CN117288729A - 白介素-10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了白介素‑10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法，其中白介素‑10含量检测试剂盒包括用于放置石英针生物传感器的探针孔、用于容纳样本的试剂孔1、用于容纳标记生物素的抗白介素‑10抗体的试剂孔2、用于容纳多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质的试剂孔3以及用于容纳清洗液的清洗孔1、清洗孔2、清洗孔3、清洗孔4、清洗孔5、清洗孔6、清洗孔7、清洗孔8和清洗孔9。本方案使捕获抗体通过疏水性结合牢固、均一地固定于石英针生物传感器表面，同时利用抗体‑抗原‑抗体的结构以及二次反应二次结合的包被过程提升了检测信号水平，可以检测到更低浓度白介素‑10，提高了检测灵敏度。

Description

白介素-10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法
技术领域
本发明涉及生物检测领域，尤其涉及白介素-10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法。
背景技术
目前针对白介素-10的免疫学检测有化学发光法、流式细胞术等常见检测方法。
化学发光法，原理是将吖啶类衍生物直接标记在目标抗体(抗原)上，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体(如磁珠交联抗体)-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，最后加入氧化剂(H2O2)和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光，并通过光电倍增管(PMT)收集光信号强度，一定时间内光子能积分值与被测抗原(抗体)浓度形成正比。但是，采用化学发光方法得试剂盒所使用的磁性微球表面为带基团的乳胶材质，其反应中容易聚集形成沉淀导致均一性差，并且微球容易与血液中的某些特殊物质非特异的结合，形成非常高的背景信号值，同时，化学发光需要配套大型发光设备，检测难度较大，检测时间较长，检测过程中还需要用到很多液路系统，如磁珠清洗，激发液与预激发液液路等，导致仪器体型庞大，结构复杂，设备要求高，成本较高。
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比。将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷流式细胞术酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。该检测方式可以在一次实验内进行多标志物的检测，但是其多种标志物之间会存在相互交叉和干扰，多种抗体之间也可能存在非特异结合或吸附，并且其检测样品必须为单细胞悬液。最终结果的准确性与样品的制备息息相关，而在将组织解离为单细胞的过程中，可能会影响到细胞，例如会损坏细胞膜等，从而造成结果的不可靠性。
发明内容
因此，为解决上述问题，本发明提供了白介素-10含量检测试剂盒、制备方法及其应用方法。
白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)将氨丙基修饰后的石英针的底部表面包被捕获抗体后烘干，制成石英针生物传感器；
(2)将标记生物素的抗白介素-10抗体用保存液室温下稀释到1ug/mL后，于2℃
-8℃保存待用；
(3)将多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质用保存液室温下稀释到5ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
(4)制备浓度为10mM、PH值为7.4的PBST清洗液，并将清洗液分装为每瓶
100mL，均于2℃-8℃保存待用；
(5)将步骤(1)制备的石英针生物传感器放入探针孔内，将步骤(2)制备的稀释后的标记生物素的抗白介素-10抗体倒入相应试剂孔，将步骤(3)
制备的稀释后的多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质倒入相应试剂孔，将步骤(4)制备的清洗液倒入清洗孔。
优选的，步骤(1)包括以下步骤：
(1.1)制备30ug/mL的抗FITC抗体和浓度为20ug/ml的荧光素标记的白介素
-10抗体；
(1.2)用APS修饰的石英针置于30ug/mL的抗FITC抗体溶液中反应900s，
转速500rpm，然后置于封闭溶液中封闭60s，转速500rpm，之后置于浓度为10mM的PBST溶液中清洗20s，转速500rpm；再置于20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体溶液中反应180s，转速500rpm；最后置于封闭溶液中封闭10s，转速500rpm；
(1.3)将包被完成后的石英针在40℃的温度下烘干5h后制成石英针生物传感器，并保存在干燥环境中待用。
优选的，所述30ug/mL的抗FITC抗体是由PBS缓冲液稀释而成。
优选的，所述20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体是由包含3.58g/L十二水磷酸氢二钠、0.27g磷酸二氢钾、9g/L氯化钠、0.2g的氯化钾、0.05％吐温-20、0.5％BSA、1mg/ml Ficoll-400、0.05％proclin300的稀释液稀释而成。
