CN117210605B - 一种鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记及其应用 - Google Patents
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- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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Abstract
本发明公开了一种鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记及其应用，涉及药用植物分子生物学领域。该InDel分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。本发明还提供了一种扩增该InDel分子标记的引物对，以及该InDel分子标记或其扩增引物对在制备鉴定玫红花黄芩的产品中的应用。该InDel分子标记是根据玫红花黄芩SbF3'5'H基因特异性缺失位点设计得到，利用该InDel分子标记可以在黄芩全生长期确定黄芩是否为玫红花黄芩，为玫红花黄芩种质鉴别提供了依据，对于黄芩的杂交育种和品质改良具有重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及药用植物分子生物学领域，特别是涉及一种鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记及其应用。
背景技术
黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)为唇形科黄芩属植物，以其干燥根入药，是大宗常用中药材，具有清热解毒、燥湿泻火、止血安胎之功效。黄芩最早记载于汉代的《神农本草经》，后在东汉的《伤寒杂病论》及明代的《本草纲目》中均有记载。黄芩根提取物中含有丰富的黄酮类、二萜、多糖、氨基酸、挥发油等生物活性成分，其中黄酮类化合物黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素是其主要活性成分。现代药理学表明，黄芩具有广谱的抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、护肝及保护神经等作用。研究显示，黄芩提取物在体外能够有效抑制新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndromecoronavirus 2，SARS-CoV-2)主要蛋白酶3CLpro(3C-like protease)的活性。由黄芩等多味中药组成的清肺排毒汤、宣肺败毒方及金花清感颗粒在抗新型冠状病毒中，临床效果显著。
目前，人工栽培黄芩是临床用药的主要来源，但是黄芩生产仍然处于无序和混乱状态，没有黄芩良种用于生产。在长期的栽培过程中，黄芩产生了许多变异类型，包括花色变异、叶片大小、叶表有无被毛等。研究显示，黄芩不同种质间存在显著的遗传变异及成分差异。玫红花黄芩变异为黄芩分子生物学研究及利用分子育种手段培育黄芩优良品种提供了良好的种质材料。花青素是植物花瓣的主要呈色物质，包括天竺葵素、矢车菊素、飞燕草素等。花青素以苯丙氨酸为前体，经一系列酶促反应生成柚皮素，后在黄烷酮羟化酶F3H、F3′H、F3′5′H的作用下生成二氢黄酮醇类物质，而后经二氢黄酮醇还原酶DFR和花青素还原酶ANS的催化生成呈色的花青素类物质。其中F3′5′H是催化合成蓝色飞燕草素的关键酶基因，被称为“蓝色基因”，F3′5′H缺失是大部分植物不能形成蓝色花的主要原因。
由于花期限制，在开花前幼苗期或花后采种期鉴别玫红花黄芩，尚无相关依据。目前，对于黄芩的鉴别多依赖外观性状或显微鉴别，个人经验及主观判断占比较高，不利于推广。因此，亟需开发一种能够在全生长期准确鉴定玫红花黄芩的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，该InDel分子标记是根据玫红花黄芩SbF3'5'H基因特异性缺失位点设计得到，利用该InDel分子标记可以在黄芩全生长期确定黄芩是否为玫红花黄芩，为玫红花黄芩种质鉴别提供了依据，对于黄芩的杂交育种和品质改良具有重要的应用价值。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记，所述InDel分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明还提供一种扩增上述的InDel分子标记的引物对，包括核苷酸序列如SEQID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。
本发明还提供上述的InDel分子标记或引物对在制备鉴定玫红花黄芩的产品中的应用。
进一步地，所述产品为试剂或试剂盒。
本发明还提供一种鉴定玫红花黄芩的产品，包括上述的引物对。
进一步地，所述产品为试剂或试剂盒。
本发明还提供上述的InDel分子标记、引物对或产品在鉴定玫红花黄芩中的应用。
本发明还提供一种鉴定玫红花黄芩的方法，包括以下步骤：
提取得到待检黄芩的基因组DNA；
以所述基因组DNA为模板，利用上述的引物对进行PCR扩增，当扩增得到核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的片段时，所述待检黄芩即为玫红花黄芩。
进一步地，所述PCR扩增的反应体系为：DNA模板1μL、正向引物1μL、反向引物1μL、2×Premix Taq 10μL和ddH2O 7μL。
