CN117164711A - 一种抗神经纤维丝轻链蛋白的抗体 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗神经纤维丝轻链蛋白的抗体，本发明公开的抗体能够结合NF蛋白的神经丝轻链蛋白，本发明公开的抗体的重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3区如SEQ ID NO:1、2、3所示，轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3区如SEQ ID NO:10、11、12所示，本发明还公开了编码抗体的多核苷酸及包含多核苷酸的载体，本发明还公开了能够制备本发明抗体的宿主细胞以及根据本发明的抗体衍生出的抗体衍生物或其他产品。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种抗神经纤维丝轻链蛋白的抗体。
背景技术
神经丝蛋白(Neurofilaments，NF)是构成神经元轴突中间纤维的特异性分子蛋白，是神经元细胞骨架的重要成分，主要定位在成熟神经元的胞体和突起中，负责轴浆运输，维持神经元正常形态及保持神经纤维的弹性，防止断裂。NF包括神经丝三联蛋白、α-内切蛋白、Ⅲ型外周蛋白，研究发现α-内切蛋白的表达早于神经丝三联蛋白，且在出生后保持较低的水平，而神经丝三联蛋白表达则是升高的，在成人周围及中枢神经系统中神经丝三联蛋白与Ⅲ型外周蛋白共表达。
神经丝三联蛋白由神经丝轻链(Neuroflament light，NFL)、神经丝中链(neurofilament middle，NFM)、神经丝重链(neurofilament heavy，NFH)构成，NFL被认为是神经丝三联蛋白中最重要的一部分，因为NFL是唯一可以自我组装成功能性纤维的神经丝蛋白，而神经丝中链和重链蛋白则不能，而且NFL的异常表达及人类NFL基因的突变均会引起多种疾病的发生。
发明内容
现有技术中存在许多待改进的技术问题，以下提供解决某些问题的技术方案：
本发明的第一方面提供了抗神经纤维丝轻链蛋白的单克隆抗体或其功能部分，单克隆抗体或其功能部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如下CDR1、CDR2和CDR3序列所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下CDR1、CDR2和CDR3序列所示的氨基酸序列：
重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；
轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；
轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。
进一步，所述单克隆抗体或其功能部分还包括重链可变区框架区和轻链可变区框架区，所述重链可变区框架区包括如SEQ ID NO:4、5、6、7所示的氨基酸序列，所述轻链可变区框架区包括如SEQ ID NO:13、14、15、16所示的氨基酸序列。
进一步，所述重链可变区框架区中SEQ ID NO:4、5、6、7所示的氨基酸序列分别对应重链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4，所述轻链可变区框架区中SEQ ID NO：13、14、15、16所示的氨基酸序列分别对应轻链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4。
进一步，单克隆抗体或其功能部分包括SEQ ID NO:8的重链可变区和SEQ ID NO:17的轻链可变区。
进一步，所述单克隆抗体或其功能部分还包括信号肽，所述信号肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9、18所示。
进一步，所述SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列对应重链可变区的信号肽，所述SEQID NO:18所示的氨基酸序列对应轻链可变区的信号肽。
进一步，所述单克隆抗体或其功能部分是灵长类源化抗体。
在某些具体实施方案中，所述单克隆抗体是人源化抗体。
在某些具体的实施方案中，所述抗体可选自异二聚抗体、半二聚抗体、四价抗体、双特异性抗体和单链抗体。
