CN117414459A - 一种止血凝胶及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种止血凝胶及其制备方法和应用，所述止血凝胶的原料包括改性明胶10‑40份、聚乙二醇400 1‑6份、改性丝素蛋白0.5‑5.5份。本发明制备的止血凝胶有着超强的粘附能力，能够紧密的贴附于伤口位置，阻止血液的流出；本发明的止血凝胶使用动物源材料可降解，减少长期植入导致的风险。且都为水溶性材料，可以渗透进伤口内部，有效封堵，止血后，可用生理盐水冲洗，保持术野清晰。

Description

一种止血凝胶及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种止血凝胶及其制备方法和应用。
背景技术
血液是人体非常重要的组成部分之一，它负责向组织提供气体和营养物质并且按需提供免疫信号和止血响应。出血是创伤发生后最常见的临床表现之一，由微小伤口引起的出血不足以致命，可以通过自身的凝血机制实现止血；然而，如果人在短时间内失血量达全身血液的30％或更多，就会危及生命。据统计，全球每年约有580万人死于不可控制的大出血，其中30％是创伤性死亡。值得注意的是，在出血发生5-10min内若能立即控制出血可有效降低死亡率，因此，快速止血材料的研发近年来引起了越来越多的关注。
创面的急性出血是临床手术中常见且具有挑战性的问题之一，特别是在切除病变组织后需要进行吻合时。在吻合口处，如果吻合钉排布存在空隙或不完整，容易导致急性出血的情况。创面的急性出血十分常见而且非常棘手。目前常规的临床止血方法有手术缝合、电凝止血、血管栓塞等，然而这些方法耗时长、止血速度慢、效率低、降解速度慢，存在着很大的局限性。
目前市面上存在着很多止血材料，如celox、沸石、介孔二氧化硅、壳聚糖、淀粉、明胶、纤维蛋白胶、纤维蛋白原凝血酶、氧化纤维素等，它们虽然对体表止血具有较高的效率，但由于它们对湿创面的粘附性能较差，容易发生脱落，缺乏激活凝血因子的有效成分以及生物相容性和降解性能，在止血过程中发生放热导致严重的组织损伤等因素的影响，通常不能阻止不规则的深切狭窄的不可压缩性伤口的出血。
CN115645597A公开了一种丝素蛋白止血凝胶及其制备方法和应用，丝素蛋白止血凝胶以室温缓慢浓缩处理的丝素蛋白纳米颗粒为原料，与多酚化合物均匀混合制备而成；所述丝素蛋白纳米颗粒的粒径为200-500nm；所述丝素蛋白止血凝胶的结晶度大于50％。粒径为200-500nm的丝素蛋白纳米颗粒可以诱导止血凝胶形成结晶度大于50％的高结晶度的纳米微晶结构，提高其力学性能。虽然用该材料制作的止血凝胶有着超强的止血性能，但由于其在组织中的粘附能力差、固化速度慢、在不平坦的表面难以充分覆盖。
CN106913900A公开了一种丝素蛋白止血材料及其制备方法；丝素蛋白止血材料制备方法包括步骤：S1、制备质量百分比为1-6％的丝素蛋白溶液；S2、制备质量百分比为10-40％的聚乙二醇溶液，其中聚乙二醇的分子量为1000-10000；
S3、将丝素蛋白溶液与聚乙二醇溶液以体积比10:0.25-10:3的比例相互混合，经冷冻干燥制得丝素蛋白止血材料。
因此，开发一种止血速度快效果好、生物相容性好、易吸收以及方便快速的止血材料，是本领域的研究重点。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种止血凝胶及其制备方法和应用，可以有效解决临床手术中的急性出血问题，该止血凝胶可实现快速止血和长效止血。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种止血凝胶，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括改性明胶10-40份(例如可以为15份、20份、25份、30份、35份等)、聚乙二醇400 1-6份(例如可以为2份、3份、4份、5份等)、改性丝素蛋白0.5-5.5份(例如可以为1份、2份、3份、4份、5份等)。
优选地，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括改性明胶10-30份、聚乙二醇4002-5份、改性丝素蛋白1-4份。
本发明提供的止血凝胶材料，具有粘附能力强、止血效果快速、可降解、生物相容性好等优点。明胶和丝素蛋白都是动物源水溶性材料，明胶具有良好的胶凝性、生物相容性和生物降解性，本发明采用的改性明胶的粘附能力更强、热稳定性更好、结构和流变特性更易调控、酸碱稳定性更强；丝素蛋白具有高度可伸展性、抗菌性和生物相容性，本发明采用的改性丝素蛋白有更高的强度和稳定性、易调控的物理化学性质；聚乙二醇400是具有可调机械性能的亲水性聚醚化合物，聚乙二醇大分子单体的末端有各种官能团，在动物源水溶性材料中加入聚乙二醇400可以增强材料的生物学性能，特别是机械性能。
优选地，所述改性明胶采用如下方法进行制备，所述方法包括：将牛皮明胶溶解于碱性溶液中，调节pH后进行透析、冷冻干燥，得到所述改性明胶。
