CN111281897B - 用于心血管的复合菌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于心血管的复合菌剂，其包括：植物乳杆菌CGMCC №.3698以及其他必要的辅剂，还可以包括红曲米粉，纳豆冻干粉，壳聚糖。所述复合菌剂还可以包括其他益生菌，如干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌。作为进一步优选，还包括皱盖假芝素A。所述复合菌剂可以做成口服液，冻干粉，胶囊等，优选作为口服液。

Description

用于心血管的复合菌剂
技术领域
本发明涉及一种用于心血管的复合菌剂，属于微生物技术领域。
背景技术
心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。
血脂异常可导致多种疾病的发生，其中最严重的就是心血管疾病。心血管类疾病是我国死亡率最高的疾病，占居民疾病死亡构成的40％以上。血脂异常如何导致心血管疾病的发生？血脂异常会导致血管提早出现老化，而血管老化是导致心血管疾病的重要因素。众所周知，正常动脉包括外膜、中膜和内膜三层结构。当体内血脂异常，会造成代谢紊乱，导致脂质在血管内皮沉积，形成斑块。随着斑块加厚，动脉管径会变窄甚至被血栓堵塞，增加心血管疾病风险。
血脂检测通常包括血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)四个项目。TG即甘油三酯，是存在于血液中的脂肪。如果体内的甘油三酯过多，其会在人体不同部位堆积，造成不同的后果。堆积在皮下，人就会发胖；堆积在肝脏，就会造成脂肪肝；堆积在血管壁，就会造成动脉硬化。TC即血清总胆固醇，是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇的总和。过多的胆固醇会在血管壁沉积，使血管变窄，失去弹性，变硬变脆。沉积的胆固醇会渐渐将血管完全堵死，诱发心绞痛、冠心病、卒中等。
本发明旨在提供一种用于心血管的复合菌剂，其能够有效减降低血脂，维护心血管健康。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于心血管的复合菌剂，其能够有效减降低血脂，维护心血管健康。
中国专利201010281481X公开了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC№.3698。该专利披露了所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3可以产生对多种病原菌和腐败菌具有抑制作用的细菌素，该细菌素对蛋白酶敏感，并且该细菌素具有很好的酸稳定性和热稳定性，在121℃高温下处理30分钟不影响其抑菌活性，抑菌谱广等优点，可以应用为具有广阔应用前景的天然食品防腐剂和饲料添加剂。本公司研发团队发现该株植物乳杆菌具有较好的降脂作用，可以应用于心血管疾病的保健。
皱盖假芝Amauroderma rude(Berk.)Pat.属于担子菌灵芝科 (Ganodermataceae)假芝属Amauroderma Murr.真菌，因其子实体受损时会产生血色分泌物，故又名血芝。皱盖假芝主要分布于热带和亚热带地区，在我国分布于云南、贵州、福建、广西、广东等地，是一味珍稀的食用菌，具有优良的生物活性和药用价值。现有技术披露过，皱盖假芝在抗肿瘤活性方面明显优于其他药用真菌。现有技术“皱盖假芝子实体中1个新的降木脂素类化合物”(中草药Chinese Traditional and Herbal Drugs第50卷第2期2019 年1月)披露过从皱盖假芝子实体中分离得到的新化合物皱盖假芝素A。其为黄色油状物，确定分子式为C19H18O7，其结构如下所示：
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本公司研发团队发现，该皱盖假芝素A单独使用并不具有明显的降脂效果，但是如果和植物乳杆菌CGMCC №.3698联合使用，则可以大大促进植物乳杆菌 CGMCC №.3698的降脂效果，并且如果是在发酵制备菌液的培养基中加入皱盖假芝素A，则促进效果更为明显。
本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。
一种用于心血管的复合菌剂，其包括：
植物乳杆菌CGMCC №.3698以及其他必要的辅剂。
所述复合菌剂还可以包括其他益生菌，如干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌。
作为进一步优选，还包括皱盖假芝素A。
作为进一步优选，所述复合菌剂还包括红曲米粉。
红曲米是以籼稻、粳稻、糯米等稻米为原料，用红曲霉菌发酵而成，为棕红色或紫红色米粒。
作为进一步优选，所述复合菌剂还包括纳豆冻干粉。
