CN117426297A - 一种诱导百合花染色体加倍的方法 - Google Patents
一种诱导百合花染色体加倍的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117426297A CN117426297A CN202311593632.9A CN202311593632A CN117426297A CN 117426297 A CN117426297 A CN 117426297A CN 202311593632 A CN202311593632 A CN 202311593632A CN 117426297 A CN117426297 A CN 117426297A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lily
- culture medium
- medium
- rooting
- scales
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000234435 Lilium Species 0.000 title claims abstract description 157
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 126
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 57
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 claims abstract description 48
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 33
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 16
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 33
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 claims description 32
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 20
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 19
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 18
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 16
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims description 10
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 10
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 claims description 8
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 abstract description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 30
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 12
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 12
- 239000003864 humus Substances 0.000 description 12
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 12
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 12
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 8
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 8
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 description 6
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 6
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000234280 Liliaceae Species 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 241001656769 Lilium canadense Species 0.000 description 1
- 241001648859 Lilium candidum Species 0.000 description 1
- 241001648855 Lilium pomponium Species 0.000 description 1
- 208000026487 Triploidy Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008641 drought stress Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 231100000502 fertility decrease Toxicity 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
- A01H1/08—Methods for producing changes in chromosome number
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本申请涉及植物育种领域，尤其涉及一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中培养；将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，随后进行继代培养；将继代培养的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；将含有4‑5根幼根的百合在室温下炼苗，随后洗涤、消毒，移栽到基质中进行栽培；将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理，然后冲洗、吸干水分，接种至培养基D中；将培养得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。本发明使得四倍体百合花生根率较高、生根速度加快，多代培养后植株倍性稳定，且可育性维持较高水平。
Description
技术领域
本申请涉及植物育种领域，尤其涉及一种诱导百合花染色体加倍的方法。
背景技术
百合花是单子叶植物亚纲百合科百合属所有种类的总称川。多年生草本植物具球形鳞茎花大而艳丽，花姿清爽、淡雅清香或浓郁，具有极高的观赏价值是世界名花之一，特别适合用作切花、盆花和园林布景，在鲜花中的地位日益重要。因而在国内外花卉市场上一百合始终倍受青睐其销售价格明显高于常见的切花品种。西方人历来将其当作圣洁的象征，中国自古就有用百合花表示纯洁与吉庆的风俗，源于百合寓意“百事合意”、“百年好合”等吉祥内涵。白色百合象征着纯洁，红色百合洋溢浓郁的喜庆与欢快的气氛，黄色百合展示出辉煌灿烂的色彩，复色百合显现娇媚柔和的风采。百合除了具有很高的经济价值和观赏价值外其鳞茎还有食用和药用价值。
在我国栽培的百合品种中自然加倍的百合很少，仅有卷丹是自然三倍体，因此人工培育百合多倍体品种对于我国资源的进一步扩大具有重要的意义。多倍体植株叶片大而厚，颜色深邃，花朵大而花期延长、抗性强等优良性状，不但提高了花卉的观赏价值和商品价值，也为新种质资源的创造增加了可能性。目前，通过秋水仙素人工化学诱变多倍体的手段仍然被认为是最有效、成绩最为显著的一条途径，具有经济方便、诱变作用转移性强、诱变突变谱广等特点一直沿用至今。但是秋水仙素诱变后，多倍体百合生根率低和生根速度慢的问题，还存在植株倍性恢复的技术问题，亦或是可育性降低的技术问题。
发明内容
本申请提供了一种诱导百合花染色体加倍的方法，以解决现有技术中多倍体百合生长育种中存在的技术问题。
第一方面，本申请提供了一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片进行清洗，清洗后通过消毒剂进行消毒处理，随后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基中进行培养；所述培养基A中含有BA、NAA和白砂糖；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基中含有活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗，随后洗涤、消毒，移栽到基质中进行栽培；