优选地，所述碱性溶液包括NaOH溶液。
优选地，所述NaOH溶液的浓度为0.08-0.12mol/L，例如可以为0.09mol/L、0.1mol/L、0.11mol/L等。
优选地，所述调节pH至6.8-7.2，例如可以为6.9、7、7.1等。
优选地，所述透析采用的透析袋的分子量为8000-12000，例如可以为9000、10000、11000等。
优选地，所述透析的温度为3-5℃，例如可以为3.5℃、4℃、4.5℃等，时间为70-75h，例如可以为71h、72h、73h、74h等。
优选地，所述改性丝素蛋白采用如下方法进行制备，所述方法包括：将丝素蛋白与交联液混合，进行交联反应，取出交联后的丝素蛋白进行溶解、透析、冷冻干燥，得到所述改性丝素蛋白。
优选地，所述丝素蛋白与交联液的质量体积比为1g:(8-12)mL，例如可以为1g:9mL、1g:10mL、1g:11mL等。
优选地，所述交联反应的温度为3-5℃，例如可以为3.5℃、4℃、4.5℃等，时间为3-24h，例如可以为5h、10h、15h、20h等。
优选地，所述透析采用的透析袋的分子量为8000-12000，例如可以为9000、10000、11000等。
优选地，所述透析的温度为3-5℃，例如可以为3.5℃、4℃、4.5℃等，时间为70-75h，例如可以为71h、72h、73h、74h等，每5-7h换一次水，例如可以为5.5h、6h、6.5h等。
优选地，所述交联液中包括N-羟基琥珀酰亚胺钠、3,4-二羟基苯丙氨酸、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。
优选地，所述交联液中N-羟基琥珀酰亚胺钠的浓度为3-4mg/mL，例如可以为3.3mg/mL、3.5mg/mL、3.8mg/mL等。
优选地，所述交联液中3,4-二羟基苯丙氨酸的浓度为1-1.5mg/mL，例如可以为1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、1.4mg/mL等。
优选地，所述交联液中1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐的浓度为15-20mg/mL，例如可以为16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL等。
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的止血凝胶的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将改性明胶、聚乙二醇400于水中溶解得到明胶溶液，向所述明胶溶液中加入改性丝素蛋白和抗生素，得到混合溶液；
(2)将所述混合溶液进行冷冻干燥，得到冻干海绵；
(3)将所述冻干海绵溶于水中，形成水凝胶，将所述水凝胶进行低温真空交联，得到交联物；
(4)将所述交联物粉碎后与CaCl2溶液混合，得到所述止血凝胶。
氯化钙会与血液中的凝血因子凝血酶反应，将纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体，这些纤维蛋白单体之间会发生交联反应，形成稳定的纤维网，从而加快血液的凝固过程，另外氯化钙还可以促进血小板的聚集和活化，增加血小板与纤维蛋白原之间的粘附，进一步加强止血效果。
优选地，所述明胶溶液中改性明胶与水的质量体积比为1g:(10-15)mL，例如可以为1g:11mL、1g:12mL、1g:13mL、1g:14mL等。
优选地，所述丝素蛋白加入时明胶溶液的温度为15-30℃，例如可以为16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃等。
优选地，所述混合溶液中抗生素的质量百分含量为0.005-0.02％，例如可以为0.006％、0.008％、0.01％、0.012％、0.014％、0.016％、0.018％等。
优选地，所述抗生素包括庆大霉素、青霉素或链霉素中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述抗生素为庆大霉素、青霉素和链霉素的组合。
优选地，步骤(2)中的冷冻干燥具体步骤为：
S1、预冻：温度为-70～-50℃，例如可以为-65℃、-60℃、-55℃等，4-5h，例如可以为4.3h、4.5h、4.8h等；
S2、冷冻干燥：真空度为8-12Pa，例如可以为9Pa、10Pa、11Pa等，温度为-40～-20℃，例如可以为-35℃、-30℃、-25℃等，时间为36-60h，例如可以为38h、40h、45h、50h、55h等。
优选地，步骤(3)中，所述冻干海绵与水的质量体积比为1g:(10-20)mL，例如可以为1g:12mL、1g:14mL、1g:16mL、1g:18mL等。
