CN117288869A - 一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析化学技术领域，涉及一种原料药中对甲苯磺酸酯类基因毒杂质的检测方法。本发明通过一维分离，使大量药物活性成分（API）被洗脱，而对甲苯磺酸酯类杂质被保留在色谱柱上。一些与对甲苯磺酸成盐的药物，在酸性条件下可水解为离子型，在反相固相萃取柱上可快速洗脱。因此，通过流动相从高水相(0.1wt%磷酸)增加到高有机相，从而将对甲苯磺酸酯类杂质洗脱至色谱柱，利用二维分离和定量对甲苯磺酸类杂质。因此，本发明提供的方法抗干扰性好，重现性高。
Description
技术领域
本发明属于分析化学技术领域，涉及一种原料药中对甲苯磺酸酯类基因毒杂质的检测方法。
背景技术
对甲苯磺酸酯是常见的一类基因毒杂质。研究表明磺酸酯具有诱变性，能够直接或者经代谢活化后间接地将自身结构上的烷基残基转移到富电子的DNA碱基上而引起DNA的烷基化，从而导致遗传物质的损伤。
该类杂质具有以下分析难点：1、限度达ppm级，对方法的灵敏度与选择性要求高。2、属于痕量杂质，存在高浓度API干扰。3、磺酸酯在高水相溶剂中的不稳定性。现有文献报道的方法大多使用LC-MS/MS法，但上述方法存在几个干扰因素：1、质谱是离子化检测的，重复性不好，一般定量需要加内标；2、质谱离子源容易有残留离子或被污染。3，质谱离子峰受参数影响较大。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种原料药中对甲苯磺酸酯类基因毒杂质的检测方法，本发明提供的检测方法检测时，干扰因素少，重现性好。
为了实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法，包括以下步骤：
将待测液依次进行一维液相分离和二维液相分离，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图；所述对甲苯磺酸酯类杂质包括对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯中的一种或几种；
根据所述对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图与预定的标准曲线，得到对甲苯磺酸酯类杂质的含量；所述预定的标准曲线为对甲苯磺酸酯类杂质的浓度和峰面积的线性关系；
所述一维液相分离的条件包括：进样方式为分段进样；富集柱为C8柱；一维流动相A为磷酸溶液；一维流动相B为乙腈；
一维梯度洗脱的程序为：
0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；
5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；
12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
所述二维液相分离的色谱条件包括：色谱柱为五氟苯基色谱柱；柱温：30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；流速为1ml/min;
二维梯度洗脱的程序为：
0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；
8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；
12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；
14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；
18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%。
19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
检测条件为：检测器为2个二极管阵列检测器；波长为225nm。
优选地，所述富集柱为CAPCELL PAK C8。
优选地，所述色谱柱为welch Ultimate PFP色谱柱。
优选地，所述分段进样为进样4个循环至定量环；每个循环为依次进样25μL对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液、250μL待测液和475μL水，定量环中的混合液中乙腈的体积含量为20%。
优选地，所述磷酸溶液中磷酸的质量浓度为0.1%。
优选地，所述对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液包括对甲苯磺酸酯类杂质的标准品和乙腈；所述待测液中的溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液。
本发明提供了一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法，包括以下步骤：将待测液依次进行一维液相分离和二维液相分离，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图；所述对甲苯磺酸酯类杂质包括对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯中的一种或几种；根据所述对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图与预定的标准曲线，得到对甲苯磺酸酯类杂质的含量；所述预定的标准曲线为对甲苯磺酸酯类杂质的浓度和峰面积的线性关系；所述一维液相分离的条件包括：进样方式为分段进样；富集柱为C8柱；一维流动相A为磷酸溶液；一维流动相B为乙腈；一维梯度洗脱的程序为：0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；所述二维液相分离的色谱条件包括：色谱柱为五氟苯基色谱柱；柱温：30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；流速为1ml/min；二维梯度洗脱的程序为：0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%；19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；检测条件为：检测器为2个二极管阵列检测器；波长为225nm。本发明通过一维分离，使大量药物活性成分（API）被洗脱，而对甲苯磺酸酯类杂质被保留在色谱柱上。一些与对甲苯磺酸成盐的药物，在酸性条件下可水解为离子型，在反相固相萃取柱上可快速洗脱。因此，通过流动相从高水相(0.1wt%磷酸)增加到高有机相，从而将对甲苯磺酸酯类杂质洗脱至色谱柱，利用二维分离和定量对甲苯磺酸类杂质。由于严格限定了分离条件并采用UV检测器，干扰因素很少，重现性高。
