CN117250345B - 一种器官芯片中生物分子的原位检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物材料技术领域。提供一种器官芯片中生物分子的原位检测方法，包括：制备棒状微纳米机器人探针；将该棒状微纳米机器人探针置于器官芯片中，并使器官芯片置于复合磁场环境中，通过复合磁场使探针与待测生物分子进行有效结合；向器官芯片中通入培养基，以洗去未与生物分子结合的探针；将洗去多余探针的器官芯片放入拉曼光谱仪，以实现对器官芯片中生物分子的原位检测。本发明通过控制外部复合磁场，从而能够快速将棒状微纳米机器人探针导航至器官芯片中任一指定位置，并且通过控制微纳米机器人探针的旋转运动，加速了与待测物的结合，最终提升了对器官芯片中生物分子的检测精度与效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料技术领域，尤其涉及一种器官芯片中生物分子的原位检测方法。
背景技术
器官芯片是指在微流控芯片中模拟较为复杂的体内环境，培养出接近人体真实病理生理功能的组织器官。目前，针对器官芯片中生物分子的检测，研究人员多通过从芯片中收集培养基，再利用相关试剂盒进行检测分析。然而，此类方法无法精确定位生物分子的分布状况。这极大限制了器官芯片在生物医学领域中的应用。
因此，为解决上述问题，急需开发一种能够指示待测物存在与否及其分布状况的原位检测方法。
发明内容
本发明提供一种器官芯片中生物分子的原位检测方法，用以解决现有技术中无法精确定位生物分子的缺陷。
本发明提供一种器官芯片中生物分子的原位检测方法，包括：
步骤1：制备探针；所述探针为棒状微纳米机器人探针；
步骤2：将制备得到的探针置于器官芯片中，并使器官芯片置于复合磁场环境中，通过复合磁场使所述探针与待测生物分子进行有效结合；所述复合磁场包括：梯度磁场和旋转磁场；所述梯度磁场用于驱动所述探针在器官芯片内平移运动，使其定向运动至指定位置；所述旋转磁场用于驱动到达指定位置的探针进行旋转运动，以加速对待测生物分子的捕获；
步骤3：向所述器官芯片中通入培养基，以洗去未与所述生物分子结合的探针；
步骤4：将洗去多余探针的器官芯片放入拉曼光谱仪，以实现对器官芯片中所述生物分子的原位检测。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，步骤1中棒状微纳米机器人探针的制备包括：
步骤11：将FeCl3·6H2O加入到乙二醇中，再向其中加入柠檬酸钠和无水乙酸钠，超声分散30 min，得到分散液；
步骤12：将所述分散液转移至反应釜中进行反应，得到Fe3O4纳米微球；
步骤13：将所述Fe3O4纳米微球用乙醇和去离子水各洗涤3次，然后将洗涤后的Fe3O4纳米微球放入真空干燥箱中干燥，得到干燥的Fe3O4纳米微球；
步骤14：将所述干燥的Fe3O4纳米微球重新分散于去离子水与异丙醇形成的混合溶液中，并施加外部磁场，使Fe3O4纳米微球相互吸引以自组装成棒状结构的Fe3O4纳米微球，以形成棒状结构的Fe3O4纳米微球溶液；
步骤15：向所述棒状结构的Fe3O4纳米微球溶液中加入氨水和正硅酸乙酯，旋转混匀反应2 h；反应结束后，得到棒状结构的Fe3O4@SiO2；
步骤16：将所述棒状结构的Fe3O4@SiO2用乙醇和去离子水各洗涤3次后，分散于乙醇中；
步骤17：利用所述棒状结构的Fe3O4@SiO2制备Fe3O4@SiO2@Au种子溶液；
步骤18：取制备得到的所述Fe3O4@SiO2@Au种子溶液，在超声条件下向其中加入PVP溶液、盐酸羟胺溶液，充分分散后，再滴加氯金酸溶液，继续超声10 min，得到产物Fe3O4@SiO2@Au；将该产物用乙醇和去离子分别洗涤后，分散于乙醇中；
步骤19：在产物Fe3O4@SiO2@Au的溶液中加入拉曼分子5,5-二硫代双-（2硝基苯甲酸）溶液，超声分散60 min，得到产物Fe3O4@SiO2@Au-DTNB；将该产物用乙醇洗涤3次后，重悬于5 mL乙醇中；