优选地，所述低温真空交联时的温度为-45～-35℃，例如可以为-44℃、-42℃、-40℃、-38℃、-36℃等，压力为60-80MPa，例如可以为65MPa、70MPa、75MPa等，时间为25-35min，例如可以为26min、28min、30min、32min、34min等。
优选地，所述交联物粉碎至100-200目，例如可以为120目、140目、160目、180目等。
优选地，所述交联物与CaCl2溶液的质量体积比为1g:(3-8)mL，例如可以为1g:4mL、1g:5mL、1g:6mL、1g:7mL等。
优选地，所述CaCl2溶液中CaCl2的质量百分含量为0.02-0.1％，例如可以为0.03％、0.04％、0.06％、0.08％等。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的止血凝胶在制备治疗内脏吻合口出血的药物和/或止血材料中的应用。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明制备的止血凝胶有着超强的粘附能力，能够紧密的贴附于伤口位置，阻止血液的流出；
(2)本发明的止血凝胶使用动物源材料可降解，减少长期植入导致的风险。且都为水溶性材料，可以渗透进伤口内部，有效封堵，止血后，可用生理盐水冲洗，保持术野清晰；
(3)使用改性丝素蛋白不仅增加粘附能力且具有抗菌性能，进一步地，抗生素的加入也减少炎症反应的发生，促进伤口恢复；CaCl2溶液的加入促进血液的凝固和止血作用。
附图说明
图1为实施例1制备得到的止血凝胶外观图；
图2为体内止血测试中施加实施例1制备的止血凝胶时的创面情况图；
图3为体内止血测试中施加实施例1制备的止血凝胶之后的创面情况图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，还可包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例性地”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本文中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。
以下实施例中试剂或仪器来源如下：
明胶：质量标准为药典二部，为牛皮提取；
聚乙二醇400(供注射用)：质量标准为药典四部。
制备例1
本制备例提供一种改性明胶，所述改性明胶的制备方法如下：
(1)取50g牛皮明胶溶于950mL 0.1mol/L NaOH的溶液，在4℃条件下浸泡5h；
(2)加入HCl将步骤(1)溶液的pH调至7.0，得到明胶溶液；
(3)将明胶溶液倒入分子量10000的透析袋中，并在4℃条件下透析72h，留用透析袋中的物质，进行冷冻干燥，得到所述改性明胶。
制备例2
本制备例提供一种丝素蛋白，所述丝素蛋白的制备方法如下：
(1)取剥离内膜的蚕茧10g，剪碎，加入沸腾的10倍量的0.02mol/L碳酸钠溶液中，确保溶液浸没蚕茧，持续加热煮沸碳酸钠溶液2h，并持续搅拌进行脱胶处理，冷却至室温后，过滤得到蚕茧丝；
(2)用10倍体积的去离子水充分淘洗蚕茧丝4次，除去残留在脱胶蚕茧上的碳酸钠和丝胶，得到脱胶丝，将脱胶丝铺展于玻璃平皿中并放入烘箱，温度设置为60℃，恒温干燥12h，取出后拉松即得脱胶蚕丝；
(3)将10g脱胶蚕丝粉刺加入50mL9.3 mol/L LiBr溶液，60℃条件下，搅拌直至溶解，得到混合溶液，将混合溶液倒入透析袋中(透析袋分子量为10000)，并在4℃条件下透析72h，每6h换一次水，留透析袋中的物质，进行冷冻干燥，得到丝素蛋白。
制备例3
本制备例提供一种改性丝素蛋白，所述改性丝素蛋白的制备方法如下：
(1)将0.38g的N-羟基琥珀酰亚胺钠与0.15g的多巴(3,4-二羟基苯丙氨酸)溶于110mL水中，再加入2.11g的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐、10g制备例2制得的丝素蛋白，在4℃条件下反应15h；
(2)过滤步骤(1)所得反应液，取出丝素蛋白10g，并溶解于50mL 9.3mol/LLiBr溶液，60℃条件下，搅拌直至溶解。将溶液导入透析袋中(透析袋分子量10000)，并在4℃条件下透析72h，每6h换一次水，留透析袋中的物质，进行冷冻干燥，得到改性丝素蛋白。
实施例1
本实施例提供一种止血凝胶，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括：
制备例1的改性明胶20份、聚乙二醇400 3份、制备例3的改性丝素蛋白2份；
制备方法包括如下步骤：
(1)将制备例1的改性明胶溶于12.5倍量的80℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、抗生素，得到混合溶液；
其中，混合溶液中抗生素的质量百分含量为0.01％，抗生素为庆大霉素、青霉素和链霉素按照1:1:1复配得到；
(2)将所述混合溶液进行冷冻干燥，得到冻干海绵；
