CN117157063A

CN117157063A - 用于治疗癌症和癌前乳头瘤病毒病变的2-s金刚乙胺和2-r金刚乙胺

Info

Publication number: CN117157063A
Application number: CN202280028827.6A
Authority: CN
Inventors: 理查德·兰普金
Original assignee: Toragan Co
Current assignee: Toragan Co
Priority date: 2021-02-16
Filing date: 2022-02-15
Publication date: 2023-12-01
Also published as: AU2022222686A1; KR20230165754A; EP4294379A1; CA3207381A1; WO2022177908A1; JP2024508754A; MX2023009556A

Abstract

本发明涉及纯化的2‑S金刚乙胺或纯化的2‑R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺、或其药学上可接受的盐治疗需要治疗的对象的癌症和癌前病变，包括乳头瘤病毒(HPV)相关的癌症和癌前病变的用途。本发明还涉及包含纯化的2‑S金刚乙胺或纯化的2‑R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺、或其药学上可接受的盐以及一种或多种免疫检查点抑制剂的组合物。

Description

用于治疗癌症和癌前乳头瘤病毒病变的2-S金刚乙胺和2-R金刚乙胺

交叉引用

本申请要求于2021年2月16日提交的美国临时申请序列号63/150,027的权益，所述申请通过引用全文并入本文。

援引并入

本文所公开的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请都通过引用并入。在本文公开的术语和并入的参考文献中的术语之间发生冲突的情况下，以本文中的术语为准。

技术领域

本公开内容涉及治疗或预防癌症，包括由乳头瘤病毒引起的癌症的方法，所述方法包括施用对映体纯的金刚乙胺的2-S对映体或对映体纯的2-R金刚乙胺。

背景技术

生殖器人乳头瘤病毒(HPV)是美国最常见的性传播感染。美国疾病控制和预防中心(Centers for Disease Control and Prevention)(CDC)表示，90％的HPV感染不会引起任何症状，并在两年内自动消退。然而，在一些情况下，HPV感染持续存在，并导致疣或癌前病变。取决于受影响的部位，这些病变会增加宫颈、外阴、阴道、阴茎、肛门、直肠和口咽癌的风险。与宫颈致瘤性相关的HPV类型被分类为15种“高危类型”(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82)和3种“可能高危类型”(HPV 26、53和66)。研究人员还证明了HPV 16和18与乳腺癌的相关性。HPV类型(HPV 6、11、40、42、43、44、54、61、70、72和81)被归类为“低风险类型”，并且已知显示良性低度宫颈病变、生殖器疣和复发性呼吸道乳头瘤病。皮肤HPV类型5、8和92与皮肤癌相关。

金刚乙胺盐酸盐(α-甲基-1-金刚烷-甲胺盐酸盐)是一种用于治疗甲型流感的口服药物，以商品名出售。金刚乙胺通过与病毒M2跨膜通道中的氨基酸结合并阻断质子穿过M2通道来抑制流感活性。/>含有金刚乙胺的外消旋混合物。一项研究发现了R-对映体比S-对映体以更大的亲和力结合M2通道孔的证据。然而，这一发现与早前发现的针对M2的对映体之间没有差异的几个发现有冲突。在后来的研究中证实了针对M2的对映体之间没有区别。金刚乙胺还被认为具有一定的抗帕金森病活性。然而，其用于这一适应症的用途尚未被开发或批准。

具有胃肠道和中枢神经系统不良作用，包括恶心、胃部不适、呕吐、厌食、口干、腹痛、乏力、紧张、疲劳、头昏、头晕、头痛、睡眠困难、注意力难集中、精神混乱和焦虑。焦虑和失眠是最常被引用的停止治疗毒性。

发明内容

下式I显示了金刚乙胺的2-R对映体和金刚乙胺的2-S对映体的化学结构。

本公开内容的一方面包括一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的对映体纯的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，与外消旋金刚乙胺相关的副作用相比，施用2-S金刚乙胺相关的副作用减少。在一些实施方案中，给对象施用2-S金刚乙胺的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是盐酸盐。在一些实施方案中，所述癌症选自黑色素瘤、头颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌和胃癌中的一种或多种。在一些实施方案中，所述癌症是肉瘤、癌瘤、淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，所述癌瘤是鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述鳞状细胞癌瘤是头颈部鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症选自头颈癌、乳腺癌和黑色素瘤。在一些实施方案中，所述癌症是HPV相关癌症。在一些实施方案中，所述HPV相关癌症与HPV的α属相关。在一些实施方案中，来自对象的一种或多种癌细胞表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV E5蛋白。在一些实施方案中，所述HPV E5蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV66和HPV69。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是来自HPV 16的E5。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是来自HPV 18的E5。

本公开内容的另一方面包括一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括：(a)在来自对象的样品中检测表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白的癌细胞；和(b)向对象施用治疗有效量的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述癌症与HPV的α属相关。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种。在一些实施方案中，所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69。在一些实施方案中，所述癌症选自头颈癌、粘膜鳞状细胞癌瘤、皮肤鳞状细胞癌瘤、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和肛门癌。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂选自：卡铂、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、紫杉醇、培美曲塞、洛莫司汀、替莫唑胺、达卡巴嗪及其组合。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂靶向以下中的一种或多种：CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA和IDO。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂选自：伊匹单抗(ipilimumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、西米普利单抗(cemiplimab)及其组合。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对对象进行放射疗法、手术或其组合。在一些实施方案中，所述对象是人。

公开的另一方面包括一种治疗需要治疗的对象癌前HPV病变的方法，包括施用治疗有效量的金刚乙胺。在一些实施方案中，所述HPV病变与HPV的α属相关。在一些实施方案中，所述金刚乙胺是外消旋混合物。在一些实施方案中，所述金刚乙胺是纯化的2-S金刚乙胺。在一些实施方案中，所述金刚乙胺是纯化的2-R金刚乙胺。在一些实施方案中，所述HPV癌前病变是子宫颈、皮肤、尿道、鼻腔、鼻窦、喉、气管支气管粘膜或口腔的病变。在一些实施方案中，所述HPV癌前病变表达选自E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种的一种或多种HPV蛋白。在一些实施方案中，所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69中的一种或多种。在一些实施方案中，所述金刚乙胺通过局部、口服、皮下或肠胃外施用。

本公开内容的另一方面包括一种治疗或预防家禽的禽流感的方法，包括施用治疗有效量的纯2-S金刚乙胺或纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述禽流感是H5N1。在一些实施方案中，与外消旋金刚乙胺或对映体纯的2-R金刚乙胺相关的副作用相比，施用2-S金刚乙胺相关的副作用减少。

本公开内容的另一方面包括一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的对映体纯的2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，与外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺相关的副作用相比，施用纯2-R金刚乙胺相关的副作用减少。在一些实施方案中，给对象施用纯2-R金刚乙胺的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是盐酸盐。在一些实施方案中，所述癌症选自黑色素瘤、头颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌和胃癌中的一种或多种。在一些实施方案中，所述癌症是肉瘤、癌瘤、淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，所述癌瘤是鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述鳞状细胞癌瘤是头颈部鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症选自头颈癌、乳腺癌和黑色素瘤。在一些实施方案中，所述癌症是HPV相关癌症。在一些实施方案中，来自对象的一种或多种癌细胞表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白。在一些实施方案中，所述HPV相关癌症与HPV的α属相关。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV E5蛋白。在一些实施方案中，HPV E5蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV52、HPV 56、HPV58、HPV 66和HPV69。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是来自HPV 16的E5。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是来自HPV 18的E5。

本公开内容的另一方面包括一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括：(a)在来自对象的样品中检测表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白的癌细胞；和(b)向对象施用治疗有效量的纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述HPV蛋白与HPV的α属相关。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种。在一些实施方案中，所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV66和HPV 69。在一些实施方案中，所述癌细胞来自选自头颈癌、粘膜鳞状细胞癌瘤、皮肤鳞状细胞癌瘤、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和肛门癌的癌症。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂选自：卡铂、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、紫杉醇、培美曲塞、洛莫司汀、替莫唑胺、达卡巴嗪及其组合。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂靶向以下中的一种或多种：CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA和IDO。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂选自：伊匹单抗、纳武利尤单抗、派姆单抗、阿替利珠单抗、阿维单抗、度伐鲁单抗、曲美木单抗、西米普利单抗及其组合。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对对象进行放射疗法、手术或其组合。在一些实施方案中，所述对象是人。在一些实施方案中，与外消旋金刚乙胺或纯2-S金刚乙胺相关的副作用相比，施用纯2-R金刚乙胺相关的副作用减少。

本公开内容的另一方面包括一种组合物，包含：纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐；以及一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫检查点抑制剂包括CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA、IDO、或其任何组合。在一些实施方案中，所述纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或外消旋金刚乙胺或其药学上可接受的盐被配制用于注射。

附图说明

图1A-B显示了NR2A的2-S金刚乙胺(TGN-S15)和2-R金刚乙胺(TGN-S16)的峰值电流幅度测量值和稳态电流测量值。图1C-D显示了NR2B的2-S金刚乙胺(TGN-S15)和2-R金刚乙胺(TGN-S16)的峰值电流幅度测量值和稳态电流测量值。

图2显示了具有不同浓度的RS-金刚乙胺(TGN-S11)、S-金刚乙胺(TGN-S15)、R-金刚乙胺(TGN-S16)和美金刚胺(TGN-S13)的CAL-27细胞的增殖。

具体实施方式

本公开内容的一方面是对映体纯的2-S金刚乙胺或对映体纯的2-R金刚乙胺用于治疗癌症的用途。在一些实施方案中，本文公开了2-S金刚乙胺(也称为“S-金刚乙胺”)或对映体纯的2-R金刚乙胺用于治疗乳头瘤病毒(诸如人乳头瘤病毒(HPV))相关的癌症的用途。在一些实施方案中，所述HPV是来自α属的HPV。

本公开内容的另一方面是2-S金刚乙胺或对映体纯的2-R金刚乙胺用于治疗乳头瘤病毒(诸如人乳头瘤病毒)相关的癌前病变的用途。

外消旋金刚乙胺在目前的处方剂量下具有副作用。所述副作用包括中枢神经系统(CNS)副作用、睡眠副作用、胃肠副作用和阿托品副作用，诸如但不限于头昏、头晕、抑郁、精神混乱、注意力难集中、焦虑(诸如紧张)、易怒、幻觉和头痛、失眠、过度疲劳、食欲不振、恶心、呕吐、便秘、口干、视力模糊、排尿困难和吞咽困难。焦虑和失眠是最常被引用的外消旋金刚乙胺的停止治疗毒性。

如本文所公开的，与2-R金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺抑制N-甲基-D-天冬氨酸盐亚型谷氨酸受体(NMDA)亚单位NR2B亚单位的程度较低(参见，下面实施例2中的表2)。

在一些实施方案中，本文公开了2-S金刚乙胺用于治疗癌症、HPV相关癌症、HPV相关的癌前病变和/或甲型流感的用途。由于其与外消旋金刚乙胺相比抑制NR2B的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-R金刚乙胺治疗这些病状相比，2-S金刚乙胺可能具有较少的副作用。由于其比2-S金刚乙胺更大程度地抑制NR2B的能力，因此与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些病状相比，2-R金刚乙胺可能具有较少的副作用。

在一些实施方案中，本文公开了2-R金刚乙胺用于治疗癌症、与HPV相关癌症、HPV相关的癌前病变和/或甲型流感的用途。由于其与外消旋金刚乙胺相比抑制NR2B的能力更强，因此与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些病状相比，2-R金刚乙胺乙胺可能具有较少的副作用。

在一些实施方案中，由于2-S金刚乙胺拮抗NMDA受体和/或抑制NMDA介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-R金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-S金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，所述NMDA受体是NR2A。在一些实施方案中，所述NMDA受体是NR2B。

在一些实施方案中，由于2-R金刚乙胺拮抗NMDA受体和/或抑制NMDA介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-R金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的NMDA受体抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，所述NMDA受体是NR2A。在一些实施方案中，所述NMDA受体是NR2B。

在一些实施方案中，由于2-S金刚乙胺拮抗GABA受体和/或抑制GABA介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-R金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-S金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。

在一些实施方案中，由于2-R金刚乙胺拮抗GABA受体和/或抑制GABA介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-R金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的GABA受体和/或GABA介导的生物通路抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。

在一些实施方案中，由于2-S金刚乙胺拮抗多巴胺受体和/或抑制多巴胺介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-R金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-S金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-S金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，所述多巴胺受体是D_2/3受体。

在一些实施方案中，由于2-R金刚乙胺拮抗多巴胺受体和/或抑制多巴胺介导的生物通路的能力较低，因此与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些病状相比，本文公开的2-R金刚乙胺可能具有较少的副作用。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％至低约20％、低约10％至低约30％、低约10％至低约40％、低约10％至低约50％、低约10％至低约60％、低约10％至低约70％、低约10％至低约80％、低约10％至低约90％、低约10％至低约100％、低约20％至低约30％、低约20％至低约40％、低约20％至低约50％、低约20％至低约60％、低约20％至低约70％、低约20％至低约80％、低约20％至低约90％、低约20％至低约100％、低约30％至低约40％、低约30％至低约50％、低约30％至低约60％、低约30％至低约70％、低约30％至低约80％、低约30％至低约90％、低约30％至低约100％、低约40％至低约50％、低约40％至低约60％、低约40％至低约70％、低约40％至低约80％、低约40％至低约90％、低约40％至低约100％、低约50％至低约60％、低约50％至低约70％、低约50％至低约80％、低约50％至低约90％、低约50％至低约100％、低约60％至低约70％、低约60％至低约80％、低约60％至低约90％、低约60％至低约100％、低约70％至低约80％、低约70％至低约90％、低约70％至低约100％、低约80％至低约90％、低约80％至低约100％、或低约90％至低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度至少低约10％、低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、或低约90％。在一些实施方案中，相对于2-S金刚乙胺或外消旋金刚乙胺，由2-R金刚乙胺引起的多巴胺受体和/或多巴胺介导的生物通路抑制的程度至多低约20％、低约30％、低约40％、低约50％、低约60％、低约70％、低约80％、低约90％、或低约100％。在一些实施方案中，所述多巴胺受体是D_2/3受体。

在另一方面，本文公开了2-S金刚乙胺用于治疗/预防兽医动物，例如家禽(例如,鸡、火鸡和鸭)和马的流感的用途。与用外消旋金刚乙胺或2-R金刚乙胺治疗这些动物相比，使用2-S金刚乙胺可能具有较少的副作用。

在另一方面，本文公开了2-R金刚乙胺用于治疗/预防兽医动物，例如家禽(例如,鸡、火鸡和鸭)和马的流感的用途。与用外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺治疗这些动物相比，使用2-R金刚乙胺可能具有较少的副作用。

定义

如在本说明书和所附权利要求中所用，除非内容另外明确规定，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物。还应注意，除非内容另外明确规定，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的含义使用。此外，本文提供的标题仅是为了方便，并且不解释所要求保护的发明的范围或含义。

在一些实施方案中，如本文所述的S-金刚乙胺、R-金刚乙胺、外消旋金刚乙胺或金刚乙胺衍生物是聚乙二醇化的。如本文所用，“聚乙二醇化的”或“聚乙二醇化”描述了化合物与聚乙二醇(PEG)部分的缀合。所述PEG部分可以是任何长度。例如，所述PEG部分可以具有2至500个重复单元。在一些实施方案中，所述PEG部分可以具有约300g/mol至约10,000,000g/mol的平均分子量。在一些实施方案中，所述PEG部分可以是高分子量PEG或低分子量PEG。例如，高分子量PEG的分子量大于或等于5kDa，且低分子量PEG的分子量小于5kDa。在一些实施方案中，所述PEG选自：PEG 200、PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 800、PEG 1000、PEG1500、PEG2000和PEG 3350。PEG部分可以是直链PEG，或者PEG部分可以是支链PEG。例如，支链PEG包括具有一个或多个从PEG主链延伸的PEG基团分支的任何PEG。

如本文所用，术语“纯的”当应用于手性化合物时，是指所述手性化合物的一种对映体基本上不含其相反的对映体(即，对映体过量)。例如，化合物的纯“R”形式基本上不含所述化合物的“S”形式，并且因此是“S”形式的对映体过量。术语“对映体纯的”或“纯对映体”表示所述化合物包含过量的对映体，例如多于75重量％、多于80重量％、多于85重量％、多于90重量％、多于91重量％、多于92重量％、多于93重量％、多于94重量％、多于95重量％、多于96重量％、多于97重量％、多于98重量％、多于98.5重量％、多于99重量％、多于99.2重量％、多于99.5重量％、多于99.6重量％、多于99.7重量％、多于99.8重量％或多于99.9重量％的所述对映体。在某些实施方案中，所述重量基于化合物的总重量，即化合物的所有对映体。在某些实施方案中，一种对映体可以过量30％-80％，或者30％-70％、30％-60％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％，或其间的任何百分比。

如本文所用且除非另有说明，术语“对映体纯的2-S金刚乙胺”是指例如，至少约80重量％的2-S金刚乙胺和至多约20重量％的2-R金刚乙胺、至少约90重量％的2-S金刚乙胺和至多约10重量％的2-R金刚乙胺、至少约95重量％的2-S金刚乙胺和至多约5重量％的2-R金刚乙胺、至少约99％重量的2-S金刚乙胺和至多约1％重量的2-R金刚乙胺，或至少约99.9％重量的2-S金刚乙胺和至多约0.1％重量的2-R金刚乙胺。在某些实施方案中，所述重量基于金刚乙胺的总重量，即金刚乙胺的两种或所有对映体。

如本文所用且除非另有说明，术语“对映体纯的2-R金刚乙胺”是指例如，至少约80重量％的2-R金刚乙胺和至多约20重量％的2-S金刚乙胺、至少约90重量％的2-R金刚乙胺和至多约10重量％的2-S金刚乙胺、至少约95重量％的2-R金刚乙胺和至多约5重量％的2-S金刚乙胺、至少约99％重量的2-R金刚乙胺和至多约1％重量的2-S金刚乙胺、至少约99.9％重量的2-R金刚乙胺或至多约0.1％重量的2-S金刚乙胺。在某些实施方案中，所述重量基于金刚乙胺的总重量，即金刚乙胺的两种或所有对映体。

在本文提供的组合物中，对映体纯的金刚乙胺或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、酯或前药可以与其他活性或非活性成分一起存在。例如，包含对映体纯的2-S金刚乙胺的药物组合物可以包含例如，约90％的赋形剂和约10％的对映体纯的2-S金刚乙胺。在某些实施方案中，此类组合物中的对映体纯的2-S金刚乙胺可以例如包含至少约99.9重量％的2-S金刚乙胺和至多约0.1重量％的2-S金刚乙胺。在某些实施方案中，所述活性成分可以用很少或不用载剂、赋形剂或稀释剂来配制。

如本文所用，术语“对象”、“个体”或“患者”可互换使用，是指任何动物，包括家禽(诸如鸡、鸭、火鸡)和哺乳动物(诸如小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马、灵长类动物和人)。在一些实施方案中，所述对象是人。

如本文所用，术语“治疗”或“处理”是指治疗或缓解措施。有益的或期望的临床结果包括但不限于，全部或部分地缓解与疾病或病症或病状相关的症状、减轻疾病的程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、延缓或减缓疾病进展、改善或减轻疾病状态(例如，疾病的一种或多种症状)，以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以意指与不接受治疗的情况下的预期存活期相比，延长存活期。

如本文所用的术语“预防”意指全部或部分地预防如本文所述疾病或病状或其症状的发作、复发或扩散。

术语“施用(administration)”或“施用(administering)”是指将一定剂量的化合物或药物组合物给予脊椎动物或无脊椎动物(包括哺乳动物、鸟、鱼或两栖动物)的方法。优选的施用方法可以取决于各种因素而变化，例如药物组合物的组分、疾病的部位和疾病的严重性。如本文提供的化合物的“治疗有效量”或“药物有效量”是足以实现所期望效果的量，并且可以根据疾病状况的性质和严重性以及化合物的效力而变化。治疗效果是在某种程度上缓解疾病的一种或多种症状，并且可以包括治愈疾病。

“治愈”意指消除活动性疾病的症状。然而，即使在获得治愈后，所述疾病的某些长期或永久影响也可能存在(例如像，广泛的组织损伤)。

如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指施用的药剂或化合物将足以在一定程度上缓解所治疗的疾病或病状的一种或多种症状的量。结果可以是疾病的体征、症状或病因的减轻和/或缓解，或者生物系统的任何其他期望变化。例如，用于治疗用途的“有效量”为使疾病症状在临床上显著减少所需要的包含如本文披露的化合物的组合物的量。在任何个体情况下的适当“有效”量可以使用诸如剂量递增研究的技术来确定。“有效量”是相对于化合物不存在时，足以使化合物实现所述目的(例如，实现施用其的效果、治疗疾病、降低酶活性、增加酶活性、减少信号传导通路，或减少疾病或病状的一种或多种症状)的量。“有效量”的实例是足以有助于治疗、预防或减轻疾病的一种或多种症状的量，其还可以称为“治疗有效量”。一种或多种症状的“减轻”(和该短语的语法对等词)意味着所述一种或多种症状的严重性或频率的降低，或者所述一种或多种症状的消除。药物的“预防有效量”是药物在向对象施用时，将具有预期预防效果的量，例如，预防或延缓损伤、疾病、病理或病状的发作(或复发)，或者降低损伤、疾病、病理或病状或其症状发作(或复发)的可能性。施用一个剂量不一定会产生完全的预防作用，并且可能仅在施用一系列剂量后才会产生。因此，可以将预防有效量在一次或多次施用中施用。如本文所用的“活性降低量”是指相对于拮抗剂不存在时，降低酶活性所需的拮抗剂的量。如本文所用的“功能破坏量”是指相对于拮抗剂不存在时，破坏酶或蛋白质功能所需的拮抗剂的量。确切的量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，Lieberman,Pharmaceutical DosageForms(第1-3卷,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of PharmaceuticalCompounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；以及Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,第20版,2003,Gennaro编辑,Lippincott,Williams&Wilkins)。

术语“免疫疗法”是指调节免疫系统的药剂。在一些实施方案中，免疫疗法可以增加免疫系统调节因子的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以减少免疫系统调节因子的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以募集和/或增强免疫细胞的活性。药学上可接受的盐、前药、立体异构体和互变异构体

本文提供的金刚乙胺的纯R或S对映体可以作为任何盐或前药施用，所述盐或前药在施用至接受者时能够直接或间接提供母体化合物，或者其自身表现出活性。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指保留主题化合物的所期望生物活性并表现出最小的不期望毒理学效应的盐。短语“药学上可接受的盐或前药”在整个说明书中用于描述化合物的任何药学上可接受的形式(诸如酯、酰胺、酯的盐、酰胺的盐或相关基团)，其在施用至患者时，提供本公开内容的活性化合物。像这样的修饰可能影响化合物的生物活性，在一些情况下，提高母体化合物的活性。药学上可接受的盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过将呈游离酸或游离碱形式的纯化化合物分别与合适的碱或酸单独反应来制备。在一些实施方案中，药学上可接受的盐可能优于相应的游离碱或游离酸，因为这种盐赋予分子更大的稳定性或溶解性，从而有利于配制成剂型。通过用合适的酸处理，碱性化合物通常能够形成药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括药学上可接受的无机酸和药学上可接受的有机酸。药学上可接受的酸加成盐的非限制性实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硝酸甲酯、硫酸盐、硫酸氢盐、氨基磺酸盐、磷酸盐、乙酸盐、羟基乙酸盐、苯乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙烯酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、对氨基水杨酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、庚酸盐、邻苯二甲酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、扁桃酸盐、单宁酸盐、甲酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、丙酮酸盐、双羟萘酸盐、丙二酸盐、月桂酸盐、戊二酸盐、谷氨酸盐、依托酸盐(estolate)、甲磺酸盐(mesylate)、乙磺酸盐(esylate)、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(besylate)、对氨基苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)、萘-2-磺酸盐、乙烷二磺酸盐、以及2,5-二羟基苯甲酸盐。

药学上可接受的前药是指在宿主中代谢(即，例如，水解或氧化)以形成本公开内容化合物的化合物。前药的典型实例包括在活性化合物的功能部分上具有生物不稳定保护基团的化合物。前药包括可以被氧化、还原、胺化、脱氨基、羟基化、脱羟基化、水解、脱水解、烷基化、脱烷基化、酰化、脱酰化、磷酸化和/或脱磷酸化以产生活性化合物的化合物。

在一些实施方案中，如本文所述的方法包括施用纯2-S金刚乙胺、或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