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
可选的，步骤S4在移栽过程中基质的含水量为30-40％。
可选的，步骤S1中消毒处理包括以下步骤：
将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min。
可选的，所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1。
可选的，所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3％的白砂糖和7g/L的琼脂。
可选的，所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3％的活性炭。
可选的，步骤S5中所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％。
可选的，步骤S5中处理时间为33h。
可选的，所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA。
本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
本申请实施例提供的百合花的诱导方法，使得四倍体百合花生根率较高、生根速度加快，多代培养后植株倍性稳定，且可育性维持较高水平。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
在本申请一个实施例中，一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，随后通过消毒剂进行消毒处理，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基中进行培养；所述培养基A中含有BA、NAA和白砂糖；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基中含有活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗，随后洗涤、消毒，移栽到基质中进行栽培；
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株，生根、移栽条件同多倍体诱导前。
本申请中，先对二倍体百合进行培育，培育过程中进行相关处理，将培育得到的二倍体百合进行多倍体诱导，大大提高诱导率，同时提高百合的出芽率、缩短百合的出芽天数，使得诱导后的百合植株长势好，粗壮，生根时间短、根较多且根茎粗壮，大大提高存活率，传代培养后倍性不变。
作为一个可选的实施方式，步骤S4在移栽过程中基质的含水量为30-40％。
本申请中，培育得到二倍体百合鳞片的过程中，进行干旱胁迫，提高了传代培养的四倍体百合的倍性稳定性。
步骤S1中消毒处理包括以下步骤：
作为一个可选的实施方式，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min。
本申请中，通过上述消毒处理降低了百合外植体的污染率，有效提高了其诱导率，使其诱导率提到至69.1％
作为一个可选的实施方式，所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1。
本申请中，通过对所述培养基A的成分的限定，缩短了出芽天数，出芽天数在17-20d，出芽率为100％。
作为一个可选的实施方式，所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3％的白砂糖和7g/L的琼脂。
本申请中，通过对所述培养基B的成分的限定，使得二倍体百合植株及新芽的生长情况较好，使得百合的长势良好，无愈伤，丛芽增殖较多且快，植株粗壮，根多，无枯死现象，无玻璃化现象。
作为一个可选的实施方式，所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3％的活性炭。
本申请中，通过对所述培养基C的成分进行限定，使得百合的生根情况较好，根多，且粗壮，且生根时间提前5-7天。
作为一个可选的实施方式，步骤S5中所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％。
本申请中，通过对秋水仙素和二甲基亚砜的浓度的限定，大大提高了百合多倍体的变异率，降低了死亡率。
作为一个可选的实施方式，步骤S5中处理时间为33h。
本申请中，严格控制多倍体诱导时间，降低死亡率的同时，提高变异率。
作为一个可选的实施方式，所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA。
本申请中，对培养基D的成分进行限定，促进多倍体百合丛芽的生长。
实施例1
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3％的白砂糖和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3％的活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为30-40％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例1
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、多倍体诱导
将清洗消毒的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S3、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S2中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例2
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3％的白砂糖和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3％的活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为60-70％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例3
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.5％的活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为30-40％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例4
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、3％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、5％的白砂糖和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为30-40％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例5
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为30-40％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
对比例6
一种诱导百合花染色体加倍的方法，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片用肥皂水清洗30min，再用自来水冲洗10min，将清洗后的百合鳞片放入0.1％的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3％的高锰酸钾中浸泡5min，最后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2％白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1；培养室温度为25±2℃，光照时间为13-15h，光照强度为1600-1900Lx；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3％的白砂糖和7g/L的琼脂；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3％的活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗3-4d，去掉培养瓶封口膜后，继续炼苗1-2d，随后洗涤除去培养基，浸泡1100倍的多菌灵溶液中1h消毒，移栽到基质中进行栽培；基质的含水量为30-40％；所述基质中含有腐殖土、椰糠和珍珠岩，m腐殖土：m椰糠：m珍珠岩＝2:1:1
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素溶液中震荡处理33h，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08％；所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5m0.4mg/L的NAA；培养温度25士1℃，光照强度为1500-1900Lx，光照14h；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