附图说明
图1为本发明提供的一维液相分离和二维液相分离示意图；
图2为加标供试品溶液和空白溶液检测色谱图；
图3为不同有机相比例的对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯对照品溶液的一维液相分离的色谱图；
具体实施方式
本发明提供了一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法，包括以下步骤：
将待测液依次进行一维液相分离和二维液相分离，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图；所述对甲苯磺酸酯类杂质包括对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯中的一种或几种；
根据所述对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图与预定的标准曲线，得到对甲苯磺酸酯类杂质的含量；所述预定的标准曲线为对甲苯磺酸酯类杂质的浓度和峰面积的线性关系；
所述一维液相分离的条件包括：进样方式为分段进样；富集柱为C8柱；一维流动相A为磷酸溶液；一维流动相B为乙腈；
一维梯度洗脱的程序为：
0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；
5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；
12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
所述二维液相分离的色谱条件包括：色谱柱为五氟苯基色谱柱；柱温：30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；流速为1ml/min;
二维梯度洗脱的程序为：
0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；
8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；
12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；
14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；
18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%；
19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
检测条件为：检测器为2个二极管阵列检测器；波长为225nm。
本发明将待测液依次进行一维液相分离和二维液相分离，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图。
在本发明中，所述一维液相分离和二维液相分离优选为：将待测液分段进样至一维富集柱，富集集分经第一洗脱至二维色谱柱后，进行第二洗脱，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图；
在本发明中，所述分段进样优选为进样4个循环至定量环；每个循环为依次进样25μL对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液、250μL待测液和475μL水，定量环中的混合液中乙腈的体积含量为20%。在本发明中，所述对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液优选包括对甲苯磺酸酯类杂质的标准品和乙腈；所述待测液中的溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液。
在本发明中，所述一维液相分离的富集柱为C8柱，优选为CAPCELL PAK C8柱；所述一维液相分离的一维流动相A为磷酸溶液；所述磷酸溶液中磷酸的质量浓度优选为0.1%；一维流动相B为乙腈。
在本发明中，所述第一洗脱优选为梯度洗脱；
一维梯度洗脱的程序为：
0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；
5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；
12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%。
在本发明中，所述二维液相分离的色谱条件优选包括：色谱柱为五氟苯基色谱柱，优选为welch Ultimate PFP色谱柱；柱温为30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；
二维梯度洗脱的程序为：
0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；
8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；
12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；
14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；
18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%；
19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%。
在本发明中，所述一维液相分离和二维液相分离优选通过六通阀实现。具体地，以图1为例，进样完成后，六通阀在位置1，样品经富集柱富集；然后，六通阀切换至位置2，富集柱与色谱柱串联，将对甲苯磺酸酯第一洗脱至色谱柱；然后，再将六通阀切换至位置1，此时富集柱与色谱柱独立存在，此时对色谱柱进行第二洗脱。
在本发明中，所述检测器为2个二极管阵列检测器，所述检测器具体为一个带有10mm流量池的DAD-3000(RS)二极管阵列检测器和一个带有60mm High Sens流量池的二极管阵列检测器组成。
得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图后，本发明根据所述对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图与预定的标准曲线，得到对甲苯磺酸酯类杂质的含量；所述预定的标准曲线为对甲苯磺酸酯类杂质的浓度和峰面积的线性关系。
在本发明中，所述预定的标准曲线的配置优选为：
分别将系列浓度的对甲苯磺酸甲酯溶液、对甲苯磺酸乙酯溶液和对甲苯磺酸异丙酯溶液按照“一维液相分离、二维液相分离”进行分离检测，分别得到各浓度下的对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯的峰面积；
