CN117337989A - 一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒及其制备方法，本发明采用pH偏移的方法，实现了对纳米颗粒负载量的调控，相较于传统方法，本发明制备的纳米颗粒姜黄素的负载量更高，从而有助于提高药物的生物利用度和疗效，这将为姜黄素在食品及医药领域的应用提供了新的可能；本发明所采用的方法不仅提高了姜黄素的水溶性和稳定性，还实现了酪蛋白或乳清蛋白的绿色可持续化高值应用，这意味着我们可以在保持酪蛋白或乳清蛋白原有功能的基础上，提高其附加值，为食品工业和生物医药产业带来更高的经济效益；本发明无有机试剂引入、载体安全无毒、操作简便、成本低廉，这一特点使得该技术具有良好的经济效益、环保效益和应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及食品科学和纳米技术领域，具体涉及一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒及其制备方法。
背景技术
随着慢病“井喷”时代到来，再加亚健康人群呈年轻化趋势，食药同源产品成为健康领域的“新兴蓝海”，食药一体虽逐渐被国际市场认可，但存在价值挖掘不全面、基础研究不足、精深加工力弱、产品同质化现象严重等问题，因此原料活性成分挖掘及其高值化利用亟待解决。
姜黄素作为疏水性天然多酚类活性物质的代表，具有多种潜在的健康功效，生物安全性高，应用于功能食品中具有巨大潜力，然而，其水溶性低、结晶度高、稳定性差以及生物可给性低等问题极大地限制了它们在食品配料中的应用。目前，基于纳米技术，已经开发了各种纳米尺度的输送体系（如：脂质体、纳米乳液、聚合物纳米颗粒、无机纳米颗粒）来克服这些障碍，但目前的体系在工业生产中仍有诸多问题，如：负载量低（乳剂中0.05-0.2克/100克）、颗粒生长不受控制、有机溶剂残留和热力学稳定性差等，这会导致为达到足够的剂量人体必须摄入更多的纳米颗粒，合成或半合成聚合物等载体材料的大量摄入可能导致潜在的人体毒性。因此，迫切需要开发一种载量高、稳定性好、无毒性的载体材料及制备技术递送姜黄素。
pH偏移作为制备纳米颗粒方法之一，因无有机试剂引入、载体安全无毒、操作简便、成本低廉等优点，目前被应用于植物蛋白，特别是一些醇溶性蛋白提高其溶解性的研究。乳蛋白（酪蛋白、乳清蛋白）是富含蛋白质的乳制品，因具有两亲性、价格低廉、良好的稳定性等优点广泛应用于食品、医药等领域。然而，乳蛋白的生物利用度较低，限制了其在这些领域的应用。纳米颗粒作为一种具有较大比表面积和生物可利用性的载体，在营养素的输送、食品医药领域中生物活性物质的负载等方面具有独特的前景。然而，现有的纳米颗粒制备方法往往存在成本高、效率低、产物稳定性差等问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒及其制备方法，得到的负载姜黄素的纳米颗粒具有包埋率高和负载量大的特点。
为了实现上述目的，本发明采取如下技术方案：
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
S1、将载体材料分散在PBS缓冲液中，搅拌均匀，然后放入2-4℃冰箱水合8-16h，得到蛋白储备液；
S2、用0.5-2mol/L NaOH溶液将蛋白储备液的pH调为11.0-12.0，在20-30℃下搅拌30-45min，得到改性蛋白分散液；
S3、将姜黄素粉末加入到改性蛋白分散液中，经搅拌、超声处理，得到混合液；
S4、用0.5-2mol/L酸溶液将混合液的pH调为7.0-8.0，在20-30℃下搅拌60-180min，得到纳米悬浮液；
S5、将纳米悬浮液进行离心，取上清液干燥，即得到负载姜黄素的纳米颗粒。
优选的，步骤S1中，所述载体材料选自酪蛋白或乳清蛋白。
优选的，步骤S1中，载体材料的浓度为10-30mg/mL。
优选的，步骤S3中，混合液中姜黄素的浓度为2-6mg/mL。
优选的，步骤S3中，搅拌条件为：在20-30℃下以400-700r/min的转速搅拌5-10min；超声条件为：超声频率为20KHz，超声功率为200-600W，超声时间为5-15min。
优选的，步骤S4中，所述酸溶液选自磷酸、盐酸或植酸。
优选的，步骤S5中，离心条件为：离心力8000-10000g，离心时间10-20 min。
优选的，步骤S5中，干燥方式为冷冻干燥或喷雾干燥。
本发明提供由上述制备方法所制备得到的负载姜黄素的纳米颗粒。
本发明还提供上述负载姜黄素的纳米颗粒在食品添加剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、本发明采用pH偏移的方法，实现了对纳米颗粒负载量的调控，相较于传统方法，本发明制备的纳米颗粒姜黄素的负载量更高，从而有助于提高药物的生物利用度和疗效，这将为姜黄素在食品及医药领域的应用提供了新的可能。
2、本发明所采用的方法不仅提高了姜黄素的水溶性和稳定性，还实现了酪蛋白或乳清蛋白的绿色可持续化高值应用，这意味着我们可以在保持酪蛋白或乳清蛋白原有功能的基础上，提高其附加值，为食品工业和生物医药产业带来更高的经济效益。
3、本发明无有机试剂引入、载体安全无毒、操作简便、成本低廉，这一特点使得该技术具有良好的经济效益、环保效益和应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1不同酸化pH下纳米悬浮液的外观形态图；
图2为本发明实施例2不同姜黄素浓度下纳米悬浮液的外观形态图；
图3为本发明实施例3不同酪蛋白浓度下纳米悬浮液的外观形态图。
具体实施方式
以下通过具体较佳实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。
需要说明的是，无特殊说明外，本发明中涉及到的化学试剂均通过商业渠道购买。
