CN117379446A - 齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备抗结肠炎药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药治疗溃疡性结肠炎领域，具体涉及齐墩果酸‑28‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷在制备抗结肠炎药物中的应用。本发明研究发现，齐墩果酸‑28‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷相比母核齐墩果酸及其他类似物，具有显著的抗溃疡性结肠炎活性，且与临床上治疗炎症性肠病的一线药物美沙拉嗪相比，具有相当的疗效，还能避免美沙拉嗪西药治疗可能带来的水杨酸过敏反应，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中医药治疗溃疡性结肠炎领域，具体涉及齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备抗结肠炎药物中的应用。
背景技术
结肠炎（colitis）是指各种原因引起的结肠炎症性病变。可由细菌、真菌、病毒、寄生虫、原虫等生物引起，亦可由变态反应及理化因子引起，根据病因不同，可分为特异性炎性病变和非特异性炎性病变，前者指感染性结肠炎、缺血性结肠炎和伪膜性结肠炎等，后者包括溃疡性结肠炎及结肠Crohn病。主要临床表现腹泻、腹痛、黏液便及脓血便、里急后重、甚则大便秘结、数日内不能通大便；常伴有消瘦乏力等，多反复发作。
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)的病因尚未完全明确，目前认为，该病的发生是由免疫因素、遗传因素、环境因素和感染因素共同作用的结果。目前治疗UC的药物疗法包括氨基水杨酸酯类药物(如美沙拉嗪)、糖皮质激素和免疫抑制试剂，但上述治疗均不能帮助患者摆脱长期用药所带来的痛苦和严重的副作用。
齐墩果酸(Oleanolic acid，OA)，又名庆四素，属于五环三萜类化合物，是从女贞子和青叶胆等植物中分离得到的有效成份，以游离体或糖苷的形式广泛存在于多种植物中，具有多样的生物活性和药理作用，如保肝、降糖降脂、抗肿瘤、抗高血压、消炎和抗HIV。
齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（28-OA-β-G），其结构式如下：
中国发明专利申请CN103233055A公开了一种齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，所述齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷是用保藏号为NRRL1086菌株对齐墩果酸进行生物转化获得，该发明还通过小鼠耳/足肿胀实验证明了其抗炎方面的用途。
中国发明专利申请CN115477681A公开了一种五环三萜皂苷衍生物及制备方法与应用，以化合物A3为原料，针对C-28的羧基利用酯化反应或酰胺化反应制备衍生物，以其为活性成分制备具有抗炎、抗氧化和抗凋亡作用的药物。该发明首次公开的五环三萜皂苷衍生物对巨噬细胞未显示出明显的细胞毒性，能够增加NF-κB信号通路中IκB蛋白水平，并且与现有阳性药相比，IκB蛋白水平明显增加（p<0.05），IL-6和TNF-α的释放显著减少，这些结果提示该衍生物有更好的抗炎活性；而且可以缓解小鼠结肠炎症状。虽然28-OA-β-G也属于五环三萜皂苷衍生物，但其结构与该发明中提到的化学结构并不相似，且目前尚无研究报道28-OA-β-G是否具有抗溃疡性结肠炎的作用。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。
为了实现本发明目的，采用的技术方案如下：
齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中TNF-α水平的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中IL-6水平的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中iNOS水平的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体结肠中MPO水平和/或MDA水平的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备提高机体结肠中SOD水平的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备增加结肠长度的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低肠道通透性的药物中的应用。
优选地，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体疾病活动指数和/或脾脏指数的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
