WO2023140355A1 - 癌治療薬 - Google Patents
癌治療薬 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2023140355A1 WO2023140355A1 PCT/JP2023/001710 JP2023001710W WO2023140355A1 WO 2023140355 A1 WO2023140355 A1 WO 2023140355A1 JP 2023001710 W JP2023001710 W JP 2023001710W WO 2023140355 A1 WO2023140355 A1 WO 2023140355A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- cancer
- ags8
- cells
- present
- administration
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 86
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 72
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 31
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 30
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 29
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 claims description 28
- 208000035614 Aicardi-Goutieres syndrome 8 Diseases 0.000 claims description 21
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 claims description 13
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 101100066983 Rattus norvegicus Fndc1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 60
- 101000913655 Rattus norvegicus Fibronectin type III domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 44
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 22
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 18
- 210000000064 prostate epithelial cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 8
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 8
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 8
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 8
- -1 alkali metal salts Chemical class 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 7
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 6
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical group 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 101000913643 Homo sapiens Fibronectin type III domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000004337 Salivary Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- RWRDJVNMSZYMDV-SIUYXFDKSA-L (223)RaCl2 Chemical compound Cl[223Ra]Cl RWRDJVNMSZYMDV-SIUYXFDKSA-L 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N Estradiol Cypionate Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H](C4=CC=C(O)C=C4CC3)CC[C@@]21C)C(=O)CCC1CCCC1 UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N 0.000 description 1
- 208000004413 Eyelid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010050497 Eyelid tumour Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100026546 Fibronectin type III domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021042 Hypopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010056305 Hypopharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 1
- 239000012741 Laemmli sample buffer Substances 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010031096 Oropharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010057444 Oropharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012193 PureLink RNA Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- UVIQSJCZCSLXRZ-UBUQANBQSA-N abiraterone acetate Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@@H](CC4=CC[C@H]31)OC(=O)C)C=C2C1=CC=CN=C1 UVIQSJCZCSLXRZ-UBUQANBQSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000009167 androgen deprivation therapy Methods 0.000 description 1
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000007469 bone scintigraphy Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 201000000787 conjunctival cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000017903 conjunctival tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- WXCXUHSOUPDCQV-UHFFFAOYSA-N enzalutamide Chemical compound C1=C(F)C(C(=O)NC)=CC=C1N1C(C)(C)C(=O)N(C=2C=C(C(C#N)=CC=2)C(F)(F)F)C1=S WXCXUHSOUPDCQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000010842 high-capacity cDNA reverse transcription kit Methods 0.000 description 1
- 102000053715 human FNDC1 Human genes 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 201000006866 hypopharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000024458 lacrimal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000029691 metastatic malignant neoplasm in the lymph nodes Diseases 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M methanesulfonate group Chemical class CS(=O)(=O)[O-] AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091054042 miR-1207 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 208000037830 nasal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000013152 negative regulation of cell migration Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 208000025303 orbit neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000000890 orbital cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 201000006958 oropharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003049 pelvic bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000002628 peritoneum cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010379 pull-down assay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 201000000746 sebaceous basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000018964 sebaceous gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000037968 sinus cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M toluenesulfonate group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)[O-])C LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940066799 xofigo Drugs 0.000 description 1
- 229940085728 xtandi Drugs 0.000 description 1
- 229940051084 zytiga Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
- A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Definitions
- the present invention relates to a cancer drug containing a compound having a specific structural formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof. More specifically, it relates to a therapeutic drug for prostate cancer.
- prostate cancer is a cancer found in elderly men. From a global perspective, prostate cancer is a cancer with a high incidence rate, especially in Europe and the United States, and in the United States, the number of morbidity and mortality among men's cancers ranks high. Prostate cancer was originally not a common cancer in Japan, but its prevalence rate has increased rapidly with the aging of the population. According to recent statistics (2018 National Cancer Research Center Incidence Data), prostate cancer is the number one cancer prevalence among Japanese males, and it is expected to continue to increase in the future.
- Treatment methods for prostate cancer include “surgical therapy”, “radiation therapy”, and “hormone therapy”.
- hormone therapy is a treatment method used at any stage. Since many prostate cancers proliferate under the influence of male hormones (androgens) secreted from the testis and adrenal glands, this treatment aims to suppress the proliferation of prostate cancer cells by suppressing the secretion and action of androgens.