以峰面积为纵坐标，以对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯的浓度为横坐标，得到浓度和峰面积的线性曲线。
实施例中的试剂和系统如下：Thermo Fisher Scientific U3000RS二元高效液相色谱系统；对甲苯磺酸甲酯 ( >99%)、对甲苯磺酸乙酯 ( >98%)和对甲苯磺酸异丙酯 ( >98%)购自北京伊诺凯化学科技有限公司和上海韶远试剂有限公司。甲苯磺酸妥舒沙星、甲苯磺酸拉帕替尼、甲苯磺酸尼拉帕利、卡培他滨原料药分别购自湖北威利德化工科技有限公司、上海赢睿生物医药科技有限公司、上海皓鸿生物医药科技有限公司。HPLC级的磷酸和乙腈分别购自Fisher Chemical。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1.1 试剂材料
对照品贮备液：准确称量一定量的对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯至10mL量瓶中，用乙腈稀释至浓度为1mg/mL的贮备液，储存于4℃冰箱备用。
低，中，高浓度的对照品溶液：将1mg/mL对照品贮备液用乙腈稀释至浓度为40、100、200ng/mL作为低，中，高浓度的对照品溶液。
供试品溶液：分别准确称量原料药对甲苯磺酸妥舒沙星、对甲苯磺酸拉帕替尼、对甲苯磺酸尼拉帕利和卡培他滨置于10mL容量瓶中，用50%乙腈溶解并稀释至浓度分别为0.1mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、0.1 mg/mL，记为。
加标供试品溶液：将适量供试品溶液和对照品溶液混合即得。
1.2 标准曲线的配置
配制对甲苯磺酸甲酯浓度分别为20.26、42.52、106.3、212.6、425.2 ng/mL，对甲苯磺酸乙酯浓度分别为20.12、42.03、105.3、210.6、420.3 ng/mL，对甲苯磺酸异丙酯浓度分别为21.34、42.68、106.7、213.4、426.8 ng/mL的系列对照溶液，注入液相色谱仪，按照“1.3 检测条件”色谱条件检测，并分别以峰面积作为纵坐标，对甲苯磺酸甲酯浓度、对甲苯磺酸乙酯浓度和对甲苯磺酸异丙酯浓度为横坐标，得到线性关系，结果显示线性关系良好，其中对甲苯磺酸甲酯回归方程：y = 0.0506x + 0.0376，相关系数r=0.9995；对甲苯磺酸乙酯回归方程：y = 0.0482x + 0.0056，相关系数r=0.9999；对甲苯磺酸异丙酯回归方程：y =0.0427x + 0.0165，相关系数r=1.0000。
1.3 检测条件
色谱检测条件：一维液相分离：进样方式为分段进样；所述分段进样为进样4个循环至定量环；每个循环为依次进样25μL对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液、250μL待测液和475μL水，定量环中的混合液中乙腈的体积含量为20%；富集柱CAPCELL PAK C8柱；流动相A为0.1%磷酸溶液；一维流动相B为乙腈；梯度洗脱的程序为：0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%。
二维液相分离的色谱条件包括：色谱柱为welch Ultimate PFP色谱柱；柱温为30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；梯度洗脱的程序：
0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；12~12.5min：述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%；19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%。
检测程序：进样完成后，六通阀在位置1，样品经富集柱富集；然后，六通阀切换至位置2，富集柱与色谱柱串联，将对甲苯磺酸酯第一洗脱至色谱柱；然后，再将六通阀切换至位置1，此时富集柱与色谱柱独立存在，此时对色谱柱进行第二洗脱。
实施例2
检出限：将对照品贮备液稀释至对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯的浓度分别为10.6、10.5、10.7 ng/mL，按照“1.3 检测条件”进行检测，以被测组分信号（S）和基线噪音（N）的比值≥3的相应浓度确定检出限。
结果为：对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯的检出限为1.06ng/mg，1.05ng/mg，1.07ng/mg。
定量限：将对照品贮备液稀释至对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯的浓度分别为21.3，21.0，21.3 ng/mL后，按照“1.3 检测条件”进行检测，以被测组分信号（S）和基线噪音（N）的比值≥10（S/N≥10）的相应浓度确定定量限。结果为：对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯定量限为2.12ng/mg，2.10ng/mg，2.13ng/mg。
实施例3
精密度测试：取浓度为20ng/mL的对照品溶液注入液相色谱仪，重复进样6针，按照“1.3 检测条件”进行检测，得到对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯的峰面积RSD分别为2.62%，2.46%，1.45%。
实施例4
准确度测试：按照“加标供试品溶液”的配置方法制备4种原料药的加标供试品溶液，分别得到对甲苯磺酸甲酯、乙酯、异丙酯的绝对加标量为4ng，10ng，20ng的低浓度溶液，中浓度溶液和高浓度溶液，然后，按照“1.3 检测条件”进行检测，并计算回收率及RSD，结果见表1。（由于基质杂质的干扰，未计算妥舒沙星和卡培他滨的ITS回收率）。
表1 准确度及重复性结果
实施例5
按照实施例4中的中浓度溶液的配置方法，平行制备6份中浓度溶液，分别注入液相色谱仪，按照“1.3 检测条件”进行检测，计算回收率及RSD，结果见表3。
实施例6
将40ng/mL的对照品溶液在1h，2h，3h，4h时分别注入液相色谱仪，按照“1.3 检测条件”进行检测，得到结果对甲苯磺酸甲酯、乙酯、异丙酯的峰面积RSD为0.84 ~ 1.17%，表明对甲苯磺酸酯杂质在该方法溶剂体系中具有良好的稳定性。
实施例7
按照“加标供试品溶液”的配置方法分别将对甲苯磺酸妥舒沙星、对甲苯磺酸拉帕替尼、对甲苯磺酸尼拉帕利和卡培他滨的供试品溶液配置成含有4.0 ppm对照品的加标供试品溶液；
空白溶液：20%乙腈水溶液。