本发明实施例中所采用的酪蛋白购自北京博奥拓达科技有限公司；
酪蛋白胶束购自晟溪生物科技（上海）有限公司；
乳清蛋白购自上海源叶生物科技有限公司。
实施例1
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白为原料，称取3g酪蛋白分散于300 mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为10mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，待完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到蛋白储备液；取3份100mL溶液，用1M的NaOH溶液将pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min，分别在每份溶液中加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，然后将上述溶液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W，用1M的HCL溶液将3份混合液的pH分别回调至6.0、7.0、8.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素，得到纳米悬浮液；
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
1.负载姜黄素纳米颗粒的粒径和ζ-电位测定
根据动态光散射原理，在25℃下用Malvern 3000激光粒度仪测量姜黄素纳米颗粒的尺寸及ζ-电位，测量前，将待测样品用去离子水稀释按1：100稀释，以避免多重光散射效应。
2.负载姜黄素纳米颗粒的包埋率和固载量测定
姜黄素标准曲线测定：精确称取11.2mg姜黄素于10 mL的容量瓶中，用无水甲醇溶液定容到10 mL，得到1.12mg/mL的姜黄素母液，取一定体积的姜黄素母液，用无水甲醇进行稀释，分别得到1.75μg/ml、3.5μg/ml、7μg/ml、14μg/ml、28μg/ml姜黄素溶液，利用酶标仪在425nm处测得吸光值，以姜黄素的浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到姜黄素在无水甲醇溶液的标准曲线。
包埋率：取500uL离心后的上清液，加入无水甲醇漩涡振荡10min，使蛋白沉淀，姜黄素全部提取到无水甲醇中，在4℃下经过8000g离心15 min测定姜黄素的浓度。
负载量：称取10mg/mL的纳米颗粒粉末溶解在10mL的去离子水中，取500uL上述溶液以将酪蛋白沉淀，姜黄素全部提取到无水甲醇中，在4℃下经过8000g离心15 min测定姜黄素的浓度。
纳米颗粒对姜黄素的包埋率及负载量计算公式如下：
式中：m1为封装姜黄素含量；m为姜黄素理论添加量；m2为干燥后纳米颗粒的质量，试验结果如表1所示：
表1
根据表1的数据可以看出，随着酸化pH升高，姜黄素的包埋率和固载量呈现逐渐增大的趋势，当酸化pH为8.0时，姜黄素的包埋率达到72.44%，负载量达到198.50mg/g。
这一现象可以从酪蛋白分子和姜黄素分子的特性入手进行解释。一方面，随着酸化pH升高，酪蛋白分子中的酸性氨基酸（如天冬氨酸、谷氨酸等）的电荷状态发生改变，酪蛋白分子表面的带电区域增加，酪蛋白分子也更容易折叠和聚集，增加了酪蛋白分子表面积，从而增强了酪蛋白分子与姜黄素之间的相互作用，促进了姜黄素的包埋和负载。另一方面，姜黄素作为一种类脂色素，具有较强的极性，随着酸化pH升高，姜黄素分子中的羟基可以部分质子化，使得姜黄素分子带有一定的正电荷，进一步增强了与酪蛋白的结合，从而使包埋率和负载量增加。此外，随着酸化pH升高，粒径总体呈上升趋势，均在200nm左右，ζ-电位变化不大，绝对值均大于30mV，体系呈现较好的稳定性。
色泽是判断样品质量的重要途径，纳米颗粒的亮度及颜色变化与其结构及材料中类脂色素浓度密切相关。图1为实施例1中不同酸化pH下纳米颗粒的外观形态图，随着酸化pH从6增加到8，纳米颗粒的色调和亮度发生了改变，颜色逐渐暗淡并向红黄色偏移，一方面是包埋率提高使更多的姜黄素被蛋白层覆盖，另外，固载量的提高使吸附在固-液界面上的酪蛋白载体膜变的很薄。
实施例2
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白为原料，将5g酪蛋白分散在500 mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中并调节分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，酪蛋白完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到浓度为10mg/mL（w/v）的酪蛋白储备液，取5份100mL蛋白溶液，用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后分别加入200mg、400mg、600mg、800mg、1000mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，得到5份混合液，将上述溶液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W，用1M的HCL溶液分别将这5份混合液的pH回调至7.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素。
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量；