在某些实施例中，本发明提供的抗体和其功能片段在CDR序列中的一或多个中包含一或多个氨基酸残基取代。在某些实施例中，亲和力变体在CDR序列中包含总共不超过20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代。
在某些实施例中，本发明提供的抗体和其功能片段在FR序列中的一或多个中包含一或多个氨基酸残基取代。在某些实施例中，亲和力变体在FR序列中包含总共不超过20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代。
本发明所使用的术语“抗体”包括是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的抗原结合部分，即，含有特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“与…免疫反应”或“免疫特异性结合”意指抗体与所需抗原的一个或多个抗原决定簇反应和不与其他多肽反应或以低得多的亲和力结合(Kd>10-6)。抗体包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、全人抗体、结构域抗体、单链、Fab和F(ab')2片段、scFv和Fab表达文库。
本发明的第二方面提供了分离的多核苷酸，所述多核苷酸包括编码前面所述单克隆抗体或其功能部分的重链可变区的重链编码序列，和编码前面所述单克隆抗体或其功能部分的轻链可变区的轻链编码序列。
进一步，所述多核苷酸包括如下核苷酸序列：
SEQ ID NO:19、20、21所示的核苷酸序列，分别用于编码前面所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3；
SEQ ID NO:28、29、30所示的核苷酸序列，分别用于编码前面所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3。
进一步，所述多核苷酸还包括如下核苷酸序列：
SEQ ID NO:22、23、24、25所示的核苷酸序列，用于编码前面所述重链可变区框架区；
SEQ ID NO:31、32、33、34所示的核苷酸序列，用于编码前面所述轻链可变区框架区。
进一步，所述重链可变区框架区中SEQ ID NO:22、23、24、25所示的核苷酸序列分别对应重链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4；
所述轻链可变区框架区中SEQ ID NO：31、32、33、34所示的核苷酸序列分别对应轻链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4。
进一步，所述多核苷酸编码前面所述单克隆抗体或其功能部分的核苷酸序列如SEQ ID NO:26、35所示。
进一步，所述多核苷酸还包括编码信号肽的核苷酸序列，所述编码信号肽的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:27、36所示。
进一步，所述SEQ ID NO:27所示的核苷酸序列对应编码重链可变区的信号肽的核苷酸序列，所述SEQ ID NO:36所示的核苷酸序列对应编码轻链可变区的信号肽的核苷酸序列。
本发明的第三方面提供了载体，所述载体包括前面所述的多核苷酸。
进一步，所述载体包括线性多核苷酸、质粒或病毒载体。
进一步，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体。
本文所用的术语“载体”指用于将核苷酸编码信息转移到宿主细胞内的任一种分子(例如，核酸、质粒或病毒等)。术语“表达载体”或“表达盒”指适于在宿主细胞内表达目的基因(待表达核苷酸序列)的载体，通常包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分。
本发明的第四方面提供了宿主细胞，所述宿主细胞包括前面所述的载体、或前面所述的多核苷酸。
进一步，所述宿主细胞包括原核细胞、真核细胞。
进一步，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、飞翼动物细胞、植物细胞、酵母细胞。
本文所用的术语“宿主细胞”指已经或者能够用核酸序列转化并从而表达所选的目的基因的细胞。该术语包括亲本细胞的后代，无论该后代与原来的亲本细胞在形态或基因组成上是否相同，只要后代存在所选目的基因即可。常用的宿主细胞包括细菌、酵母、哺乳动物细胞等。
本发明的第五方面提供了抗体衍生物，所述抗体衍生物包括前面所述的单克隆抗体或其功能部分经过修饰得到的复合物。
进一步，所述修饰的方式包括使用可检测标记物标记修饰、治疗剂缀合修饰、显像剂缀合修饰。