进一步地，所述PCR扩增的反应条件为95℃预变性3min；95℃30s，60℃30s，72℃30s，35个循环；72℃延伸5min。
本发明公开了以下技术效果：
本发明提供了一种可以鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记SbFIn1，利用该InDel分子标记，可以通过检测黄芩植株的基因组DNA在黄芩全生长期确定黄芩的花色，不受花期限制。
本发明还提供一种利用InDel分子标记SbFIn1鉴定玫红花黄芩的检测方法，其是一种简捷、准确、可大批量鉴定玫红花黄芩的方法，该方法技术要求简单，对仪器操作要求较低，常规分子实验室的常规仪器即可操作，且方法精准、高效。
本发明为玫红花黄芩种质鉴别提供了依据，对于黄芩的杂交育种和品质改良具有重要的应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为利用比较转录组结合代谢组对控制玫红花黄芩的基因进行分析的结果；
图2为玫红花和蓝紫花黄芩SbF3'5'H基因的序列对比结果，其中方框内表示基因InDel位点特异性；
图3为不同株系蓝紫花和玫红花黄芩SbF3'5'H基因的InDel位点差异，其中方框内表示基因InDel位点特异性；
图4为利用分子标记SbFIn1高通量鉴别玫红花黄芩和蓝紫花黄芩的结果。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1控制黄芩玫红花色基因的确定
为了确定控制黄芩玫红花色的基因，发明人前期利用比较转录组结合靶向代谢组学技术对黄芩蓝紫花和玫红花的花青素组成及基因表达差异进行检测及数据分析。发现蓝紫花中既含有呈现蓝紫色的飞燕草素类花青素，又有呈现红色的矢车菊素类花青素；而玫红花中仅含有呈现红色的矢车菊素类花青素，缺少飞燕草素类花青素。基因表达分析显示，玫红花中SbF3'5'H基因的表达量显著低于蓝紫花(图1)。
实施例2SbF3'5'H基因编码区序列克隆、比对，特异性InDel位点分析
分别提取蓝紫花和玫红花黄芩花RNA，反转录为cDNA，根据转录组测序提供的SbF3'5'H基因序列设计基因扩增引物(引物序列由青岛派森诺生物科技有限公司合成)，其上、下游引物序列如下：
F35HF:5'-ATGAATGTTTTTTTAATGATTAGCG-3'(SEQ ID NO.3)；
F35HR:5'-TCAAATAGGAGCATAGCAATGTG-3'(SEQ ID NO.4)；
对选取的株系进行SbF3'5'H基因扩增；
其中PCR扩增反应体系为：DNA模板1μL，正向引物和反向引物各1μL，2×PrimeSTARMAX Premix 10μL，ddH2O 7μL。
PCR扩增反应条件为95℃预变性5min；95℃30s，58℃30s，72℃1.5min，35个循环；72℃延伸7min。
将扩增得到的PCR产物连接pMD18-T载体，转化大肠杆菌，挑取单克隆利用T载体通用引物进行测序(北京擎科生物科技股份有限公司青岛分公司提供测序)。利用多序列比对软件工具DNAMAN，通过序列比对分析，发现相对于蓝紫花黄芩SbF3'5'H基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，玫红花黄芩SbF3'5'H基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)在第933-939位存在特异性的7bp的碱基缺失(如表1和图2所示)。
表1突变碱基
SEQ ID NO.1：
ATGAATGTTTTTTTAATGATTAGCGAAATTATTGTAGCCATCTTAATTTATGTTTTCATCCGTTTCCTCGTCTCGAAAATCACCACCACCAATGGCGGTGAGCTGCCACCGGGGCCGAGTGGCTTCCCGATTGTCGGTGCCCTTCCACTCCTCGGTGACATGCCACATGTCGCACTGGCCAATTTGTCCAAAATTTATGGTCCTGTTATGTACCTAAAAGTTGGTACACGTGGCATGGTGGTGGCCTCAACCCCTGATTCCGCGCAAGCCTTCCTCAAAACCCTAGACTCCAACTTCTCCGATCGCCCTGATCATGCCGGGCCCACAATCCTCGCATATGGTGCACAGGACATGGTCTTTGCACCATACGGGCCCAAGTGGAGACTACTCAGGAAACTGAGCAATCTCCACATGTTGGGCGGAAAGGCTCTGGACGAGTGGGCCAACGTGAGGTCCTCGGAGATGGGGCACATGCTCCAGGACATGCACGAGGCTAGCCGGCGTGGGGAGCCGGTGGCCCTGCCGGAGATGCTGGTCTATGCAATGGCTAACATGATAGGCCAGGTGATACTAAGCCAAAGGGTGTTCGTTACAAAAGGGAAGGAAGTGAATGAGTTCAAGGACATGGTTGTGGAGCTGATGACGTCAGCTGGATACTTCAACATTGGTGACTTCATTCCATGGCTTGCTTGGATGGATTTGCAAGGGATCGAGAAAGGGATGAAGCGTTTGCACGAAAAATTCGACGTTTTGATCAGTACAATGTTCGATGATCACTTGTTAACTACTCATAAAAGGAAGGAAAAACCAGATTTTCTTGATGTTCTTCTGGCTAATCGTGATAACTCCGAAGGGGAAAGCCTCACCAGAACCAATATCAAAGCCCTTTTACTGAACTTGTTCACTGCTGGCACGGACACATCTTCAAGCACAATAGAGTGGGCTCTTTCAGAGATGATACAAAATCCAAGTATCTTGCAAAAGGCGCATGAAGAAATGGATCGGGTCATAGGCCGGGGCAGACGACTGCAAGAATCCGACATACCGAAGTTATCGTACCTACAAGCAATCTGCAAGGAGTCATTTCGAAAACATCCTTCAACTCCATTAAACCTACCTCGTATCTCATCCAAAGCATGCATGGTTAACGACTACTACATACCAAAGAACACGAGGCTGAGTGTGAACATATGGGCGATCGGGAGGGACCCCAACGTGTGGGAGAATCCTCTCGATTTCAACCCGGATAGGTTCTTGGGAACGAACGAAAAGATCGACCCCAGAGGGAACAACTTCGAGCTGATCCCTTTTGGGGCTGGTCGGAGGATCTGTGCTGGGACGAGGATGGGGATTGTTCTGGTCGAGTATATTTTAGGCACGTTGGTGCACTCCTTCGATTGGAAACTGCCACGTGGTGTGAATGAGCTCAACATGGACGAGACATTCGGGCTTGCGTTGCAGAAAGCTGTCCCTCTTTCAGCCGTGGTCACTCCTAGGTTGCCCCCACATTGCTATGCTCCTATTTGA。
SEQ ID NO.2：
ATGAATGTTTTTTTAATGATTAGCGAAATTATTGTAGCCATCTTAATTTATGTTTTCATCCGTTTCCTCGTCTCGAAAATCACCACCACCAATGGCGGTGAGCTGCCACCGGGGCCGAGTGGCTTCCCGATTGTCGGTGCCCTTCCACTCCTCGGTGACATGCCACATGTCGCACTGGCCAATTTGTCCAAAATTTATGGTCCTGTTATGTACCTAAAAGTTGGTACACGTGGCATGGTGGTGGCCTCAACCCCTGATTCCGCGCAAGCCTTCCTCAAAACCCTAGACTCCAACTTCTCCGATCGCCCTGATCATGCCGGGCCCACAATCCTCGCATATGGTGCACAGGACATGGTCTTTGCACCATACGGGCCCAAGTGGAGACTACTCAGGAAACTGAGCAATCTCCACATGTTGGGCGGAAAGGCTCTGGACGAGTGGGCCAACGTGAGGTCCTCGGAGATGGGGCACATGCTCCAGGACATGCACGAGGCTAGCCGGCGTGGGGAGCCGGTGGCCCTGCCGGAGATGCTGGTCTATGCAATGGCTAACATGATAGGCCAGGTGATACTAAGCCAAAGGGTGTTCGTTACAAAAGGGAAGGAAGTGAATGAGTTCAAGGACATGGTTGTGGAGCTGATGACGTCAGCTGGATACTTCAACATTGGTGACTTCATTCCATGGCTTGCTTGGATGGATTTGCAAGGGATCGAGAAAGGGATGAAGCGTTTGCACGAAAAATTCGACGTTTTGATCAGTACAATGTTCGATGATCACTTGTTAACTACTCATAAAAGGAAGGAAAAACCAGATTTTCTTGATGTTCTTCTGGCTAATCGTGATAACTCCGAAGGGGAAAGCCTCACCAGAACCAATATCAAAGCCCTTTTACTGAACTTGTTCACTGCTGGCACGGACACATCTTCAAGCACTGGGCTCTTTCAGAGATGATACAAAATCCAAGTATCTTGCAAAAGGCGCATGAAGAAATGGATCGGGTCATAGGCCGGGGCAGACGACTGCAAGAATCCGACATACCGAAGTTATCGTACCTACAAGCAATCTGCAAGGAGTCATTTCGAAAACATCCTTCAACTCCATTAAACCTACCTCGTATCTCATCCAAAGCATGCATGGTTAACGACTACTACATACCAAAGAACACGAGGCTGAGTGTGAACATATGGGCGATCGGGAGGGACCCCAACGTGTGGGAGAATCCTCTCGATTTCAACCCGGATAGGTTCTTGGGAACGAACGAAAAGATCGACCCCAGAGGGAACAACTTCGAGCTGATCCCTTTTGGGGCTGGTCGGAGGATCTGTGCTGGGACGAGGATGGGGATTGTTCTGGTCGAGTATATTTTAGGCACGTTGGTGCACTCCTTCGATTGGAAACTGCCACGTGGTGTGAATGAGCTCAACATGGACGAGACATTCGGGCTTGCGTTGCAGAAAGCTGTCCCTCTTTCAGCCGTGGTCACTCCTAGGTTGCCCCCACATTGCTATGCTCCTATTTGA。
实施例3分子标记SbFIn1引物设计与测序检测
(1)引物设计
根据实施例2中发现的SbF3'5'H基因的InDel特异性，开发InDel分子标记SbFIn1(引物序列由青岛派森诺生物科技有限公司合成)，具体引物序列如下：
SbFIn1F:5'-TTCACTGCTGGCACGGACAC-3'(SEQ ID NO.5)；
SbFIn1R:5'-TGTCGGATTCTTGCAGTCGTC-3'(SEQ ID NO.6)。
InDel分子标记SbFIn1的核苷酸序列：