步骤20：取所述Fe3O4@SiO2@Au-DTNB分散于MES溶液中，向其中加入EDC溶液和NHS溶液，旋转混匀反应0.5 h，以完成DTNB上羧基的活化；随后，收集产物，重悬于PBS溶液中，加入抗体，旋转混匀2 h；接着，将加入抗体的产物超声分散于BSA溶液中，旋转混匀1 h以封闭未反应的羧基位点；反应结束后，即可得到所述棒状微纳米机器人探针；
所述抗体为能够与待测生物分子进行特异性结合的抗体。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，步骤14中，所述去离子水与异丙醇的体积比为1:5。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，步骤17中所述Fe3O4@SiO2@Au种子的制备包括：
步骤171：将所述Fe3O4@SiO2分散于去离子水中，向其中加入PEI溶液，超声分散40min，得到Fe3O4@SiO2-PEI，将该Fe3O4@SiO2-PEI用去离子水洗涤3次后，分散于去离子水中，作为 Fe3O4@SiO2-PEI溶液备用；
步骤172：将去离子水加入三口烧瓶，在机械搅拌的条件下依次加入氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、硼氢化钠溶液，室温搅拌5 h，得到胶体金溶液；
步骤173：将所述Fe3O4@SiO2-PEI溶液加至所述胶体金溶液中，超声30 min，获得所述Fe3O4@SiO2@Au种子。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，所述步骤11中，所述柠檬酸钠和无水乙酸钠的质量比为0.2：1.2。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，步骤12中，反应釜的反应条件为：200 ℃反应10 h。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，所述器官芯片的制备包括：
将硅片浸没于清洗液，75 ℃水浴加热4 h；用去离子水重复清洗硅片三次并进行干燥处理；
将干燥后的硅片放于匀胶机转盘中央，向硅片中心滴入光刻胶进行旋涂；旋涂结束后，将旋涂有光刻胶的硅片置于90 ℃热板加热2 h；将掩膜放在硅片上，紫外曝光30 s，随后在90℃热板上干燥3-5 s；利用乳酸乙酯溶解硅片上未被曝光的区域，然后使用异丙醇冲洗硅片；将冲洗后的硅片置于160 ℃烘台上坚膜30 min；在硅片四周粘贴铝箔胶带和塑料薄板以形成围栏；
将PDMS与固化剂按9:1的体积比混匀再浇筑于坚膜后的硅片上；将浇筑后的硅片转移到真空箱中抽取气泡，随后再转移至80 ℃烘箱内加速固化；固化结束后，将硅片上的PDMS层剥离，在剥离PDMS层的硅片上打孔以获得单层结构的PDMS器官芯片；
将所述单层结构的PDMS器官芯片进行氧等离子体处理，随后将两层经过等离子处理的所述单层结构的PDMS器官芯片上下对齐进行键合，后将其置于75℃烘箱中保温30min，以形成牢固封装的PDMS器官芯片。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，所述清洗液包括：去离子水、氨水、30%过氧化氢，三者的体积比为5:1:1。
进一步地，如上所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，所述PDMS预聚物为Sylgard 184A；所述固化剂为Sylgard 184B。