药物组合物

本文还提供了包含如本文所述的纯2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐的药物组合物。如本文所述，可以向对象施用本文所述的任何药物组合物以治疗癌症。

2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐或其药物组合物的施用可以经由任何可接受的施用模式进行，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、局部、经皮、腹膜内、肌内、肺内、阴道、直肠、本体、神经病学、眼内、结膜下、经由前房注射、玻璃体内、腹膜内、鞘内、腹腔内、胸膜腔内、经由伤口灌洗、口腔内、腹内、关节内、耳内、支气管内、囊内、脑膜内、经由吸入、经由气管内或支气管内滴注、经由直接滴注到肺腔中、脊椎内、滑膜内、胸腔内、经由胸廓造口灌洗、硬膜外、鼓室内、脑池内、血管内、脑室内、骨内、经由感染骨的灌洗，或经由作为任何假体装置混合物的一部分的应用。在一些实施方案中，施用方法包括口服或肠胃外施用。

药学上可接受的组合物可以包括固体、半固体、液体、溶液、胶体、脂质体、乳液、悬浮液、复合物、凝聚物和气溶胶。药学上可接受的组合物还可以包括剂型，例如像，片剂、胶囊、粉末、液体、悬浮液、栓剂、气雾剂、植入物、控释剂等。2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐或其药物组合物还可以以缓释或控释剂型施用，包括积存注射剂、渗透泵、丸剂(片剂和/或胶囊)、经皮(包括电转运)贴剂、植入物等，用于以预定速率延长和/或定时脉冲施用。

在一些实施方案中，所述药物组合物是片剂。在一些实施方案中，所述药物组合物是膜包衣片剂。

纯2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐或其药物组合物可以单独施用，或者可以与常规药物载剂、赋形剂等组合施用。药学上可接受的赋形剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS)诸如d-α-生育酚、聚乙二醇1000、琥珀酸酯、用于药物剂型的表面活性剂，诸如吐温类、泊咯沙姆或其他类似聚合物递送基质、血清蛋白，诸如人血清白蛋白、缓冲物质，诸如磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷(tris)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和的植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，以及羊毛脂。环糊精也可以用于增强本文所述化合物的递送。

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物将采取单位剂型的形式，诸如丸剂或片剂，并且因此所述组合物可以含有2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、稀释剂，诸如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等；润滑剂，诸如硬脂酸镁等；以及粘合剂，诸如淀粉、阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、纤维素、纤维素衍生物等。在另一种固体剂型中，粉末、丸粒、溶液或悬浮液(例如，在碳酸丙烯酯、植物油、PEG、泊洛沙姆124或甘油三酯中)被封装在胶囊(凝胶状纤维素基胶囊)中。还考虑了单位剂型，其中2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐(本文提供)或另外的活性剂是物理分离的；例如，具有每种药物的颗粒(或胶囊中的片剂)的胶囊；双层片剂；两室软胶囊等。还考虑了肠溶包衣或延迟释放的口服剂型。

在一些实施方案中，所述金刚乙胺或其药学上可接受的盐是聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化金刚乙胺或其药学上可接受的盐包含高分子量PEG。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化金刚乙胺或其药学上可接受的盐包含低分子量PEG。在一些实施方案中，所述金刚乙胺或其药学上可接受的盐被修饰。在一些实施方案中，所述修饰是聚乙二醇化。

在一些实施方案中，所述聚乙二醇化金刚乙胺或其药学上可接受的盐是用高分子量PEG聚乙二醇化的。在一些实施方案中，所述聚乙二醇化金刚乙胺或其药学上可接受的盐是用低分子量PEG聚乙二醇化的。因此，本文还公开了治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的聚乙二醇化金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述药物组合物包含一种或多种选自以下的赋形剂：羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、微晶5纤维素和羧甲淀粉钠。

例如，可以通过将本文提供的化合物和任选的药物佐剂在载剂(例如，水、盐水、含水右旋糖、甘油、乙二醇、乙醇等)中溶解、分散等以形成溶液、胶体、脂质体、乳液、复合物、凝聚层或悬浮液来制备药学上可施用的液体组合物。如果期望，则所述药物组合物还可以含有少量无毒的辅助物质，诸如湿润剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、pH缓冲剂等(例如，乙酸钠、柠檬酸钠、环糊精衍生物、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸酯、三乙醇胺油酸酯等)。

可以制备含有如本文所述的2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐(其范围为0.005％至100％，余量由无毒载剂组成)的剂型或组合物。预期的组合物可以含有0.001％-100％的本文提供的化合物，在一个实施方案中为0.1％-95％，在另一个实施方案中为75％-85％，在另一个实施方案中为20％-80％。制备此类剂型的实际方法对本领域技术人员来说是已知的或显而易见的；例如，参见Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第22版(Pharmaceutical Press,London,UK.2012)。

本文的药物组合物每单位剂量单位(例如，片剂、胶囊、悬浮液、溶液、再造小袋、粉末、注射剂、I.V.、栓剂、舌下/颊膜剂、茶匙量等)可以含有约0.1-1000mg的2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。纯2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐可以以约0.01-300mg/kg/天或其中任何范围的剂量(优选约0.5-50mg/kg/天或其中任何范围)给予。在一些实施方案中，本文提供的药物组合物每单位剂量单位含有约25mg至约500mg本文提供的化合物(例如，约25mg至约400mg、约25mg至约300mg、约25mg至约250mg、约25mg至约200mg、约25mg至约150mg、约25mg至约100mg、约25mg至约75mg、约50mg至约500mg、约100mg至约500mg、约150mg至约500mg、约200mg至约500mg、约250mg至约500mg、约300mg至约500mg、约400mg至约500mg、约50至约200mg、约100至约250mg、约50至约150mg)。在一些实施方案中，本文提供的药物组合物每单位剂量单位含有约25mg、约50mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、或约500mg本文提供的化合物。然而，所述剂量可以根据患者的需要、所治疗病状的严重性和所采用的化合物而变化。在一些实施方案中，所述剂量是每天施用一次(QD)或每天施用两次(BID)。

在一些实施方案中，本公开内容包括一种组合物，包含纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

治疗方法

本文还提供了治疗对象的癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向对象施用治疗有效量的本文所述药物组合物中的一种或多种。在一些实施方案中，所述药物组合物包含对映体纯的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药物组合物包含对映体纯的2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是盐酸盐。

在一些实施方案中，所述癌症是肉瘤、癌瘤、黑色素瘤、淋巴瘤或白血病。肉瘤的非限制性实例包括：骨肉瘤(例如，血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、尤文氏肉瘤(Ewing'ssarcoma)、巨细胞瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤和滑膜肉瘤)和软组织肉瘤(例如，纤维肉瘤、5胃肠道间质瘤(GIST)、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcom)、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤和软组织尤文氏肉瘤)。癌瘤的非限制性实例包括：基底细胞癌瘤、鳞状细胞癌瘤、肾细胞癌瘤、浸润性导管癌瘤、肝细胞癌瘤和腺癌瘤。淋巴瘤的非限制性实例包括：非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin'slymphoma)(例如，B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症)和霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)(例如，淋巴细胞耗竭型霍奇金病、淋巴细胞丰富型霍奇金病、混合细胞性霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主型霍奇金病，以及结节性硬化型霍奇金淋巴瘤)。白血病的非限制性实例包括：急性毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、骨髓增生性肿瘤和系统性肥大细胞增多症。

在一些实施方案中，所述癌症选自：黑色素瘤、头颈癌、肺癌、结肠癌、肛门癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、肝癌和胃癌。

在一些实施方案中，所述癌症是癌瘤。在一些实施方案中，所述癌瘤选自：腺癌瘤、鳞状细胞癌瘤、移行细胞癌瘤、肝细胞癌瘤和透明细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症是鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述鳞状细胞癌瘤是头颈部鳞状细胞癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症是肝细胞癌瘤。

在一些实施方案中，所述癌症选自头颈癌、乳腺癌和黑色素瘤。

在一些实施方案中，如本文所述的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐可以用于治疗对象的乙型肝炎病毒(HBV)相关癌症。如本文所用的“HBV相关癌症”是其中一种或多种癌细胞表达至少一种HBV蛋白的癌症(例如参见，Liu等人,Hepatitis BVirus X Protein Induces RHAMM-Dependent Motility in Hepatocellular CarcinomaCells via PI3K-Akt-Oct-1 Signaling.Mol Cancer Res.2020年3月；18(3):375-389.doi：10.1158/1541-7786.MCR-19-0463.2019年12月2日电子出版.PMID：31792079)。例如，一种或多种癌细胞可以表达HBV癌蛋白。在一些实施方案中，所述HBV相关癌症是肝癌(例如，肝细胞癌瘤)。在一些实施方案中，所述HBV相关癌症是宫颈癌。

在一些实施方案中，如本文所述的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐可以用于治疗对象的人乳头瘤病毒(HPV)相关癌症。如本文所用的“HPV相关癌症”是其中一种或多种癌细胞表达至少一种HPV蛋白的癌症。例如，一种或多种癌细胞可以表达HPV癌蛋白。人乳头瘤病毒(HPV)可以通过例如，靶向关键的肿瘤抑制因子p53和Rb而导致恶性转化(参见例如，Conway和Meyers.J Dent Res.2009年4月；88(4):307-17；和Hoppe-Seyler.Trends Microbiol.2018年2月；26(2):158-168)。HPV基因也可以帮助HPV感染的细胞逃避免疫应答(参见例如，Senba.Oncol Rev.5 2012年10月5日；6(2):e17)。例如，HPV基因和蛋白质可以靶向有效适应性免疫应答所需的抗原加工和抗原呈递(参见例如，Senba.Oncol Rev.2012年10月5日；6(2):e17；以及O'Brien和Saveria Campo.VirusRes.2002年9月；88(1-2):103-17)。存在许多HPV癌蛋白，包括但不限于HPV16 E5、E6和E7。例如，HPV E5是一种据报道具有多种功能的蛋白质，所述功能包括调节肿瘤细胞分化和凋亡、调节负责晚期内体酸化的H+ATP酶，以及免疫调节，包括直接结合和下调主要组织相容性复合体(MHC)I类和MHC II类(参见例如，Venuti.Mol Cancer.2011,10:140)，这可以影响抗原加工和呈递。

在一些实施方案中，来自对象的一种或多种癌细胞表达HPV蛋白。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV E5、E6或E7蛋白中的一种或多种。在一些实施方案中，所述HPV E5、E6或E7蛋白来自选自以下的一种或多种HPV亚型：HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。在一些实施方案中，所述对象患有选自以下的癌症：头颈癌、粘膜鳞状细胞癌瘤、皮肤鳞状细胞癌瘤、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和肛门癌。

在一些实施方案中，所述癌症是HPV相关癌症。在一些实施方案中，所述HPV相关癌症是HPV相关头颈部鳞状细胞癌瘤(HNSCC)。

在一些实施方案中，如本文所述的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐可以用于治疗人乳头瘤病毒癌前病变，诸如以下相关的病变，但不限于此：增生性疣状白斑(PVl)、口腔白斑、反向吸烟者的尼古丁腭炎、口腔红斑、喉部角化病、日光性唇裂、光滑性厚白斑、plummer-vinson的光滑红舌病、无烟烟草角化病、口腔粘膜下纤维化综合征、红斑性白斑、颗粒性白斑、口腔扁平苔藓(糜烂型)、光滑薄白斑、尼古丁口炎、以及子宫颈烟包角化病(子宫颈非典型增生)；和阴茎上皮内瘤形成(PeIN病变)。在口腔中，24种类型的HPV(1、2、3、4、6、7、10、11、13、16、18、30、31、32、33、35、45、52、55、57、59、69、72和73)与良性病变相关，并且12种类型(2、3、6、11、13、16、18、31、33、35、52和57)与恶性病变相关。大约40％的浸润性阴茎癌瘤归因于HPV 16、18和6/11。宫颈致瘤性相关的HPV类型为15种高危类型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82)和3种“可能高危类型”(HPV26、53和66)。

HPV的测试是本领域已知的，例如参见Coultlée,F.等人,2005,Can J Infect DisMed Microbiol 16(2):83-91；careHPV测试试剂盒(QIAGEN,Redwood City,CA)；Tang,K.D.,2019,Unlocking the Potential of Saliva-Based Test to Detect HPV-16-Driven Oropharyngeal Cancer,Cancers(Basel),11(4):473；HPV探针(BIOCARE MEDICAL,Pacheo,CA)。