分别记录实施例和对比例的多倍体诱导率和死亡率，并将实施例和对比例得到的多倍体百合进行传代培养，记录生根时间、生根情况、传代倍性稳定等情况以及死亡率和耐水率。
表1
由表1可知，本发明涉及的诱导方法使得百合死亡率低，诱导率高。
表2
由表2可知，本发明诱导得到的四倍体百合的出芽天数较短，出芽率较高，生根率较高，且根系状态较好，可多代培养而保持四倍体特性，耐水性较好。
注：鳞片数量统一为10片，继代培养接种50个芽，传代代数为5代；
无恢复二倍体情况-稳定；
第5代恢复二倍体数低于3-较为稳定；
第5代恢复二倍体数低于5-一般稳定；
第5代恢复二倍体数高于5-不稳定；
耐水性在含水率为80-90％的基质中培养，
死亡率低于2，则耐水性好，
死亡率低于5％，则耐水性较好，
死亡率低于8％，则耐水性一般好，
死亡率高于8％，则耐水性不好。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (9)
1.一种诱导百合花染色体加倍的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、清洗消毒
取百合鳞片进行清洗，清洗后通过消毒剂进行消毒处理，随后通过无菌水进行清洗；
S2、百合芽诱导
将消毒清洗后的百合鳞片接种于培养基A中进行培养；所述培养基A中含有BA、NAA和白砂糖；
S3、百合芽继代培养
将培养得到的百合丛芽接种的含有激素组合的培养基B中，培养后筛选出适宜的进行继代培养；
S3、组培苗生根
将继代培养的生长健壮的、高度为4-5cm的百合试管苗转移到生根培养基C上诱导不定根的产生；所述培养基C中含有活性炭；
S4、移栽
将含有4-5根幼根的百合在室温下炼苗，随后洗涤、消毒，移栽到基质中进行栽培；
S5、多倍体诱导
将栽培得到的百合鳞片进行清洗消毒，随后放入秋水仙素和二甲基亚砜混合溶液中震荡处理，随后无菌水冲洗、滤纸吸干水分，然后接种至培养基D中；
S6、多倍体的扩繁、生根和移栽
将步骤S5中得到的百合丛芽进行扩繁、生根和移栽，得到完整植株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4在移栽过程中基质的含水量为30-40%。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中消毒处理包括以下步骤：
将清洗后的百合鳞片放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡5min，然后取出清洗，放入0.3%的次氯酸钠溶液中浸泡10min，随后取出清洗，放入3%的高锰酸钾中浸泡5min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基A为MS培养基，所述培养基A中含有1.2mg/L的BA、0.2mg/L的NAA、2%白砂糖和7g/L的琼脂，培养基的pH为6.1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基B为MS培养基，所述培养基B中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、3%的白砂糖和7g/L的琼脂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基C为MS培养基，所述培养基C中含有0.7mg/L的BA和0.3% 的活性炭。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S5中所述秋水仙素的浓度为0.04-0.08%，所述二甲基亚砜混合溶液的浓度为0.3%。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤S5中处理时间为33h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基D为MS培养基，所述培养基D中含有1.5mg/L的BA、0.4mg/L的NAA。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311593632.9A CN117426297A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 一种诱导百合花染色体加倍的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311593632.9A CN117426297A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 一种诱导百合花染色体加倍的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117426297A true CN117426297A (zh) | 2024-01-23 |
Family
ID=89548075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311593632.9A Pending CN117426297A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 一种诱导百合花染色体加倍的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117426297A (zh) |
-
2023
- 2023-11-27 CN CN202311593632.9A patent/CN117426297A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nirmal Babu et al. | Micropropagation of camphor tree (Cinnamomum camphora) | |
| Kacar et al. | Gelling agents and culture vessels affect in vitro multiplication of banana plantlets | |
| CN103858770B (zh) | 一种花叶玉簪快速繁殖的方法 | |
| CN110192524B (zh) | 一种以叶茎及花序梗隐芽为外植体的姜科植物离体快速繁育的方法 | |
| CN101292630B (zh) | 丽格海棠组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110521600B (zh) | 一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法 | |
| CN101133704A (zh) | 鹿角蕨的无菌孢子萌发和试管育苗方法 | |
| CN106386478A (zh) | 一种楠木组培快繁方法 | |
| CN114667927A (zh) | 一种离体诱导三角梅多倍体的方法 | |
| CN102217551A (zh) | 一种鼓槌石斛芽尖组织培养快速繁殖方法 | |
| CN112753575B (zh) | 一种高产双叶杜鹃兰种苗培育方法 | |
| Khandakar et al. | Regeneration of haploid plantlet through anther culture of Chrysanthemum (Dendranthema grandiflorum) | |
| Singh et al. | A review: Micropropagation of guava (Psidium spp.) | |
| Harazy et al. | In vitro propagation of statice as an aid to breeding | |
| CN108782247A (zh) | 一种日本晚樱“御衣黄”品种的组织培养方法 | |
| CN106106138B (zh) | 一种红掌杂交育种及快速繁殖方法 | |
| CN105123528A (zh) | 新铁炮百合远缘杂交早期不同发育阶段胚拯救方法 | |
| CN111837959A (zh) | 一种基于生姜试管苗的微姜块诱导方法及应用 | |
| CN117426297A (zh) | 一种诱导百合花染色体加倍的方法 | |
| CN113100069B (zh) | 一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105359961B (zh) | 一种通过幼胚离体挽救获得朱顶红‘苹果’杂交种的方法 | |
| CN111316900A (zh) | 一种提高紫肉甘薯脱毒苗移栽成活率的方法 | |
| Aishwarya et al. | In vitro regeneration of Lycopersicum esculentum Mill. | |
| CN103385167A (zh) | 一种宝莲灯子房培养及组培快繁方法 | |
| CN112616666B (zh) | 垂筒花的组培快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |