CN117258020A - 一种外科用敷料制备方法和应用 - Google Patents
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- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
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Abstract
本发明涉及敷料技术领域,尤其涉及一种外科用敷料制备方法和应用,解决了现有技术中的乳液敷料是通过添加增稠剂和乳化剂等得到的,安全性差的问题。一种外科用敷料制备方法和应用,包括将植物油、大米、水、葡萄糖和蛋白胨混合,制得发酵培养基A,将酵母菌接种到发酵培养基A中,经发酵培养,灭菌,制得敷料A,将敷料A、大豆粉、葡萄糖混合,制得发酵培养基B,将乳酸菌接种到发酵培养基B中,经发酵培养,灭菌,离心,收集上清液,制得敷料。本发明在没有乳化剂和增稠剂的条件下,利用微生物乳化技术将植物油乳化到体系中,制得的敷料无刺激性、同时具有保湿、抗氧化能力好、安全温和等功效。
Description
技术领域
本发明涉及敷料技术领域,尤其涉及一种外科用敷料制备方法和应用。
背景技术
敷料是与创面直接或间接接触的医疗用品,其用途只与创面发生关系。敷料又可细分为外科敷料、创面接触敷料和包扎固定敷料。其中外科敷料包括纱布块、纱布球、腹巾等,在对于一些基本恢复创口的创面位置需要对其皮肤进行养护,此时就需要通过乳液类的敷料结合纱布对创面进行保护,从而对创面的皮肤进行养护;但是现有技术中的敷料乳液是通过添加增稠剂和乳化剂乳化油脂等得到的,安全性差,所以我们提出了具有无乳化剂、无增稠剂、无刺激性、保湿、抗氧化能力好、安全温和等功效的一种外科用敷料制备方法和应用,用以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种外科用敷料制备方法和应用,解决了现有技术中的乳液敷料是通过添加增稠剂和乳化剂乳化油脂等得到的,安全性和温和性差的问题。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
一种外科用敷料制备方法和应用,包括步骤一:将植物油、大米、水、葡萄糖和蛋白胨混合,制得发酵培养基A,将酵母菌接种到发酵培养基A中,经发酵培养,灭菌,制得敷料A;
步骤二:将敷料A、大豆粉、葡萄糖混合,制得发酵培养基B,将乳酸菌接种到发酵培养基B中,经发酵培养,灭菌,离心,收集上清液,制得敷料。
优选的,步骤一中:稻谷经清理、砻谷、碾米、成品整理工序后制成大米粉,大米粉的粒径为60-100目。
优选的,步骤一中:植物油包括澳洲坚果籽油、白池花籽油、牡丹籽油、橄榄油、葡萄籽油、山茶籽油和灵芝孢子油中的一种或者几种。
优选的,步骤一中:植物油与大米的质量比为1:(1-10);植物油与水的质量比为1:(10-100);植物油与葡萄糖的质量比为1:(0.5-2);植物油与蛋白胨的质量比为1:(0.5-2);发酵培养基A在使用前进行灭菌的操作。
优选的,发酵培养基A和发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法。
优选的,采用高温灭菌法对发酵培养基A和发酵培养基B进行灭菌时,温度设定为115-121℃;采用高温灭菌法对发酵培养基A进行灭菌时,灭菌时间设定为20-30min;发酵培养基A经灭菌的操作后进行冷却,冷却至室温。
优选的,步骤一中:酵母菌包括酿酒酵母、黄酒酵母、汉逊酵母、啤酒酵母中的一种或者几种;酵母菌以酵母菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基A中接种的酵母菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养在震荡培养箱中进行,震荡培养箱中摇床的转速为100-200r/min;发酵培养的时间为48-120h;发酵培养的温度为25-40℃;发酵培养的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,发酵培养基A的温度设定为115-121℃,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基A在灭菌操作后冷却至室温。