在本发明的一些实施方案中，本发明的单克隆抗体是经过功能部分修饰(通过用可检测标记物标记)的抗体，所述可检测标记例如放射性同位素、酶、染料或生物素、或其他亲和剂。
进一步，所述可检测标记物包括荧光色素、亲和素、放射性同位素、酶标记物、染料、生物素。
进一步，所述治疗剂包括放射性同位素或放射性核素、毒素部分、类毒素激素制剂、蛋白酶体抑制剂、化疗剂、细胞因子。
在本发明的一些实施方案中，本发明的单克隆抗体是经过功能部分修饰(与治疗剂缀合)的抗体，所述治疗剂例如放射性同位素或放射性核素(例如111In或90Y)、毒素部分(例如，破伤风类毒素或蓖麻蛋白)、类毒素或化学治疗剂。
在本发明的一些实施方案中，本发明的单克隆抗体是通过显像剂缀合修饰的抗体。显像剂可包括例如用于容易分离或检测的标记部分(例如，生物素、荧光部分、放射性部分、组氨酸或myc标签或其他肽标签)。
在某些具体的实施方案中，所述单克隆抗体的修饰包括血清毒素或细胞毒性剂，包括对于细胞有害(例如杀死)的任何制剂。例子包括combrestatins、dolastatins、埃博霉素、星形孢菌素、类美坦素、spongistatins、根霉素、软海绵素、杆孢菌素、哈米特林、泰素、细胞松弛素B、溴化乙啶、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。
在缀合中有用的功能部分包括但不限于，抗叶酸剂(例如氨基蝶呤和氨甲蝶呤)、抗代谢药(例如氨甲蝶呤、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺)、烷化剂(例如氮芥、噻替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀、罗莫司汀、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C)、蒽环(例如柔红霉素(之前是道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素(之前是放线菌素)、博来霉素、光辉霉素、氨茴霉素(AMC)、卡奇霉素、多卡米星、CC-1065、enedieyenes、新制癌菌素)、和抗有丝分裂药(例如长春新碱、长春碱)。
其他功能部分可包括螯合放射性核素，或药物例如但不限于烷基磷酸胆碱、拓扑异构酶I抑制剂、紫杉烷、舒拉明。
本发明的第六方面提供了产品，所述产品包括前面所述的单克隆抗体或其功能部分、前面所述的多核苷酸、前面所述的载体、前面所述的宿主细胞、或前面所述的抗体衍生物。
进一步，所述产品包括试剂盒、层析试纸条、芯片。
本发明的第七方面提供了制备如前面所述的抗神经纤维丝轻链蛋白的单克隆抗体或其功能部分的方法，其包括培养前面所述的宿主细胞以及产生单克隆抗体或其功能部分的步骤。
本发明的第八方面提供了前面所述的单克隆抗体或其功能部分、前面所述的多核苷酸、前面所述的载体、前面所述的宿主细胞、或前面所述的抗体衍生物在制备诊断、预防或治疗神经损伤类疾病的药物组合物中的应用。
进一步，所述神经损伤类疾病包括阿尔兹海默症、Pick病、中风、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、外伤性中枢神经系统疾病、脊髓损伤疾病、多发性硬化、创伤性脑损伤、急性缺血性卒中。
本发明的第九方面提供了药物组合物，所述药物组合物包括有效量的前面所述的单克隆抗体或其功能部分，和药学上可接受的载体。
在某些实施方案中，抗NFL抗体或含所述抗体的药物组合物的“有效量”是有效作用在施用了所述抗体或药物组合物的受试者中的任何量。确定“有效量”的方法是本领域技术人员众所周知的，并且依赖包括但不限于下述的因素：涉及的受试者类型、受试者的大小和年龄以及递送的具体治疗剂的药代动力学性质。
本文所使用的术语“有效量的”指可对人和/或动物产生功能或活性且可被人和/或动物所接受的量。“药学上可接受的载体”指用于给药的载体，包括各种赋形剂、稀释剂和缓冲剂等，这些物质适合于人和/或动物给药而无过度的不良副反应，同时适合于维持位于其中的药物或活性剂的活力。
附图说明
图1是western检测抗体培养上清对重组抗原识别能力图；
图2是14G11F12抗体和18A12C11检测抗体联合检测与抗原结合的特异性图。
具体实施方式
实施例1抗NFL蛋白抗体的制备
1、实验方法
1)动物免疫：选取BALB/c小鼠，常规方法免疫。经三次免疫后，用间接ELISA方法测试抗血清效价，选取效价高的小鼠进行后续实验，使用western测试抗血清对重组抗原的识别。