在本文所述方法的一些实施方案中，将纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐与治疗有效量的选自一种或多种另外的抗癌疗法或治疗剂(例如，化疗剂)的至少一种另外的治疗剂组合施用。使用不同治疗形式的组合来治疗患有癌症的对象是医学肿瘤学中的常见实践。除了本文所述的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐之外，这些其他形式的联合治疗或疗法可以包括例如，手术、放疗和另外的抗癌剂，诸如激酶抑制剂、信号转导抑制剂、基于铂的化疗和/或单克隆抗体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。

另外的抗癌剂的非限制性实例包括：卡铂、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、紫杉醇、培美曲塞、洛莫司汀、替莫唑胺和达卡巴嗪。

在一些实施方案中，所述另外的抗癌剂是免疫疗法。许多类型的免疫疗法可以与本文所述的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐组合使用。免疫疗法的非限制性实例包括：免疫检查点抑制剂、抗体疗法、细胞免疫疗法、抗体-药物缀合物、细胞因子疗法、基于mRNA的免疫疗法和癌症疫苗。

在一些实施方案中，所述免疫疗法是一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂靶向以下中的一种或多种：CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA和IDO。在一些实施方案中，所述检查点抑制剂选自：伊匹单抗、纳武利尤单抗、派姆单抗、阿替利珠单抗、阿维单抗、度伐鲁单抗、西米普利单抗、曲美木单抗及其组合。

在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，所述CTLA-4抑制剂是伊匹木单抗(ipilimumab)或曲美木单抗(CP-675,206)。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂是派姆单抗/>西米普利单抗/>或纳武利尤单抗/>在一些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是阿替利珠单抗/>阿维单抗或度伐鲁单抗(IMFINZI^TM)。

在一些实施方案中，所述抗体疗法是贝伐单抗(bevacizumab)(MVASTI^TM，)、曲妥单抗(trastuzumab)/>阿维单抗利妥昔单抗(rituximab)(MABTHERA^TM，/>)、依决洛单抗(edrecolomab)(Panorex)、达雷妥尤单抗(daratumuab)/>奥拉单抗(olaratumab)(LARTRUVO^TM)、奥法木单抗(ofatumumab)/>阿仑单抗(alemtuzumab)/>西妥昔单抗(cetuximab)/>奥戈伏单抗(oregovomab)、派姆单抗/>达妥昔单抗(dinutiximab)奥妥珠单抗(obinutuzumab)/>曲美木单抗(CP-675,206)、雷莫芦单抗(ramucirumab)/>乌妥昔单抗(ublituximab)(TG-1101)、帕尼单抗(panitumumab)/>埃罗妥珠单抗(elotuzumab)(EMPLICITI^TM)、阿维单抗/>耐昔妥珠单抗(necitumumab)(PORTRAZZA^TM)、西妥珠单抗(cirmtuzumab)(UC-961)、替伊莫单抗(ibritumomab)伊沙妥昔单抗(isatuximab)(SAR650984)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、夫苏木单抗(fresolimumab)(GC1008)、利瑞鲁单抗(lirilumab)(INN)、5莫格利珠单抗(mogamulizumab)/>非拉妥组单抗(ficlatuzumab)(AV-299)、地诺单抗(denosumab)/>加尼妥单抗(ganitumab)、乌瑞芦单抗(urelumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)或阿麦妥单抗(amatuximab)。

在一些实施方案中，所述免疫疗法是细胞免疫疗法(例如，过继性T细胞疗法、树突细胞疗法、自然杀伤细胞疗法)。

在一些实施方案中，所述免疫疗法是抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物是吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG^TM)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)本妥昔单抗(brentuximab vedotin)恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)(TDM-1；)、帕克莫单抗(moxetumomab pasudotox)/>泊洛妥珠单抗(polatuzumab vedotin-piiq)/>索米妥昔单抗(mirvetuximabsoravtansine)(IMGN853)或雷星-阿奈妥单抗(anetumab ravtansine)。

在一些实施方案中，所述免疫疗法是细胞因子疗法。在一些实施方案中，所述细胞因子疗法是白介素2(IL-2)疗法、白介素(IL-15)疗法、白介素7(IL-7)疗法、干扰素α(IFNα)疗法、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)疗法、白介素12(IL-12)疗法、或红细胞生成素-α(EPO)疗法。在一些实施方案中，所述IL-2疗法是阿地白介素(aldesleukin)在一些实施方案中，所述IFNα疗法是干扰素α-2b(例如，/>)或干扰素α-2a(例如，)。在一些实施方案中，所述G-CSF疗法是非格司亭(filgrastim)

在一些实施方案中，所述免疫疗法是基于mRNA的免疫疗法。在一些实施方案中，所述基于mRNA的免疫疗法是CV9104(参见例如，Rausch等人(2014)Human Vaccin Immunother10(11):3146-52；和Kubler等人(2015)J.Immunother Cancer 3:26)。还参见Pardi等人NatRev Drug Discov.2018Apr；17(4):261–279，这些文献通过引用全文并入本文。

在一些实施方案中，所述方法包括对对象进行放射疗法、手术或其组合。例如，手术可以是开放式手术或微创手术。

在一些实施方案中，所述对象对标准疗法(例如，标准护理)是难治的。在一些实施方案中，所述对象没有标准疗法选项。在一些实施方案中，所述对象在标准疗法后复发或进展。在一些实施方案中，本文提供的方法可用于治疗对标准疗法难治的局部晚期或转移性实体肿瘤。例如，HPV相关癌症对免疫检查点抑制剂(诸如本文所述的那些)可能是难治的。

在一些实施方案中，所述对象患有对标准疗法(例如，施用化疗剂、免疫疗法或放射疗法)难治或不耐受的癌症。在一些实施方案中，所述对象患有对先前疗法(例如，施用化疗剂、免疫疗法(例如，免疫检查点抑制剂)或放射疗法)难治或不耐受的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。在一些实施方案中，对标准疗法难治或不耐受的癌症是HPV相关癌症。在一些实施方案中，所述对象患有没有标准疗法的癌症(例如，局部晚期或转移性肿瘤)。

在一些实施方案中，所述对象已进行先前疗法。在一些实施方案中，在用2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐治疗之前，所述对象接受了用基于铂的化疗、免疫检查点抑制剂(例如，PD-1/PDL1免疫疗法)、放射疗法或其组合的治疗。

待向对象施用的纯2-S金刚乙胺、或纯2-R金刚乙胺、或其药学上可接受的盐的最佳剂量可以由本领域技术人员确定，并且将随施用模式、制剂的强度、施用模式和疾病状况的进展而变化。在一些实施方案中，可以向对象施用剂量为约0.01至10,000mg/25名成年人/天的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。例如，可以配制包含纯2-S金刚乙胺、或纯2-R金刚乙胺、或外消旋金刚乙胺、或其药学上可接受的盐的药物组合物，以提供约0.01、约0.05、约0.1、约0.5、约1、约2.5、约5、约10、约15、约25、约50、约100、约150、约200、约250或约500毫克金刚乙胺或其药学上可接受的盐的剂量。在一些实施方案中，可以以每天约0.1mg/kg至约1000mg/kg体重或其中任何范围的剂量水平提供有效量的纯2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺、或其药学上可接受的盐。例如，每天约0.5至约500mg/kg体重、每天约1.0至约250mg/kg体重、每天约0.1至约100mg/kg体重、每天0.1至约50.0mg/kg体重、每天15.0mg/kg体重，或每天约0.5至约7.5mg/kg体重。可以以每天1至5次的方案或以单次每日剂量向对象施用纯2-S金刚乙胺、或纯2-R金刚乙胺、或其药学上可接受的盐。

在一方面，本文公开的化合物用于制备用于治疗本文所述疾病或病状的药物。另外，用于治疗需要这种治疗的对象的本文所述的任何疾病或病状的方法涉及以治疗有效量向所述对象施用药物组合物，所述药物组合物包含至少一种本文公开的化合物或其药学上可接受的盐、活性代谢物、前药或溶剂化物。

在某些实施方案中，施用含有本文公开的化合物的组合物以用于预防性和/或治疗性治疗。在某些治疗性应用中，向已经罹患疾病或病状的患者施用组合物，其量足以治愈或至少部分地阻止疾病或病状的至少一种症状。对于此用途有效的量取决于疾病或病状的严重性和病程、先前的疗法、患者的健康状态、体重和对于药物的应答以及治疗医师的判断。治疗有效量任选地通过包括但不限于剂量递增临床试验的方法确定。

在预防应用中，将含有本文公开的化合物的组合物施用至易受特定疾病、病症或病状影响或以其他方式处于其风险中的患者。

在某些实施方案中，可以暂时减少或暂时停止一段时间(即“药物假期”)正在施用的药物剂量。

HPV的检测方法

本公开内容的另一方面包括治疗对象的癌症的方法，所述方法包括在来自对象的样品中检测表达HPV蛋白的癌细胞，并且然后向所述对象施用治疗有效量的本文所述的任一种药物组合物。本文所述的检测方法基于确定HPV蛋白或其功能等同变体的存在与否。在一些实施方案中，其中在来自对象的样品中检测到HPV蛋白或其功能等同变体的存在，确定了HPV蛋白的表达水平。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。在一些实施方案中，所述药物组合物包含选自一种或多种另外的抗癌疗法或治疗剂(例如，化疗剂)的至少一种另外的治疗剂。

因此，在另一方面，本公开内容涉及一种体外方法，用于诊断对象的HPV蛋白的存在相关的疾病，或用于确定对象患有HPV蛋白的存在相关的所述疾病的倾向，或用于确定对象的HPV蛋白的存在相关的所述疾病的分期或严重性，或用于监测对患有HPV蛋白存在相关的所述疾病的对象施用的疗法的效果，所述方法包括定量来自所述对象的生物样品中HPV蛋白或其功能等同变体的表达水平，其中相对于对照样品中编码HPV蛋白或其功能等同变体的基因的表达水平，编码HPV蛋白或其功能等同变体的基因表达增加指示HPV蛋白的存在相关的疾病，或指示所述对象患有HPV蛋白的存在相关的疾病的更大倾向，或对所述对象施用的疗法无应答。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。在一些实施方案中，所述药物组合物包含选自一种或多种另外的抗癌疗法或治疗剂(例如，化疗剂)的至少一种另外的治疗剂。

因此，如本文所用，术语“功能等同变体”还包括所述标志蛋白的任何功能等同片段。术语“片段”涉及包含所述标志蛋白的一部分的肽。在这种情况下，功能等同片段是包含所述标志蛋白的一部分并具有与所述蛋白基本上相同功能的肽或蛋白。“标志蛋白”优选地是指HPV蛋白，但不限于此。

如本领域技术人员将理解的，检测通常可能对100％的对象不正确，尽管优选是正确的。然而，所述术语要求能够将对象的统计学显著部分鉴定为具有足够量的感兴趣的蛋白质，使得对象患有感兴趣的蛋白质的存在相关的疾病或具有相同的倾向。本领域技术人员可以通过简单地使用一个或几个公知的统计评价工具(例如，确定置信区间、确定p值、学生t检验(Student's t-test)、曼-惠特尼检验(Mann-Whitney test)等)，来确定一个部分是否具有统计学显著性。详情在Dowdy和Wearden,Statistics for Research,John Wiley&Sons,New York 1983中。优选的置信区间是至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％。p值优选地是0.2、0.1、0.05。

如本文所用，术语“倾向”意指对象仍未发展成疾病或上述疾病的任何症状或其他诊断标准，然而在未来将以一定的概率发展成疾病。所述概率将显著不同于HPV蛋白的存在相关的疾病发作的统计概率。优选地诊断出发展HPV蛋白的存在相关的疾病的概率为至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％倾向。倾向的诊断有时可以被称为对象发展疾病的概率的预后或预测。

在本公开内容的上下文中，“对照样品”被理解为用于确定本公开内容中使用的基因和蛋白质的表达水平变化的参考样品。在一个实施方案中，使用从健康个体获得的组织样品从所提供的信号中获得参考值。优选地，样品取自几个健康个体的相同组织并合并，使得样品中多肽的量反映所述分子在群体中的平均值。

因此，在本公开内容的具体实施方案中，HPV蛋白的表达水平可以被定量。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。