优选的,步骤二中:大豆粉的粒径为60-100目;大豆粉与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);葡萄糖与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);发酵培养基B在使用前进行灭菌操作;发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B经灭菌的操作后进行冷却的操作,冷却至室温;乳酸菌包括植物乳杆菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或者几种;乳酸菌以乳酸菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基B中接种的乳酸杆菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养的方法为静置培养或震荡培养;发酵培养的时间为48-96h;发酵培养的温度为30-40℃;乳酸菌灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B灭菌的操作后冷却至室温;离心的转速为3000-5000r/min;离心的时间为20-40min;离心的操作后包括二次灭菌的操作;二次灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的时间为25-30min;制得的敷料可包括与防腐剂混合的操作;防腐剂包括对羟基苯乙酮、己二醇、苯氧乙醇、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯中的一种或者几种。
一种外科用敷料的应用,敷料作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用,皮肤外用剂中包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中至少一种。
本发明至少具备以下有益效果:
本申请在没有乳化剂和增稠剂的条件下,利用微生物乳化技术将植物油乳化到体系中,制得的敷料无刺激性、同时具有保湿、抗氧化能力好、安全温和等功效。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例一
一种外科用敷料制备方法,包括;
步骤一:将植物油、大米、水、葡萄糖和蛋白胨混合,制得发酵培养基A,将酵母菌接种到发酵培养基A中,经发酵培养,灭菌,制得敷料A;
步骤二:将敷料A、大豆粉、葡萄糖混合,制得发酵培养基B,将乳酸菌接种到发酵培养基B中,经发酵培养,灭菌,离心,收集上清液,制得敷料。
实施例二
稻谷经清理、砻谷、碾米、成品整理工序后制成大米粉,大米粉的粒径为60-100目;
植物油包括澳洲坚果籽油、白池花籽油、牡丹籽油、橄榄油、葡萄籽油、山茶籽油和灵芝孢子油中的一种或者几种;
步骤一中:植物油与大米的质量比为1:(1-10);植物油与水的质量比为1:(10-100);植物油与葡萄糖的质量比为1:(0.5-2);植物油与蛋白胨的质量比为1:(0.5-2);发酵培养基A在使用前进行灭菌的操作;
发酵培养基A和发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法。
采用高温灭菌法对发酵培养基A和发酵培养基B进行灭菌时,温度设定为115-121℃;采用高温灭菌法对发酵培养基A进行灭菌时,灭菌时间设定为20-30min;发酵培养基A经灭菌的操作后进行冷却,冷却至室温。
步骤一中:酵母菌包括酿酒酵母、黄酒酵母、汉逊酵母、啤酒酵母中的一种或者几种;酵母菌以酵母菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基A中接种的酵母菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养在震荡培养箱中进行,震荡培养箱中摇床的转速为100-200r/min;发酵培养的时间为48-120h;发酵培养的温度为25-40℃;发酵培养的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,发酵培养基A的温度设定为115-121℃,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基A在灭菌操作后冷却至室温。
步骤二中:大豆粉的粒径为60-100目;大豆粉与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);葡萄糖与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);发酵培养基B在使用前进行灭菌操作;发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B经灭菌的操作后进行冷却的操作,冷却至室温;乳酸菌包括植物乳杆菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或者几种;乳酸菌以乳酸菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基B中接种的乳酸杆菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养的方法为静置培养或震荡培养;发酵培养的时间为48-96h;发酵培养的温度为30-40℃;乳酸菌灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B灭菌的操作后冷却至室温;离心的转速为3000-5000r/min;离心的时间为20-40min;离心的操作后包括二次灭菌的操作;二次灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的时间为25-30min;制得的敷料可包括与防腐剂混合的操作;防腐剂包括对羟基苯乙酮、己二醇、苯氧乙醇、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯中的一种或者几种