- prostate cancer becomes hormone therapy resistant. Although it varies depending on the time of initiation of treatment and the stage of progression of prostate cancer, the average duration of the effect of the first hormone treatment is said to be 3 years. Cancer cells that have become hormone-insensitive tend to progress to invasion and metastasis. Prostate cancer is particularly prone to metastasis to lymph nodes and bones (especially the spinal column and pelvic bones) (this is also called "metastatic prostate cancer"), and although it depends on the site of metastasis, it is likely to be difficult to control.
- the 5-year recurrence-free survival rate is 20% (5-year recurrence rate 80%) and the 5-year survival rate is 50% (mortality rate 50%) (see The Lancet Oncology (2013), 14, 149-158). Therefore, there is a need for effective therapeutics for the treatment of metastatic prostate cancer.
- expression of Activator of G-protein signaling 8 (hereinafter sometimes referred to as "AGS8") is found in prostate cancer, and its expression level is higher in advanced cancer and metastatic prostate cancer, and the presence or absence of expression is reported to correlate with life prognosis (see Non-Patent Document 1).
- AGS8-G ⁇ the interaction between AGS8 and the G protein ⁇ subunit (hereinafter sometimes referred to as "AGS8-G ⁇ ”) plays an extremely important role in hypoxia-induced apoptosis of cardiomyocytes, and have reported that inhibiting this interaction could be a new approach to protect the myocardium from ischemic damage (see Non-Patent Document 2).
- peptides designed to inhibit the AGS8-G ⁇ interaction have been reported to inhibit vascular endothelial growth factor (VEGF)-induced angiogenesis (see Non-Patent Document 3).
- VEGF vascular endothelial growth factor
- Non-Patent Document 1 shows that AGS8 is expressed at a high rate in prostate cancer, especially metastatic prostate cancer
- Non-Patent Document 3 suggests that the interaction between AGS8 and G ⁇ plays an extremely important role in the expression of AGS8 function, but no specific treatment method for prostate cancer has been shown so far.
- peptides that inhibit the AGS8-G ⁇ interaction such as those described in Non-Patent Document 3, have a problem that they are not suitable as therapeutic agents because of their low in vivo stability. Accordingly, an object of the present invention is to provide a therapeutic drug for cancer that suppresses cancer cell growth by inhibiting the AGS8-G ⁇ interaction.
- the present inventors considered AGS8 to be a new target for cancer therapy, screened for compounds that inhibit the association of AGS8-G ⁇ , and examined their efficacy in detail. As a result, the inventors have found that a specific compound has an effect of inhibiting cancer cell growth, and have completed the present invention. That is, the present invention has been made to solve the above-described problems, and embodiments of the present invention may include the following configurations.
- a therapeutic agent for cancer comprising a compound represented by formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
- the cancer therapeutic drug according to (1) which further contains a pharmaceutically acceptable excipient.
- the cancer therapeutic drug according to (1) or (2), wherein the cancer is prostate cancer.
- the cancer therapeutic drug according to any one of (1) to (3), wherein the cancer is metastatic prostate cancer.
- the cancer therapeutic drug according to any one of (1) to (4), wherein the cancer is accompanied by increased expression levels of AGS8 compared to normal human prostatic epithelial cells.
- the cancer therapeutic drug of the present invention it is possible to inhibit the differentiation, proliferation and migration of cancer cells, and to specifically suppress the proliferation of cancer cells.
- it is effective for the treatment of prostate cancer, particularly androgen-independent prostate cancer, which is resistant to hormone therapy.
- androgen-independent cancers are metastatic, they are effective in treating metastatic prostate cancer.
- the therapeutic drug for cancer of the present invention has a mechanism of action that inhibits the association of AGS8-G ⁇ , it is particularly effective against cancer cells expressing AGS8 among androgen-independent metastatic prostate cancers.
- the cancer therapeutic agent of the present invention has low toxicity and less burden on patients.
- various administration methods can be selected.
- manufacturing costs can be kept low unlike biopharmaceuticals.
- FIG. 3 shows the results of confirming the inhibition of AGS8-G ⁇ subunit association by the therapeutic drug for cancer of the present invention.
- FIG. 1 shows cytotoxicity of the cancer therapeutic drug of the present invention in PC-3 and DU-145 cells.
- FIG. 3 shows cell viability in DU-145 cells by the cancer therapeutic agent of the present invention.
- FIG. 2 shows inhibition of cell migration by the cancer therapeutic agent of the present invention in DU-145 cells.
- FIG. 1 shows the in vivo tumorigenesis inhibitory effect of the cancer therapeutic agent of the present invention.