如本领域技术人员所理解的，蛋白质的表达水平可以通过任何常规方法来定量。通过非限制性的说明，蛋白质的水平可以被定量，例如，通过使用具有结合所述蛋白质(或其含有抗原决定簇的片段)的能力的抗体，以及随后定量所形成的复合物。这些测定中使用的抗体可以被标记或不标记。可以使用的标志的说明性实例包括放射性同位素、酶、荧光团、化学发光试剂、酶底物或辅因子、酶抑制剂、颗粒、染料等。存在多种可以用于本公开内容的已知测定，它们使用未标记的抗体(第一抗体)和标记的抗体(第二抗体)；这些技术包括蛋白质印迹、ELISA(酶联免疫吸附测定)、RIA(放射免疫测定)、竞争性EIA(竞争性酶免疫测定)、DAS-ELISA(双抗体夹心ELISA)、免疫细胞化学和免疫组织化学技术、基于使用生物芯片或蛋白质(其包括特异性抗体)微阵列的技术，或基于胶体沉淀形式的测定，诸如试纸条。在另一个具体实施方案中，蛋白质水平的定量通过免疫分析方法(诸如蛋白质印迹、免疫组织化学或ELISA)进行。在一些实施方案中，所述免疫分析方法包括对HPV16 E5特异的抗体。

同样，本公开内容的检测方法可以应用于与上述定义的HPV蛋白的存在相关的任何疾病。在优选的实施方案中，与HPV蛋白的存在相关的疾病是癌症，优选具有高水平HPV蛋白的癌症。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。

将本公开内容的方法付诸实践包括从待研究的对象获得生物样品。所述样品的说明性非限制性实例包括不同类型的生物流体，诸如血液、血清、血浆、脑脊液、腹膜液、粪便、尿液和唾液以及组织样品。生物流体样品可以通过任何常规方法获得，如组织样品；举例来说，所述组织样品可以是通过手术切除获得的活检样品。

在另一方面，本公开内容涉及一种包含用于定量HPV蛋白或其功能等同变体的表达水平的试剂的试剂盒，用于诊断对象的的癌症或用于确定对象患有所述癌症的倾向，或用于确定对象的所述癌症的分期或严重性，或用于监测向患有所述癌症的对象施用的疗法的效果，其中如果所述试剂检测到所述基因或所述蛋白质或其功能等同变体的表达相对于对照样品增加，则所述对象可能患有HPV蛋白的存在相关的疾病，或表现出患有HPV蛋白的存在相关的所述疾病的更大倾向，或表现出所述疾病的更大严重性，或所施用的疗法是无效的。在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。在一些实施方案中，所述药物组合物包含选自一种或多种另外的抗癌疗法或治疗剂(例如，化疗剂)的至少一种另外的治疗剂。

本公开内容还涉及所述试剂盒的用途。

上文已经针对本公开内容的其他创造性方面和特定实施方案描述并解释了在定义试剂盒的用途时使用的所有术语和表达，并且也适用于本文所述试剂盒的用途。

用于设计定制疗法和选择可以受益于2-S金刚乙胺或2-R金刚乙胺施用的患者的方法

在另一方面，本公开内容涉及一种用于为患有HPV蛋白的存在相关的疾病的患者设计定制疗法的体外方法，所述方法包括：

(a)定量所述患者的HPV蛋白的表达水平，和

(b)将所述表达水平与对照水平进行比较，

其中如果所述患者中HPV蛋白的表达水平高于对照值，则向所述患者施用治疗有效量的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述HPV蛋白是HPV16 E5。在一些实施方案中，向患者施用选自一种或多种另外的抗癌疗法或治疗剂(例如，化疗剂)的至少一种另外的治疗剂。

在另一方面，本公开内容涉及一种用于选择患有HPV蛋白的存在相关的疾病的患者的体外方法，所述患者待用治疗有效量的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐进行治疗，所述方法包括

a)定量所述患者的HPV蛋白的表达水平，和

b)将所述表达水平与对照水平进行比较，

其中如果所述患者中HPV蛋白的表达水平高于对照值，则选择所述患者以接受治疗有效量的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

实施例

实施例-1.对NR1/NR2A和NR1/NR2B的测定

ScreenPatch

·由人GRIN1/GRIN2A基因编码的NR1/NR2A离子通道型受体，在HEK293细胞中表达。

·由人GRIN1/GRIN2B基因编码的NR1/NR2B离子通道型受体，在HEK293细胞中表达

配制品

每天制备2-S金刚乙胺、2-R金刚乙胺、外消旋金刚乙胺和金刚烷胺溶液，并且通过将储备溶液稀释到适当的HEPES缓冲生理盐水(HB-PS)溶液中来制备。因为0.6％ DMSO不影响通道电流，所以所有测试和对照溶液都含有0.6％ DMSO。在室温下将测试物品配制品超声处理(型号2510/5510，Branson Ultrasonics，Danbury，CT)至少20分钟以促进溶解。

以8点浓度-应答格式(4个重复孔/浓度)评价测试物品效果。所有测试和对照溶液都含有0.6％ DMSO。使用自动液体处理系统(Assist Plus，INTEGRA)将测试物品配制品装载到384孔化合物板中。

阳性对照治疗组

分批制备阳性对照物品的储备溶液，将其等分供个人使用，冷冻储存，并在六个月内使用。每天新鲜制备阳性对照测试溶液。最终DMSO浓度为0.6％(v/v)。将NMDA受体激动剂L-谷氨酸盐和甘氨酸在本研究中用作参考激动剂。将NMDA受体拮抗剂金刚烷胺在本研究中用作参考拮抗剂。

测试和浓度：

评价了测试物品对离子通道的功能影响。测试浓度在下表1中示出。

表1.测试物品浓度

克隆测试系统

将细胞保持在组织培养培养箱中。将储备液保持在低温存储器中。将用于电生理学的细胞铺在塑料培养皿中。

HEK293培养程序

用编码NRl和NR2A-B的适当离子通道或一种或多种受体cDNA转染HEK293细胞。使用并入表达质粒中的G418和Zeocin博莱霉素抗性基因选择稳定的转染子。用培养基中的0418和博莱霉素保持选择压力。将细胞在补充有10％胎牛血清、100U/mL青霉素钠、100μg/mL硫酸链霉素、100ug/mL博莱霉素、5ug/mL杀稻瘟菌素和500μg/mL 0418的杜氏改良Eagle培养基/营养混合物F-12(D-MEM/F-12)中培养。

ScreenPatch测试方法：

所有实验均在环境温度下进行。目标特定的测试程序如下所述。以下程序适用于所有ScreenPatch测定。

在测试之前，将培养皿中的细胞用HBSS溶液洗涤两次。在即将用于IonWorksBarracuda^TM之前，将细胞在含有6mM CaCh的HB-PS中洗涤以提高密封性。

以8点浓度-应答格式(4个重复孔/浓度，参见表1)评价测试物品。先前的结果表明，0.6％ DMSO不影响通道电流；因此，除非另有说明，所有测试和对照溶液都含有0.6％DMSO。将测试物品配制品装载到384孔化合物板中，并且置于IonWorks Barracuda ^TM板孔中。

分批制备阳性对照物品，将其等分供个人使用，冷冻储存，并在六个月内使用。每天新鲜制备阳性对照测试溶液。最终DMSO浓度为0.6％。

在应用与1倍浓度的测试物品混合的L-谷氨酸盐(Sigma-Aldrich)/甘氨酸(Sigma-Aldrich)(5μM L-谷氨酸盐和50μM甘氨酸)之前2分钟，预应用2倍浓度的测试物品(如表2中所规定)。

为了监测测定的灵敏度，以8个半对数浓度(范围0.3-1000μM)应用了拮抗剂阳性对照盐酸金刚烷胺(Sigma-Aldrich)；n＝4，其中n＝每个浓度的重复次数。以八(8)个浓度(0.03-100μM；n＝4，其中n＝重复次数)应用了激动剂阳性对照(L-谷氨酸盐)以及50μM甘氨酸。

化合物对通道的抑制作用计算如下：

其中，基值是在低测试物品浓度下的应答，最大值是在高浓度下的最大应答，x半值是EC₅₀或IC₅₀，即产生半最大激活或抑制的测试物品浓度，并且率是Hill系数。假设一个简单的结合模型进行非线性最小二乘拟合。如果适当的话，则用标准差对拟合进行加权。没有进行关于拟合参数的假设；通过算法来确定拟合参数。

使用Excel 2016的XL拟合插件(Boston，MA)解决了非线性最小二乘拟合。

用两种类型的测量来评价化合物的效果：

1.最大电流时的峰值电流幅度(PCA)测量。

2.稳态电流幅度(SSC)测量，是指用激动剂刺激受体后4至5秒。

程序

电生理学程序：

a)细胞内溶液(mM)：50mM CsCl、90mM CsF、2mM MgCl₂、5mM EGTA、10m MHEPES。用CsOH调节至pH 7.2。分批制备该溶液并冷藏储存。在准备记录过程中，将细胞内溶液装载到PPC平面电极的细胞内隔室中。

b)细胞外溶液，HB-PS(以mM为单位的组分)：NaCl，137；KCl，1.0；CaCl₂，5；HEPES，10；葡萄糖，10；用NaOH将pH调节至7.4(冷藏直至使用)。

c)保持电位：-70mV，测试物品应用期间的电位：-70mV。

记录程序：

a)将细胞外缓冲液装载到PPC板孔中(11μL/孔)。将细胞悬浮液移液到PPC平面电极的孔中(9μL/孔)。

b)经由膜片穿孔建立全细胞记录配置，其中膜电流由板载膜片钳放大器记录。

c)进行了两次记录(扫描)。第一次扫描，在以2倍浓度添加测试物品期间，以检测潜在的激动剂作用，以及用于测试物品与细胞的预孵育(持续2分钟)。第二次，在与1倍浓度的测试物品共应用的受体(5μM L-谷氨酸盐和50μM甘氨酸)的激动剂刺激期间，以检测测试物品的拮抗作用。

测试物品施用：所述应用包括以10μL/s(总应用时间为2秒)添加20μL 1倍浓缩的测试物品溶液和激动剂。

阳性对照激动剂：0.03-100μM L-谷氨酸盐(8个浓度剂量-应答，半对数标度)和50μM甘氨酸

阳性对照拮抗剂：与5μM谷氨酸盐和50μM甘氨酸共应用的0.3-1000μM金刚烷胺(8个浓度-应答，半对数标度)。

效果评价基于峰值电流测量。

结果

使用基于HTS电生理学的方法，Ion Work Barracuda^TM(IWB)检查了四(4)种化合物的激动剂和拮抗剂特性。采用了双应用协议。

激动剂形式：在首次应用期间，检查了测试物品和阳性对照拮抗剂金刚烷胺的潜在激动作用。测试物品和金刚烷胺均未对NMDA受体产生显著的激活作用(数据未显示)

拮抗剂形式：在用5μM L-谷氨酸盐和50μM甘氨酸刺激受体后，在第二次应用化合物的过程中检查测试物品的拮抗剂活性。据发现所有四种测试物品均对NMDA受体功能产生显著的浓度依赖性抑制。为了获得开放通道阻断类型的抑制，测量峰值和稳态电流幅度(在激动剂应用后的第4至第5秒)(分别为PCA和SSC)。表2显示了用这两种类型的测量结果得到的NR1/NR2A和NR1/NR2B受体的化合物IC₅₀的平均值。

金刚烷胺产生对NR1/NR2A受体的抑制，其中分别地，对于峰值和稳态电流振幅，IC_{50_PCA}＝97.8μM且IC_{50_SSC}＝48.9μM。NR1/NR2B受体被金刚烷胺抑制，其中分别地，对于峰值和稳态电流振幅，IC_{50_PCA}＝22.0μM且IC_{50_SSC}＝17.9μM。稳态电流测量中金刚烷胺效力的左移至少部分地表明，抑制NR1/NR2A NMDA受体的开放通道阻断机制。

表2.由测试物品和参考拮抗剂金刚烷胺产生的抑制IC₅₀汇总。

这些测定的结果在图1A-D中进一步举例说明。

实施例2.纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺在小鼠癌症模型中的作用。

方法

细胞系

使AT-84-E7和B16-OVA在含有10％ FBS、1％ L-氟他胺、1％青霉素/链霉素、1％丙酮酸钠和200μg/ml G418的RPMI 1640中生长。使DC2.4、RAW264.7、B3Z、4T1、B16和MC38在含有10％ FBS、1％L-谷氨酰胺、1％青霉素/链霉素和1％丙酮酸钠的RPMI 1640 20中生长。使HEK293T在含有10％ FBS、1％ L-谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素的DMEM中生长。将4MOSC1在胶原包被的培养皿中用KSFM培养基(Invitrogen,Carlsbad,20CA)培养，该培养基补充了1％青霉素/链霉素、5ng/ml EGF(Invitrogen)和2x 10-11Mcholera毒素(Sigma,St.Louis,MO)(27)。使CAL-27、CAL-33和SCC-47在含有10％ FBS、22 1％ L-谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素的DMEM中生长。使用MycoAlert PLUS检测试剂盒(Lonza,Basel,Switzerland)进行对支原体污染的常规监测。所有细胞系在解冻后十次传代内使用。