实施例三
一种外科用敷料的应用,敷料作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用,皮肤外用剂中包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中至少一种。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法:
菌种的活化:挑取酿酒酵母1环接种至含有YEPD固体斜面培养基的试管中,28℃静置培养24h;挑取干酪乳杆菌1环接种至含有MRS固体斜面培养基的试管中,37℃静置培养24h。
种子液体培养:取酿酒酵母YEPD斜面菌2环,接种于100mLYEPD液体培养基中,28℃,150rpm培养24h;取干酪乳杆菌MRS斜面菌2环,接种于100mLMRS液体培养基中,28℃,150rpm培养24h。
称取30g目数为100目的大米粉末、10g澳洲坚果籽油、10g葡萄糖、2g蛋白胨以及1000mL去离子水混合,在121℃高压灭菌锅中灭菌30min,灭菌后冷却至室温,制得发酵培养基A;
在上述制得的发酵培养基A中接入酵母菌(酿酒酵母SM004,保藏编号:CGMCCNO.26536,2023年2月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心);发酵底物A中接种的酵母菌的数量为108CFU/mL;接种后,在28℃震荡培养箱中发酵48h,震荡培养箱中摇床的转速为150r/min,发酵培养结束后,将得到的发酵乳液在温度为121℃的高压灭菌锅中灭菌30min,灭菌后冷却至室温,制得敷料A;
将步骤(1)制得的敷料A、10g大豆粉和10g葡萄糖混合,在121℃高压灭菌锅中灭菌30min,灭菌后冷却至室温,制得发酵培养基B;将乳酸杆菌(干酪乳杆菌SM003,保藏编号:CGMCCNO.26537,2023年2月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)接种到发酵培养基B中,发酵培养基B中接种的乳酸杆菌的数量为108CFU/mL;在30℃培养箱中静置发酵48h,发酵培养结束后,在温度为121℃的高压灭菌锅中灭菌30min,灭菌后冷却至室温,再进行离心,在离心的转速为5000r/min,离心的时间为30min,得上清液,对上层液进行二次灭菌,在温度为121℃的高压灭菌锅中灭菌30min,灭菌完成后冷却至室温;与防腐剂(己二醇和对羟基苯乙酮)混合,即得敷料;
对比例1:
与实施例2相比,区别仅在于步骤(2)中酵母菌培养时间24h,其他条件参数同实施例3。
对比例2
与实施例2相比,区别仅在于步骤(1)中不添加葡萄糖,其他条件参数同实施例1。
对比例3
与实施例2相比,区别仅在于步骤(1)中不添加蛋白胨,其他条件参数同实施例2。
对比实例4
与实施例2相比,区别仅在于步骤(3)接入的菌为干酪乳杆菌,步骤(4)接入酿酒酵母,以与实施例2相同的方法制备了敷料。
对比实例5
与实施例2相比,区别在于步骤(3)中接入的菌为黄酒酵母,步骤(4)中接入植物乳杆菌,以与实施例1相同的方法制备了敷料。
对比实例6
与实施例2相比,区别在于步骤(4)中接入植物乳杆菌,以与实施例2相同的方法制备了敷料。
对比实例7
与实施例2相比,区别在于步骤(3)中接入汉逊酵母,以与实施例2相同的方法制备了敷料;
实验例1:抗氧化的评价
抗氧化测定自由基(freeradical)消除活性,利用了1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)。即取等体积(1mL)的实验例和对比例的样品与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1管);取等体积(1mL)的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2管);取等体积(1mL)的无水乙醇与待测液混匀(A3管);避光反应30min后,在517nm下测A1管、A2管、A3管吸光度值;清除率计算公式为:清除率=[(OD1+OD3)-OD1]/OD2×100%;
公式中:
OD1为测试样品A1管的吸光度值;
OD2为测试样品A2管的吸光度值;
OD3为测试样品A3管的吸光度值。
实验例2:羟自由基清除