将上述加标供试品溶液和空白溶液按照“1.3 检测条件”进行检测，色谱图见图2，从图2可知：对甲苯磺酸拉帕替尼、对甲苯磺酸尼拉帕利中目标分析物对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯色谱峰与其他杂质完全分离，然而，对甲苯磺酸妥舒沙星和卡培他滨中对甲苯磺酸异丙酯无法与原料药中的其他杂质分离。
实施例8
配制含有不同有机相比例的对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯对照品混合溶液，其中对照品溶液中含有的乙腈的体积比分别为20%，25%，30%，35%，40%，然后将上述不同有机相比例的对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯对照品溶液进行一维液相分离（直接进样），得到的色谱图见图3；结果显示：当有机相占比为20%时，峰形最尖锐，峰面积较大。
实施例9
第一对照品混合溶液：将适量对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯溶于体积浓度为20%乙腈水溶液中，得到第一对照品混合溶液，第一对照品混合溶液中对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯的浓度均为4ppm。
第二对照品混合溶液：与第一对照品混合溶液的区别仅仅在于：将20%乙腈水溶液替换为50%乙腈水溶液。
第三对照品混合溶液：与第一对照品混合溶液的区别仅仅在于：将20%乙腈水溶液替换为纯乙腈。
将第一对照品混合溶液、第二对照品混合溶液和第三对照品混合溶液连续直接进样6次，按照“1.3 检测条件”进行检测，得到对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯的峰面积，并计算峰面积的RSD。
结果：第一对照品混合溶液、第二对照品混合溶液和第三对照品混合溶液4 h内的RSD（n=6）分别为1.40~39.42%、0.52~2.96%、0.84%~1.17%。选择20%乙腈溶液直接进样RSD值较高，因此不能采用直接进样的方式直接进样。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种原料药中对甲苯磺酸酯类杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将待测液依次进行一维液相分离和二维液相分离，得到对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图；所述对甲苯磺酸酯类杂质包括对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯中的一种或几种；
根据所述对甲苯磺酸酯类杂质的色谱图与预定的标准曲线，得到对甲苯磺酸酯类杂质的含量；所述预定的标准曲线为对甲苯磺酸酯类杂质的浓度和峰面积的线性关系；
所述一维液相分离的条件包括：进样方式为分段进样；富集柱为C8柱；一维流动相A为磷酸溶液；一维流动相B为乙腈；
一维梯度洗脱的程序为：
0~5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到20%；
5~12min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速增加到80%；
12.5~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
所述二维液相分离的色谱条件包括：色谱柱为五氟苯基色谱柱；柱温：30℃；二维流动相A为水；二维流动相B为乙腈；流速为1ml/min;
二维梯度洗脱的程序为：
0~7.5min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
7.5~8.5min：所述流动相A的体积百分含量由80%匀速减少到40%；
8.5~12min：所述流动相A的体积百分含量为40%；
12~12.5min：所述流动相A的体积百分含量由40%匀速减少到20%；
12.5~14min：所述流动相A的体积百分含量为20%；
14~14.5min：所述流动相A的体积百分含量由20%匀速减少到5%；
14.5~18min：所述流动相A的体积百分含量为5%；
18~19min：所述流动相A的体积百分含量由5%匀速增加到80%；
19~20min：所述流动相A的体积百分含量为80%；
检测条件为：检测器为2个二极管阵列检测器；波长为225nm。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述富集柱为CAPCELL PAK C8。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述色谱柱为welch Ultimate PFP色谱柱。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述分段进样为进样4个循环至定量环；每个循环为依次进样25μL对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液、250μL待测液和475μL水，定量环中的混合液中乙腈的体积含量为20%。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述磷酸溶液中磷酸的质量浓度为0.1%。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述对甲苯磺酸酯类杂质的标准品溶液包括对甲苯磺酸酯类杂质的标准品和乙腈；所述待测液中的溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998001571A2 (en) * | 1996-07-05 | 1998-01-15 | Biotica Technology Limited | Erythromycins and process for their preparation |
| WO2001077684A2 (en) * | 2000-04-10 | 2001-10-18 | The Scripps Research Institute | Proteomic analysis using activity-based probe libraries |
| CN102372627A (zh) * | 2010-08-18 | 2012-03-14 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 木豆素及其结构类似物的制备方法 |
| CN105037209A (zh) * | 2015-06-24 | 2015-11-11 | 上海上药第一生化药业有限公司 | 一种拉科酰胺类似物的应用 |
