CN117180318B - 一种后生元复合发酵液、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种后生元复合发酵液、其制备方法和应用。后生元复合发酵液由黄精多糖提取物和罗伊式乳杆菌WX‑94制成,其中，黄精多糖提取物为发酵基质，罗伊式乳杆菌为发酵菌种，经复合发酵得到所述后生元复合发酵液。本发还公开了包含后生元复合发酵液的后生元复合发酵制剂以及后生元复合发酵液在制备改善糖脂代谢紊乱功能药物中应用。本发明中黄精多糖提取物作为发酵基质可促进罗伊式乳杆菌殖，并且能够代谢产生具有良好抗氧化性、抗炎、抗肿瘤和提高免疫力的代谢物，同时该后生元发酵液对高糖高脂诱导的脂代谢紊乱和代谢器官损伤具有改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种后生元复合发酵液、其制备方法和应用。
背景技术
由不健康饮食引起的肠道微生态失衡继而引发的代谢器官炎症加剧、功能失调、免疫降低等问题已经严重威胁我国人群健康。肠道微生物参与营养吸收和代谢等重要生理过程，越来越多的研究揭示了它与糖尿病、心脏病和多种癌症等多种慢性代谢疾病之间的紧密联系。罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）是目前已报道的几乎可存在于所有脊椎动物和哺乳动物肠道内的一种益生菌，定植能力强，具有改善肠道健康，增强糖脂代谢功能和肠道屏障，减少炎症并加强身体免疫功能等多个健康功效。罗伊氏乳杆菌于2003年正式被卫生部批准为可食用菌株，广泛应用于益生菌食品和保健品中。然而，由于氧气含量、温度、湿度和酸碱度等外界环境因素以及体内复杂生理环境对益生菌活性和功能影响巨大，直接服用罗伊氏乳杆菌等益生菌，个体差异大，作用缓慢，甚至作用效果达不到预期效果。食品加工通常需要高温高压，对益生菌的活度和益生功能保持极为不利。
越来越多的研究表明，人为灭活的益生菌体系，包括死亡的菌细胞、菌细胞原有成分（肽聚糖衍生的微肽、磷壁酸、内外多糖、细胞表面蛋白和菌毛或鞭毛等），以及益生菌代谢过程中分泌产生的蛋白质/肽、细菌素（如罗伊氏菌素等）、细胞-游离上清液、各类有机酸如乳酸和乙酸、维生素、神经递质和生物表面活性剂等的代谢产物，也在抗炎症、抗氧化、调节免疫、预防或治疗代谢性疾病等方面发挥积极作用。
后生元不仅对人体健康产生有益的影响，还避免了活菌本身生物利用度低、效果不稳定、易传递耐药基因等问题。热灭活罗伊氏乳杆菌DSM17648可有效减少胃中的幽门螺杆菌数量。热灭活罗伊氏乳杆菌GMNL-263可有效降低高脂大鼠体重和胰岛素抵抗，加速脂肪分解，还可以显著降低2型糖尿病患者血压水平，显著影响受试者肠道菌群。
现有的技术中后生元大部分与多种菌种或其他成分进行混合使用，如CN113854461A公开的一种复合后生元固体饮料及其制备方法、CN114480192A公开的植物乳杆菌后生元及其制备方法与应用、CN114984058A公开的基于的混合益生菌及其代谢产物配方在制备缓解结直肠炎产品中的应用。然而，并无利用罗伊氏单一菌种制备核心成分明确且具备改善代谢功能的后生元。
黄精（Polygonati Rhizoma）是一种著名的药食同源植物，始载于《名医别录》，其食用历史已有2000多年。陕西自古至今都是黄精的道地产区，有成熟的种植技术和加工技术。黄精具有“补气养阴，健脾，润肺，益肾”之效。现代食品营养学研究表明，黄精富含多糖、甾体皂苷、挥发油和生物碱等多种活性成分，具有降糖降脂、抗肿瘤、抗炎，抗氧化和抗衰老等健康作用。黄精水提物对高脂饮食小鼠有减重、提高糖耐量等效果，能够缓解由高脂饮食诱发的肝脏脂肪变性以及小肠上皮细胞的损伤与炎症，显著影响高脂饲养的小鼠肠道菌群组成及功能，降低厚壁菌门与拟杆菌门的比例，增加产短链脂肪酸菌的相对丰度，减少产生肠道内毒素菌的相对丰度。中国专利CN 110522843A公开了黄精在调节肠道微生物中的用途。
当前无研究表明黄精提取物（富含黄精多糖）对罗伊氏乳杆菌的增殖作用及其对菌的代谢物的影响。