利用Fenton反应产生羟自由基(·OH),向反应体系中加入水杨酸,·OH与水杨酸反应,生成的有色化合物2,3-二羟基苯甲酸在510nm处有特征吸收。采用固定反应时间法,在510nm处测定含被测物反应液的吸光度,并与空白液比较,测定被测物对·OH的清除作用按表1往试管中添加试剂,依次加入9mmol/LFeSO4、9mmol/L水杨酸乙醇溶液、样品、适量去离子水和8.8mmol/LH2O2溶液。摇匀,37℃水浴加热15min后取出,测定空白对照的吸光度A0、加样品吸光度Ax和不加H2O2的溶液本底吸光度Ax0。测定A0时,参比溶液为不加双氧水体系。
羟自由基清除率计算公式为:
清除率=(A0-(Ax-Ax0))/A0×100%
组别 | V(FeSO4)/ml | V(水杨酸)/ml | V(样品)/m | V(去离子水)/m | V(H2O2)/m |
A | 0.5 | 0.5 | 0 | 6 | 0.5 |
B | 0.5 | 0.5 | 2.5 | 3.5 | 0.5 |
C | 0.5 | 0.5 | 2.5 | 4 | 0 |
表1被测物对·OH的清除作用添加剂添加步骤
实验例3体外抑制酪氨酸酶实验:
PBS溶液配制1mg/ml的酪氨酸溶液和200U/ml的酪氨酸酶溶液。设计实施例1、对比例1-4做为处理组,维生素C乙基醚溶液为阳性对照组,将处理组的发酵组合物和维生素C乙基醚溶液使用PBS配制为质量分数分别为0.25%、0.5%、1%、2%的4个实验浓度。
酶活检测:使用微量移液器分别按照表2移取a、b、c、d四组样液置于1.5mlEP管(配制反应体系为1000u1),35℃水浴10min;加入酪氨酸酶溶液200μl,35℃水浴30min,各反应管分别取150μl加入96孔板,酶标仪测定475nm吸光度A值。每组重复试验3次。
表2酪氨酸酶抑制实验加样步骤(L-酪氨酸作底物)(μL)
实验例4:产品安全性实验-鸡胚绒毛尿囊膜试验
依据SN/T2329-2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》中的方法,在测试环境温度:25℃±1℃,测试环境湿度:50%±10%下,选择9日龄鸡胚进行照蛋检查,在蛋壳表面标记气室位置;用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分,暴露白色蛋膜。用吸管滴加适量的0.9%氯化钠溶液使蛋膜湿润,然后将0.9%氯化钠溶液倾出。小心用镊子去除内膜,保证血管膜不受损。此时应再次观察血管系统的结构,并对其完整性和是否适宜用于试验做出判断。取实施例与比较例的样品0.3mL直接滴加于CAM表面,观察CAM反应情况,并试验结果计算:
采用反应时间法进行的试验,应用式(1)计算刺激评分(IS),结果保留小数点后两位:
公式中:
secH(出血时间hemorrhage time)—CAM膜上观察到开始发生出血的平均时间,单位为秒(s);
secL(血管融解时间vessel lysis time)—CAM膜上观察到开始发生血管融解的平均时间,单位为秒(s);
secC(凝血时间coagulation time)—CAM膜上观察到开始出现凝血的平均时间,单位为秒(s)。
根据计算的IS数值按表1对受试物眼刺激性进行分类。
根据计算的IS数值按表3对受试物眼刺激性进行分类:
刺激评分 | 刺激性评分 |
IS<1 | 无刺激性 |
1≤IS<5 | 轻刺激性 |
5≤IS<9 | 中度刺激性 |
IS≥9 | 强刺激性/腐蚀性 |
表3刺激评分法结果评价
实验例5:产品安全性实验-人体皮肤斑贴试验(皮肤封闭型斑贴试验)
按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)中的人体皮肤斑贴试验-皮肤封闭型斑贴试验,阴性对照:空白,受试者共20人,男6人,女14人,均符合受试者入选标准。
人体皮肤斑贴试验结果显示,20名受试者在移除斑贴后3个观察时间点30min、24h和48h评分等级均为0分。
所有测试样品的人体皮肤斑贴试验皮肤反应为阴性。
实验例6:皮肤保湿性测试
选择符合条件的志愿者,志愿者统一用温水、标准洁面乳(实验室配方)清洗测试部位,在符合规定的房间内等待30min后进行基础数据采集,用皮肤测试仪MPA580测试皮肤角质层水分含量。基础数值测试完成后,将产品分发给志愿者,志愿者按产品说明书自行使用。结束后将面膜取下,然后在符合规定的房间内等待30min,然后再次对志愿者测试区域的皮肤角质层水分含量进行测试。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (9)
1.一种外科用敷料制备方法,其特征在于,包括:
步骤一:将植物油、大米、水、葡萄糖和蛋白胨混合,制得发酵培养基A,将酵母菌接种到发酵培养基A中,经发酵培养,灭菌,制得敷料A;
步骤二:将敷料A、大豆粉、葡萄糖混合,制得发酵培养基B,将乳酸菌接种到发酵培养基B中,经发酵培养,灭菌,离心,收集上清液,制得敷料。