本发明提供的器官芯片中生物分子的原位检测方法，通过控制外部复合磁场，即可实现棒状微纳米机器人探针在器官芯片中的运动可控性，从而能够快速将其导航至器官芯片中任一指定位置，并且并微纳米机器人探针的主动旋转运动，加速了与待测物的结合，提升了检测精度与效率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
微纳米机器人能够通过消耗化学燃料或利用外部磁场、光场等能量，将其转化为自身运动的驱动力，可作为人类在微纳米尺度下开展相关研究的有利工具。在众多驱动微纳米机器人运动的方式中，磁场驱动具有获取简单、调试方便、容易控制、非侵入性等优势。因此，磁性微纳米机器人脱颖而出，并在生物检测和药物递送等领域引起了广泛关注。
本发明提供的棒状结构的磁性微纳米机器人不同于常规的磁性微纳米机器人，本发明提供的棒状结构的磁性微纳米机器人具有可辨认的磁矩方向，可通过操纵外部磁场，进行直线、旋转等复杂运动，从而实现更为精确的运动控制。因此，棒状微纳米机器人有望作为运动可控的微纳探针，利用外部磁场的驱动以执行定向运动，在基于人体组织器官的生物分子原位检测中大有前景。
本发明提供的器官芯片中生物分子的原位检测方法，通过操控外部复合磁场来产生梯度磁场和旋转磁场，通过产生梯度磁场和旋转磁场来驱动探针在芯片中定向运动（平移、自旋转等运动），以到达任一感兴趣位置与并待测物结合；随后，冲洗掉多余检测探针并将器官芯片置于拉曼光谱仪中，施加激发光，通过检测待测物的拉曼信号，实现对器官芯片中待测生物分子的原位检测。
下面对本发明提供的方法进行详细介绍：
步骤1：棒状微纳米机器人探针的制备
（1）Fe3O4的制备：将1.08 g FeCl3·6H2O加入到20 mL乙二醇，再向其中加入0.2 g柠檬酸钠和1.2 g无水乙酸钠，超声分散30 min。随后，将溶液转移至反应釜中，200 ℃反应10 h。反应结束后，得到的Fe3O4纳米微球用乙醇和去离子水各洗涤3次，放入真空干燥箱中干燥；
（2）Fe3O4@SiO2的制备：取5 mg上述Fe3O4重新分散于30 mL去离子水与异丙醇混合溶液中（两者体积比为1:5），施加强度为1.6 mT外部磁场，使磁性微球相互吸引自组装成棒状结构。接着向溶液中加入0.5 mL氨水和500 μL正硅酸乙酯，旋转混匀反应2 h。氨水催化水解的正硅酸乙酯在棒状结构表面缩合成SiO2壳层，以固化稳定该结构。反应结束后，得到的棒状Fe3O4@SiO2用乙醇和去离子水各洗涤3次后，分散于30 mL乙醇中保存；
（3）Fe3O4@SiO2@Au种子的制备：带正电的聚乙烯亚胺（PEI）在超声条件下可通过静电作用在带负电的SiO2表面自组装形成阳离子层结构，以进一步吸附带负电的金纳米颗粒，形成Fe3O4@SiO2@Au种子。
Fe3O4@SiO2-PEI的制备：取5 mg上一步骤制备的Fe3O4@SiO2，分散于100 mL去离子水中，向其中加入10 mL 5 mg/mL PEI溶液，超声分散40 min。产物用去离子水洗涤3次后，分散于10 mL去离子水中保存；
胶体金的制备：将200 mL去离子水加入三口烧瓶，在机械搅拌的条件下依次向其中加入3.4 mL 1%氯金酸溶液（w/v），2.94 mL的1%柠檬酸钠溶液（w/v），12 mL 0.1 M硼氢化钠溶液，室温搅拌5 h，即制得胶体金溶液。产物用去离子水洗涤3次后，分散于100 mL去离子水中保存；
Fe3O4@SiO2@Au种子的制备：取5 mL Fe3O4@SiO2-PEI溶液加至50 mL胶体金溶液中，超声30 min，即可获得表面Au种子化的Fe3O4@SiO2。产物用乙醇洗涤3次后，分散于10 mL乙醇中保存；
（4）Fe3O4@SiO2@Au的制备：在稳定剂PVP的作用下，盐酸羟胺还原氯金酸，使得Au在Au种子表面生长，以在Fe3O4@SiO2外部包覆连续且粗糙的金壳。取5 mL上一步骤获得的Fe3O4@SiO2@Au种子溶液，在超声条件下向其中加入10 mL 5mg/mL的PVP溶液、1 mL 10 mg/mL盐酸羟胺溶液，充分分散后，再缓慢滴加150 μL 1%氯金酸溶液（w/v），继续超声10 min。随后，将产物Fe3O4@SiO2@Au用乙醇和去离子各洗涤3次后，分散于5 mL乙醇中保存。