（1）本发明采用葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导结肠炎，是一种常用的溃疡性结肠炎的实验模型，DSS会引起肠道滞留、黏膜屏障破损和炎症细胞浸润等，促进结肠炎的发展。研究发现，齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷相比母核齐墩果酸及其他类似物（如齐墩果酸3位接糖、齐墩果酸3和28位同时接糖），具有显著的抗溃疡性结肠炎活性。
（2）本发明研究发现，齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷与美沙拉嗪具有相当的疗效。美沙拉嗪，又名5-氨基水杨酸(5-ASA)，是治疗溃疡性结肠炎(UC)等炎症性肠病的一线药物。
（3）本发明进一步研究了齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的体内抗溃疡性结肠炎活性，并通过DAI，HE切片，透射电镜，Elisa试剂盒（TNF-α，iNOS，IL-6，MPO，MDA和SOD）等指标探讨了其药效，结果发现齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可显著降低溃疡性结肠炎机体血清和/或结肠中TNF-α、IL-6、iNOS、MPO和MDA水平，还可升高SOD水平，降低机体疾病活动指数和脾脏指数，增加结肠长度、降低肠道通透性等作用。
附图说明
图1为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对Caco-2细胞模型中TNF-α水平的影响，其中横坐标轴上，从左往右依次是空白组、模型组、5-ASA组、齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组。
图2为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对Caco-2细胞模型中IL-6水平的影响，其中横坐标轴上，从左往右依次是空白组、模型组、5-ASA组、齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3-O-β-D吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组。
图3为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸、齐墩果酸-3-O-β-D吡喃葡萄糖苷对Caco-2细胞模型中iNOS水平的影响，其中横坐标轴上，从左往右依次是空白组、模型组、5-ASA组、齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组。
图4为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对Caco-2细胞模型中TEER值的影响，其中横坐标轴上，从左往右依次是空白组、模型组、5-ASA组、齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3,28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸单给药、低、中、高剂量组，齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷单给药、低、中、高剂量组。
图5为实施例1各组细胞的免疫荧光图，其中包括ZO-1和Occludin典型免疫荧光结果。
图6为实施例1各组细胞的免疫荧光图，其中包括Claudin-1和E-cadherin典型免疫荧光结果。
图7为各组小鼠体重的变化。
图8为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠疾病活动指数的影响结果。
图9为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠长度的影响结果。
图10为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠脾脏指数的影响结果。
图11为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠FITC-葡聚糖渗透性的影响结果。
图12为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠TNF-α水平的影响结果，其中，Serum为血清，Colon为结肠。
图13为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠IL-6水平的影响结果，其中，Serum为血清，Colon为结肠。
图14为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠iNOS水平的影响结果，其中，Serum为血清，Colon为结肠。
图15为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠MPO水平的影响结果。
图16为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠SOD水平的影响结果。