TTCACTGCTGGCACGGACACATCTTCAAGCACTGGGCTCTTTCAGAGATGATACAA AATCCAAGTATCTTGCAAAAGGCGCATGAAGAAATGGATCGGGTCATAGGCCGGGGCAG ACGACTGCAAGAATCCGACA(SEQ IDNO.7)
(2)DNA提取
分别取8个蓝紫花黄芩株系和8个玫红花黄芩株系叶片，采用TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒提取叶片DNA。具体步骤如下：
a.取植物新鲜组织约100mg(或干重组织约30mg)，加入液氮充分碾磨。
b.将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中(实验前在预热的GP1中加入疏基乙醇，使其终浓度为0.1wt％)，迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
c.加入700μL氯仿，充分混匀，12,000rpm(13,400×g)离心5min。
d.小心地将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700μL缓冲液GP2，充分混匀。
e.将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000rpm(13,400×g)离心30sec，弃掉废液。
f.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前加入无水乙醇)，12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
g.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前加入无水乙醇)，12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
h.重复上一步骤。
i.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
j.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加70μLddH2O，室温放置5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。-20℃保存备用。
(3)PCR扩增
利用InDel分子标记SbFIn1的特异性引物对(核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示)分别对8个蓝紫花和8个玫红花黄芩叶片基因组DNA进行PCR扩增。
PCR扩增的反应体系为：DNA模板1μL，正向引物和反向引物各1μL，2×Premix Taq10μL，ddH2O 7μL。
PCR扩增的反应条件为95℃预变性3min；95℃30s，60℃30s，72℃30s，35个循环；72℃延伸5min。
(4)测序
PCR产物送北京擎科生物科技股份有限公司青岛分公司利用反向引物(SEQ IDNO.6)进行测序，利用多序列比对软件工具DNAMAN对序列进行比对分析，结果发现8个玫红花黄芩PCR扩增片段均存在特异性的7bp的缺失，InDel分子标记SbFIn1测序结果与黄芩花色完全相符(图3)。
实施例4利用InDel分子标记SbFIn1鉴定玫红花黄芩的高通量检测方法
分别采集60个黄芩株系叶片，分别提取叶片基因组DNA(方法同实施例3)，利用InDel分子标记SbFIn1的特异性引物对(核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示)进行PCR扩增，扩增体系及条件同实施例3。
PCR扩增产物检测采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。
8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳100mL配方为：40％丙烯酰胺(acrylamide:bisacrylamid＝39:1)20mL、5×TBE 20mL、ddH2O 60mL、20％过硫酸铵1000μL和TEMED 100μL。
其中5×TBE 1000mL配方为Tris 54g，硼酸27.5g，0.5mol/L EDTA20 mL，pH 8.0。
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法如下：
a.取2套干净的聚丙烯酰胺凝胶专用玻璃板，分别用夹子夹紧，放在灌胶槽内。
b.根据8％非变性聚丙烯酰胺凝胶配置20mL封底液(40％丙烯酰胺4mL、5×TBE4mL、ddH2O 12mL、20％过硫酸铵200μL和TEMED 20μL)，每个板子10mL，从玻璃板上方缓慢灌入底部，待胶凝固。
c.根据8％非变性聚丙烯酰胺凝胶配置80mL封底液(40％丙烯酰胺16mL、5×TBE16mL、ddH2O 48mL、20％过硫酸铵800μL和TEMED 80μL)，每个板子40mL，从玻璃板上方缓慢灌入板中间，快速插入梳子，梳子不宜插得太深，待胶凝固。
d.胶凝后，轻轻拔下梳子，用去离子水将插梳孔上方的残胶倒置冲洗干净，将2套胶板放入电泳槽，加入1×TBE电泳缓冲液。
e.每个胶孔内加2～3μL样品，并加入DL 2000DNAmarker以便区分条带大小。
f.接通电泳仪电源，先用240V电压预电泳约2min，至DNAmarker两条带分离后将电压调至150V，电泳3.5h。