（5）Fe3O4@SiO2@Au-DTNB的制备：取2 mL Fe3O4@SiO2@Au溶液，加入500 μl 2 mM的拉曼分子5,5-二硫代双-（2硝基苯甲酸）（DTNB）溶液，超声分散60 min，使得DTNB的二硫键与Au壳偶联形成Au-S键，从而将DTNB结合在Fe3O4@SiO2@Au表面。产物用乙醇洗涤3次后，重悬于5 mL乙醇中保存；
（6）Fe3O4@SiO2@Au-DTNB-Ab的制备：取2 mL上一步骤制备的Fe3O4@SiO2@Au-DTNB，去离子水洗涤3次后，分散于1 mL MES（100mM，pH6.0）溶液中，向其中各加入100 μL 10 mM的EDC溶液和NHS溶液，旋转混匀反应0.5 h，以完成DTNB上羧基的活化。随后，收集产物，重悬于2 mL PBS溶液中，加入0.5 mg用于与待测物特异性结合的抗体，旋转混匀2 h。接着，将产物超声分散于5 mL 1% BSA溶液中（w/v），旋转混匀1 h以封闭未反应的羧基位点。反应结束后，即可得到棒状微纳米机器人检测探针，分散于5 mL PBS中保存；
步骤2：磁场控制系统的搭建
利用信号发生器、信号放大装置与三维亥姆赫兹线圈，搭建体积小巧、操作便捷的磁场发生及控制系统；
步骤3：肾小管器官芯片的制备
（1）硅片的前处理：将新购置的硅片完全浸没在清洗液（去离子水：氨水：30%过氧化氢体积比为5:1:1），75 ℃水浴加热4 h；用去离子水重复清洗硅片三次，置于超净台内干燥；
（2）光刻胶的旋涂与曝光：将硅片放于匀胶机转盘中央，向硅片中心滴入SU8 3035光刻胶并启动匀胶机旋涂SU8 3035；旋涂结束后，将硅片置于90 ℃热板加热2 h。将掩膜放在硅片上，紫外曝光30 s，随后在90℃热板上干燥3-5 s；将曝光后的硅片放入圆皿中，倒入乳酸乙酯溶解硅片上未被曝光的区域，使用异丙醇冲洗硅片；将硅片置于160 ℃烘台上坚膜30 min；在硅片四周粘贴铝箔胶带和塑料薄板以形成围栏；
（3）PDMS芯片的制备：将PDMS预聚物（Sylgard 184A）与固化剂（Sylgard 184B）按9:1的体积比混匀再浇筑于硅片上；将硅片模板转移到真空箱中抽取气泡，随后再转移至80℃烘箱内加速固化；固化结束后，将PDMS层剥离下来，用打孔笔将需要插管和接种细胞的腔室位置打孔以获得PDMS器官芯片的单层结构；
（4）PDMS芯片的键合与封装：将带有微通道和腔室的PDMS芯片进行氧等离子体处理，随后对齐上下层芯片组件进行键合，75℃烘箱中保温30 min，以形成牢固封装的PDMS器官芯片；
（5）芯片的前处理：将芯片置于超净工作台紫外辐照30 min以上，随后用DMEM培养基轻柔冲洗通道；
（6）细胞的接种：胰酶消化培养瓶中的肾小管上皮细胞，计数后将细胞按一定浓度重悬于10% FBS的高糖DMEM培养基；以5×104个/cm2的密度接种肾小管上皮细胞于器官芯片中，置于恒温培养箱中培养；
步骤4：棒状微纳米机器人探针检测肾器官芯片中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipid，NGAL）用于评估木犀草素的肾毒性。
（1）待肾小管上皮细胞在芯片中形成三维结构后，用含10% FBS的培养基稀释木犀草素至10 μM，随后将药液缓慢注入器官芯片循环通道中，培养24 h；
（2）将偶联了NGAL抗体的棒状微纳米机器人检测探针超声分散于PBS中，注入器官芯片；
（3）将上述芯片置于磁场控制系统中，通过调节仪器的电流相关参数，实时控制磁场的加载方式，实现对检测探针运动行为的精准控制，以促进棒状微纳米机器人检测探针与待测物NGAL的结合。如：
施加梯度磁场，驱动探针在器官芯片内平移运动，使其定向运动到达指定位置；