- a trimeric G protein forms a heterotrimer consisting of three subunits ⁇ , ⁇ , and ⁇ , functions as a molecular switch in vivo, and plays an important role in physiological regulation.
- the G ⁇ subunit and the G ⁇ subunit are stably linked, and the G ⁇ complex functions as one subunit.
- Trimeric G proteins are activated by cell surface G protein-coupled receptors (GPCRs) and convert various external stimuli recognized by GPCRs into intracellular signals.
- GPCRs cell surface G protein-coupled receptors
- G proteins were considered to be molecular switches that are activated by receptors that recognize hormones, drugs, physical stimuli, etc., but in recent years, it has become clear that proteins other than receptors activate G proteins, and this functions as a pathophysiological regulation mechanism.
- One of the proteins is the Activator of G-protein signaling 8 (AGS8).
- the drug for treating cancer of the present invention contains a compound represented by the following general formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof. It is preferable to contain an effective amount of a compound represented by the following general formula or a salt thereof.
- AGS8 inhibitor the compound represented by the following general formula may be referred to as "AGS8 inhibitor”.
- AGS8 inhibitor it may have a substituent as long as the above basic skeleton is maintained. The number of substituents may be 1 or more. When having two or more substituents, the substituents may be the same or different.
- a pharmaceutically acceptable salt is one that is at least suitable for human use without causing excessive toxicity, irritation, or allergic reactions. Any salt that does not impair the effects of the present invention may be used, such as basic salts such as alkali metal salts and alkaline earth metal salts, organic acid salts such as hydrochlorides, sulfates, nitrates, acetates, citrates, tartrates, methanesulfonates, and toluenesulfonates, and salts with amino acids.
- basic salts such as alkali metal salts and alkaline earth metal salts
- organic acid salts such as hydrochlorides, sulfates, nitrates, acetates, citrates, tartrates, methanesulfonates, and toluenesulfonates, and salts with amino acids.
- the above compounds and salts thereof can be produced by known methods, and commercially available products can be obtained and used. It is preferable if one conforming to the Japanese Pharmacopoeia can be used. Since it can be synthesized by organic synthesis, manufacturing costs can be kept low unlike biopharmaceuticals.
- the cancer therapeutic drug of the present invention is a low-molecular-weight compound, it is stable in vivo.
- Peptides designed to inhibit the interaction between AGS8 and G ⁇ described in Non-Patent Document 3 are easily degraded by enzymes in the body when inoculated, and are not as effective as expected as a drug.
- cell membranes play a role as a barrier that separates the inside and outside of cells, and biopolymers such as proteins and nucleic acids, as well as macromolecules, are highly hydrophilic and cannot permeate cell membranes. Therefore, it is generally not easy to introduce arbitrary substances into cells for medical purposes.
- transfection is used as a method of delivering proteins into cells.
- Various transfection reagents are available to meet various conditions such as the type of cells to be introduced and the type of biomolecules to be introduced.
- Non-Patent Document 3 a transfection reagent called PLUSin (Polyplus) is used to deliver peptides to cells, but the transfection reagent used for peptides is based on lipophilic vesicles. This reagent is cell membrane toxic and may be highly toxic to cells.
- introduction of a sample into cells using a transfection reagent requires optimization of various conditions such as the number of reagents and target cells to be introduced. In in vivo administration, it is difficult to obtain uniform introduction conditions, resulting in non-uniformity in sample introduction.
- the cancer therapeutic drug of the present invention is a low-molecular-weight compound, it easily passes through cell membranes and is taken up into cells. Since no transfection reagent is required, there is no need to worry about cell damage or toxicity due to reagents.
- the subjects of administration of the cancer therapeutic agent of the present invention are humans and non-human mammals for which cancer treatment is desired or required.
- Non-human mammals are, for example, monkeys, pigs, cows, horses, goats, sheep, dogs, cats, mice, rats, guinea pigs, hamsters, etc., and include pet animals, farm animals, and laboratory animals.
- Preferred administration subjects include humans.