优选的，步骤(2)中，标记生物素的抗白介素-10抗体中，生物素与抗白介素-10抗体的比例为(5-10)：1。
优选的，所述多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质为用Ficoll-400聚蔗糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5和吖啶酯。
优选的，所述保存液为浓度为10mM的磷酸盐保存液。
白介素-10含量检测试剂盒，根据如上所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法制备而成，还包括用于放置石英针生物传感器的探针孔、用于容纳样本的试剂孔1、用于容纳标记生物素的抗白介素-10抗体的试剂孔2、用于容纳多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质的试剂孔3以及用于容纳清洗液的清洗孔1、清洗孔2、清洗孔3、清洗孔4、清洗孔5、清洗孔6、清洗孔7、清洗孔8和清洗孔9。
白介素-10含量检测试剂盒的应用方法，包括以下步骤：
S1：准备如上所述的白介素-10含量检测试剂盒；
S2：将样本加入到试剂孔1中，并将石英针生物传感器置入试剂孔1中反应60s,转速1200rpm；
S3：将反应过的生物传感器到清洗孔7，清洗孔8中清洗7s，转速1200rpm；
S4：将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应60s，转速1200rpm；
S5：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S6：将清洗后的生物传感器置入试剂孔3中反应15s，转速1200rpm；
S7：将反应好的生物传感器置入清洗孔3，清洗孔4中以1200rpm的转速清洗7s；S8：再将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应15s，转速1200rpm
S9：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S10：再将清洗好的生物传感器置入试剂孔3中反应10s，转速1200rpm；
S11：将反应好的生物传感器到清洗孔1，清洗孔2中以1200rpm的转速清洗7s；S12：将循环反应好的生物传感器置入清洗孔9中读数。
本发明技术方案的有益效果主要体现在：
1、本方案中，石英针表面预先通过APS修饰，APS作为疏水性介质，既保证抗体结合时的有效性，也能去除其他杂蛋白或者杂质对石英针的吸附，因而抗体在石英探针表面的致密度高，检测准确性效果好，通过APS修饰后的石英针包被捕获抗体，捕获抗体包括抗FITC抗体(荧光素抗体)和荧光素标记的白介素-10抗体，荧光素标记的白介素-10抗体可以通过荧光素测定标记抗体的浓度，抗FITC抗体可以和荧光素标记的白介素-10抗体的荧光素特异性的共价结合反应，使捕获抗体通过疏水性结合牢固、均一地固定于石英针生物传感器表面。
2、标记生物素的白介素-10检测抗体与多糖骨架偶联生物素-SA标记结合，经过生物素亲和素放大，其检测背景保持不变，但是检测信号增大了数十上百倍，大大提升了检测信号水平，因而可以检测到更低浓度白介素-10，提高了检测灵敏度。
3、包被后的石英针生物传感器特异地结合血清/血浆中含有的白介素-10抗原，再跟标记生物素的白介素-10抗体形成抗体-抗原-抗体的复合物，运用生物传感器经过多次捕获、反应和清洗流程，在多聚体的多次捕获下，荧光因为有多聚体的存在因而空间结构更大，从原来的二维结构变成了三维立体结构，大大增大反应比表面积，提高反应信号水平并增加检测范围。
4、在白介素-10含量检测试剂盒的应用过程中，石英针生物传感器表面经过一轮捕获抗体-抗原(样本)-检测抗体-多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质后，再次循环包被检测抗体和多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质，连接荧光素抗体的多糖聚物可通过与捕获抗体特异地结合，使荧光素标记的白介素-10抗体通过疏水性结合牢固、均一地固定于石英针生物传感器表面，亲水性极佳的多糖聚合物作为固相基质与抗体结合的桥梁，既可以很好的结合捕获抗体，又能利用其强大的亲水能力去除非特异性吸附，采用了二次反应二次结合的过程，使结合更饱和，提升低端检测灵敏度，可以避免同一个样本的二次检测，节约了检测时间和成本。
附图说明
图1是实施例2中白介素-10含量检测试剂盒的使用状态参考图；
图2是石英针生物传感器表面各物质多次捕获、反应的原理示意图。
图3：本发明实施例3中对实施例2中的白介素-10含量检测试剂盒进行性能测试后所获得的线性范围示意图；
图4：本发明实施例3中对实施例2中的白介素-10含量检测试剂盒进行性能测试后所获得的HOOK效应示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、优点和特点能够更加清楚、详细地展示，将通过下面优选实施例的非限制性说明进行图示和解释。该实施例仅是应用本发明技术方案的典型范例，凡采取等同替换或者等效变换而形成的技术方案，均落在本发明要求保护的范围之内。
