CN117214430A - 新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒及制备方法，包括与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条，以及包括底板和顶盖；底板上开设有三个放置槽，三个放置槽以底板的中心为圆心呈圆周分布，试纸条置于所述放置槽内，且三个放置槽的交汇连通处设有凸柱，凸柱的顶部一体成型有锥台，锥台的顶部开设有滴液槽，且锥台的侧壁开设有三个引流槽，三个引流槽的一端均与滴液槽连通，且引流槽的另一端分别延伸至三条试纸条的加样垫上方；顶盖盖设在底板上，顶盖上开设有三个配合试纸条的检测线和质控线的观察孔，且顶盖的中心处开设有配合锥台的通孔，在三条试纸条的加样垫上同步滴加样液。

Description

新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒及制备 方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒及制备方法。

背景技术

新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒在感染人体后，人体所表现出来的临床症状以及病情的演变过程非常相似，如发烧、咳嗽、呼吸困难等，病情严重者甚至会有生命危险。此外，它们的CT影像也大同小异，且这几类病毒均有较强的传染性，可在人与人之间传播。因此，为了减少感染的人数，如何建立快速、便捷、信号敏锐的检测方式是非常有必要的。目前，市面上已有的检测方法有核酸检测，但核酸检测的方法存在等待时间长的问题，不满足快速检测的要求；另外，如果采用胶体金方法检测则需要对三种病毒分别进行检测，但多次取样也容易造成检测误差，导致结果出错。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明提供新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒及制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是提供了新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒，包括

与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条，每条所述试纸条包括衬板和按顺序设置在衬板上的加样垫、检测垫和吸水垫，且加样垫与检测垫之间设有包含金标抗新型冠状病毒抗体或金标抗甲型流感病毒抗体或金标抗乙型流感病毒抗体的金标抗体垫，所述检测垫上包被有由新型冠状病毒抗体或甲型流感病毒抗体或乙型流感病毒抗体形成的检测线，以及包被有由羊抗鼠二抗形成的质控线；

底板，所述底板上开设有三个放置槽，三个所述放置槽以底板的中心为圆心呈圆周分布，所述试纸条置于所述放置槽内，且三个所述放置槽的交汇连通处设有凸柱，所述凸柱的顶部一体成型有锥台，所述锥台的顶部开设有滴液槽，且锥台的侧壁开设有三个引流槽，三个所述引流槽的一端均与滴液槽连通，且引流槽的另一端分别延伸至三条试纸条的加样垫上方；

顶盖，所述顶盖盖设在所述底板上，顶盖上开设有三个配合试纸条的检测线和质控线的观察孔，且顶盖的中心处开设有配合锥台的通孔。

作为进一步的方案，所述滴液槽的槽底设有弧形凸缘，弧形凸缘的边沿延伸至引流槽的一端。

作为进一步的方案，所述顶盖的顶面设有文字标记，所述文字标记靠近所述观察孔。

另外，还提供了新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的制备方法，所述的制备方法用于制备上述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。

作为进一步的方案，所述的制备方法包括以下步骤：

（1）制备金标抗体垫；

（2）在检测垫上包被检测线和质控线；

（3）在衬板上组合加样垫、步骤（1）的金标抗体垫、步骤（2）中包被好的检测垫和吸水垫，从而形成试纸条；

（4）将步骤（3）中的试纸条分别置于底板上的三个放置槽内，在底板上盖上顶盖，形成新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。

作为进一步的方案，步骤（1）中金标抗体垫的制备方法包括以下步骤：

S1、在浓度为0.004-0.012%的氯金酸中加入浓度为1-3%的柠檬酸三钠，氯金酸与柠檬酸三钠的体积比为100%：1.3-2%，煮沸10-20分钟，可得到15-50nm的胶体金溶液；具体的，纳米金粒径均一性影响试纸条的灵敏度和批间差异。通过优化氯金酸加入量、柠檬酸三钠加入量、反应温度、反应时间等工艺条件,利用柠檬酸钠还原法制备单分散、稳定的 15-50纳米金悬浮液。

S2、在步骤S1形成的胶体金溶液中按4-12mg / 100ml分别加入抗新型冠状病毒抗体、抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒抗体的抗体，经搅拌后再按0.1-0.6g/100ml加入动物血清蛋白，得到混合液；