图17为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对模型小鼠结肠MDA水平的影响结果。
图18为各组小鼠结肠组织H&E染色图。
图19为各组小鼠结肠组织透射电镜图。
以上图片中，#表示与空白组比较，具有显著的统计学差异，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；*表示与模型组比较，具有显著的统计学差异，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；Δ表示5-ASA组与齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷高剂量组比较，无显著的统计学差异。
上述图中不清晰之处，不影响本领域技术人员对本发明技术方案的理解。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明。
齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（28-OA-β-G）制备方法为：以α-D-吡喃葡萄糖为原料，合成溴苷糖基供体；溴苷糖基供体与齐墩果酸反应，得齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（28-OA-β-G）。
齐墩果酸-3, 28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3,28-OA-β-G）制备方法为：以α-D-吡喃葡萄糖为原料，合成溴苷糖基供体和三氯乙酰亚胺酯糖基供体；溴苷糖基供体和三氯乙酰亚胺酯糖基供体先后与齐墩果酸反应，得齐墩果酸-3, 28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3,28-OA-β-G）。
齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3-OA-β-G）制备方法为：以α-D-吡喃葡萄糖为原料，合成三氯乙酰亚胺酯糖基供体；以齐墩果酸为原料合成糖基受体；三氯乙酰亚胺酯糖基供体与糖基受体反应，得齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3-OA-β-G）。
齐墩果酸（OA）的供应商为上海韶远试剂有限公司，批号：R21110011。
美沙拉嗪（5-ASA）的供应商为葵花药业集团佳木斯鹿灵制药有限公司，批号：220612。
实施例1齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷抗溃疡性结肠炎的体外实验
1.实验试剂
主要实验试剂见表1。
表1 主要实验试剂
2.实验方法
（1）Caco-2细胞跨膜上皮电阻和炎症因子的测定
将Caco-2细胞以1×105个细胞/ml（每孔加400μl）接种于Transwell小室，在5% CO2和37℃条件下培养，21天后，将培养基更换为基础MEM培养基。以1μg/ml LPS作为Caco-2细胞的炎症模型诱导剂，将细胞分为19组：空白组（Control），模型组（LPS 1μg/ml），5-ASA组（LPS 1μg/ml+5-ASA 50μM），LPS+28-OA-β-GL组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 2μM），LPS+28-OA-β-GM组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 4μM），LPS+28-OA-β-GH组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 8μM），28-OA-β-G组（28-OA-β-G 8μM），LPS+3,28-OA-β-GL组（LPS 1μg/ml+3,28-OA-β-G 2μM），LPS+3,28-OA-β-GM组（LPS 1μg/ml+3,28-OA-β-G 4μM），LPS+3,28-OA-β-GH组（LPS 1μg/ml+3,28-OA-β-G 8μM），3,28-OA-β-G组（3,28-OA-β-G 8μM），LPS+OAL组（LPS 1μg/ml+OA 2μM），LPS+OAM组（LPS 1μg/ml+OA 4μM），LPS+OAH组（LPS 1μg/ml+OA 8μM），OA组（OA 8μM），LPS+3-OA-β-GL组（LPS 1μg/ml+3-OA-β-G 2μM），LPS+3-OA-β-GM组（LPS 1μg/ml+3-OA-β-G 4μM），LPS+3-OA-β-GH组（LPS 1μg/ml+3-OA-β-G 8μM），3-OA-β-G组（28-OA-β-G 8μM），其中，空白组加入MEM培养基，其他组以MEM培养基为溶剂，加入对应剂量的LPS和化合物，在5% CO2和37 ℃的恒温培养箱中孵育24小时。使用跨膜电阻仪测量电阻值。TEER值=（实测电阻值−空白电阻值）×Transwell小室面积单位为Ω·cm2。取细胞上清样本，使用ELISA试剂盒测定血清中TNF-α、IL-6、iNOS的含量。
（2）Caco-2细胞紧密连接蛋白表达水平的测定