2)脾细胞制备：引颈处死小鼠，无菌条件下取出脾脏，置于已消毒的90～100目不锈钢网中。用注射器向脾脏内注入3ml无血清培养液，反复抽吸数次获取细胞，再制成细胞悬液。把细胞悬液注入50ml离心管中，加10～20ml培养液，轻轻吹打数次，室温中静置5分钟。离心(800～1000转/分)计数，备用。
3)细胞融合：将小鼠骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞按1：5比例混合，离心弃去上清，并以消毒滤纸吸净多余上清。将1ml 40％的PEG溶液60秒内逐滴加入到细胞团中，同时并不断轻微转动离心管。在不断转动的离心管中，60秒内逐滴加入1ml无血清培养液。而后于5分钟内缓慢加完20ml无血清培养基。离心(800转/分，8分钟)，去上清，用完全培养液10ml悬浮，轻轻混匀。将细胞悬液加入96孔板内，每孔50微升。37℃CO2培养箱中培养24小时后更换成HAT选择性培养液。
4)融合后细胞培养：以NFL重组蛋白和HIS标签蛋白作为抗原包被酶标板，包被抗原浓度为1μg/ml，100μl/孔。包被缓冲液为PBS(PH＝7.4)。4℃放置过夜。次日PBS洗涤3次，每次5分钟。以1％ BSA封闭，每孔加入200μl。37℃恒温箱孵育2小时。弃去BSA，加入含有单克隆抗体的细胞培养上清，每孔100μl。以小鼠的阳性抗血清作为阳性对照，以空白培养上清作为阴性对照。37℃恒温箱孵育2小时。弃去一抗，洗涤液洗5次，加Peroxidase-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG，37℃恒温箱孵育1小时。加入底物显色后，以酶标仪测定吸光值。
将检测的阳性细胞进行再一轮的克隆化培养，经验证后确定阳性细胞株，增殖后进行冻存和体外培养。
2、实验结果
抗体对NFL重组蛋白的吸光值>1.7，远远大于阴性对照值0.067，对HIS标签蛋白的吸光值与阴性对照值相当，说明抗体对NFL重组蛋白抗原有很好的亲和力，结果如表1所示。B列数据是指对NFL抗原上标签的反应性，对标签蛋白不反应，说明对NFL蛋白反应的特异性。
表1单克隆抗体细胞培养上清识别重组蛋白
实施例2单克隆抗体的纯化及测序
1、实验方法
首先将产生单克隆抗体的培养液，应用半饱和、饱和硫酸铵进行沉淀，进行初步浓缩和纯化；再用亲和层析法进一步纯化。
1)用饱和硫酸铵溶液进行盐析。临用前取所需的量，用2mol/L NaOH调PH至7.8；将产生抗体的培养液移入烧杯中，边搅拌边滴加饱和硫酸铵溶液5ml，继续缓慢搅拌30分钟；10000rpm/min离心15分钟；弃去上清液，沉淀物用1/3饱和度硫酸铵悬浮，搅拌作用30分钟，同法离心；重复前一步1-2次；沉淀物溶于PBS(0.01mol/L PH7.2)缓冲液中。
用透析法对盐析样本进行脱盐。将透析袋于2％ NaHCO3，1mmol/L EDTA溶液中煮10分钟，用蒸馏水清洗透析袋内外表面，再用蒸馏水煮透析袋10分钟，冷至室温即可使用。将盐析样品装入透析袋中，对50-100倍体积的PBS缓冲液透析(4℃)12-24小时，其间更换5次透析液，用萘氏试剂(碘化汞11.5g，碘化钾8g，加蒸馏水50ml，待溶解后，再加20％ NaOH50ml)检测，直至透析外液无黄色物形成为止。
2)亲和层析法进行抗体纯化：将初步纯化的抗体溶液经过protein A/G亲和层析柱过滤，经过结合、洗脱、收集，得到高纯度的抗体。利用分光光度计测定抗体浓度。将纯化的抗体分装后在-80℃保存。
3)单克隆抗体序列的测定：取对数生长期的杂交瘤细胞，采用Invitrogen公司的Trizol抽提总RNA，逆转录生成cDNA。然后利用特异性引物PCR分别扩增其重、轻链可变区基因。PCR产物经电泳纯化后，通过TA克隆插入载体，测序、进行序列分析。
2、实验结果
14G11F12抗体序列检测结果如表2所示。
表2 14G11F12抗体的序列
实施例3 14G11F12抗体的功能鉴定
1、实验方法
1)以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原，以小鼠杂交瘤细胞14G11F12的单克隆细胞培养上清进行检测，使用间接ELISA方法检测抗体识别抗原的能力。
2)以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原，以小鼠杂交瘤细胞14G11F12的单克隆细胞培养上清进行检测，使用western blot检测抗体抗原的结合能力。
3)应用双抗体夹心ELISA方法，以14G11F12为包被抗体，以18A12C11-biotin抗体为检测抗体，检测抗体对抗原的识别和捕获作用。