S3、将步骤S2的混合液经离心去沉淀物，得上清液；

S4、将步骤S3的上清液经离心得沉淀物；

S5、将步骤S4的沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M.Ph7.4 Tris-HCI缓冲液中，得到金标抗体溶液；该缓冲液中含0.2-0.6%的动物血清蛋白和0.01-0.06%叠氮钠；

S6、将步骤S5的金标抗体溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，形成金标抗体垫。

本发明至少具有以下有益效果之一：

1、在滴液槽内滴加样液，样液分别通过三个引流槽引流至三条试纸条的加样垫上方，并同步滴加在三条试纸条的加样垫，经过层析作用，样液沿着加样垫、金标抗体垫、检测垫和吸水垫的方向逐渐层析，并在检测线、质控线显现出结果，从而实现在三条试纸条的加样垫上同步滴加而不是分开先后滴加，从而减少检测误差，检测结果更准确。

2、将与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条集合在同一试剂盒上，从而可在同一试剂盒上同时检测新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原，实现快速鉴别检测，并且相应的检测结果都体现在同一试剂盒上，方便检测人员查看检测结果。

3、该试剂盒检测新型冠状病毒抗原和甲、乙型流感病毒抗原时具有较高的特异性和灵敏性，检测过程操作讯速、快捷、方便,适用于临床检验、流行病学调查和场地检疫等多种场合，且操作简便，无需专门设施。

附图说明

图1为本发明实施例的立体图；

图2为图1中的A处放大图；

图3为本发明实施例的立体爆炸图；

图4为本发明实施例中试纸条的结构示意图。

图中，1-底板，11-放置槽，12-凸柱，13-锥台，14-滴液槽，15-引流槽，2-顶盖，21-观察孔，22-通孔，23-文字标记，3-试纸条，31-衬板，32-加样垫，33-金标抗体垫，34-检测垫，35-吸水垫，36-检测线，37-质控线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

实施例1

如附图1所示，本实施例提供的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒，包括与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条3，如附图4所示，每条试纸条3包括衬板31和按顺序设置在衬板31上的加样垫32、检测垫34和吸水垫35，且加样垫32与检测垫34之间设有包含金标抗新型冠状病毒抗体或金标抗甲型流感病毒抗体或金标抗乙型流感病毒抗体的金标抗体垫33，检测垫34上包被有由新型冠状病毒抗体或甲型流感病毒抗体或乙型流感病毒抗体形成的检测线36，以及包被有由羊抗鼠二抗形成的质控线37；可在三条试纸条3的加样垫32上滴加样液，经过层析作用，样液沿着加样垫32、金标抗体垫33、检测垫34和吸水垫35的方向逐渐层析，当样液层析至检测垫34时，如血清含有新型冠状病毒抗原或甲型流感病毒抗原或乙型流感病毒抗原，则在各自的试纸条3上形成检测线36、质控线37，双线为阳性,否则为阴性或检测无效，如若检测无效需要重新检测。

如附图1~3所示，该试剂盒还包括底板1和顶盖2，底板1上开设有三个放置槽11，三个放置槽11以底板1的中心为圆心呈圆周分布，试纸条3置于放置槽11内，从而方便组装，并且使试纸条3准确放置在底板1上的对应位置，避免其错位移动，使三条试纸条3相互独立，互不影响，检测结果可信度高。三个放置槽11的交汇连通处设有凸柱12，凸柱12一方面是用于对三条试纸条3起到限位作用，避免其错位移动，另一方面是使锥台13高于三条试纸条3。同时，凸柱12的顶部一体成型有锥台13，锥台13的顶部开设有滴液槽14，滴液槽14用于承接滴下来的样液，且锥台13的侧壁开设有三个引流槽15，三个引流槽15的一端均与滴液槽14连通，且引流槽15的另一端分别延伸至三条试纸条3的加样垫32上方。

在滴液槽14内滴加样液，样液分别通过三个引流槽15引流至三条试纸条3的加样垫32上方，并同步滴加在三条试纸条3的加样垫32，经过层析作用，样液沿着加样垫32、金标抗体垫33、检测垫34和吸水垫35的方向逐渐层析，并在检测线36、质控线37显现出结果，从而实现在三条试纸条3的加样垫32上同步滴加而不是分开先后滴加，从而减少检测误差，检测结果更准确。