其中，冷冻干燥的步骤为：-60℃预冻4.5h后，于真空度为10Pa，温度为-30℃下冷冻干燥45h；
(3)将所述冻干海绵溶于15倍量水中，形成水凝胶，将所述水凝胶于-40℃低温环境中，形成固态，并对样品进行加压70MPa，低温真空交联30min，得到交联物；
(4)将所述交联物粉碎至150目后与6倍量的0.05％ CaCl2溶液混合均匀，得到所述止血凝胶。
实施例1制备得到的止血凝胶外观如图1所示。
实施例2
本实施例提供一种止血凝胶，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括：
制备例1的改性明胶10份、聚乙二醇400 5份、制备例3的改性丝素蛋白4份；
制备方法包括如下步骤：
(1)将制备例1的改性明胶溶于10倍量的90℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、抗生素，得到混合溶液；
其中，混合溶液中抗生素的质量百分含量为0.005％，抗生素为庆大霉素、青霉素和链霉素按照1:1:1复配得到；
(2)将所述混合溶液进行冷冻干燥，得到冻干海绵；
其中，冷冻干燥的步骤为：-60℃预冻4.5h后，于真空度为10Pa，温度为-30℃下冷冻干燥45h；
(3)将所述冻干海绵溶于10倍量水中，形成水凝胶，将所述水凝胶于-35℃低温环境中，形成固态，并对样品进行加压80MPa，低温真空交联35min，得到交联物；
(4)将所述交联物粉碎至100目后与3倍量的0.1％ CaCl2溶液混合均匀，得到所述止血凝胶。
实施例3
本实施例提供一种止血凝胶，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括：
制备例1的改性明胶30份、聚乙二醇400 2份、制备例3的改性丝素蛋白1份；
制备方法包括如下步骤：
(1)将制备例1的改性明胶溶于15倍量的80℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、抗生素，得到混合溶液；
其中，混合溶液中抗生素的质量百分含量为0.02％，抗生素为庆大霉素、青霉素和链霉素按照1:1:1复配得到；
(2)将所述混合溶液进行冷冻干燥，得到冻干海绵；
其中，冷冻干燥的步骤为：-60℃预冻4.5h后，于真空度为10Pa，温度为-30℃下冷冻干燥45h；
(3)将所述冻干海绵溶于20倍量水中，形成水凝胶，将所述水凝胶于-45℃低温环境中，形成固态，并对样品进行加压60MPa，低温真空交联25min，得到交联物；
(4)将所述交联物粉碎至200目后与8倍量的0.02％ CaCl2溶液混合均匀，得到所述止血凝胶。
实施例4
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将聚乙二醇400调整为1份，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例5
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将聚乙二醇400调整为12份，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例6
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将制备例3的改性丝素蛋白调整为0.5份，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例7
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将制备例3的改性丝素蛋白调整为5.5份，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例8-1
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于步骤(1)不同，本实施例的步骤(1)为：
将制备例1的改性明胶溶于12.5倍量的80℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、庆大霉素，得到混合溶液；其中，混合溶液中庆大霉素的质量百分含量为0.01％；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例8-2
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于步骤(1)不同，本实施例的步骤(1)为：
将制备例1的改性明胶溶于12.5倍量的80℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、青霉素，得到混合溶液；其中，混合溶液中青霉素的质量百分含量为0.01％；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