鉴于此，有必要提供一种后生元复合发酵液、其制备方法和应用,以解决上述不足。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种后生元复合发酵液、其制备方法和应用。本发明的黄精多糖提取物对罗伊式乳杆菌具有增殖作用；本发明的黄精多糖提取物与罗伊式乳杆菌发酵培养的后生元复合发酵液具有抗氧化活性；本发明的黄精多糖对罗伊式乳杆菌后生元复合发酵液的代谢物组成有影响，采用黄精多糖提取物为发酵基质，提供体院，可大幅提升罗伊式乳杆菌后生元体系中的3-O-甲基槲皮素-7-O-双葡萄糖苷-4＂-O-葡萄糖苷、焦棓酸、儿茶酚、山萘酚、刺芒柄花素、甘草素、芹菜素、染料木素、芥子醛等黄酮和酚酸类物质的含量，使得后生元复合发酵制剂的抗氧化性、抗炎、抗肿瘤和提高免疫力等多种健康功效；本发明的黄精多糖提取物和罗伊式乳杆菌后生元发酵复合发酵液对高糖高脂诱导的大鼠脂代谢紊乱和代谢器官损伤具有明显的改善作用。
本发明的目的是提供一种后生元复合发酵液。
本发明的另一目的是提供一种后生元复合发酵液的制备方法。
本发明的另一目的是还提供一种后生元复合发酵液的应用。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，由黄精多糖提取物和罗伊式乳杆菌WX-94制成,其中，
黄精多糖提取物为发酵基质，罗伊式乳杆菌为发酵菌种，经复合发酵得到所述后生元复合发酵液。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，所述罗伊式乳杆菌WX-94是CN111647525A中公开的保藏编号为CGMCC No.15062的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillusreuteri）WX-94。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，所述发酵基质还包括培养基，所述黄精多糖提取物在所述发酵基质中的质量百分数为2～8%。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，所述培养基包括如下原料：蛋白胨8～12g/L、牛肉浸粉6～10g/L、酵母浸粉2～6g/L、磷酸氢二钾1～3g/L、柠檬酸氢二钾1～3g/L、乙酸钠3～7g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L、硫酸锰0.02～0.06g/L和吐温750～850g/L。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，所述发酵基质的pH值5.5～6.0。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液，所述黄精提取物由如下步骤制备而成：
生黄精除去杂质，洗净，切丁;
称取生黄精，加入7倍体积的水浸泡30min，然后一次煎煮1h，过滤；
向过滤的滤渣中加入7倍体积的水，二次煎煮1h；
合并滤液，将滤液浓缩，加入3倍体积的乙醇进行醇沉2次，收集沉淀物；
将沉淀物用适量蒸馏水溶解完全，加入Sevage试剂震荡3min，然后在3000r/min下离心15min，静置分三层，分液保留最上层的多糖浊液；
向多糖浊液中再加入Sevage试剂洗涤、分液，循环2次，即制得黄精多糖提取物。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵液的制备方法，包括如下步骤：
将罗伊式乳杆菌接种至所述发酵基质中，厌氧发酵培养得到后生元复合发酵液。
根据本发明具体实施方式提供的的制备方法，所述罗伊式乳杆菌WX-94的接种量为8～12%；所述厌氧发酵的温度为35～40℃。
根据本发明具体实施方式提供的后生元复合发酵制剂，其包含上述的后生元复合发酵液。
优选的，该后生元复合发酵制剂的形式可以为液态、固态或半固态形式。
本发明还提供了该述后生元复合发酵液在制备改善糖脂代谢紊乱功能药物中应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明的黄精多糖提取物对罗伊式乳杆菌具有增殖作用；
2、本发明的黄精多糖提取物与罗伊式乳杆菌发酵培养的后生元复合发酵液具有抗氧化活性。