将Caco-2细胞（1×105个细胞/ml）接种在24孔板的细胞爬片上（每孔加600 μl），2天后达汇合状态。将细胞分为7组：空白组（Control），模型组（LPS 1μg/ml），5-ASA组（LPS 1μg/ml+5-ASA 50μM），LPS+28-OA-β-GL组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 2μM），LPS+28-OA-β-GM组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 4μM），LPS+28-OA-β-GH组（LPS 1μg/ml+28-OA-β-G 8μM），28-OA-β-G组（28-OA-β-G 8μM），其中，空白组加入MEM培养基，其他组以MEM培养基为溶剂，加入对应剂量的LPS和28-OA-β-G，在5% CO2和37 ℃的恒温培养箱中孵育24小时，经系列处理后进行免疫荧光成像。
3.结果分析
炎症因子：结果见图1至图3。与空白组（Control）相比，模型组（Model）TNF-α、IL-6和iNOS三种炎症因子水平明显增加，说明炎症模型建立成功。与模型组（Model）相比，给药组在不同剂量均可降低三种炎症因子的表达，其中，28-OA-β-G与其他高剂量给药组相比效果最好，显示出较好的抗炎活性。
TEER值：结果见图4，Caco-2细胞经过LPS处理后，TEER值显著降低，表示LPS可以诱导Caco-2细胞屏障损伤。而经28-OA-β-G（8μM）干预后，TEER值显著升高，提示28-OA-β-G可以改善Caco-2细胞的屏障功能。
紧密连接蛋白：肠道中紧密连接相关蛋白均在细胞膜上表达，因此，使用免疫荧光观察可以更直观的了解膜上紧密连接蛋白的分布。具体结果如图5和图6，图中可见，ZO-1、Occludin、Claudin-1和E-cadherin均在细胞膜上表达。在正常的Caco-2细胞中，各种紧密连接蛋白在膜上呈连续分布，荧光强度最强。在正常细胞中，单独给予28-OA-β-G不会影响4种紧密连接蛋白的表达。1μg/ml的LPS虽然不会抑制Caco-2细胞的存活，但是可以导致4种紧密连接蛋白表达降低，并且导致在细胞膜上的分布紊乱，甚至消失。28-OA-β-G干预可减轻LPS对Caco-2细胞肠道屏障的损伤，随着28-OA-β-G剂量的增加，4种紧密连接蛋白在细胞膜上恢复了正常的分布，同时也增加了表达量。
实施例2齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷抗溃疡性结肠炎的体内实验
1.实验试剂
主要实验试剂见表2。
表2 主要实验试剂
2.动物分组
SPF级BALB/c雄性小鼠（体重22-24 g），购自长春亿斯实验动物技术有限责任公司。小鼠适应性饲养1周后，随机分为6组（n=10），包括：空白组（Control），模型组（Model），阳性药组（5-ASA，100 mg/kg），齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷低剂量组（28-OA-β-GL，5mg/kg）、中剂量组（28-OA-β-GM，10 mg/kg）以及高剂量组（28-OA-β-GH，20 mg/kg）。
3.动物造模及给药
空白组（Control）给予蒸馏水，其他组自由饮用3.5%葡聚糖硫酸钠（M.W.: 40000Da，DSS）溶液7天以诱导UC模型。造模第4天到第10天，空白组（Control）和模型组（Model）小鼠灌胃给予蒸馏水，其他组小鼠分别灌胃给予5-ASA或28-OA-β-G溶液。每天灌胃1次。给药体积均为10 ml/kg。第10天禁食12 h后，所有小鼠采用眼球取血法收集全血，脱颈法处死小鼠，收集结肠组织和脾脏组织。
4.实验检测及结果分析
体重和疾病活动指数评分：在实验过程中，每天称量所有小鼠的体重，并观察小鼠的一般行为状态，每天对小鼠的体重变化、粪便状态和便血情况进行记录，并根据表3中所示标准进行评分，根据公式：疾病活动指数（Disease activity index，DAI）=（体重减轻评分+粪便状态评分+便血情况评分）/3，计算出每天每组小鼠的平均DAI评分。
表3疾病活动指数评分标准
体重：结果见图7，在整个实验过程中，空白组（Control）的小鼠行动和饮食正常，体重上升；模型组（Model）小鼠随着造模时间的增长逐渐食欲减退和体重减轻；给药组小鼠在经5-ASA和28-OA-β-G干预后，体重下降速率明显减缓，第10天各给药组小鼠体重均大于模型组。其中，28-OA-β-GH组的体重变化趋向于空白组（Control），且28-OA-β-G给药组的体重变化与剂量的增加呈正相关。
DAI评分：结果见图8。实验过程中，空白组（Control）小鼠大便干燥，无肛门出血，DAI评分基本不变；而模型组（Model）小鼠随着DSS诱导时间的延长逐渐出现稀便、血便，DAI评分也随着造模时间延长而增加；从实验的第5天开始就可看出各给药组小鼠的DAI分数增长速率较模型组（Model）明显减缓，实验第10天，28-OA-β-GH组DAI评分显著低于模型组（Model），且相较于5-ASA组无显著性差异。
结肠长度：结果见图9，与空白组（Control）相比，模型组（Model）结肠长度明显缩短，说明小鼠结肠组织受损；而口服28-OA-β-G后，可有效减轻结肠损伤程度。