同时声明，在方案的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“前”、“后”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，本方案中的术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或者暗示对重要性的排序，或者隐含指明所示的技术特征的数量。因此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明中，“多个”的含义是两个或者两个以上，除非另有明确具体的限定。
白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)将氨丙基修饰后的石英针的底部表面包被捕获抗体后烘干，制成石英针生物传感器；
(2)将标记生物素的抗白介素-10抗体(检测抗体)用保存液室温下稀释到1ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
(3)将多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5用保存液室温下稀释到5ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
(4)制备浓度为10mM(毫摩尔每升)、PH值为7.4的PBST清洗液，并将清洗液分装为每瓶100mL，均于2℃-8℃保存待用；
(5)将步骤(1)制备的石英针生物传感器放入探针孔内，将步骤(2)制备的稀释后的标记生物素的抗白介素-10抗体倒入相应试剂孔，将步骤(3)制备的稀释后的多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5倒入相应试剂孔，将步骤(4)制备的清洗液倒入清洗孔。
在一些实施例中，如图1、图2所示，步骤(1)包括以下步骤：
(1.1)制备30ug/mL的抗FITC抗体和浓度为20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体；
(1.2)用APS修饰的石英针置于30ug/mL的抗FITC抗体溶液中反应900s，转速500rpm，然后置于封闭溶液中封闭60s，转速500rpm，之后置于浓度为10mM的PBST溶液中清洗20s，转速500rpm；再置于20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体溶液中反应180s，转速500rpm；最后置于封闭溶液中封闭10s，转速500rpm；
(1.3)将包被完成后的石英针在40℃的温度下烘干5h后制成石英针生物传感器，并保存在干燥环境中待用。
在一些实施例中，所述30ug/mL的抗FITC抗体优选由PBS缓冲液稀释而成。
在一些实施例中，所述20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体优选由包含3.58g/L十二水磷酸氢二钠、0.27g磷酸二氢钾、9g/L氯化钠、0.2g的氯化钾、0.05％吐温-20、0.5％BSA、1mg/ml Ficoll-400、0.05％proclin300的稀释液稀释而成。
在一些实施例中，步骤(2)中，标记生物素的抗白介素-10抗体中，生物素与抗白介素-10抗体的比例优选为(5-10)：1。
在一些实施例中，所述多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质优选采用Ficoll-400聚蔗糖标记，且所述链霉亲和素荧光物质为Cy5。
在一些实施例中，所述保存液优选采用浓度为10mM的磷酸盐保存液。
实施例1：
白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)将氨丙基修饰后的石英针的底部表面包被捕获抗体后烘干，制成石英针生物传感器；
(1.1)用PBS缓冲液将抗FITC抗体稀释至30ug/mL，用包含3.58g/L十二水磷酸氢二钠、0.27g磷酸二氢钾、9g/L氯化钠、0.2g的氯化钾、0.05％
吐温-20、0.5％BSA、1mg/ml Ficoll-400、0.05％proclin300的稀释液将荧光素标记的白介素-10抗体稀释至20ug/ml；
(1.2)用APS修饰的石英针置于30ug/mL的抗FITC抗体溶液中反应900s，
转速500rpm，然后置于封闭溶液中封闭60s，转速500rpm，之后置于浓度为10mM的PBST溶液中清洗20s，转速500rpm；再置于20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体溶液中反应180s，转速500rpm；最后置于封闭溶液中封闭10s，转速500rpm；
(1.3)将包被完成后的石英针在40℃的温度下烘干5h后制成石英针生物传感器，并保存在干燥环境中待用。
(2)将标记生物素的抗白介素-10抗体用浓度为10mM的磷酸盐保存液在室温下稀释到1ug/mL后，于2℃-8℃保存待用，所述标记生物素的抗白介素-10抗体中，生物素与抗白介素-10抗体的比例为8：1；
(3)将Ficoll-400聚蔗糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5和吖啶酯用浓度为10mM的磷酸盐保存液在室温下稀释到5ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
(4)制备浓度为10mM、PH值为7.4的PBST清洗液，并将清洗液分装为每瓶100mL，均于2℃-8℃保存待用；
(5)将步骤(1)制备的石英针生物传感器放入探针孔内，将步骤(2)制备的稀释后的标记生物素的抗白介素-10抗体倒入相应试剂孔，将步骤(3)