将与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条3集合在同一试剂盒上，从而可在同一试剂盒上同时检测新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原，实现快速鉴别检测，并且相应的检测结果都体现在同一试剂盒上，方便检测人员查看检测结果。

如附图3所示，顶盖2盖设在底板1上，从而可以固定住底板1，避免试纸条3直接暴露于空气中，顶盖2上开设有三个配合试纸条3的检测线36和质控线37的观察孔21，方便检测人员查看相应的检测结果。需要说明的是，如附图1所示，顶盖2的顶面印刷有文字标记23，文字标记23靠近观察孔21。文字标记23内容是关于不同病毒抗原对应的试纸条3，如新型冠状病毒抗原检测试纸条3、甲型流感病毒抗原检测试纸条3和乙型流感病毒抗原检测试纸条3，从而方便检测人员鉴别不同试纸条3。并且，如附图3所示，顶盖2的中心处开设有配合锥台13的通孔22，从而使锥台13可以穿过通孔22，方便检测人员在锥台13的滴液槽14内滴加样液。

作为进一歩的改进，滴液槽14的槽底设有弧形凸缘，弧形凸缘的边沿延伸至引流槽15的一端，从而使样液滴加在弧形凸缘之后，可以更加快速流向引流槽15，避免积聚在滴液槽14内。

实施例2

本实施例提供的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的制备方法，该制备方法用于制备实施例1的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。该制备方法包括以下步骤：

（1）制备金标抗体垫33，金标抗体垫33的制备方法包括以下步骤：

S1、取100mg氯金酸溶于1000ml三蒸水中，加入15ml、浓度为1%的拧檬酸三钠,煮沸15分钟，冷却后得到15-50纳米的胶体金溶液，完成胶体金的制备步骤；

S2、取100ml步骤S1形成的胶体金溶液，用0.2mol碳酸钾溶液调pH8.4,分别加入6mg抗新型冠状病毒抗体、抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒抗体，搅拌20分钟，再加入240mg牛血清白蛋白，继续搅拌5分钟，4℃静置2-4小时，得到混合液，完成胶体金标记抗新型冠状病毒抗体、抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒抗体的步骤；需要说明的是，胶体金标记抗新型冠状病毒抗体、抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒，抗体为抗人IgG单克隆抗体。

S3、将步骤S2的混合液经2000转/分钟离心10分钟，去沉淀物，得上清液；

S4、将步骤S3的上清液经10000转/分钟离心60分钟离心得沉淀物；

S5、将步骤S4的沉淀物按4ml/100ml溶于0.02M Ph7.4 Tris-HCI缓冲液得金标抗体溶液；该缓冲液中含0.25%的牛血清白蛋白和0.02%叠氮钠；

S6、将步骤S5的金标抗体溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，在37℃下2小时干燥而形成金标抗体垫33。

（2）在检测垫34上包被检测线36和质控线37：分别取新型冠状病毒抗体、甲型流感病毒抗体和乙型流感病毒抗体,调浓度为1mg/ml，加入2%的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线36；再取羊抗鼠二抗调浓度为2mg/ml，加入2%的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线36360.5cm处，喷质控线37，按20ul/10cm设置喷膜量，喷膜37℃干燥，2小时，再用0.01mpH7.0含10%小牛血清的PBS，在37℃下封闭30分钟，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。需要说明的是，检测垫34为纤维素膜,该纤维素膜可为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜；

（3）在衬板31上组合加样垫32、步骤（1）的金标抗体垫33、步骤（2）中包被好的检测垫34和吸水垫35，从而形成试纸条3：在塑料衬板31的两端分别粘贴加样垫32和吸水垫35；在其中段粘贴步骤2中包被好的检测垫34，在加样垫32与检测垫34的交接部位，夹贴含金标抗体的玻璃纤维,玻璃纤维的4/5部分在加样垫32中间, 1/5部分在检测垫34上，然后按4毫米宽、8厘米长规格切条。需要说明的是，加样垫32和吸水垫35由多层滤纸制成；

（4）将步骤（3）中的试纸条3分别置于底板1上的三个放置槽11内，在底板1上盖上顶盖2，形成新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。此时，顶盖2的通孔22正对底板1的锥台13，观察孔21正对检测垫34上的检测线36和质控线37。