3、本发明的黄精多糖对罗伊式乳杆菌后生元复合发酵液的代谢物组成有影响，采用黄精多糖提取物为发酵基质，提供体院，可大幅提升罗伊式乳杆菌后生元体系中的3-O-甲基槲皮素-7-O-双葡萄糖苷-4＂-O-葡萄糖苷、焦棓酸、儿茶酚、山萘酚、刺芒柄花素、甘草素、芹菜素、染料木素、芥子醛等黄酮和酚酸类物质的含量，使得后生元复合发酵制剂的抗氧化性、抗炎、抗肿瘤和提高免疫力等多种健康功效。
4、本发明的黄精多糖提取物和罗伊式乳杆菌后生元发酵复合发酵液对高糖高脂诱导的大鼠脂代谢紊乱和代谢器官损伤具有明显的改善作用。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的罗伊氏乳杆菌WX-94在不同碳源培养基中的生长情况统计图；
图2为本发明实施例2提供的不同碳源处理组对DPPH的清除率折线图；
图3为本发明实施例2提供的不同碳源处理组对ABTS阳离子自由基清除率折线图；
图4为本发明实施例2提供的不同碳源处理组铁离子还原能力折线图；
图5为本发明实施例2提供的不同添加量黄精提取物后生元制剂抗氧化活性图；
图6为本发明实施例3提供的主成分分析score图；
图7为本发明实施例3提供的代谢物聚类热图；
图8为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物7，3＇，4＇-三羟基黄酮含量统计图；
图9为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物7-O-甲基槲皮素-3-O-半乳糖苷-6＂-鼠李糖苷含量统计图；
图10为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物芹菜素 7-O-(2G鼠李糖基)龙胆二糖苷含量统计图；
图11为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物芹菜素含量统计图；
图12为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物儿茶酚含量统计图；
图13为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物芒柄花素含量统计图；
图14为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物γ-亚麻酸含量统计图；
图15为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物5,7,4＇-三羟基异黄酮含量统计图；
图16为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物黄豆黄素含量统计图；
图17为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物异欧前胡素含量统计图；
图18为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物异甘草素含量统计图;
图19为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物山奈酚含量统计图；
图20为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物曲酸含量统计图；
图21为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物甘露醇含量统计图；
图22为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物氧化小蘖碱含量统计图；
图23为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物苯乙酸含量统计图；
图24为本发明实施例3提供的不同碳源处理组代谢物邻苯三酚含量统计图；
图25为本发明实施例4提供的实验设计图；
图26为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠体重统计图；
图27为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠肝脏重量统计图；
图28为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠肾脏重量统计图；
图29为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠空腹血糖统计图；
图30为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠口服葡萄糖后血糖变化折线图；
图31为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠口服葡萄糖后血糖随时间变化的曲线下面积统计图。
图32为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清谷胱甘肽含量统计图；
图33为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清丙二醛含量统计图；
图34为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清总胆固醇含量统计图；
图35为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清甘油三酯含量统计图；
图36为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清谷丙转氨酶含量统计图；
图37为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠血清谷草转氨酶含量统计图；
图38为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠肝脏组织切片观测图；
图39为本发明实施例4提供的不同实验组和对照组大鼠结肠组织切片观测图。
注：图26-29和32-37中，不同小写字母a、b表示差异显著（P＜0.05），无字母或有相同字母表示差异不显著。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
下述实验例中用到的Sevage试剂为氯仿和正丁醇按体积比4:1混合制成。
下述实验例中用到的乙醇为80%乙醇。
下述实验例中的发酵培养基选择MRS培养基的主要原料，碳源包括但不限于：黄精提取物、β-葡萄糖、山药多糖提取物、黑木耳多糖提取物和马齿苋多糖提取物中的任意一种，发酵基质的原料还包括：
蛋白胨8～12g/L、牛肉浸粉6～10g/L、酵母浸粉2～6g/L、磷酸氢二钾1～3g/L、柠檬酸氢二钾1～3g/L、乙酸钠3～7g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L、硫酸锰0.02～0.06g/L和吐温750～850g/L。
发酵基质的pH值5.5～6.0。
为试验需要黄精提取物添加到发酵基质中的质量百分数为0～10%，优选为2～8%，进一步优选为5%；其中，黄精提取物添加量＞8%时，发酵培养基的颜色为棕色，对OD值的检测结果会造成干扰。
实施例1
本实施例研究不同碳源处理组对罗伊式乳杆菌WX-94生长影响试验。
1、黄精多糖提取物制备
生黄精除去杂质，洗净，切丁;
称取500g，加入7倍体积的水浸泡30min，然后一次煎煮1h，过滤；
向过滤的滤渣中加入7倍体积的水，二次煎煮1h；
合并滤液，将滤液浓缩至100mL，加入3倍体积的乙醇进行醇沉2次，收集沉淀物；
将沉淀物用适量蒸馏水溶解完全，加入Sevage试剂震荡3min，然后在3000r/min下离心15min，静置分三层，分液保留最上层的多糖浊液；
向多糖浊液中再加入Sevage试剂洗涤、分液，循环2次，即制得黄精多糖提取物。
2、罗伊式乳杆菌WX-94的活化
在超净工作台中，蘸取保存管中的菌液，平板划线后在厌氧工作站中37℃静置过夜培养；挑取平板上的单菌落接种与液体培养基中活化24h，按5.0%的接种量进行培养，得到罗伊式乳杆菌WX-94的活化液。
3、不同碳源对罗伊式乳杆菌WX-94生长影响试验：