施加旋转磁场，使到达指定位置的探针进行旋转搅拌运动，加速对局部NGAL的捕获；
（4）向器官芯片中通入培养基，洗去多余的检测探针；
（5）将器官芯片放入拉曼光谱仪，使用633 nm作为激发光检测探针捕获到NGAL的拉曼信号，从而实现对芯片中NGAL的原位检测。
本发明提供的方案，具有如下优势：
1、本发明制备得到的棒状微纳米机器人探针具有形态均一、运动可控、生物相容性好、稳定性高、成本低廉、可长期保存等优势。该棒状微纳米机器人探针能够受到外加磁场的驱动，在器官芯片中进行自主导航运动。因此，将微纳米机器人探针与拉曼光谱仪相结合，可实现器官芯片中生物分子的原位检测，有望进一步拓展器官芯片在生物分子间相互作用的机理研究、毒性试验和药物筛选中的应用。
2、本发明提供的方法，通过调节检测仪器电流参数来控制外部磁场，即可实现棒状微纳米机器人探针在器官芯片中的运动可控性，从而能够快速将其导航至器官芯片中任一指定位置并与待测物结合；微纳米机器人探针的主动旋转运动，加速了与待测物的结合，提升了检测的精度和效率。
3、本发明提供的方法，利用磁控系统、微纳米机器人探针、拉曼光谱仪，即可在器官芯片中快速指示待测物在指定位置的存在与否及分布状况，在生物分子的原位检测方面具有很大的应用前景。
4、以Fe3O4@SiO2表面包覆的连续金壳作为拉曼信号的增强基底，金颗粒间存在的缝隙结构能够放大吸附在其表面拉曼分子的信号，增强检测灵敏度；
5、鉴于微纳米机器人探针运动可控、生物相容性好等独特优势，除联合器官芯片进行原位检测外，还能联合动物模型，在体内环境中生物分子的定位和检测方面也有广阔的发展潜力。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (5)
1.一种器官芯片中生物分子的原位检测方法，其特征在于，包括：
步骤1：制备探针；所述探针为棒状微纳米机器人探针；
步骤2：将制备得到的探针置于器官芯片中，并使器官芯片置于复合磁场环境中，通过复合磁场使所述探针与待测生物分子进行有效结合；所述复合磁场包括：梯度磁场和旋转磁场；所述梯度磁场用于驱动所述探针在器官芯片内平移运动，使其定向运动至指定位置；所述旋转磁场用于驱动到达指定位置的探针进行旋转运动，以加速对待测生物分子的捕获；
步骤3：向所述器官芯片中通入培养基，以洗去未与所述生物分子结合的探针；
步骤4：将洗去多余探针的器官芯片放入拉曼光谱仪，以实现对器官芯片中所述生物分子的原位检测；
步骤1中所述棒状微纳米机器人探针的制备包括：
步骤11：将1.08 g FeCl3·6H2O加入到20 mL乙二醇，再向其中加入0.2 g柠檬酸钠和1.2 g无水乙酸钠，超声分散30 min，得到分散液；
步骤12：将所述分散液转移至反应釜中进行反应，200 ℃反应10 h，得到Fe3O4纳米微球；
步骤13：将所述Fe3O4纳米微球用乙醇和去离子水各洗涤3次，然后将洗涤后的Fe3O4纳米微球放入真空干燥箱中干燥，得到干燥的Fe3O4纳米微球；
步骤14：将5 mg所述干燥的Fe3O4纳米微球重新分散于30 mL去离子水与异丙醇形成的混合溶液中，去离子水与异丙醇的体积比为1:5；并施加1.6 mT外部磁场，使Fe3O4纳米微球相互吸引以自组装成棒状结构的Fe3O4纳米微球，以形成棒状结构的Fe3O4纳米微球溶液；
步骤15：向所述棒状结构的Fe3O4纳米微球溶液中加入0.5 mL氨水和500 μL正硅酸乙酯，旋转混匀反应2 h；反应结束后，得到棒状结构的Fe3O4@SiO2；
步骤16：将所述棒状结构的Fe3O4@SiO2用乙醇和去离子水各洗涤3次后，分散于30 mL乙醇中保存；
步骤17：利用所述棒状结构的Fe3O4@SiO2制备Fe3O4@SiO2@Au种子溶液；
步骤18：取制备得到的所述Fe3O4@SiO2@Au种子溶液，在超声条件下向其中加入PVP溶液、盐酸羟胺溶液，充分分散后，再滴加氯金酸溶液，继续超声10 min，得到产物Fe3O4@SiO2@Au；将该产物用乙醇和去离子分别洗涤后，分散于乙醇中；