- the therapeutic drug for cancer of the present invention contains the above AGS8 inhibitor as an active ingredient, and if necessary, is formulated by mixing with non-toxic and inert pharmaceutically acceptable excipients such as solid, semi-solid or liquid diluents, dispersants, fillers and carriers. Furthermore, stabilizers, preservatives, pH adjusters, binders, disintegrants, surfactants, lubricants, fluidity enhancers, corrigents, coloring agents, flavor preservatives, media, physiological saline, and agents having other medicinal effects may be contained as additives within the range that does not impair the effects of the present invention. ⁇ Dosage form and dosage>
- the dosage form of the drug for treating cancer of the present invention is not particularly limited, and examples include formulations for oral administration (tablets, coated tablets, powders, granules, capsules, liquid formulations, etc.), formulations for respiratory tract administration, formulations for intraperitoneal administration, formulations for intravenous administration, injections, suppositories, patches, ointments, etc., but formulations for oral administration, formulations for administration through the respiratory tract, or formulations for intravenous administration are preferred.
- Preparations for intravenous administration include preparations for intravenous injection and preparations for intravenous infusion. In humans, formulations for oral administration or intravenous administration are preferred.
- the dosage of the cancer therapeutic drug of the present invention can be appropriately adjusted in consideration of the purpose of use, the subject of administration, the sex, age, body weight, stage of cancer progression, etc. of the subject of administration, but when administered to humans, it is preferable that the dose of the AGS8 inhibitor is 1 to 10 mg/kg, preferably 3 to 10 mg/kg, based on the body weight of the patient. Within the above range, the effects of the present invention are likely to be exhibited, and the toxicity is low, resulting in few side effects. As the administration regimen, the amount within the above range may be administered once daily, or intermittently administered every 1 to 2 days. Since the dosage varies depending on various conditions, there are cases where a dosage and frequency of administration that are less than the above range are sufficient, and there are also cases where a dosage and frequency of administration that exceed the above range are necessary.
- the therapeutic drug for cancer of the present invention may be administered in combination with other therapeutic drugs for cancer.
- it may be administered in combination with oral cancer therapeutic agents Xtandi (registered trademark) and Zytiga (registered trademark), injection drugs Taxotere (registered trademark) and Jebutana (registered trademark), and bone metastasis therapeutic agent Xofigo (registered trademark).
- Concomitant administration means administration at the same time as administration of the therapeutic drug for cancer of the present invention, or administration before or after administration of the therapeutic drug for cancer of the present invention.
- the therapeutic drug for cancer of the present invention and the other therapeutic drug for cancer described above can be mixed to form one preparation.
- the therapeutic drug for cancer of the present invention can be used for, for example, prostate cancer, malignant melanoma, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, lung cancer (including small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung and squamous cell carcinoma of the lung), peritoneal cancer, hepatocellular carcinoma, gastric or stomach cancer (including gastrointestinal cancer), pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, liver cancer, breast cancer Cancer, colon cancer, colorectal cancer, endometrial cancer, uterine cancer, salivary gland cancer, kidney or renal cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, eyelid tumor (including sebaceous gland cancer and basal cell carcinoma), conjunctival tumor, orbital tumor (including lacrimal gland tumor), intraocular tumor (including retinoblastoma and choroidal malignant melanoma), malignant lymphoma, metastatic tumor of the eye, or various types
- Androgen-independent prostate cancer refers to cancer that has acquired resistance (tolerance) after a certain period of hormone therapy (androgen deprivation therapy) from cancers that are androgen-dependent.
- hormone therapy androgen deprivation therapy
- prostate cancer-specific antigen value e.g., PSA value
- the cancer-specific antigen value measured at intervals of 4 weeks or more is 25% or more from the lowest value and the increase is a specific value (e.g., 2.0 ng/mL) or more
- the cancer is judged to be resistant.
- androgen-independent prostate cancer is determined when the PSA value is 25% or more from the lowest value and the increase is 2.0 ng/mL or more.
- T tumor
- N nodes
- M metastasis
- the cancer therapeutic drug of the present invention has a mechanism of action that inhibits the association of AGS8-G ⁇ , it is effective against androgen-independent prostate cancers in which the expression level of AGS8 is elevated against normal human prostate epithelial cells. Metastasis is often observed in androgen-independent cells, but in the present specification, metastatic prostate cancer does not matter as long as the expression level of AGS8 is elevated relative to normal human prostate epithelial cells.
- the expression level of AGS8 is not particularly limited as long as the expression level of AGS8 can be quantified in specimens collected by biopsy or resected by surgery, but for example, quantitative real-time (qRT) PCR, microarray, etc. can be used.
- qRT-PCR can be performed, for example, using commercially available reagents and equipment. Specifically, mRNA is extracted from cells and cDNA is synthesized. Using the synthesized cDNA as a template, qRT-PCR can be performed using a real-time PCR device. Primer sequences of 5'-TTCCGTAACCCTCTCCCG-3' (sense) and 5'-AACCCACGATCAAGGTCCAC-3' (antisense) can be used.