提供质量百分数为5%的不同碳源的发酵基质，以不添加碳源的MRS肉汤培养基作为对照，按10%的接种量接种罗伊氏乳杆菌WX-94，在37℃下厌氧静置培养，分别在0h、12h、24h、36h、48h和72h取样，在波长600nm处测定OD值，测试结果如图1所示。
由图1可见，在培养的24h内，罗伊氏乳杆菌WX-94在以黄精多糖提取物为碳源以及β-葡萄糖为碳源的MRS培养基中均可以快速生长，并在24h达到最大，黄精多糖提取物为碳源时，罗伊氏乳杆菌WX-94的生长繁殖速度优于β-葡萄糖为碳源，表明黄精多糖提取物对罗伊氏乳杆菌WX-94的增值作用显著高于其他多糖提取物和和β-葡聚糖。
实施例2
本实施例研究不同碳源处理组对罗伊式乳杆菌β-葡萄糖WX-94后生元抗氧化活性的影响。
以10％的接种量将罗伊氏乳杆菌液分别接种到含有5%黄精多糖提取物的发酵基质、5%葡萄糖的发酵基质和无糖MRS培养基中，分别在0h、12h、24h、36h、48h和72h取样，80℃下灭菌15min，将灭菌样本在12000r/min离心5min，静置，取上清液用0.22μm滤膜过滤；
将上清液的样液分别命名为PK_Postbiotics、MRS_Postbiotics和sugar-freeMRS，测试上清液样液的抗氧化活性。
不同碳源处理组抗DPPH自由基活性，测试方法：取1mL样液和2mL浓度为0.04mg/mL的DPPH溶液混匀，避光反应30min，在517nm波长下测定吸光度。
不同碳源处理组ABTS阳离子自由基清除，测试方法：取200μL样液和800μL的ABTS工作液混匀，避光反应6min，立即在734nm波长下测定吸光度。
不同碳源处理组铁离子还原能力（FRAP），测试方法：取样液、pH=6.6的PBS缓冲溶液和1%铁氰化钾溶液等体积混匀，在50℃水浴中反应20min，加入10%三氯乙酸摇匀；静置取上清液和0.1%三氯化铁混匀，静置10min，在700nm处测定吸光度。
测试结果如图2-5所示。
由图2-5可见，结果表明，黄精多糖提取物为碳源培养罗伊氏乳杆菌WX-94后生元体系（PK_Postbiotics）抗氧化活性显著高于以葡萄糖为碳源的代谢物体系。
实施例3
本实施例研究不同碳源处理组对罗伊式乳杆菌WX-94后生元代谢物组成的影响。
以无糖MRS培养基作为空白对照，进行LC-MS/MS质谱分析以β-葡萄糖和黄精多糖提取物为碳源培养的罗伊氏乳杆菌WX-94后生元代谢物（培养24h后灭菌）；测试样品采用Agilent 1290 Infinity LC超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；柱温25℃；流速0.3 mL/min；流动相组成为A：水+25 mmol/L 乙酸铵+25 mmol/L氨水；B：乙腈；梯度洗脱程序如下：0～0.5min，95%B；0.5～7 min，B从95%线性变化至65%；7～8 min，B从65%线性变化至40%；8～9 min，B维持在40%；9～9.1min，B从40%线性变化至95%；9.1～12min，B维持在95%；整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中。分别采用电喷雾电离（ESI）正离子和负离子模式进行检测。样品经超高效液相色谱仪分离后用Agilent 6550质谱仪进行质谱分析，ESI源条件如下：气体温度：250℃；干燥气体：16L/min；喷雾器：20 psig；鞘流气温：400℃；鞘流气流速：12 L/min；Vcap电压：3000V；喷嘴电压：0V；碎裂器电压：175V；质量范围：50～1200；取得率：4Hz；周期： 250 ms。样本检测完毕后，采用AB Triple TOF 6600质谱仪对代谢物进行鉴定，采集样品的一级、二级谱图。ESI源条件如下：离子源气体1（Gas1）：40；离子源气体2（Gas2）：80；气帘气（CUR）：30；源温度：650℃；电压浮动（ISVF）：±5000V（正负两种模式）；二级质谱采用信息依赖获取（IDA）获得，并且采用高灵敏度模式；去簇电压（DP）：±60V（正负两种模式）；碰撞能量：35±15eV；IDA设置如下：排除4Da之内的同位素，每个周期监测候选离子数：10。数据采集是按质量范围进行分段，50～300，290～600，590～900，890～1200，从而扩大二级谱图的采集率，每个方法每段采集四个重复。所采集获得的数据，基于MetDDA和LipDDA方法进行代谢物的结构鉴定。