小鼠研究

在小鼠右侧皮下注射重悬于100μl PBS中的1.0至5.0x 10⁵个AT-84-E7、1.5x 10⁵个B16-OVA或5.0x 10⁵个4T1细胞。对于原位模型，将于30μl PBS中的1.0x 10⁵个AT-84-E7或1.0x 10⁶个4MOSC1注射到舌内。每2至3天用电子游标卡尺测量肿瘤直径，并且使用公式报告为体积；肿瘤体积(mm³)＝(长x宽²)/2。一旦肿瘤可触知，则每3天经由IP注射用200μg抗PDL1抗体(BioXcell,West Lebanon,NH)治疗小鼠，每只小鼠总共注射3或4次，或者每天经由IP注射用10-20mg/kg体重的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺治疗5只小鼠持续7天。对于过继转移实验，首先，将来自OT-1小鼠的脾的单细胞悬浮液在含有10ng/ml OVA SIINFEKL肽(InvivoGen,San Diego,CA)和2ng/ml重组IL-2(PeproTech,Rocky Hill,NJ)的培养基中培养数天，并且然后将4.0x 10⁶个细胞静脉内注射到携带B16-OVA的小鼠中。

流式细胞术

通过机械解离从肺、肝、肿瘤引流淋巴结和肿瘤制备单细胞悬浮液，并使用70μm过滤器过滤。在机械解离前，将AT-84-E7和MOC2肿瘤在胶原酶D(Roche,Basel,Switzerland)中于37℃孵育1小时。对来自肿瘤的单细胞悬浮液进行40％/80％ Percoll(GEHealthcare,Chicago,IL)梯度的密度梯度离心。在获得单细胞悬浮液后，将每个样品与Fc封闭试剂(抗CD16/32抗体；BioLegend,San Diego,CA)一起孵育。在Fc阻断后，用荧光标记的抗体[BioLegend，BD Bioscience(San Jose,CA)或eBiosciences(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)]对细胞进行染色。将LIVE/DEAD Fixable细胞染色试剂盒(Invitrogen)用于活力染色。对于细胞内染色，用Foxp3/转录因子固定/透化浓缩物和稀释剂(Invitrogen)处理细胞。使用BD FACS Aria II或LSR II流式细胞仪(BD)分析细胞。在FlowJo(FlowJo,LLC,Ashland,OR)上分析数据。对于每种抗体，使用以下克隆：CD45.2(104)、CD3e(145-2C11)、CD4(RM4-5)、CD8a(5H10)、CD25(3C7、PC61)、CD44(IM7)、CD62L(MEL-14)、IFN-γ(XMG1.2)、Foxp3(MF23)、H-2Kb(AF6-88.5)、H-2Kk(36-7-5)、H-2Kd(SF1-1.1)、H-2Kb/SIINFEKL(eBio25-D1.16)、I-A/I-E(2G9)、CD49b(DX5)、CD11b(M1/70)、FLAG(L5)、CD31(MEC13.3)、NK-T/NK细胞抗原(U5A2-13)、CD102(3C4(MIC2/4))、CD62P(RMP-1)、CD105(MJ7/18)、CD106(429(MVCAM.A))和CD162(2PH1)。H-2Kb/SIINFEKL四聚体购自MBL国际公司(Woburn,MA)。

细胞周期和增殖测定

在根据制造商的协议，使用BD Pharmingen BrdU Flow试剂盒(BD,FranklinLakes,NJ)，用BrdU-APC和7-AAD对1个细胞染色后，基于BrdU掺入分析细胞周期进程。使用流式细胞术分析细胞。通过使用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑]来评估细胞增殖。首先，将细胞接种在96孔板中，并培养2-3天。接下来，用含有0.5mg/ml MTT(Sigma)的新鲜培养基替换培养基，并将板在37℃下孵育4小时。然后，将紫色甲瓒晶体溶解在裂解缓冲液(于异丙醇中的4mM HCl和0.1％ NP-40)中，并且在TECAN infiniteM200酶标仪(Tecan,Switzerland)上记录570nm波长处的吸光度，其中以650nm处的吸光度作为参考。

B3Z活化测定

将B16-OVA细胞接种到96孔板中，并且用100μM纯2-R金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺或外消旋金刚乙胺处理24小时，然后添加B3Z细胞。在共培养24小时后，除去培养基并添加100μl裂解缓冲液[于PBS中的0.155mM氯酚红β-D-吡喃半乳糖苷(CPRG)(Roche)、0.125％Nonidet P-40替代物(EMDCalbiochem)和9mM MgCl₂(Sigma)]。在37℃下孵育4小时后，在TECAN infinite M200酶标仪上测定570nm处的吸光度。

逆转录和定量PCR

使用TRIzol试剂(Invitrogen)提取总RNA，并且根据制造商的说明，用qScriptcDNA合成试剂盒(Quanta BioSciences,Beverly,MA)进行逆转录。通过使用KAPA SYBR1FAST(KAPA Biosystems,Wilmington,MA)在7900HT快速实时PCR系统(AppliedBiosystems,Foster City,CA)上进行定量PCR分析。

结果

纯2-S金刚乙胺和纯2-R金刚乙胺单独具有抗肿瘤活性，并显著降低肿瘤生长。用5x 10⁵个AT84-E7/E5肿瘤细胞接种6只小鼠，并且从第8天开始，每天一次用腹膜内(IP)注射10mg/kg体重的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺进行治疗，总共注射7次。在实验过程中测量肿瘤体积。与对照组相比，接受纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺的小鼠显示出肿瘤大小的统计学显著减小。用1.5x 10⁵个B16-OVA肿瘤细胞接种6只小鼠，并且从第10天开始，每天一次用IP注射10mg/kg体重的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺进行治疗，总共注射7次。在实验过程中测量肿瘤体积。与对照组相比，接受纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺的小鼠显示出肿瘤大小的统计学显著减小。将该实验重复了三次，结果相似。用5x 10⁵个4T1肿瘤细胞接种5只小鼠，并且从第6天开始，每天一次用IP注射10mg/kg体重的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺进行治疗，总共注射7次。在实验过程中测量肿瘤体积。与对照组相比，接受2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺的小鼠显示出肿瘤大小的统计学显著减小。纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺的抗肿瘤作用在不表达E5的AT-84-E7肿瘤中降低。在多种细胞系中观察到MHC表面表达的显著增加。用纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺治疗恢复了MHC离子E5阳性AT-84-E7的细胞表面表达。

为了测试2-S金刚乙胺增强肿瘤细胞上功能性抗原呈递的能力，将表达OVA的B16细胞用作模型肿瘤抗原，并与应答于OVA SINNFKL肽的B3Z细胞共培养。用纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺处理B16-OVA细胞导致B3Z细胞对该模型肿瘤抗原的识别显著增加3倍。纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺联合抗PDL1免疫疗法导致荷B16-OVA肿瘤小鼠的存活率显著改善。

使用RAW264.7细胞系测试了纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺增加抗原呈递细胞上MHC表达的能力，并且观察到MHC I类和MHC II类两者表面表达的显著增加。这些发现表明，纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺在多种临床前肿瘤模型中具有新的抗肿瘤活性，以及通过上调MHC增强抗原呈递的功能。

为了研究纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺的直接细胞毒性活性，进行了体外BrdU掺入测定，以量化纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺对人HNSCC细胞系中细胞周期的影响。在AT-84-E7和B16-OVA两种模型中，单独的纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺导致G0/G1细胞周期停滞的显著增加，以及S期的显著减少。还观察到细胞增殖的抑制。测试了纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺对T细胞增殖的效果分析，但没有显著效果。

使用RTqPCR筛选由纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺引起的细胞周期蛋白基因表达的变化，并且看到微管和细胞周期调节分子Stathmin的显著减少。还观察到微管相关分子Tau的减少。

为了证实纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺具有抗人头颈部肿瘤细胞系的活性，进行了BrdU掺入测定和增殖测定。在人CAL-27、CAL-33和SCC-47鳞状细胞癌瘤细胞系中观察到单独使用金刚乙胺的显著细胞周期停滞和增殖减少。最后，纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺在被工程化以表达HPV16 E5的鼠和人细胞系中诱导细胞周期停滞，从而表明纯2-S金刚乙胺或纯2-R金刚乙胺能够在功能上逆转HPV E5的作用。

实施例3.HPV基因分型

HPV基因分型在本领域中是已知的，例如，参见Sichero等人,2017,CancerEpidemiol Biomarkers,26(8):1312-1320。例如，通过旋转柱色谱法从脱落的宫颈细胞中提取DNA。使用采用引物诸如MY09/11和PGMY09/11(参见表3)的PCR扩增，随后经由与HPV类型特异性寡核苷酸探针杂交和限制性片段长度多态性分析进行基因分型，测试了粘膜α-HPV。将阴性和阳性对照用于确定模板DNA的质量。

表3-引物序列

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简并碱基代码如下：M＝A或C，W＝A或T，Y＝C或T，并且R＝A或G。

实施例4.2-S金刚乙胺和2-R金刚乙胺的体内毒理学

进行了一系列体内实验，以确定2-S金刚乙胺或2-R金刚乙胺是否对谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体中的任一种、或其任何组合具有更高的结合选择性。与外消旋金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺或2-R金刚乙胺对谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体中的任一种、或其任何组合的选择性增强，导致不存在通常与外消旋金刚乙胺相关的中枢神经系统不良作用，包括恶心、胃部不适、呕吐、厌食、口干、腹痛、乏力、紧张、疲劳、头昏、头晕、头痛、睡眠困难、注意力难集中、精神混乱和焦虑。

为了测试上述情况，每天经由IP注射用10-20mg/kg体重的纯2-S金刚乙胺、纯2-R金刚乙胺、外消旋金刚乙胺(对照)或金刚烷胺(对照)来治疗小鼠，持续7天。接下来，如Schramm,N.等人(2000)所述的一系列SPECT分析。对谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体中的每种进行用于小动物SPECT的紧凑型高分辨率检测器，以评估2-S金刚乙胺和2-R金刚乙胺的结合选择性。

SPECT分析包括用对每种受体特异的放射性配体治疗小鼠。例如，已经证明[¹²³I]IBZM对D_2/3多巴胺受体具有高亲和力。对谷氨酸盐和GABA受体特异的放射性配体是本领域技术人员已知的。将谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体中每种的适当量的对应放射性配体注射到小鼠的侧尾静脉中，并且在放射性配体施用后45分钟开始SPECT测量。

令人惊讶的是，与2-S金刚乙胺相比，2-R金刚乙胺对谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体或通路、或其任何组合具有显著更高的结合选择性或激动行为。因此，与2-S金刚乙胺相比，2-R金刚乙胺导致更高发生率的中枢神经系统不良作用，包括恶心、胃部不适、呕吐、厌食、口干、腹痛、乏力、紧张、疲劳、头昏、头晕、头痛、睡眠困难、注意力难集中、精神混乱和焦虑。结合实施例2，作为癌症的治疗，与2-R金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺的毒性显著降低，但仍然有效。

实施例5.2-S金刚乙胺和2-R金刚乙胺的体内毒理学

令人惊讶的是，与2-R金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺对谷氨酸盐、GABA、多巴胺受体或通路、或其任何组合具有显著更高的结合选择性或激动行为。因此，与2-R金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺导致更高发生率的中枢神经系统不良作用，包括恶心、胃部不适、呕吐、厌食、口干、腹痛、乏力、紧张、疲劳、头昏、头晕、头痛、睡眠困难、注意力难集中、精神混乱和焦虑。结合实施例2，作为癌症的治疗，与2-R金刚乙胺相比，2-S金刚乙胺的毒性显著降低，但仍然有效。

实施例6.2-S金刚乙胺和2-R金刚乙胺的体外增殖

进行实验以确定2-S金刚乙胺(在整个申请中也称为“S-金刚乙胺”)、2-R金刚乙胺(在整个申请中也称为“R-金刚乙胺”)、外消旋(RS)金刚乙胺和美金刚胺影响CAL-27细胞增殖的能力。与R-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺相比，S-金刚乙胺导致增强的或相当的癌细胞增殖。