纳豆冻干粉是固体发酵的纳豆，经过零下40摄氏度冻结后，经真空抽湿升华干燥、粉碎，成为纳豆冻干粉。真空冷冻干燥价格昂贵，但是，最大限度地保留了纳豆中的生理活性物质，物有所值。
作为进一步优选，所述复合菌剂还包括壳聚糖。
壳聚糖是一种膳食纤维，具有降低血清胆固醇、调节肠道菌群、降低血压等功效。人体摄入壳聚糖后，通过粪便分析表明它几乎不被消化吸收，因此属于膳食纤维的一种。研究表明，壳聚糖具有膳食纤维的部分特性，诸如保水性、膨胀性、吸附性和难消化吸收性等，能够促进消化道蠕Chemicalbook动，吸附有毒物质，增加排便容积，降低腹压及肠内压，改善便秘，预防大肠癌的发生等。壳聚糖与胃粘蛋白的理化作用相似，具有抑制胃酸、抗胃溃疡、消炎等作用，它是一种抗胃酸的多糖类，遇水后胀发为粘浆状并具有黏附力，在胃中可形成保护膜，以减少胃酸对溃疡面刺激。
所述复合菌剂可以做成口服液，冻干粉，胶囊等，优选作为口服液。
所述复合菌剂还可以用于发酵食品做成保健食品。
所述食品优选为乳制品。
本发明的研究方法：
选择模型小鼠进行降脂效果测试，用高脂饮食造模。
所述高脂饲料配方：66.5％基础饲料，10％猪油，20％蔗糖，2.5％胆固醇，1％胆酸盐。
本发明的优点：
(1)植物乳杆菌是安全性很高的食品用益生菌，而且本身就具有很好的保健效果，植物乳杆菌CGMCC №.3698更是具有已知的抗致病细菌的效果，对肠道健康很有帮助。皱盖假芝素A分离自珍贵传统药材，安全性亦非常有保障，且有着潜在的提高免疫力，抗肿瘤的效果。
(2)本发明的复合菌剂还可以包括红曲米粉，纳豆冻干粉，壳聚糖。红曲米是以籼稻、粳稻、糯米等稻米为原料，用红曲霉菌发酵而成，为棕红色或紫红色米粒。复合菌剂还包括纳豆冻干粉。纳豆冻干粉是固体发酵的纳豆，经过零下40摄氏度冻结后，经真空抽湿升华干燥、粉碎，成为纳豆冻干粉。壳聚糖是一种膳食纤维，具有降低血清胆固醇、调节肠道菌群、降低血压等功效。人体摄入壳聚糖后，通过粪便分析表明它几乎不被消化吸收，因此属于膳食纤维的一种。研究表明，壳聚糖具有膳食纤维的部分特性，诸如保水性、膨胀性、吸附性和难消化吸收性等，能够促进消化道蠕Chemicalbook动，吸附有毒物质，增加排便容积，降低腹压及肠内压，改善便秘，预防大肠癌的发生等。壳聚糖与胃粘蛋白的理化作用相似，具有抑制胃酸、抗胃溃疡、消炎等作用，它是一种抗胃酸的多糖类，遇水后胀发为粘浆状并具有黏附力，在胃中可形成保护膜，以减少胃酸对溃疡面刺激。
(3)本发明的复合菌剂还有显著的降脂效果，对于心血管的健康具有很大的改善作用，很有应用前景。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明的具体实施例如以下说明。
实施例1血清中总胆固醇含量测定
1、活化菌种：
植物乳杆菌CGMCC №.3698：取一环植物乳杆菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，厌氧培养成0.5*108cfu/ml植物乳杆菌CGMCC №.3698种子液，使用乳酸调节pH值6.0。
2、配置液体
皱盖假芝素A溶液配制：使用水、吐温80(质量分数1％)和皱盖假芝素A 配制成皱盖假芝素A浓度为10mg/kg溶液。
3.发酵液配制
a.植物乳杆菌CGMCC №.3698发酵液：植物乳杆菌CGMCC №.3698种子液至MRS液体培养基中活化，厌氧培养24h，使用培养基调节成1*107cfu/ml，乳酸调节pH值6.0。
b.混合发酵液(添加皱盖假芝素A)：植物乳杆菌CGMCC №.3698种子液至 MRS液体培养基中活化，同时添加质量分数5％的皱盖假芝素A溶液混合培养，厌氧培养24h，使用培养基调节成1*107cfu/ml，乳酸调节pH值6.0。
4.大鼠模型制备
选择60只SD大鼠，雌性，105-115g左右。实验室常规喂养1周后准备试验。
分为两种饲养方式，普通基础饲料饲养和高脂饲料饲养。高脂饲料配方： 66.5％基础饲料，10％猪油，20％蔗糖，2.5％胆固醇，1％胆酸盐。
将SD大鼠分为6组，每组10只大鼠，各组大鼠之间无统计学差异。分成5 组。分别为空白对照组、阳性对照组、植物乳杆菌处理组、皱盖假芝素A处理组、混合发酵处理组、植物乳杆菌+皱盖假芝素A处理组。具体饲养和给药方式如下：
空白对照组：基础饲养，每只大鼠PBS(2ml/d)灌胃；
阳性对照组：高脂饲养，每只大鼠PBS(2ml/d)灌胃；
植物乳杆菌处理组：高脂饲养，每只大鼠植物乳杆菌CGMCC №.3698 (2ml/d)发酵液灌胃；
皱盖假芝素A处理组：高脂饲养，每只大鼠皱盖假芝素A溶液(0.2ml/d) 灌胃；
植物乳杆菌+皱盖假芝素A处理组：高脂饲养，每只大鼠植物乳杆菌CGMCC №.3698发酵液(2ml/d)+皱盖假芝素A溶液(0.2ml/d)灌胃；
混合发酵处理组：高脂饲养，每只大鼠2ml/d混合发酵液灌胃。
灌胃试验前采集眼眶静脉血1次(-80℃保藏)；灌胃试验连续进行4周，持续到最后一天时，大鼠被禁食12h，对眼眶静脉取血第2次。采血后EP管静置2h离心取上层血清完成下一步试验。