| RU2568638C1 (ru) * | 2015-02-26 | 2015-11-20 | Индивидуальный предприниматель Михайлов Олег Ростиславович | КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ β-МОДИФИКАЦИЯ 4-[4-({ [4-ХЛОРО-3-(ТРИФТОРОМЕТИЛ) ФЕНИЛ]КАРБАМОИЛ} АМИНО)ФЕНОКСИ]-N-МЕТИЛ-ПИРИДИН-2-КАРБОКСАМИДА п-ТОЛУОЛСУЛЬФОНАТА, СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕЁ ОСНОВЕ |
| CN109580825A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 山东铂源药业有限公司 | 消旋卡多曲中对甲苯磺酸酯类物质的检测方法 |
| US20220214355A1 (en) * | 2019-03-21 | 2022-07-07 | University Of Virginia Patent Foundation | Sulfur-heterocycle exchange chemistry and uses thereof |
| CN115128177A (zh) * | 2021-06-18 | 2022-09-30 | 上药康丽（常州）药业有限公司 | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 |
-
2023
- 2023-11-24 CN CN202311577407.6A patent/CN117288869B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998001571A2 (en) * | 1996-07-05 | 1998-01-15 | Biotica Technology Limited | Erythromycins and process for their preparation |
| WO2001077684A2 (en) * | 2000-04-10 | 2001-10-18 | The Scripps Research Institute | Proteomic analysis using activity-based probe libraries |
| CN102372627A (zh) * | 2010-08-18 | 2012-03-14 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 木豆素及其结构类似物的制备方法 |
| RU2568638C1 (ru) * | 2015-02-26 | 2015-11-20 | Индивидуальный предприниматель Михайлов Олег Ростиславович | КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ β-МОДИФИКАЦИЯ 4-[4-({ [4-ХЛОРО-3-(ТРИФТОРОМЕТИЛ) ФЕНИЛ]КАРБАМОИЛ} АМИНО)ФЕНОКСИ]-N-МЕТИЛ-ПИРИДИН-2-КАРБОКСАМИДА п-ТОЛУОЛСУЛЬФОНАТА, СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕЁ ОСНОВЕ |
| CN105037209A (zh) * | 2015-06-24 | 2015-11-11 | 上海上药第一生化药业有限公司 | 一种拉科酰胺类似物的应用 |
| CN109580825A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 山东铂源药业有限公司 | 消旋卡多曲中对甲苯磺酸酯类物质的检测方法 |
| US20220214355A1 (en) * | 2019-03-21 | 2022-07-07 | University Of Virginia Patent Foundation | Sulfur-heterocycle exchange chemistry and uses thereof |
| CN115128177A (zh) * | 2021-06-18 | 2022-09-30 | 上药康丽（常州）药业有限公司 | 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| CONSTANTINOS K. ZACHARIS ET AL: "Application of analytical quality by design principles for the determination of alkyl p-toluenesulfonates impurities in aprepitant by hplc validation using total-error concept", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 * |
| MOHAN B ET AL: "Determination of genotoxic alkyl p-Toluene Sulfonates in cabazitaxel using LC-MS method", 《CURRENT PHARMACEUTICAL ANALYSIS》 * |
| RAVI R. YADAV ET AL: "Determination of potential genotoxic impurities in Sorafenib Tosylate by UPLC method", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF THEORETICAL & APPLIED SCIENCES》 * |
| 周洁: "多种色谱技术在复杂体系药物分析中的应用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
| 姜艺菲 等: "二维液相色谱阀切换接口技术的发展及应用", 《分析试验室》 * |
| 王红;张华山;: "分离检测生物活性物质的荧光标记试剂与分子探针及其应用", 化学进展, no. 05, 24 May 2007 (2007-05-24) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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