在第1天，将CAL-27细胞接种在96孔板中(2-4x 10³个细胞/孔，培养基100μl/孔)并放置过夜，以使细胞附着到板。在第2天，向细胞中添加不同浓度的金刚乙胺(0μM、100μM、250μM、或500μM)并允许孵育24小时或48小时。在第3天或第4天，吸出培养基，并且向培养基中添加100μl/孔的MTT溶液(包含0.5mg/ml的MTT浓度；通过用储备溶液(于PBS(-20℃)中5mg/ml)稀释噻唑蓝溴化四唑溶液(SIGMA，目录号M2128)形成)。将细胞在37℃下的CO₂培养箱中培养3小时，并吸出MTT溶液。然后添加100μl/孔的DMSO，并将细胞孵育约5分钟。然后读取OD570 nm(参考650nm)。实验的结果在图2中示出。

实施例7.体内肿瘤模型/抗肿瘤活性方法

将使用体内鼠同系肿瘤模型测试2-S金刚乙胺、2-R金刚乙胺和外消旋金刚乙胺对HPV相关肿瘤的活性。与外消旋金刚乙胺和/或R-金刚乙胺相比，S-金刚乙胺将表现出相当或增强的抗肿瘤活性。质粒构建以及表达HPV16 E5的稳定细胞系

密码子优化的HPV16 E5将被扩增。C-末端或N-末端FLAG标记的全长HPV16 E5和缺失突变体将被克隆到MIP(MSCV-IRES-Puro)或pMSCV-杀稻瘟菌素载体中。所有的构建都将通过DNA测序来确认。为了建立表达HPV16 E5的细胞系，将使用PEI试剂(Sigma-Aldrich)用MIP-HPV16 E5和Ecopac(pIK6.1MCV.ecopac.UTd)共转染HEK293T细胞。然后将来自这些细胞的培养基的逆转录病毒用于感染AT-84-E7、MOC2和CAL-27细胞，并且将通过嘌呤霉素选择经感染的细胞。pMSCV杀稻瘟菌素-HPV16 E5将用于MEER细胞。

小鼠研究

将使用6至8周龄的雌性小鼠进行实验。将使用C3H/HeN小鼠和C57BL/6和BALB/c。将在小鼠右侧皮下注射重悬于100mL PBS中的1.0至5.0x10⁵个AT-84-E7、1.5x10⁵个B16-OVA、5.0x10⁵个4T1或1.0x10⁵个MOC2细胞。对于原位模型，于30mL PBS中的1.0 10⁵个AT-84-E7或1.0 10⁶个4MOSC1将被注射到舌内。一旦肿瘤变得可触知，则将每3天经由i.p.注射用200mg抗PD-L1抗体(Bio XCell)治疗小鼠，每只小鼠总共注射3或4次，或者将每天经由i.p.注射用10mg/kg体重的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺治疗小鼠持续7天。对于过继转移实验，来自OT-1小鼠的脾的单细胞悬浮液将在含有10ng/mL OVA SIINFEKL肽(InvivoGen)和2ng/mL重组IL2(PeproTech)的培养基中培养5天，并且然后4.0 10⁶个细胞将被静脉内注射到携带B16-OVA的小鼠中。将每2至3天用电子游标卡尺测量肿瘤直径，并且使用公式报告为体积；肿瘤体积(mm³)(长宽²)/2。

Miyauchi S.等人,CancerRes.2020年2月15日；80(4):732-746中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。所公开的信息和程序(例如，方案)将用于S-金刚乙胺、R-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺的研究。

实施例8.体外抗病毒方法

将使用体外HPV病毒复制测定来测试金刚乙胺(例如，S-金刚乙胺)对映体针对HPV病毒复制的直接抗病毒活性。与外消旋金刚乙胺或R-金刚乙胺相比，S-金刚乙胺将表现出相当或增强的直接HPV抗病毒活性。

质粒

将使用Snls-Cre表达质粒pCAGGS-nlsCre。将使用pNeo-loxP HPV-18和pNeo-loxPHPV-18E6*I质粒。对于这两种质粒，34-bp loxP位点将位于核苷酸7474上游和核苷酸7473下游的线性HPV-18序列的侧翼。所述载体将携带在细菌和哺乳动物细胞中可选择的新霉素抗性标志基因。在HPV-18E6*I突变体中，主要的E6*I mRNA中的内含子编码序列(核苷酸234-415)将被删除。对于反式互补实验，将使用仅含空载体的逆转录病毒pLC和pLJ HPV-18URR-E6或URR-E6/E7逆转录病毒。每个都表达新霉素抗性基因(Cheng等人1995.Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiatedkeratinocytes.Genes&Dev.9:2335–2349；Chien等人2002.Alternative fates ofkeratinocytestransduced by human papillomavirus type 18E7 during squamousdifferentiation.J.Virol.76:2964–2972)。所有质粒都将通过条带纯化(例如，在CsCl-溴化乙锭平衡密度梯度中)。

HPV-18病毒体回收和滴度测定

如所述(Favre,M.1975.Structural polypeptides of rabbit,bovine,andhuman papillomaviruses.J.Virol.15:1239-1247)，将从第14天或第16天的上皮细胞中回收HPV-18病毒体。为了测定病毒的滴度，病毒原液的等分试样将用DNase I(Invitrogen)消化，然后将在100℃下加热5分钟将其灭活。然后将通过用蛋白酶K消化和苯酚/氯仿提取来纯化包装的病毒DNA。将通过实时定量PCR分析病毒DNA的系列稀释物，使用例如，SYBRGreenER qPCR SuperMix(Invitrogen)以及引物J和K，如Wang HK.等人,Genes Dev.2009年1月15日；23(2):181–194的补充表1中所公开的。作为标准品，纯化的pNeo-LoxP HPV-18质粒DNA将被连续稀释至约40至4x 10⁸个拷贝/孔。将进行一式三份的四十个循环PCR扩增反应(例如，在使用ABI 7900HT的384孔板中)。然后将对数据进行处理(例如，使用SDS2.1软件(Applied Biosystems))。

HPV-18传染性测定

大约1x 10⁵个原代人角质形成细胞(PHK)将被接种不同量的病毒原液，对应于1mLK-SFM中5200、1040、208、42、10、2、1或0的MOI，并孵育过夜。培养基将被更换，并且细胞将再培养4天。然后将提取总RNA(例如，使用Trizol(Invitrogen))。逆转录将在10mg RNA的50-mL反应中进行。然后，如所述(Meyers等人2002.Infectious virions produced from ahuman papillomavirus type18/16genomic DNA chimera.J.Virol.76:4723–4733)，将使1微升的RT反应在35-mL反应混合物中进行30次循环的PCR或巢式PCR扩增(各30次循环)，以产生剪接的HPV-18E6–E7–E1^E4、RNA或b-肌动蛋白mRNA的cDNA片段。将通过在2％琼脂糖凝胶中电泳来解析15微升的每个反应，并且通过溴化乙锭染色来可视化。PHK还将在K-SFM中以各种MOI感染过夜，并发育成筏式培养物，在第14天固定，并如所述进行处理。

然后接受不同量病毒原液的PHK将暴露于不同浓度的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺一段时间(例如，1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)。所公开的信息和程序(例如，方案)将用于S-金刚乙胺、R-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺的研究。

Wang HK.等人,Genes Dev.2009Jan 15；23(2):181–194中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。所公开的信息和程序(例如，方案)将用于S-金刚乙胺、R-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺的研究。

实施例9.体内中枢神经系统(“CNS”)测定

将进行研究以确定R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺对活体动物(例如，小鼠和/或大鼠)CNS的影响。将研究不同剂量的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺，并进行以下测试。接受S-金刚乙胺的动物将在相似剂量的R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺下表现出较低的CNS毒性。另外，与接受R-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺的动物相比，接受S-金刚乙胺的动物在表现出CNS毒性的体征和/或症状之前将能够接受更高剂量的相应药剂。另外，与接受相似剂量的R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的小鼠相比，接受S-金刚乙胺的小鼠将更好地耐受CNS毒性的体征和症状。

a)Rotarod

将使用rotarod系统(例如，Rotor Rod系统，San Diego Instruments)来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。使用Rotor Rod系统将允许通过允许观察动物(例如，小鼠或大鼠)的运动协调来研究可能由R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺引起的CNS毒性。

动物将接受数个剂量(例如，不同剂量)的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在接受一定剂量后的一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，将使用rotarod系统测量潜在的CNS效应。当与R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，接受S-金刚乙胺的动物(例如，小鼠或大鼠)将表现出较少的异常运动协调。Rotor Rod,San Diego Instruments(可在https://sandiegoinstruments.com/product/rotor-rod/获得)；ROTOR-ROD^TM系统,内布拉斯加大学林肯分校(University of Nebraska-Lincoln)教育和人文科学学院(College of Education and Human Sciences)生物医学和肥胖研究核心(Biomedical and Obesity Research Core)(可在https://cehs.unl.edu/borc/rotor-rod％E2％84％A2-system/获得)；Castagne等人,CNS Safety Pharmacology,ReferenceModule in Biomedical Research,2014；Dunham NW和Miya TS(1957)A note on a simpleapparatus for detecting neurological deficit in rats and mice.Journal of theAmerican Pharmaceutical Association,美国药师协会(American PharmaceuticalAssociation)(Baltimore)46:208–209；Bohlen等人,Calibration of rotationalacceleration for the rotarod test of rodent motor coordination,Journal ofNeuroscience Methods(2009)178:10–14；Shiotsuki等人,A rotarod test forevaluation of motor skill learning.J Neurosci Methods.2010年6月15日；189(2):180-5.doi：10.1016/j.jneumeth.2010.03.026.2010年3月30日电子出版.PMID：20359499；以及Rustay NR,Wahlsten D和Crabbe JC(2003)Influence of task parameters onrotarod performance and sensitivity to ethanol in mice.Behavioural BrainResearch 141:237–249中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。所公开的信息和程序(例如，方案)将用于S-金刚乙胺、R-金刚乙胺和/或外消旋金刚乙胺的研究。

b)Photobeam活动系统-家用笼

将使用Photobeam活动系统-家用笼(San Diego Instruments)来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。使用photobeam活动系统-家用笼将允许研究动物的自主活动。如通过photobeam活动系统-家用笼测试所证实，接受R-金刚乙胺的动物将表现出较少的CNS毒性。

动物(例如，小鼠或大鼠)将接受数个剂量(例如，不同剂量)的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在接受一定剂量后的一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，将使用Photobeam活动系统-家用笼测量潜在的CNS效应。当与R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，接受S-金刚乙胺的动物(例如，小鼠或大鼠)将表现出较少的异常自发活动。Photobeam Activity System-Home Cage,San Diego Instruments(可在https://sandiegoinstruments.com/product/pas-homecage/获得)，以及Tatem等人,Behavioral and locomotor measurements using an open field activity monitoringsystem for sk eletal musclediseases.J Vis Exp.2014年9月29日；(91):51785.doi：10.3791/51785.PMID：25286313；PMCID：PMC4672952中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。所述研究将用于分析动物与CNS相关的生理应答(诸如昼夜节律和焦虑)方面，并可能进行修改。

c)Irwin测试/功能观察组合(FOB)

将使用Irwin测试和FOB来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。使用Irwin测试和FOB将实现研究R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的定性效果。如通过Irwin测试/FOB测试所证实，接受R-金刚乙胺的动物将表现出较少的CNS毒性。

动物(例如，小鼠或大鼠)将接受数个剂量(例如，不同剂量(例如，四种不同剂量))的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在接受一定剂量后的一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，将研究动物(例如，小鼠或大鼠)的行为和生理功能。当与R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的异常行为和生理功能以及相似的剂量，并且接受R-金刚乙胺的动物将在表现出对行为和生理功能的可观察效果之前耐受更高的剂量和/或在表现出明显的行为毒性之前耐受更高的剂量。Castagne等人,CNS Safety Pharmacology,Reference Module in BiomedicalResearch,2014；Irwin S(1968),Comprehensive observational assessment:Ia.Asystematic,quantitative procedure for assessing the behavioral andphysiologic state of the mouse,Psychopharmacologia 13:222–257；Esteve J,FarreAJ和Roser R(1988)Pharmacological profile of droxicam,General Pharmacology 19:49–54；Mattson等人,(1996)A performance standard for clinical and functionalobservational battery examination of rats.Journal of the American College ofToxicology,15:239–250；以及Roux等人,Primary observation(Irwin)test in rodentsfor assessing acute toxicity of a test agent and its effects on behavior andphysiological function.Curr.Protoc.Pharmacol.2005年1月1日；第10章:第10.10单元.doi：10.1002/0471141755.ph1010s27.PMID：22294127中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。

d)Morris水迷宫测试

将使用Morris水迷宫测试来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。Morris水迷宫测试将允许通过测试动物的空间学习能力来研究动物(例如，小鼠或大鼠)经历的潜在CNS毒性。如通过Morris水迷宫测试所证实，接受R-金刚乙胺的动物将表现出较少的CNS毒性。