将上述得到的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的试纸条进行以下实验：

1.1、新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原质控品稀释实验

为了检测出该试纸条的最低检测限，对新型冠状病毒、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原质控品进行浓度梯度稀释。而所谓最低检测限也就是指试纸条所能检测出的最低新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒抗原质控品阳性浓度的能力，是评价试纸条的一个重要指标：检测过程中，将样本溶液(约80μL或4滴)滴加于加样垫,之后样本溶液会向吸水垫方向流动，途中与抗抗体、抗原等结合形成复合物，最终使检测线显色，得出检测结果。其中，新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原质控品，购自上海纽华经贸发展有限公司。

将原浓度为1mg/mL新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒质控品均稀释10000倍得到中值质控品,用牛血清对该溶液分别进行1:20,1:40,1:60,1:80,1:100,1:120浓度稀释，观察不同稀释浓度新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒抗原的检测结果。

1.2、检测新型冠状病毒抗原

设置冲洗液、牛血清为对照组，每次重复3次，取两个不同批次的试纸条进行加样。15分钟内读取试纸条显色结果。

表 1 预实验不同稀释比条件下标记试纸条检测新型冠状病毒抗原结果

注：“++”表示试纸条检测线显色情况，“+”越多表示显色越明显；“—”表示试纸条检测线不显色。

由预实验结果（表1）得出试纸条检测新型冠状病毒抗原质控品的最低检测限在1:50~1:60稀释区间，为了更精确地得知其最低检测限，又对中值新型冠状病毒抗原质控品进行了1:52,1:54,1:56,1:58浓度稀释,同样进行上述实验，记录结果（表2）。

表 2 实验标记试纸条检测新型冠状病毒抗原结果

在上述实验结果基础上，用两个不同批次的试纸条进行1:54稀释后的新型冠状病毒抗原质控品分别重复试验7次，两个批次检测结果均可得到检测线和质控线的显色结果，从而确定其最低检测限为1.85ng/mL。

1.3、检测甲型流感病毒抗原

设置冲洗液、牛血清为对照组，每组重复3次。取两个不同批次的试纸条进行加样。

表 3 预实验不同稀释比条件下标记试纸条检测甲型流感病毒抗原结果

由预实验结果（表3）得出试纸条检测新型冠状病毒抗原质控品的最低检测限在1:40~1:50稀释区间，为了更精确地得知其最低检测限，又对中值新型冠状病毒抗原质控品进行了1:42,1:44,1:46,1:48浓度稀释,同样进行上述实验，记录结果（表4）。

表 4 实验标记试纸条检测甲型流感病毒抗原结果

在上述实验结果基础上，用两个不同批次的试纸条进行1:46和1:48稀释后的新型冠状病毒抗原质控品分别重复试验7次，1:46浓度下两个批次检测结果均可得到检测线和质控线的显色结果，从而确定其最低检测限为2.17ng/mL。

1.4、检测乙型流感病毒抗原

设置冲洗液、牛血清为对照组，每组重复3次。取两个不同批次的试纸条进行加样。

表 5 预实验不同稀释比条件下标记试纸条检测乙型流感病毒抗原结果

由预实验结果（表4）得出试纸条检测新型冠状病毒抗原质控品的最低检测限在1:40~1:50稀释区间，为了更精确地得知其最低检测限，又对中值新型冠状病毒抗原质控品进行了1:52,1:54,1:56,1:58浓度稀释,同样进行上述实验，记录结果（表5）。

表 6 实验标记试纸条检测乙型流感病毒抗原结果

在上述实验结果基础上，用两个不同批次的试纸条进行1:56稀释后的新型冠状病毒抗原质控品分别重复试验7次，两个批次检测结果均可得到检测线和质控线的显色结果，从而确定其最低检测限为1.79ng/mL。

1.5、试纸条的灵敏度检测

在试纸条的最低检测限水平，也就是当新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原抗原和乙型流感病毒抗原抗原质控品浓度分别为1.85ng/mL, 2.17ng/mL和1.79ng/mL时，分别对两种质控品进行100次重复试验，得出实验结果，并根据公式计算试纸条的灵敏度：