5.血清中总胆固醇含量的测定
测定方法：配置空白管(蒸馏水10ul、工作液1000ul)、校准管(5.17mmol/L 校准品10ul、工作液1000ul)、样本管溶液(样本10ul、工作液1000ul)。混匀，37℃孵育10min，波长510nm，光径0.5cm，蒸馏水调零，测定各管吸光度值。
计算公式：胆固醇含量(nmol/L)＝(样本OD值-空白OD值)/(校准OD 值-空白OD值)*校准品浓度
按照计算公式将不同组别大鼠样本进行总胆固醇含量的测定。
6.统计学处理
使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。
7.试验结果如表1所示。
表1各组别大鼠测定的总胆固醇含量
Figure BDA0002397293330000071
Figure BDA0002397293330000081
注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和阳性对照组比较)；
可见，单纯灌胃给与植物乳杆菌CGMCC №.3698单独对高脂饮食后控制总胆固醇有轻微降低，但是无统计学意义；单纯皱盖假芝素A灌胃未见明显效果；植物乳杆菌CGMCC№.3698和皱盖假芝素A同时灌胃降低总胆固醇效果好，有统计学意义；当皱盖假芝素A发酵阶段对植物乳杆菌进行发酵培养，其混合发酵培养液灌胃效果最好，有统计学意义，和阳性对比组比较P<0.05。
实施例2甘油三酯测定
1.血清中甘油三酯含量的测定
测定方法：配置空白管(蒸馏水10ul、工作液1000ul)、校准管(2.26mmol/L 校准品10ul、工作液1000ul)、样本管溶液(样本10ul、工作液1000ul)。混匀，37℃孵育10min，波长510nm，光径0.5cm，蒸馏水调零，测定各管吸光度值。
计算公式：甘油三酯含量(nmol/L)＝(样本OD值-空白OD值)/(校准OD 值-空白OD值)*校准品浓度
按照计算公式将不同组别大鼠样本进行甘油三酯含量的测定。
2.使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差, 采用组间t检验。
3.试验结果如表2所示。
表2各组别大鼠测定的甘油三酯含量
Figure BDA0002397293330000082
Figure BDA0002397293330000091
注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和阳性对照组比较)；
可见，和阳性对照组进行比较，单纯皱盖假芝素A灌胃未见明显效果，无统计学意义；植物乳杆菌处理组能轻微降低甘油三酯，有统计学意义(P<0.05)；植物乳杆菌CGMCC№.3698和皱盖假芝素A同时灌胃降低甘油三酯更好，有统计学意义(P<0.05)；当皱盖假芝素A发酵阶段对植物乳杆菌进行发酵培养，其混合发酵培养液灌胃效果对降低甘油三酯最好(P<0.05)。
综上所述，本公司研发团队发现，该皱盖假芝素A单独使用并不具有明显的降脂效果，但是如果和植物乳杆菌CGMCC №.3698联合使用，则可以大大促进植物乳杆菌CGMCC№.3698的降脂效果，并且如果是在发酵制备菌液的培养基中加入皱盖假芝素A，则促进效果更为明显。
实施例3
稳定性测试：在植物乳杆菌+皱盖假芝素A处理组中加入红曲米粉，纳豆冻干粉，壳聚糖后，经测试后降脂效果没有减少，并且在均质乳化后可以稳定常温存放12个月。
术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.一种用于心血管的复合菌剂，其包括：
植物乳杆菌CGMCC №.3698，皱盖假芝素A；
其中，所述皱盖假芝素A分子式为C19H18O7；
所述复合菌剂配制成混合发酵液：将植物乳杆菌CGMCC №.3698种子液至 MRS 液体培养基中活化，同时添加质量分数5%的皱盖假芝素A溶液混合培养，厌氧培养24 h，使用培养基调节成1*107cfu/ml，乳酸调节pH值6.0；
所述皱盖假芝素A溶液的配制：使用水、质量分数1%的吐温80和皱盖假芝素A配制成皱盖假芝素A浓度为10mg/kg溶液。
2.权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于：
还包括红曲米粉，纳豆冻干粉，壳聚糖。
3.权利要求2所述的复合菌剂，其特征在于：
所述复合菌剂还包括其他益生菌。
4.权利要求3所述的复合菌剂，其特征在于：
还包括益生元。
5.权利要求1-4任一项所述的复合菌剂，其特征在于：
所述复合菌剂做成口服液，或冻干粉，或胶囊。
6.权利要求5所述的复合菌剂，其特征在于：
所述复合菌剂做成口服液。
7.权利要求1-6任一项所述的复合菌剂用于发酵食品做成保健食品的应用。
8.生产权利要求1-7任一项所述的复合菌剂的方法。
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