脾脏指数：分离脾脏组织，精确称量后根据公式计算脾脏指数：脾脏指数 = 脾脏质量（mg）/小鼠体重（g），结果见图10。脾脏指数同样会体现机体内炎症反应程度。结果显示，模型组（Model）小鼠的脾脏指数较之空白组（Control）显著升高，说明小鼠体内产生了炎症反应；与模型组（Model）比较，阳性药组、28-OA-β-G高、中剂量组小鼠的脾脏指数均显著降低，且28-OA-β-G高剂量组与阳性药5-ASA组的脾脏指数相似，无明显差异（p>0.05）。
从结肠长度和脾脏指数测量结果可见齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可减轻UC模型小鼠的结肠损伤和炎症反应。
FD4渗透性分析：所有小鼠在处死前30分钟，灌胃给予20 mg/kg的FD4生理盐水溶液，在无菌超净台上，眼球取血法收集全血，离心后取上层血清，将血清吸入黑色96孔微板内。使用酶标仪在激发波长492nm以及发射波长520nm下检测荧光强度。结果见图11。模型组（Model）由于肠道屏障功能受损，导致荧光素外溢，流入血中；而28-OA-β-G干预后，血清内FD4浓度显著降低，提示28-OA-β-G可以降低FD4渗透性，提高UC小鼠的肠道屏障功能。
炎症因子和氧化应激指标的含量测定：取血清和结肠样本，使用ELISA试剂盒测定血清和结肠中TNF-α、IL-6、iNOS的含量，同时检测结肠中MPO、SOD、MDA水平。TNF-α、IL-6、iNOS的测定结果如图12、图13和图14所示，与空白组（Control）相比，模型组（Model）血清和结肠中TNF-α、IL-6和iNOS的水平均显著增加。灌胃给予5-ASA和28-OA-β-G后，上述因子的水平均显著下降。值得一提的是，高剂量28-OA-β-G显示出与阳性药5-ASA相似的药理作用（p>0.05）。结果表明，28-OA-β-G可呈剂量依赖性地降低溃疡性结肠炎小鼠的TNF-α、IL-6和iNOS水平。MPO、SOD、MDA的测定结果如图15、图16和图17所示。模型组（Model）结肠中MDA和MPO的水平均显著高于Control组，给药干预后上述指标水平均受到不同程度的抑制。SOD变化趋势与其他指标相反。从上述结果可以看出28-OA-β-G可呈剂量依赖性地降低UC模型小鼠的TNF-α、iNOS、IL-6、MDA和MPO水平，升高SOD水平。
小鼠结肠组织病理学检查：小鼠结肠组织使用4%多聚甲醛/通用型组织固定液固定后，进行石蜡包埋、切片、脱蜡、水化、苏木精-伊红（H&E）染色、分化、透明、封片之后，在光学显微镜下观察并拍摄照片。结果如图18所示，空白组（Control）可见正常完整的结肠结构和黏膜上皮；但模型组（Model）结肠黏膜损伤严重，黏膜下区水肿，杯状细胞缺失，炎症细胞浸润，隐窝缺失；与模型组（Model）比较，各给药组结肠组织症状均不同程度上有所缓解，炎症细胞浸润减少，上皮损伤恢复，结肠组织相对完整。
小鼠结肠组织透射电镜观察：小鼠结肠组织使用2.5%戊二醛溶液固定后，进行后固定、脱水、树脂包埋、切片、醋酸铀酰和柠檬酸铅染色，在透射电子显微镜下观察并拍摄照片。结果如图19所示，空白组（Control）小鼠结肠粘膜细胞刷状缘微绒毛整齐排列，微绒毛细长、紧密。细胞间紧密连接形态正常，细胞器无变性，细胞质内无空泡改变；模型组（Model）小鼠微绒毛稀疏、变短甚至消失，细胞间连接不再紧密，细胞质不均匀，线粒体出现空泡变性。与模型组（Model）相比，28-OA-β-GH组恢复了肠粘膜细胞完整性，微绒毛整齐排列，细胞器无变性，保持了小鼠结肠黏膜上皮细胞超微结构。
结果表明，齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有显著的抗溃疡性结肠炎活性，并与一线治疗药5-ASA阳性对照组无统计学差异，二者具有相当的疗效。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (9)
1.齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中TNF-α水平的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中IL-6水平的药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体血清和/或结肠中iNOS水平的药物中的应用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体结肠中MPO水平和/或MDA水平的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备提高机体结肠中SOD水平的药物中的应用。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备增加结肠长度的药物中的应用。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低肠道通透性的药物中的应用。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备降低机体疾病活动指数和/或脾脏指数的药物中的应用。
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