制备的稀释后的多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5倒入相应试剂孔，将步骤(4)制备的清洗液倒入清洗孔。
实施例2：
如图1、图3、图4所示，包括根据如实施例1所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法制备而成的白介素-10含量检测试剂盒，其中，还包括由第一端至第二端依次设置的用于放置石英针生物传感器的探针孔、用于容纳样本的试剂孔1、用于容纳标记生物素的抗白介素-10抗体的试剂孔2、用于容纳多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质的试剂孔3以及用于容纳清洗液的清洗孔1、清洗孔2、清洗孔3、清洗孔4、清洗孔5、清洗孔6、清洗孔7、清洗孔8和清洗孔9，所述清洗孔9为读数孔，其底部透明且底部设置有用于检测信号的光学系统，其中，所述探针孔顶部设置有保护帽，所述试剂孔1、试剂孔2、试剂孔3以及清洗孔1-9的顶部覆盖有铝箔封口。
实施例3
对上述实施例2中的白介素-10含量检测试剂盒进行如下性能测试：
最低检出限：
检测白介素-10空白缓冲液(n＝20)，分别计算(空白均值)和S(标准差)，统计的浓度值。
结论：得到最低检出限≤1.1pg/mL。
线性范围：
用接近线性范围上限(1000pg/mL)的高浓度样本和接近线性范围下限(1.1pg/mL)的低浓度样本按比例混合成11个浓度，每个浓度点测试4次(4＝3)，分别计算测试结果的均值(Yi)，以稀释浓度(Xi)为自变量，以检测结果均值(Yi)为因变量求出线性回归方程，计算线性回归相关系数(r2)，样本信息及测试结构如下表所示：
结论：在1.1pg/ml-1000pg/ml的范围内，r2为0.996。
精密度：
低、中、高值样品(5pg/mL、20pg/mL、500pg/mL)测试，每个浓度重复测试20次(n＝20)，计算变异系数(CV)，
其中，各浓度样品及检测结果如下表所示
其中，低浓度水平的CV为5.01％，中浓度水平CV为4.37％，高浓度水平CV为5.42％。
批间差：
用低值、高值样品(5pg/mL、20pg/mL)分别测试3个不同批号的试剂盒，每个浓度测试10次(n＝10)，分别计算两个浓度的各30个检测结果的CV。
浓度 总均值 标准差 CV
5pg/mL 4.98 0.026 5.2％
20pg/mL 20.1 0.096 4.8％
结果显示：本发明批间差不超过15％。
准确度：
高、低浓度(5pg/mL和20pg/mL)的参考品分别检测各3次(n＝3)，测试结果记为Xi，并按公式分别计算相对偏差(Bi)，Bi＝(Xi-T)/T×100％。
试验结果
本发明的准确度偏差均≤±10％
HOOK效应：
检测白介素-10检测上限(1000pg/mL)及5倍、10倍、100倍于检测上限的样本(5000pg/mL、10000pg/mL、100000pg/mL)，验证其检测信号值是否>1000pg/mL。
试验结果
结果显示检测5000pg/mL、10000pg/mL、100000pg/mL，检测结果均>1000pg/mL，无HD-HOOK效应。随着白介素-10抗原浓度的增加，反应的信号值趋于平缓，但由于本平台每步反应均添加了洗涤过程，因此信号值肯定不会出现下降的趋势。
干扰性：
内源性干扰物质如血红蛋白、甘油三酯、胆红素、生物素以及未添加干扰物质的白介素-10样本为对照，检测添加至下表所述干扰物质浓度的20pg/mL、5pg/mL和阴性样本，得到加入干扰物的样本中的白介素-10含量，根据白介素-10对照值，通过公式：计算其差异。20pg/mL、5pg/mL的检测差异在±10％之内且0pg/mL无显著变化的干扰物质最高浓度即为本试剂干扰物质浓度上限。
上述检测结果得到，上述浓度的干扰物质对本产品检测结果无明显影响(偏差在±10％之内)。
交叉物质：
通过参考相应疾病临床检测指标的文献和国外知名公司的白介素-10检测性能要求，确定了可能发生交叉反应的主要指标：白介素-1α、白介素-1β、白介素-2、白介素-4、白介素-6、白介素-8、IFN-γ、干扰素α-肿瘤坏死因子，用白介素-10检测下表所述浓度交叉物质作为样本，检测其信号值偏差在±10％之内。
检测结果偏差≤±10％，因此对本法检测影响不明显。
综上所述，实施例2所述的白介素-10含量检测试剂盒具备检测信号水平高、检测灵敏度高的优点。
实施例4：
白介素-10含量检测试剂盒的应用方法，如图2所示，包括以下步骤：
S1：准备如上所述的白介素-10含量检测试剂盒；
S2：将样本加入到试剂孔1中，并将石英针生物传感器置入试剂孔1中反应60s,转速1200rpm；
S3：将反应过的生物传感器到清洗孔7，清洗孔8中清洗7s，转速1200rpm；
S4：将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应60s，转速1200rpm；
S5：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S6：将清洗后的生物传感器置入试剂孔3中反应15s，转速1200rpm；
S7：将反应好的生物传感器置入清洗孔3，清洗孔4中以1200rpm的转速清洗7s；S8：再将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应15s，转速1200rpm
S9：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S10：再将清洗好的生物传感器置入试剂孔3中反应10s，转速1200rpm；
S11：将反应好的生物传感器到清洗孔1，清洗孔2中以1200rpm的转速清洗7s；S12：将循环反应好的生物传感器置入清洗孔9中读数。