图6为本实验例主成分分析score图；
图7为代谢物聚类图；
图8-24为代谢物含量对比图。
研究结果表明：无碳源MRS培养基、β-葡萄糖为碳源的MRS培养基和以黄精多糖提取物为碳源的MRS培养基对罗伊氏乳杆菌代谢产物影响显著。三种培养基发酵罗伊氏乳杆菌24小时代谢物后黄精多糖提取物为碳源大幅提升罗伊氏乳杆菌后生元发酵液的抗氧化性能，其代谢物3-O-甲基槲皮素-7-O-双葡萄糖苷-4＂-O-葡萄糖苷、焦棓酸、儿茶酚、山萘酚、刺芒柄花素、甘草素、芹菜素、染料木素、芥子醛等黄酮和酚酸类物质具有良好的抗氧化、抗炎、抗肿瘤和提高免疫力等多种健康功效。
实验例4
本实验例研究黄精多糖和罗伊式乳杆菌WX-94后生元复合发酵液对高糖高脂诱导大鼠脂代谢紊乱和代谢器官损伤的改善作用。
根据图25所示设计实验进行研究，具体为：
75只4周龄SD大鼠，适应饲养一周后，随机分六组，分别为：PK实验组10只、PK_Postbiotics-Low实验组10只、PK_Postbiotics-High实验组10只、MRS_Postbiotics实验组10只、HFHS实验组10只和NC对照组15只；对照组每日正常食水喂养；PK实验组、PK_Postbiotics-Low实验组、PK_Postbiotics-High实验组、MRS_Postbiotics实验组、HFHS实验组（HFHS）每日喂养高脂（30%猪油饲料）和高果糖（15%果糖）饲料，并每日进行灌胃，灌胃具体为：PK实验组每日灌胃0.3mL黄精多糖提取物；PK_Postbiotics-Low实验组每日灌胃0.3mL以10％的接种量将罗伊氏乳杆菌WX-94接种到2%黄精多糖提取物的MRS无糖培养基中培养24h后的发酵液；PK_Postbiotics-High实验组每日灌胃0.3mL以10％的接种量将罗伊氏乳杆菌接种到5%黄精多糖提取物的MRS无糖培养基中，培养24h后的发酵液；MRS_Postbiotics实验组每日灌胃0.3mL以10％的接种量将罗伊氏乳杆菌接种到以5%β-葡萄糖为碳源的MRS培养基中，培养24h后的发酵液；高HFHS实验组生理盐水灌胃；灌胃干预8周后，各组处死5只大鼠；各实验组保留的5只大鼠，在无菌水中添加3%的DSS（葡聚糖硫酸钠盐）自由喂食7d；NC对照组保留的10只大鼠，随机选择其中5只喂食DSS（葡聚糖硫酸钠盐） 7d，剩余5只继续保持正常饮食饮水7d；将全部剩余大鼠处死。
实验过程中记录大鼠的体重、粪便硬度变化和血便等实验指标。
大鼠处死后收集血液，收集肝脏、肾脏和结肠组织，以进行生理指标和H&E染色组织病理学检测分析。
血液收集后立即离心（4℃、4000r/min，离心15min）分离血清，-80℃冰箱中保存。
空腹血糖检测：灌胃干预8周时，处死大鼠前，检测大鼠空腹血糖；晚上8:00各组大鼠更换垫料并开始禁食，自由饮水；次日早上8:00通过剪尾取血用血糖仪检测空腹血糖，并记录。
口服葡萄糖耐量测定：灌胃干预8周后，在鼠禁食12h，口服葡萄糖（2g/kg体重）。在葡萄糖负荷后0min、15min、30min、60min、90min和120min从大鼠尾部采集血样，并使用血糖仪测量血糖水平。计算随时间变化的曲线下面积(area under curve, AUC)。
血清生化指标测定：采用ELASA试剂盒测定血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯(triglyceride,TG)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)，丙二醛（MDA），谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量并DAI分析。
DAI分析标准如表1所示。
表1
不同碳源发酵培养罗伊式乳杆菌WX-94后生元发酵液对DSS（葡聚糖硫酸钠盐）诱导结肠炎症的缓解结果统计如表2所示。
表2