实施例8-3
本实施例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于步骤(1)不同，本实施例的步骤(1)为：
将制备例1的改性明胶溶于12.5倍量的80℃水中，加入聚乙二醇400溶解后冷却至室温加入制备例3的改性丝素蛋白、链霉素，得到混合溶液；其中，混合溶液中链霉素的质量百分含量为0.01％；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
对比例1
本对比例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将制备例1的改性明胶替换为等量的明胶，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
对比例2
本对比例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，将制备例3的改性丝素蛋白替换为等量的制备例2的丝素蛋白，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
对比例3
本对比例提供一种止血凝胶，其与实施例1的区别仅在于，未进行步骤(3)交联，将步骤(2)所得冻干海绵直接进行步骤(4)，其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。
测试例1
粘附力
粘附力的测定参考YY/T 1477.4-2017接触性创面辅料性能评价用标准试验模型第4部分：评价创面敷料潜在粘连性的体外模型；
把实施例和对比例制备的止血凝胶样品分别均匀涂抹在两个马口铁板上，然后把创面模型置于两个样品之间。将样品与创面模型组合体置于一水平托盘上，在组合体上面施加压块并在室温下培养10min。将样品与创面模型的组合体，放入干燥箱内在(37±2)℃干燥24h，至样品表面干燥后，取出，放置至室温。
将样品与创面模型的组合体安装于拉伸试验机的夹具上，使上下两个夹具分别夹持两片样品。并使两个夹具的初始间距约为50mm，夹持距离2.5cm以100mm/min的速率拉伸直至其中一片样品完全与纤维蛋白凝块剥离。每个试验重复三次。测试结果如表1所示。
测试例2
溶胀能力
溶胀能力的测定参考GB/T 20405.5-2006/ISO 17190-5:2001失禁者用尿吸收剂：聚合物基质吸液材料特性的测试方法-第5部分：在生理盐水中用称重法测定吸水率；
在室温下，分别称取实施例和对比例制备的止血颗粒样品，并记为m1，精确至0.001g。将纱布和橡皮筋完全浸入在生理盐水溶液中取出，用吸水棉擦拭纱布表面生理盐水溶液分后精确称量，纱布质量记为m2。橡皮筋质量记为m3。将样品包于纱布中后，置于烧杯中，其中添加生理盐水溶液，使产品完全浸于生理盐水溶液中，轻微晃动纱布，使产品内部充分与水接触。
浸泡24后，从烧杯中提出纱布，静置4min，再用吸水纸轻微擦拭掉纱布表面的生理盐水溶液，并精确称量记录m4。溶胀能力(X)计算公式如下：
每个试验重复三次。测定结果如表1所示。
测试例3
体外血液凝结时间
血液凝结时间方法：称取2.5mL的无菌脱纤维羊血于15mL的离心管中，分别加入0.2g的实施例和对比例制备的止血颗粒于漩涡震动仪上震动，3000r/min，并记录血液凝结时间，每个样品平行测试3次，测定结果如表1所示。
测试例4
体内止血测试
测试方法:(1)选用SD大鼠(公，0.2-0.25kg)，通过腹腔注射10％水合氯醛(0.03mL/kg)麻醉；(2)用手术刀在肝划三道，长度约1cm，深度约3mm；(3)以最小的压力分别将实施例和对比例制备的止血颗粒样品覆盖伤口；(4)待60s后，用生理盐水冲洗创面，并记录止血情况，示例性地，施加实施例1制备的止血凝胶时的创面情况如图2所示，测试后的创面情况如图3所示。
表1
样品 粘附力(N) 溶胀能力 凝结时间(s)
实施例1 38.4 23.4 4.1
实施例2 23.8 12.4 7.3
实施例3 26.5 30.2 6.6
实施例4 32.4 24.1 5.2
实施例5 9.8 7.3 15.4
实施例6 22.6 26.8 5.7
实施例7 65.3 18.4 4.9
实施例8-1 / / 4.3
实施例8-2 / / 4.4
实施例8-3 / / 4.6
对比例1 25.6 16.8 7.3
对比例2 23.2 20.5 6.8
对比例3 26.2 22.8 5.7