2.根据权利要求1的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,步骤一中:稻谷经清理、砻谷、碾米、成品整理工序后制成大米粉,大米粉的粒径为60-100目。
3.根据权利要求1的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,步骤一中:植物油包括澳洲坚果籽油、白池花籽油、牡丹籽油、橄榄油、葡萄籽油、山茶籽油和灵芝孢子油中的一种或者几种。
4.根据权利要求1的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,步骤一中:植物油与大米的质量比为1:(1-10);植物油与水的质量比为1:(10-100);植物油与葡萄糖的质量比为1:(0.5-2);植物油与蛋白胨的质量比为1:(0.5-2);发酵培养基A在使用前进行灭菌的操作。
5.根据权利要求1的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,发酵培养基A和发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法。
6.根据权利要求5的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,采用高温灭菌法对发酵培养基A和发酵培养基B进行灭菌时,温度设定为115-121℃;采用高温灭菌法对发酵培养基A进行灭菌时,灭菌时间设定为20-30min;发酵培养基A经灭菌的操作后进行冷却,冷却至室温。
7.根据权利要求6的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,步骤一中:酵母菌包括酿酒酵母、黄酒酵母、汉逊酵母、啤酒酵母中的一种或者几种;酵母菌以酵母菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基A中接种的酵母菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养在震荡培养箱中进行,震荡培养箱中摇床的转速为100-200r/min;发酵培养的时间为48-120h;发酵培养的温度为25-40℃;发酵培养的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,发酵培养基A的温度设定为115-121℃,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基A在灭菌操作后冷却至室温。
8.根据权利要求7的一种外科用敷料制备方法,其特征在于,步骤二中:大豆粉的粒径为60-100目;大豆粉与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);葡萄糖与步骤一中植物油的质量比为1:(0.5-1);发酵培养基B在使用前进行灭菌操作;发酵培养基B的灭菌条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法对发酵培养基B进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B经灭菌的操作后进行冷却的操作,冷却至室温;乳酸菌包括植物乳杆菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或者几种;乳酸菌以乳酸菌菌液的形式添加;单位体积的发酵培养基B中接种的乳酸杆菌的数量为107-109CFU/mL;发酵培养的方法为静置培养或震荡培养;发酵培养的时间为48-96h;发酵培养的温度为30-40℃;乳酸菌灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行灭菌时,灭菌的时间为20-30min;发酵培养基B灭菌的操作后冷却至室温;离心的转速为3000-5000r/min;离心的时间为20-40min;离心的操作后包括二次灭菌的操作;二次灭菌的条件和方法为高温灭菌法;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的温度为115-121℃;当采用高温灭菌法进行二次灭菌时,二次灭菌的时间为25-30min;制得的敷料包括与防腐剂混合的操作;防腐剂包括对羟基苯乙酮、己二醇、苯氧乙醇、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯中的一种或者几种。
9.一种外科用敷料的应用,根据权利要求1-8中任一项的所述一种外科用敷料制备方法,其特征在于,敷料作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用,皮肤外用剂中包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中至少一种。
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