各实验组和对照组大鼠的体重、肝脏重量、肾脏重量、空腹血糖及糖耐受的结果统计如图26-31所示；
各实验组和对照组大鼠血清中GSH-Px、MDA、TC、TG、ALT、AST的含量结果统计如图32-37所示；
各实验组和对照组大鼠肝脏切片进行H&E染色后的观测结果如图38所示；
各实验组和对照组大鼠结肠组织切片进行H&E染色后的观测结果如图39所示。
试验研究表明：
由图26-31可见，黄精多糖提取物与罗伊氏乳杆菌WX-94发酵培养的后生元复合发酵液可预防高脂高糖引起的体重、肝重和肾脏重量，可抑制空腹血糖升高，提升血糖耐受能力；
由图32-37可见，黄精多糖提取物与罗伊氏乳杆菌WX-94发酵培养的后生元复合发酵液还可以降低血糖中的中TC、TG、MDA、AST和ALT含量，提升GSH-Px含量，具有降血糖作用；
由图38和39可见，黄精多糖提取物与罗伊氏乳杆菌WX-94发酵培养的后生元复合发酵液可降低高脂高糖喂养大鼠肝脏细胞炎症浸润，可抑制高脂高糖对大鼠结肠组织的破坏。
分析发现，黄精多糖提取物与罗伊氏乳杆菌WX-94发酵培养的后生元复合发酵液，与NC和HFHS相比，灌胃干预期间PK_Postbiotics的添加有效预防DSS（葡聚糖硫酸钠盐）引起的结肠缩短和体重减轻，DAI评分较低；DSS（葡聚糖硫酸钠盐）摄入显著改变肠道结构和肠屏障，具体表现为粘膜层破坏，肠杯状细胞耗竭和炎性细胞浸润，其中HFHS实验组喂养的大鼠结肠损伤更为严重，HFHS干预期间灌胃PK_Postbiotics可以有效缓解后期DSS（葡聚糖硫酸钠盐）引起的结肠杯状细胞耗竭和炎性细胞浸润，且PK_Postbiotics组的改善效果优于PK实验组和MRS_ Postbiotics实验组；黄精多糖提取物与罗伊氏乳杆菌WX-94发酵培养的后生元复合发酵液改善糖脂代谢紊乱功能具有显著作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种后生元复合发酵液在制备改善高糖高脂诱导的脂代谢紊乱和代谢器官损伤药物中的应用，其特征在于，所述后生元复合发酵液由黄精多糖提取物和罗伊式乳杆菌WX-94制成，其中，
黄精多糖提取物为发酵基质，罗伊式乳杆菌为发酵菌种，经复合发酵得到所述后生元复合发酵液；
所述药物为降低血糖中的TC含量的药物；
和/或，所述药物为降低肝脏细胞炎症浸润的药物；
和/或，所述药物为缓解结肠杯状细胞耗竭和炎性细胞浸润的药物；
黄精多糖提取物对罗伊式乳杆菌具有增殖作用；
黄精多糖提取物与罗伊式乳杆菌发酵培养的后生元复合发酵液具有抗氧化活性；
黄精多糖对罗伊式乳杆菌后生元复合发酵液的代谢物组成有影响，使得后生元复合发酵制剂具有抗氧化性、抗炎、抗肿瘤和提高免疫力的作用；
所述罗伊式乳杆菌WX-94的保藏编号为CGMCCNo.15062；
所述发酵基质还包括培养基，所述黄精多糖提取物在所述发酵基质中的质量百分数为2～8%；
所述黄精多糖提取物由如下步骤制备而成：
生黄精除去杂质，洗净，切丁；
称取生黄精，加入7倍体积的水浸泡30min，然后一次煎煮1h，过滤；
向过滤的滤渣中加入7倍体积的水，二次煎煮1h；
合并滤液，将滤液浓缩，加入3倍体积的乙醇进行醇沉2次，收集沉淀物；
将沉淀物用适量蒸馏水溶解完全，加入Sevage试剂震荡3min，然后在3000r/min下离心15min，静置分三层，分液保留最上层的多糖浊液；
向多糖浊液中再加入Sevage试剂洗涤、分液，循环2次，即制得黄精多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基包括如下原料：蛋白胨8～12g/L、牛肉浸粉6～10g/L、酵母浸粉2～6g/L、磷酸氢二钾1～3g/L、柠檬酸氢二钾1～3g/L、乙酸钠3～7g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L、硫酸锰0.02～0.06g/L和吐温750～850g/L。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵基质的pH值5.5～6.0。
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