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，结果如表2所示：
表2
根据表2的数据可以看出，随着姜黄素浓度的增加，其包埋率逐渐降低，改性酪蛋白与姜黄素之间的相互作用可能变得更加复杂，导致姜黄素分子在蛋白的包埋空间中难以均匀分布，从而降低了姜黄素的包埋率，在6-8mg/mL时急剧下降。这可能是因为姜黄素的添加量超过了蛋白的荷载能力，部分姜黄素再产生晶核，使蛋白发生聚集和沉淀。而负载量呈现先增加后减少的趋势，负载量最高可增到203.10mg/g，这可能是因为在一定范围内酪蛋白与姜黄素之间的相互作用增强，姜黄素能够较好地嵌入酪蛋白中并能够形成较稳定的颗粒，使负载量增加。但当姜黄素浓度继续增加时，蛋白与姜黄素之间的相互作用可能会变得过于剧烈而不稳定，导致姜黄素可能会从酪蛋白分子解离出来。另外，当姜黄素浓度过高时，酪蛋白分子的空间结构可能会被过度压缩，从而影响其在蛋白中负载量。此外，利用超声辅助pH偏移的方法可以诱导酪蛋白和姜黄素组装形成稳定性较好的纳米级颗粒，颗粒平均粒径均在200nm左右，ζ-电位的绝对值均大于20 mV，一般认为绝对值大于20mV的纳米粒子由于其足够的静电斥力，因此具有良好的胶体稳定性。
图2为实施例2中不同姜黄素浓度下纳米颗粒的外观形态图，随着姜黄素浓度的提高，纳米颗粒的颜色先由黄色向红黄色偏移，当浓度升高到6mg/mL时，姜黄素的包载达到饱和后又向黄色偏移，亮度也呈现同样的变化趋势，由鲜明逐渐转向暗淡，当浓度升高到6mg/mL时纳米颗粒的亮度最暗，随着浓度升高，亮度又变得较为鲜明，此变化与纳米颗粒的包封效率结果相一致。
实施例3
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白为原料，称取5份酪蛋白分别分散于100mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL及40mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，酪蛋白完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到不同浓度的蛋白储备液；用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，得到5份混合液，将上述溶液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W，用1M的HCL溶液分别将这5份混合液的pH回调至7.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素。
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，结果如表3所示：
表3
根据表3的数据可以看出，随着酪蛋白浓度的升高，姜黄素的包埋率和固载量先呈现增大后减少的趋势。当酪蛋白浓度为10mg/mL时，固载量达到最高值203.10mg/g，此时包埋率为69.56%。
酪蛋白浓度较低时，酪蛋白分子的空间结构相对较宽松，加入姜黄素时，姜黄素分子更容易与酪蛋白分子相互作用，导致姜黄素的包埋率及固载量逐渐增大。但随着酪蛋白浓度的增加，空间结构变得更加紧密，蛋白分子之间的相互作用可能也会增强，从而导致蛋白质分子聚集成为胶束，减少了与姜黄素分子作用的疏水位点，使包埋率及固载量出现下降。此外，随着蛋白浓度的增加，粒径总体呈降低的趋势，均在200nm左右，ζ-电位变化不大，绝对值均大于35mV，体系呈现较好的稳定性。
图3为实施例3中不同酪蛋白浓度下纳米颗粒的外观形态图，随着酪蛋白浓度的提高，纳米颗粒的颜色向红黄色偏移，当浓度大于10mg/mL时，纳米颗粒逐渐变暗并向黄色偏移，说明载体蛋白层加厚，纳米颗粒具有较差的包封效果，此变化与纳米颗粒的包封效率相一致。
实施例4
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白胶束为原料，称取1g分别分散于100mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为10mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，待完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到蛋白储备液。用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，将上述分散液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W。用1M的HCL溶液将混合液的pH回调至8.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素，得到纳米悬浮液；
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，纳米颗粒的粒径为257.83±0.60nm，ζ-电位为-35.20±1.07mV，包埋率为73.56%±0.08，负载量为206.10±1.01mg/g。
实施例5
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以乳清蛋白为原料，称取1g分别分散于100mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为10mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，待完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到蛋白储备液。用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，将上述分散液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W。用1M的HCL溶液将混合液的pH回调至8.0，在25℃下搅拌2h使乳清蛋白充分包载姜黄素，得到纳米悬浮液；