以2.5μg/ml的纯化抗体包被酶标板，包被液为PBS(pH＝7.4)，4℃放置过夜。洗涤液洗涤3次，加入重组蛋白作为抗原，抗原浓度分别为0、1、10、100ng/ml。37℃孵育1小时。洗涤3次，加入生物素标记的检测抗体，浓度为1μg/ml。37℃孵育1小时。洗涤3次，加入HRP标记的链酶亲和素，与检测抗体结合，浓度为1mg/ml，1:10,000稀释，每孔加入100μl。37℃孵育30分钟。加底物显色，酶标仪测定吸光值。
4)将14G11F12抗体与抗体18A12C11-biotin配对组合，检测纯化抗体与抗原结合的特异性，将抗原进行倍比稀释，根据抗原浓度与吸光值进行绘图。
2、实验结果
以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原，以含有单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞培养上清进行检测。在目标位置，出现强阳性条带，说明抗体对临床样本中的抗原有很强的结合力，实验结果如图1所示。
双抗夹心ELISA检测结果如表3所示，抗体14G11F12与抗体18A12C11-biotin配对成功，随着抗体含量的增加，吸光值随之上升。抗原浓度为100ng/ml时，吸光值>2.6，明显高于阴性对照。说明该抗体对抗原有很强的识别和捕获作用。
抗体14G11F12与抗体18A12C11-biotin配对组合，对重组蛋白进行检测。将抗原浓度进行倍比稀释，根据抗原浓度与吸光值进行绘图，结果如图2中显示，随着抗原浓度升高，吸光值也随之升高，说明抗体与抗原结合具有特异性。
表3纯化抗体对Tau抗原的识别
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.抗神经纤维丝轻链蛋白的单克隆抗体或其功能部分，其特征在于，单克隆抗体或其功能部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如下CDR1、CDR2和CDR3序列所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下CDR1、CDR2和CDR3序列所示的氨基酸序列：
重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；
轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；
轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；
优选地，所述单克隆抗体或其功能部分还包括重链可变区框架区和轻链可变区框架区，所述重链可变区框架区包括如SEQ ID NO:4、5、6、7所示的氨基酸序列，所述轻链可变区框架区包括如SEQ ID NO:13、14、15、16所示的氨基酸序列；
优选地，所述重链可变区框架区中SEQ ID NO:4、5、6、7所示的氨基酸序列分别对应重链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4，所述轻链可变区框架区中SEQ ID NO：13、14、15、16所示的氨基酸序列分别对应轻链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其功能部分，其特征在于，单克隆抗体或其功能部分包括SEQ ID NO:8的重链可变区和SEQ ID NO:17的轻链可变区；
优选地，所述单克隆抗体或其功能部分还包括信号肽，所述信号肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9、18所示；
进一步，所述SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列对应重链可变区的信号肽，所述SEQ IDNO:18所示的氨基酸序列对应轻链可变区的信号肽。
3.分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括编码权利要求1或2所述单克隆抗体或其功能部分的重链可变区的重链编码序列，和编码权利要求1或2所述单克隆抗体或其功能部分的轻链可变区的轻链编码序列；
优选地，所述多核苷酸包括如下核苷酸序列：
SEQ ID NO:19、20、21所示的核苷酸序列，分别用于编码权利要求1或2所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3；
SEQ ID NO:28、29、30所示的核苷酸序列，分别用于编码权利要求1或2所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3；