- the cancer has an elevated expression level of AGS8 according to the present invention. It is preferably 5 fold or more. More preferably, it should be 100 fold or more.
- a pilot library was obtained from the RIKEN compound bank NP Depo, and screened for compounds having inhibitory activity on the association between AGS8 and G ⁇ subunits to identify the AGS8 inhibitor of the present invention.
- the identified AGS8 inhibitor was purchased from overseas suppliers (Asinex ( Russia), Sundia MediTech Company (China, Shanghai)) through Namiki Shoji Co., Ltd. and used for the test. (cell)
- PC-3 derived from bone metastatic prostate cancer cells
- DU-145 derived from brain metastatic prostate cancer cells
- Monolayer culture was performed using RPMI-1640 medium (Life Technologies, Inc.) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS; GIBCO), 100 U/mL penicillin, and 100 ⁇ g/mL streptomycin (both GIBCO) in a humidified incubator at 5% CO 2 , 95% O 2 and 37°C.
- FBS fetal bovine serum
- streptomycin both GIBCO
- PrEC Human normal prostate epithelial cells
- AGS8 expression levels in PC-3, DU-145 and PrEC were measured using quantitative real-time (qRT) PCR. Specifically, total RNA was extracted from cultured cell suspensions using the PureLink RNA Mini Kit (Ambion), reverse transcribed using the High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher Scientific), and qRT-PCR analysis was performed. qRT-PCR was performed using Step One Plus real-time PCR system (Applied Biosystem) according to the protocol of TB Green Premix Ex Taq II (Takara Bio). Specific PCR primers were designed as follows. The following primer sequences were used for human AGS8 real-time PCR.
- a gene encoding AGS8 (C-terminal 372 amino acids of AGS8) was inserted into pGEX-4T vector (Amersham Biosciences) and expressed as a GST-tagged fusion protein in E. coli (Esche-richia coli BL21, Amersham Biosciences). After cell disruption, the eluted GST-AGS8 was affinity purified using Glutathione-Sepharose 4B. The G protein ⁇ 1 ⁇ 2 subunit used was synthesized in insect cells.
- the cancer therapeutic agent of the present invention 100 nM GST-AGS8, 10 nM G ⁇ 1 ⁇ 2, the cancer therapeutic agent of the present invention (final concentration 16 ⁇ g/ml), and a compound that does not inhibit the association of AGS8-G ⁇ subunits (final concentration 16 ⁇ g/ml) were added, and the mixture was added at 4° C. in 300 ⁇ l reaction solution (20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.6 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 70 mM M NaCl, 0.01% Lubrol, 10 ⁇ m GDP, and 10 mM MgCl2) for 18 hours.
- 300 ⁇ l reaction solution 20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.6 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 70 mM M NaCl, 0.01% Lubrol, 10 ⁇ m GDP, and 10 mM MgCl2
- Glutathione-Sepharose 4B was added to the reaction tube to adsorb GST-AGS8C for 1 hour. Glutathione-Sepharose 4B was washed three times with the reaction solution to remove non-specific adsorption, and the adsorbed proteins were eluted with Laemmli sample buffer. All samples were loaded into wells and separated by 10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis.
- FIG. Input is a 1/50 volume mixed reaction solution containing GST-AGS8 and G ⁇ 1 ⁇ 2.
- GST-AGS8 co-precipitated G ⁇ subunits, but in the presence of 16 ⁇ g/ml of the cancer therapeutic drug of the present invention (described as AGS8 inhibitor in FIG. 2), the amount of G ⁇ subunits that precipitated on the resin decreased.
- AGS8 inhibitor in FIG. 2
- a compound that did not inhibit the association of AGS8-G ⁇ subunits at the same concentration referred to as a control group in FIG. 2 did not affect coprecipitation of G ⁇ subunits by GST-AGS8. Therefore, it was revealed that the cancer therapeutic agent of the present invention inhibits the association of AGS8-G ⁇ subunits. (Cytotoxicity test)
- the enzyme LDH is eluted into the culture medium. Therefore, the cytotoxicity of the therapeutic agent for cancer of the present invention was evaluated with the concentration of LDH eluted under conditions under which almost all cells would be damaged as 100%.