灵敏度（%）=100%×[真阳性/（真阳性+假阴性）]

最终检测结果为100份新型冠状病毒抗原质控品中，15份检测结果为阴性，85份检测结果为阳性。92份甲型流感病毒抗原抗原质控品中，10份检测结果为阴性，82份检测结果为阳性。85份新型冠状病毒抗原质控品中，8份检测结果为阴性，77份检测结果为阳性。所以经计算得最终试纸条在新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原抗原和乙型流感病毒抗原抗原质控品时灵敏度分别为85%，89%，91%。

该试剂盒检测新型冠状病毒抗原和甲、乙型流感病毒抗原时具有较高的特异性和灵敏性，检测过程操作讯速、快捷、方便,适用于临床检验、流行病学调查和场地检疫等多种场合，且操作简便，无需专门设施。

以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒，其特征在于，包括：

与新型冠状病毒抗原、甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原对应的三条试纸条（3），每条所述试纸条（3）包括衬板（31）和按顺序设置在衬板（31）上的加样垫（32）、检测垫（34）和吸水垫（35），且加样垫（32）与检测垫（34）之间设有包含金标抗新型冠状病毒抗体或金标抗甲型流感病毒抗体或金标抗乙型流感病毒抗体的金标抗体垫（33），所述检测垫（34）上包被有由新型冠状病毒抗体或甲型流感病毒抗体或乙型流感病毒抗体形成的检测线（36），以及包被有由羊抗鼠二抗形成的质控线（37）；

底板（1），所述底板（1）上开设有三个放置槽（11），三个所述放置槽（11）以底板（1）的中心为圆心呈圆周分布，所述试纸条（3）置于所述放置槽（11）内，且三个所述放置槽（11）的交汇连通处设有凸柱（12），所述凸柱（12）的顶部一体成型有锥台（13），所述锥台（13）的顶部开设有滴液槽（14），且锥台（13）的侧壁开设有三个引流槽（15），三个所述引流槽（15）的一端均与滴液槽（14）连通，且引流槽（15）的另一端分别延伸至三条试纸条（3）的加样垫（32）上方；

顶盖（2），所述顶盖（2）盖设在所述底板（1）上，顶盖（2）上开设有三个配合试纸条（3）的检测线（36）和质控线（37）的观察孔（21），且顶盖（2）的中心处开设有配合锥台（13）的通孔（22）。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒，其特征在于：所述滴液槽（14）的槽底设有弧形凸缘，弧形凸缘的边沿延伸至引流槽（15）的一端。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒，其特征在于：所述顶盖（2）的顶面设有文字标记（23），所述文字标记（23）靠近所述观察孔（21）。

4.新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的制备方法用于制备如权利要求1~3中任一项所述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。

5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：

（1）制备金标抗体垫（33）；

（2）在检测垫（34）上包被检测线（36）和质控线（37）；

（3）在衬板（31）上组合加样垫（32）、步骤（1）的金标抗体垫（33）、步骤（2）中包被好的检测垫（34）和吸水垫（35），从而形成试纸条（3）；

（4）将步骤（3）中的试纸条（3）分别置于底板（1）上的三个放置槽（11）内，在底板（1）上盖上顶盖（2），形成新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒。

6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒与甲、乙型流感病毒抗原联检试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤（1）中金标抗体垫（33）的制备方法包括以下步骤：

S1、在浓度为0.004-0.012%的氯金酸中加入浓度为1-3%的柠檬酸三钠，氯金酸与柠檬酸三钠的体积比为100%：1.3-2%，煮沸10-20分钟，可得到15-50nm的胶体金溶液；

S2、在步骤S1形成的胶体金溶液中按4-12mg / 100ml分别加入抗新型冠状病毒抗体、抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒抗体的抗体，经搅拌后再按0.1-0.6g/100ml加入动物血清蛋白，得到混合液；

S3、将步骤S2的混合液经离心去沉淀物，得上清液；

S4、将步骤S3的上清液经离心得沉淀物；

S5、将步骤S4的沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M.Ph7.4 Tris-HCI缓冲液中，得到金标抗体溶液；该缓冲液中含0.2-0.6%的动物血清蛋白和0.01-0.06%叠氮钠；

S6、将步骤S5的金标抗体溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，形成金标抗体垫（33）。