动物(例如，小鼠或大鼠)将接受数个剂量(例如，不同剂量(例如，四种不同剂量))的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在一定剂量后一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，动物将被放入迷宫中。当与R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，接受S-金刚乙胺的动物将表现出对其空间学习能力的较少抑制。Vorhees等人,Morris water maze:procedures for assessing spatial and relatedforms of learning and memory,Nat Protoc1,848–858(2006).https://doi.org/10.1038/nprot.2006.116，以及Castagne等人,CNS Safety Pharmacology,ReferenceModule in Biomedical Research,2014；Morris RGM(1981)Spatial localization doesnot require the presence of local cues,Learning and Motivation 12:239–260中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。

e)脑电图(EEG)扫描

将使用EEG扫描来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。EEG扫描将允许研究动物(例如，小鼠或大鼠)大脑中的电活动。如通过EEG测试所证实，接受R-金刚乙胺的动物将表现出较少的CNS毒性。

动物(例如，小鼠或大鼠)将接受数个剂量(例如，不同剂量(例如，四种不同剂量))的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在接受一定剂量后的一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，将记录来自动物的EEG信号。当与R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，与接受R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的动物相比，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的异常EEG信号。Vogler等人,Low Cost Electrod Assemblyfor EEg Recordings in Mice,Front.Neurosci.,2017年11月14日,https://doi.org/10.3389/fnins.2017.00629；Danhof M和Visser SA(2002)Pharmaco-electroencephalograph y and pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling in drugdevelop ment:focus on preclinical steps.Methods&Findings in Experimen tal&Clinical Pharmacology 24((Suppl D):127–128；Itil TM和ItilKZ(1995)QuantitativeEEG Brain Mapping In Psychotropic DrugDevelopment,Drug Treatment Selection,and Monitoring.AmericanJournal of Therapy 2:359–367；以及Protocol for RatSleep EEG,NeuroDetective International(可在https://www.ndineuroscience.com/userfiles/Rat_Sleep_EEG_Methods.pdf获得)中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。

实施例10.体外中枢神经系统(“CNS”)测定

将进行研究以确定R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺对CNS毒性相关的解剖学和/或生理学变化的影响。当与从接受R-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺的动物获得的组织相比时，从接受S-金刚乙胺的动物(例如，活的或死的)(例如，小鼠和/或大鼠)获得的组织与基线或正常(例如，在可接受的限度内)组织相比将表现出较少的变化。

当与接受相似剂量的R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的动物相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的由CNS毒性引起的生理和/或解剖变化。接受S-金刚乙胺的动物在表现出CNS毒性相关的生理和/或解剖变化之前将能够比接受R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的动物接受更高剂量的S-金刚乙胺。将研究不同剂量的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺，并至少使用以下测试。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。

脑切片/全细胞膜片钳

将使用脑切片/全细胞膜片钳研究来研究与使用R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺相关的CNS毒性。脑切片/全细胞膜片钳电生理学将允许分析神经元细胞中神经计算和病理学的生物物理机制(例如，离子电流)。如通过脑切片/全细胞膜片钳测试所证实，接受R-金刚乙胺的动物将表现出较少的CNS毒性(例如，较少的解剖和/或生理变化)。

动物(例如，小鼠或大鼠)将接受数个剂量(例如，不同剂量(例如，四种不同剂量))的R-金刚乙胺、S-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺。在接受一定剂量后的一段时间(例如，1小时、2小时、3小时、5小时、10小时、1天、2天、3天、5天、7天和/或10天)后，将对动物实施安乐死，并且将获得脑切片并进行分析。可替代地，全细胞膜片钳可以在体内进行。在这种情况下，在接受一定剂量后的一段时间后，将对动物进行分析而不进行安乐死。当与接受R-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的动物相比时，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的不良CNS效应和毒性。特别地，与接受R-金刚乙胺或外消旋金刚乙胺的动物相比，接受S-金刚乙胺的动物将表现出较少的神经计算和病理学的异常生物物理机制(例如，离子电流)。Kodandaramaiah等人,Automated whole-cell patch-clamp electrophysiology ofneurons in vivo,Nat Methods.2012年6月；9(6):585-7.doi：10.1038/nmeth.1993.2012年5月6日电子出版.PMID：22561988；PMCID：PMC3427788中使用和公开的信息和程序通过引用全文特此并入。这些公开内容中列出的信息和方案将用于R-金刚乙胺、S-金刚乙胺和外消旋金刚乙胺的研究。

其他实施方案

应当理解，虽然已经结合其具体实施方式描述了本发明，但前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围来限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。

Claims

1.一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的对映体纯的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其中与外消旋金刚乙胺相关的副作用相比，施用2-S金刚乙胺相关的副作用减少。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中给所述对象施用2-S金刚乙胺的药学上可接受的盐。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述药学上可接受的盐是盐酸盐。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述癌症选自黑色素瘤、头颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌和胃癌中的一种或多种。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述癌症是肉瘤、癌瘤、淋巴瘤或白血病。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述癌瘤是鳞状细胞癌瘤。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述鳞状细胞癌瘤是头颈部鳞状细胞癌瘤。

9.根据权利要求5所述的方法，其中所述癌症选自头颈癌、乳腺癌和黑色素瘤。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述癌症是HPV相关癌症。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述HPV相关癌症与HPV的α属相关。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中来自所述对象的一种或多种癌细胞表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述HPV蛋白是HPV E5HPV E5蛋白。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述HPV E5蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV 66和HPV 69。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述HPV蛋白是来自HPV 16的E5。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述HPV蛋白是来自HPV 18的E5。

17.一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括：

(a)在来自所述对象的样品中检测表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白的癌细胞；和

(b)向所述对象施用治疗有效量的2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述癌症与HPV的α属相关。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述HPV蛋白是E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69。

21.根据权利要求17-18中任一项所述的方法，其中所述癌症选自头颈癌、粘膜鳞状细胞癌瘤、皮肤鳞状细胞癌瘤、肝癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和肛门癌。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述另外的抗癌剂选自：卡铂、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、紫杉醇、培美曲塞、洛莫司汀、替莫唑胺、达卡巴嗪及其组合。

24.根据权利要求22所述的方法，其中所述另外的抗癌剂是免疫疗法。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述另外的抗癌剂是免疫检查点抑制剂。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂靶向以下中的一种或多种：CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA和IDO。

27.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自：伊匹单抗、纳武利尤单抗、派姆单抗、阿替利珠单抗、阿维单抗、度伐鲁单抗、曲美木单抗、西米普利单抗及其组合。

28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括对所述对象进行放射疗法、手术或其组合。

29.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

30.一种治疗需要治疗的对象的癌前HPV病变的方法，包括施用治疗有效量的金刚乙胺。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述HPV病变与HPV的α属相关。

32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述金刚乙胺是外消旋混合物。

33.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述金刚乙胺是纯化的2-S金刚乙胺。

34.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述金刚乙胺是纯化的2-R金刚乙胺。

35.根据权利要求30-34中任一项所述的方法，其中所述HPV癌前病变是子宫颈、皮肤、尿道、鼻腔、鼻窦、喉、气管支气管粘膜或口腔的病变。

36.根据权利要求30-35中任一项所述的方法，其中所述HPV癌前病变表达选自E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种的一种或多种HPV蛋白。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69中的一种或多种。

38.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述金刚乙胺通过局部、口服、皮下或肠胃外施用。

39.一种治疗或预防家禽的禽流感的方法，所述方法包括施用治疗有效量的纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述禽流感是H5N1。

41.根据权利要求3-29中任一项所述的方法，其中与外消旋金刚乙胺或对映体纯的2-R金刚乙胺相关的副作用相比，施用2-S金刚乙胺相关的副作用减少。

42.一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的对映体纯的2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

43.根据权利要求42所述的方法，其中与外消旋金刚乙胺或2-S金刚乙胺相关的副作用相比，施用纯2-R金刚乙胺相关的副作用减少。

44.根据权利要求42或43所述的方法，其中给所述对象施用纯2-R金刚乙胺的药学上可接受的盐。

45.根据权利要求42或44所述的方法，其中所述药学上可接受的盐是盐酸盐。

46.根据权利要求42-45中任一项所述的方法，其中所述癌症选自黑色素瘤、头颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌和胃癌中的一种或多种。

47.根据权利要求42-45中任一项所述的方法，其中所述癌症是肉瘤、癌瘤、淋巴瘤或白血病。

48.根据权利要求47所述的方法，其中所述癌瘤是鳞状细胞癌瘤。

49.根据权利要求48所述的方法，其中所述鳞状细胞癌瘤是头颈部鳞状细胞癌瘤。

50.根据权利要求46所述的方法，其中所述癌症选自头颈癌、乳腺癌和黑色素瘤。

51.根据权利要求42-50中任一项所述的方法，其中所述癌症是HPV相关癌症。

52.根据权利要求42-51中任一项所述的方法，其中来自所述对象的一种或多种癌细胞表达人乳头瘤病毒(HPV)蛋白。

53.根据权利要求51所述的方法，其中所述HPV相关癌症与HPV的α属相关。

54.根据权利要求51或53所述的方法，其中所述HPV蛋白是HPV E5蛋白。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述HPV E5蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV58、HPV 66和HPV 69。

56.根据权利要求55所述的方法，其中所述HPV蛋白是来自HPV 16的E5。

57.根据权利要求55所述的方法，其中所述HPV蛋白是来自HPV 18的E5。

58.一种治疗对象的癌症的方法，所述方法包括：

(b)向所述对象施用治疗有效量的纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述HPV蛋白与HPV的α属相关。

60.根据权利要求59所述的方法，其中所述HPV蛋白是E5、E6或E7 HPV蛋白中的一种或多种。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述HPV E5、E6或E7蛋白来自一种或多种HPV亚型，所述亚型选自HPV 6、HPV 11、HPV 16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 56、HPV 58、HPV 66和HPV 69。

62.根据权利要求58-61中任一项所述的方法，其中所述癌细胞来自选自头颈癌、粘膜鳞状细胞癌瘤、皮肤鳞状细胞癌瘤、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌和肛门癌的癌症。

63.根据权利要求42-62中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括施用另外的抗癌剂。

64.根据权利要求63所述的方法，其中所述另外的抗癌剂选自：卡铂、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、紫杉醇、培美曲塞、洛莫司汀、替莫唑胺、达卡巴嗪及其组合。

65.根据权利要求63所述的方法，其中所述另外的抗癌剂是免疫疗法。

66.根据权利要求63所述的方法，其中所述另外的抗癌剂是免疫检查点抑制剂。

67.根据权利要求66所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂靶向以下中的一种或多种：CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA和IDO。

68.根据权利要求66或67所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自：伊匹单抗、纳武利尤单抗、派姆单抗、阿替利珠单抗、阿维单抗、度伐鲁单抗、曲美木单抗、西米普利单抗及其组合。

69.根据权利要求42-68中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括对所述对象进行放射疗法、手术或其组合。

70.根据权利要求42-69中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

71.根据权利要求42-70中任一项所述的方法，其中与外消旋金刚乙胺或纯2-S金刚乙胺相关的副作用相比，施用纯2-R金刚乙胺相关的副作用减少。

72.一种组合物，包含：

纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或外消旋金刚乙胺或其药学上可接受的盐；以及

一种或多种免疫检查点抑制剂。

73.根据权利要求72所述的组合物，其中所述一种或多种免疫检查点抑制剂包括CTLA-4、PD-1、PD-L1、BTLA、LAG-3、A2AR、TIM-3、B7-H3、VISTA、IDO、或其任何组合。

74.根据权利要求72所述的组合物，其中所述纯2-R金刚乙胺或其药学上可接受的盐、纯2-S金刚乙胺或其药学上可接受的盐、或外消旋金刚乙胺或其药学上可接受的盐被配制用于注射。