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，纳米颗粒的粒径为164.01±1.15nm，ζ-电位为-29.97±0.86mV，包埋率为76.24%±0.33，负载量为198.52±0.47mg/g。
实施例6
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白为原料，称取1g分别分散于100mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为10mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，待完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到蛋白储备液；用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，将上述分散液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W；用1M的H3PO4溶液将混合液的pH回调至8.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素，得到纳米悬浮液；
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，纳米颗粒的粒径为221.06±1.23nm，ζ-电位为-31.42±0.58mV，包埋率为78.47%±0.34，负载量为208.06±0.89mg/g。
实施例7
一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
以酪蛋白为原料，称取1g分别分散于100mL PBS(0.01M，pH7.0)溶液中，配成浓度为10mg/mL(w/v)的蛋白分散液，调节其分散液的pH至7.0，然后在45℃下以500r/min的转速搅拌3小时，待完全溶解后放入4℃冰箱水合12h得到蛋白储备液；用1M的NaOH溶液将其pH调至12.0，在25℃下以500r/min的转速搅拌45min后加入600mg的姜黄素粉末，继续搅拌5min，将上述分散液在装有6mm变幅杆的超声设备上进行15min的超声处理，超声频率为20KHz，超声功率为400W；用1M的植酸将混合液的pH回调至8.0，在25℃下搅拌2h使酪蛋白充分包载姜黄素，得到纳米悬浮液；
将所得纳米悬浮液在4℃下经过8000g离心10 min，去除游离的姜黄素和未包载的大分子蛋白，取50ml上清液测定纳米颗粒的粒度、ζ-电位及姜黄素的包埋率，剩下50mL经过冷冻干燥后测定纳米颗粒的固载量及再分散水化液的粒径和ζ-电位。
纳米颗粒的粒径、电位、包埋率及固载量测试方法同实施例1，纳米颗粒的粒径为220.65±0.58nm，ζ-电位为-35.10±1.21mV，包埋率为75.94%±0.09，负载量为210.12±1.03mg/g。
最后需要说明的是：以上实施例不以任何形式限制本发明。对本领域技术人员来说，在本发明基础上，可以对其作一些修改和改进。因此，凡在不偏离本发明精神的基础上所做的任何修改或改进，均属于本发明要求保护的范围之内。
Claims (7)
1.一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将载体材料分散在PBS缓冲液中，搅拌均匀，然后放入2-4℃冰箱水合8-16h，得到蛋白储备液；
S2、用0.5-2mol/L NaOH溶液将蛋白储备液的pH调为11.0-12.0，在20-30℃下搅拌30-45min，得到改性蛋白分散液；
S3、将姜黄素粉末加入到改性蛋白分散液中，经搅拌、超声处理，得到混合液；
S4、用0.5-2mol/L酸溶液将混合液的pH调为7.0-8.0，在20-30℃下搅拌60-180min，得到纳米悬浮液；
S5、将纳米悬浮液进行离心，取上清液干燥，即得到负载姜黄素的纳米颗粒；
步骤S1中，所述载体材料选自酪蛋白或乳清蛋白；
步骤S1中，载体材料的浓度为10-30mg/mL；
步骤S3中，混合液中姜黄素的浓度为2-6mg/mL。
2.根据权利要求1所述的一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤S3中，搅拌条件为：在20-30℃下以400-700r/min的转速搅拌5-10min；超声条件为：超声频率为20KHz，超声功率为200-600W，超声时间为5-15min。
3.根据权利要求1所述的一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述酸溶液选自磷酸、盐酸或植酸。
4.根据权利要求1所述的一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤S5中，离心条件为：离心力8000-10000g，离心时间10-20 min。
5.根据权利要求1所述的一种基于pH偏移负载姜黄素的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤S5中，干燥方式为冷冻干燥或喷雾干燥。
6.如权利要求1-5任一项所述制备方法所制备得到的负载姜黄素的纳米颗粒。
7.如权利要求6所述的负载姜黄素的纳米颗粒在食品添加剂中的应用。
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