根据表格数据可知，当制备止血凝胶时所用原料：改性明胶、聚乙二醇400和改性丝素蛋白的比例为(10-30):(2-5):(1-4)时，止血凝胶的粘附力、溶胀能力均较强，而且体外血液凝结时间更短；由实施例1、实施例4-5可知，当原料中聚乙二醇400的用量过少时，粘附能力减少，溶胀能力增加，体外血液的凝结时间增长，用量过多时，粘附能力减少，溶胀能力减少，体外血液的凝结时间增长；由实施例1、实施例6-7可知，当原料中改性丝素蛋白用量过少时，粘附能力减少，溶胀能力增加，体外血液的凝结时间增长，用量过多时，粘附能力增加，溶胀能力减少，体外血液的凝结时间略增长；由实施例1、实施例8-1、实施例8-2、实施例8-3可知，抗生素采用庆大霉素、青霉素、链霉素的组合时，体外血液凝结时间更短，当采用其中任意一种时，凝结时间均会受到影响，并且在体内止血测试中可知，三种抗生素组合使用，可以有效控制吻合口炎症的发生，利于伤口止血和愈合；由实施例1、对比例1可知，当将改性明胶替换为普通明胶时，溶胀能力明显下降；由实施例1、对比例2可知，当将采用未改性的丝素蛋白作为原料时，粘附能力明显下降，凝结时间增长；由实施例1、对比例3可知，当止血材料未进行交联，所得止血凝胶的粘附能力、溶胀能力、体外血液的凝结效率均有所下降。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种止血凝胶，其特征在于，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括改性明胶10-40份、聚乙二醇400 1-6份、改性丝素蛋白0.5-5.5份。
2.根据权利要求1所述的止血凝胶，其特征在于，以重量份数计，所述止血凝胶的原料包括改性明胶10-30份、聚乙二醇400 2-5份、改性丝素蛋白1-4份。
3.根据权利要求1或2所述的止血凝胶，其特征在于，所述改性明胶采用如下方法进行制备，所述方法包括：将牛皮明胶溶解于碱性溶液中，调节pH后进行透析、冷冻干燥，得到所述改性明胶。
4.根据权利要求3所述的止血凝胶，其特征在于，所述碱性溶液包括NaOH溶液；
优选地，所述NaOH溶液的浓度为0.08-0.12mol/L；
优选地，所述调节pH至6.8-7.2；
优选地，所述透析采用的透析袋的分子量为8000-12000；
优选地，所述透析的温度为3-5℃，时间为70-75h。
5.根据权利要求1-4任一项所述的止血凝胶，其特征在于，所述改性丝素蛋白采用如下方法进行制备，所述方法包括：将丝素蛋白与交联液混合，进行交联反应，取出交联后的丝素蛋白进行溶解、透析、冷冻干燥，得到所述改性丝素蛋白；
优选地，所述丝素蛋白与交联液的质量体积比为1g:(8-12)mL；
优选地，所述交联反应的温度为3-5℃，时间为3-24h；
优选地，所述透析采用的透析袋的分子量为8000-12000；
优选地，所述透析的温度为3-5℃，时间为70-75h，每5-7h换一次水。
6.根据权利要求5所述的止血凝胶，其特征在于，所述交联液中包括N-羟基琥珀酰亚胺钠、3,4-二羟基苯丙氨酸、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐；
优选地，所述交联液中N-羟基琥珀酰亚胺钠的浓度为3-4mg/mL；
优选地，所述交联液中3,4-二羟基苯丙氨酸的浓度为1-1.5mg/mL；
优选地，所述交联液中1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐的浓度为15-20mg/mL。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的止血凝胶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将改性明胶、聚乙二醇400于水中溶解得到明胶溶液，向所述明胶溶液中加入改性丝素蛋白和抗生素，得到混合溶液；
(2)将所述混合溶液进行冷冻干燥，得到冻干海绵；
(3)将所述冻干海绵溶于水中，形成水凝胶，将所述水凝胶进行低温真空交联，得到交联物；
(4)将所述交联物粉碎后与CaCl2溶液混合，得到所述止血凝胶。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述明胶溶液中改性明胶与水的质量体积比为1g:(10-15)mL；
优选地，所述丝素蛋白加入时明胶溶液的温度为15-30℃；
优选地，所述混合溶液中抗生素的质量百分含量为0.005-0.02％；
优选地，所述抗生素包括庆大霉素、青霉素或链霉素中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述抗生素为庆大霉素、青霉素和链霉素的组合。
9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述冻干海绵与水的质量体积比为1g:(10-20)mL；
优选地，所述低温真空交联时的温度为-45～-35℃，压力为60-80MPa，时间为25-35min；
优选地，所述交联物粉碎至100-200目；
优选地，所述交联物与CaCl2溶液的质量体积比为1g:(3-8)mL；
优选地，所述CaCl2溶液中CaCl2的质量百分含量为0.02-0.1％。
10.一种如权利要求1-6任一项所述的止血凝胶在制备治疗内脏吻合口出血的药物和/或止血材料中的应用。
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