银染显色方法如下：
a.称取0.5g硝酸银溶于500mL去离子水配成0.1％硝酸银溶液，对电泳后的聚丙烯酰胺凝胶进行染色15min。
b.去离子水快速漂洗30s左右。
c.配置500mL显影液(500mL去离子水+10g NaOH+0.2-0.3gNa2CO3，750μL甲醛现用现加)，对染色后的聚丙烯酰胺凝胶进行显色约15min，不断摇动，直至DNA条带清晰可见。
d.去离子水漂洗2次。
e.观察拍照。
结果如图4所示，结果显示电泳结果出现135bp特征条带的均为玫红花黄芩，电泳结果出现142bp特征条带的均为蓝紫花黄芩。
由于黄芩花色只有在花期才能显现，在苗期、尤其是种子收获期无法通过肉眼鉴别蓝紫花和玫红花黄芩，而本发明采用分子标记进行黄芩花色鉴定，技术要求简单，可直接通过PCR扩增和凝胶电泳即可实现，并且准确、高效，是一种简单、快捷、可高通量检测玫红花黄芩的方法，在黄芩种质鉴定方面具有重要应用价值，也为利用分子育种手段培育黄芩优良品种奠定基础。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (9)
1.一种扩增鉴定玫红花黄芩的InDel分子标记的引物对，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向引物；
所述InDel分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
2.一种如权利要求1所述的引物对在制备鉴定玫红花黄芩的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂或试剂盒。
4.一种鉴定玫红花黄芩的产品，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。
5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品为试剂或试剂盒。
6.一种如权利要求1所述的引物对或权利要求4或5所述的产品在鉴定玫红花黄芩中的应用。
7.一种鉴定玫红花黄芩的方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取得到待检黄芩的基因组DNA；
以所述基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，当扩增得到核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的片段时，所述待检黄芩即为玫红花黄芩。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：DNA模板1μL、正向引物1μL、反向引物1μL、2×Premix Taq 10μL和ddH2O 7μL。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为95℃预变性3min；95℃30s，60℃30s，72℃30s，35个循环；72℃延伸5min。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108546773A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-09-18 | 沈阳农业大学 | 用于鉴定红花草莓花色性状的ssr分子标记的引物及应用 |
| CN111386342A (zh) * | 2017-10-03 | 2020-07-07 | 三得利控股株式会社 | 具有蓝色系花色的转化植物及其制作方法 |
| CN114410821A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-04-29 | 北京市农林科学院 | 鉴定苋菜叶色性状的InDel分子标记及其应用 |
-
2023
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111386342A (zh) * | 2017-10-03 | 2020-07-07 | 三得利控股株式会社 | 具有蓝色系花色的转化植物及其制作方法 |
| CN108546773A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-09-18 | 沈阳农业大学 | 用于鉴定红花草莓花色性状的ssr分子标记的引物及应用 |
| CN114410821A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-04-29 | 北京市农林科学院 | 鉴定苋菜叶色性状的InDel分子标记及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Metabolomic and Transcriptomic Profiling Uncover the Underlying Mechanism of Color Differentiation in Scutellaria baicalensis Georgi. Flowers;Defu Wang 等;Front Plant Sci.;第13卷;全文 * |
| 不同花色黄芩中dfr基因的克隆及时空表达分析;王疆然 等;生物工程学报;第37卷(第4期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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