优选地，所述多核苷酸还包括如下核苷酸序列：
SEQ ID NO:22、23、24、25所示的核苷酸序列，用于编码权利要求1或2所述重链可变区框架区；
SEQ ID NO:31、32、33、34所示的核苷酸序列，用于编码权利要求1或2所述轻链可变区框架区；
优选地，所述重链可变区框架区中SEQ ID NO:22、23、24、25所示的核苷酸序列分别对应重链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4；
所述轻链可变区框架区中SEQ ID NO：31、32、33、34所示的核苷酸序列分别对应轻链可变区框架区的FR1、FR2、FR3、FR4；
优选地，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述单克隆抗体或其功能部分的核苷酸序列如SEQ ID NO:26、35所示；
优选地，所述多核苷酸还包括编码信号肽的核苷酸序列，所述编码信号肽的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:27、36所示；
优选地，所述SEQ ID NO:27所示的核苷酸序列对应编码权利要求1或2所述重链可变区的信号肽的核苷酸序列，所述SEQ ID NO:36所示的核苷酸序列对应编码权利要求1或2所述轻链可变区的信号肽的核苷酸序列。
4.载体，其特征在于，所述载体包括权利要求3所述的多核苷酸；
优选地，所述载体包括线性多核苷酸、质粒或病毒载体；
优选地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体。
5.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求4所述的载体、或权利要求3所述的多核苷酸；
优选地，所述宿主细胞包括原核细胞、真核细胞；
优选地，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、飞翼动物细胞、植物细胞、酵母细胞。
6.抗体衍生物，其特征在于，所述抗体衍生物包括权利要求1或2所述的单克隆抗体或其功能部分经过修饰得到的复合物；
优选地，所述修饰的方式包括使用可检测标记物标记修饰修饰、治疗剂缀合修饰、显像剂缀合修饰；
优选地，所述可检测标记物包括荧光色素、亲和素、放射性同位素、酶标记物、染料、生物素；
优选地，所述治疗剂包括放射性同位素或放射性核素、毒素部分、类毒素激素制剂、蛋白酶体抑制剂、化疗剂、细胞因子。
7.产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1或2所述的单克隆抗体或其功能部分、权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的载体、权利要求5所述的宿主细胞、或权利要求6所述的抗体衍生物；
优选地，所述产品包括试剂盒、层析试纸条、芯片。
8.制备如权利要求1或2所述的抗神经纤维丝轻链蛋白的单克隆抗体或其功能部分的方法，其包括培养权利要求5所述的宿主细胞以及产生单克隆抗体或其功能部分的步骤。
9.权利要求1或2所述的单克隆抗体或其功能部分、权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的载体、权利要求5所述的宿主细胞、或权利要求6所述的抗体衍生物在制备诊断、预防或治疗神经损伤类疾病的药物组合物中的应用；
优选地，所述神经损伤类疾病包括阿尔兹海默症、Pick病、中风、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、外伤性中枢神经系统疾病、脊髓损伤疾病、多发性硬化、创伤性脑损伤、急性缺血性卒中。
10.药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括有效量的权利要求1或2所述的单克隆抗体或其功能部分，和药学上可接受的载体。
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Citations (8)
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- 2023-09-28 CN CN202311267366.0A patent/CN117164711B/zh active Active
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