本发明尚有多种实施方式，凡采用等同变换或者等效变换而形成的所有技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将氨丙基修饰后的石英针的底部表面包被捕获抗体后烘干，制成石英针生物传感器；
将标记生物素的抗白介素-10抗体用保存液室温下稀释到1ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
将多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质用保存液室温下稀释到5ug/mL后，于2℃-8℃保存待用；
制备浓度为10mM 、PH值为7.4的PBST清洗液，并将清洗液分装为每瓶100mL，均于2℃-8℃保存待用；
将步骤（1）制备的石英针生物传感器放入探针孔内，将步骤（2）制备的稀释后的标记生物素的抗白介素-10抗体倒入相应试剂孔，将步骤（3）制备的稀释后的多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质倒入相应试剂孔，将步骤（4）制备的清洗液倒入清洗孔；
步骤（1）中，捕获抗体包括30ug/mL的抗FITC抗体和浓度为20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体。
2.根据权利要求1所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤（1）包括以下步骤：
制备30ug/mL的抗FITC抗体和浓度为20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体；
用APS修饰的石英针置于30ug/mL的抗FITC抗体溶液中反应900s，转速500rpm，然后置于封闭溶液中封闭60s，转速500rpm，之后置于浓度为10mM的PBST溶液中清洗20s，转速500rpm；再置于20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体溶液中反应180s，转速500rpm；最后置于封闭溶液中封闭10s，转速500rpm；
将包被完成后的石英针在40℃的温度下烘干5h后制成石英针生物传感器，并保存在干燥环境中待用。
3.根据权利要求2所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述30ug/mL的抗FITC抗体是由PBS缓冲液稀释而成。
4.根据权利要求2所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述20ug/ml的荧光素标记的白介素-10抗体是由包含3.58g/L十二水磷酸氢二钠、0.27g磷酸二氢钾、9g/L氯化钠、0.2g的氯化钾、0.05%吐温-20、0.5%BSA、1mg/ml Ficoll-400、0.05%proclin300的稀释液稀释而成。
5.根据权利要求1所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，标记生物素的抗白介素-10抗体中，生物素与抗白介素-10抗体的比例为（5-10）：1。
6.根据权利要求1所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质为用Ficoll-400聚蔗糖标记的链霉亲和素荧光物质Cy5和吖啶酯。
7.根据权利要求1所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述保存液为浓度为10mM的磷酸盐保存液。
8.白介素-10含量检测试剂盒，其特征在于：根据权利要求1-7任一所述的白介素-10含量检测试剂盒的制备方法制备而成，还包括用于放置石英针生物传感器的探针孔、用于容纳样本的试剂孔1、用于容纳标记生物素的抗白介素-10抗体的试剂孔2、用于容纳多聚糖标记的链霉亲和素荧光物质的试剂孔3以及用于容纳清洗液的清洗孔1、清洗孔2、清洗孔3、清洗孔4、清洗孔5、清洗孔6、清洗孔7、清洗孔8和清洗孔9。
9.白介素-10含量检测试剂盒的应用方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：准备如上所述的白介素-10含量检测试剂盒；
S2：将样本加入到试剂孔1中，并将石英针生物传感器置入试剂孔1中反应60s, 转速1200rpm；
S3：将反应过的生物传感器到清洗孔7，清洗孔8中清洗7s，转速1200rpm；
S4：将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应60s，转速1200rpm；
S5：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S6：将清洗后的生物传感器置入试剂孔3中反应15s，转速1200rpm；
S7：将反应好的生物传感器置入清洗孔3，清洗孔4中以1200rpm的转速清洗7s；
S8：再将清洗后的生物传感器置入试剂孔2中反应15s，转速1200rpm
S9：将反应过的生物传感器到清洗孔5，清洗孔6中清洗7s，转速1200rpm；
S10：再将清洗好的生物传感器置入试剂孔3中反应10s，转速1200rpm；
S11：将反应好的生物传感器到清洗孔1，清洗孔2中以1200rpm的转速清洗7s；
S12：将循环反应好的生物传感器置入清洗孔9中读数。
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