步骤19：在产物Fe3O4@SiO2@Au的溶液中加入拉曼分子5,5-二硫代双-（2硝基苯甲酸）溶液，超声分散60 min，得到产物Fe3O4@SiO2@Au-DTNB；将该产物用乙醇洗涤3次后，重悬于5mL乙醇中；
步骤20：取所述Fe3O4@SiO2@Au-DTNB分散于MES溶液中，向其中加入EDC溶液和NHS溶液，旋转混匀反应0.5 h，以完成DTNB上羧基的活化；随后，收集产物，重悬于PBS溶液中，加入抗体，旋转混匀2 h；接着，将加入抗体的产物超声分散于BSA溶液中，旋转混匀1 h以封闭未反应的羧基位点；反应结束后，即可得到所述棒状微纳米机器人探针；
所述抗体为能够与待测生物分子进行特异性结合的抗体。
2.根据权利要求1所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，其特征在于，步骤17中所述Fe3O4@SiO2@Au种子的制备包括：
步骤171：将所述Fe3O4@SiO2分散于去离子水中，向其中加入PEI溶液，超声分散40 min，得到Fe3O4@SiO2-PEI，将该Fe3O4@SiO2-PEI用去离子水洗涤3次后，分散于去离子水中，作为Fe3O4@SiO2-PEI溶液备用；
步骤172：将去离子水加入三口烧瓶，在机械搅拌的条件下依次加入氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、硼氢化钠溶液，室温搅拌5 h，得到胶体金溶液；
步骤173：将所述Fe3O4@SiO2-PEI溶液加至所述胶体金溶液中，超声30 min，获得所述Fe3O4@SiO2@Au种子。
3.根据权利要求1所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，其特征在于，所述器官芯片的制备包括：
将硅片浸没于清洗液，75 ℃水浴加热4 h；用去离子水重复清洗硅片三次并进行干燥处理；
将干燥后的硅片放于匀胶机转盘中央，向硅片中心滴入光刻胶进行旋涂；旋涂结束后，将旋涂有光刻胶的硅片置于90 ℃热板加热2 h；将掩膜放在硅片上，紫外曝光30 s，随后在90℃热板上干燥3-5 s；利用乳酸乙酯溶解硅片上未被曝光的区域，然后使用异丙醇冲洗硅片；将冲洗后的硅片置于160 ℃烘台上坚膜30 min；在硅片四周粘贴铝箔胶带和塑料薄板以形成围栏；
将PDMS预聚物与固化剂按9:1的体积比混匀再浇筑于坚膜后的硅片上；将浇筑后的硅片转移到真空箱中抽取气泡，随后再转移至80 ℃烘箱内加速固化；固化结束后，将硅片上的PDMS层剥离，在剥离PDMS层后的硅片上打孔以获得单层结构的PDMS器官芯片；
将所述单层结构的PDMS器官芯片进行氧等离子体处理，随后将两层经过等离子处理的所述单层结构的PDMS器官芯片上下对齐进行键合，后将键合后PDMS器官芯片置于75℃烘箱中保温30 min，以形成牢固封装的PDMS器官芯片。
4.根据权利要求3所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，其特征在于，所述清洗液包括：去离子水、氨水、30%过氧化氢，三者的体积比为5:1:1。
5.根据权利要求3所述的器官芯片中生物分子的原位检测方法，其特征在于，所述PDMS预聚物为Sylgard 184A；所述固化剂为Sylgard 184B。
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Also Published As
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|---|---|
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