- HUVEC or DU-145 cells were seeded in a 96-well culture plate at a density of 6,000 cells/well. After overnight culture, the cells were incubated for 48 hours in medium containing the cancer therapeutic agent of the present invention (1, 3, 10, 13, 100 ⁇ g/mL). For cytotoxicity, the amount of LDH released into the medium was evaluated using an LDH assay kit (Dojindo Laboratories). Results were quantified colorimetrically at absorbance at 450 nm using SpectraMax M3 (Molecular Devices).
- DU-145 cells were cultured in 96-well plates in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and treated with different doses of the cancer therapeutic agent of the present invention. After 48 hours of treatment, cell viability was assessed using the Cell Counting Kit-8 assay. Shown as mean ⁇ SEM of 6 experiments.
- DU-145 suspended at 5 ⁇ 10 4 cells/200 ⁇ l were seeded into 8 ⁇ m pore (BD Biosciences) fibronectin-coated transwell inserts pretreated with 3% BSA.
- Cell migration was induced by adding 150 ng/ml PDGF-BB to the lower chamber of the 24-well plate. After 18 hours, a cotton swab was used to remove any remaining cells on the upper surface of the filter.
- Transwell inserts were fixed with 4% PFA and stained with 1% crystal violet. As a control, phosphate-buffered saline was added. A digital microscope image was taken of the underside of each transwell insert at random and the stained cells were counted. Data were performed 7 times independently and expressed as mean ⁇ SEM. (Analyzed by one-way analysis of variance (ANOVA))
- mice Male BALB/c nude mice (5 weeks old) (Nihon SLC Co., Ltd.) were obtained.
- DU-145 cells (4 ⁇ 10 6 cells/200 ⁇ L) were suspended in serum-free RPMI-1640 medium, mixed with Matrigel (1:1 ratio) and implanted subcutaneously in the flank region of mice.
- the therapeutic agent for cancer of the present invention was suspended in 0.9% physiological saline and subcutaneously injected into the tumor at 10 ⁇ g and 30 ⁇ g each day.
- the DU-145 cell-implanted portion was dissected every other week, the tumor was taken out, and the tumor volume and weight were measured.
- FIG. 6(A) shows representative tumors after administration of 0.1% physiological saline as a control and administration of 10 ⁇ g and 30 ⁇ g of the therapeutic agent for cancer of the present invention for 1 to 4 weeks.
- FIG. 6(B) shows the tumor volume after administration of the control and the cancer therapeutic agent of the present invention for 1 to 4 weeks, and (C) shows the tumor weight.
- Statistical differences between treatment groups at each time point were detected by two-way analysis of variance (ANOVA) and Tukey's correction test. Controls showed tumor growth from 1 to 4 weeks.
- administration of the therapeutic agent for cancer of the present invention significantly (**p ⁇ 0.01) suppressed tumor volume and weight. ( Figure 6 (A) to (C)). No abnormalities in appearance were observed in any of the mice during the test, demonstrating the safety of the present invention.
- a compound represented by general formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be applied to the treatment of cancer.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
【課題】癌細胞の増殖を抑える癌治療薬を提供すること。 【解決手段】一般式(1)で表される化合物又はその医薬的に許容される塩を含有してなる癌治療薬。
Description
本発明は、特定の構造式を有する化合物又はその医薬的に許容される塩を含有してなる癌治療薬に関する。より具体的には前立腺癌治療薬に関する。
癌が日本人の死因の第一位になってから久しく、現在では年間30万人以上の国民が、癌で死亡している。また、生涯のうちに癌にかかる可能性は、男性の2人に1人、女性の3人に1人と推測されている。世界レベルで見ても癌による死亡者数は増加しており、世界保健機構(WHO)の外部研究組織である国際がん研究機関(IARC)によれば、癌による年間死者数は2030年までに、08年からほぼ倍増の1330万人に達すると予測している。
癌の中でも前立腺癌は、高齢男性にみられる癌である。世界的にみると、前立腺癌は特に欧米で発症頻度の高い癌であり、アメリカにおいては男性の癌の中での罹患数及び死亡者数は上位を占める。日本において前立腺癌は、もともとあまり多く見られる癌ではなかったが、人口の高齢化と共にその罹患率は急激に増加し、最近の統計(国立研究開発法人国立がん研究センター 2018年全国登録罹患データ)では、邦人男性癌の罹患数1位となっており、今後も増加していくと予想される。
前立腺癌の治療法としては、「手術療法」「放射線療法」「ホルモン療法」などが挙げられる。その中で「ホルモン療法」はどのステージにおいても使われる治療法である。これは、前立腺癌の多くが、精巣及び副腎から分泌される男性ホルモン(アンドロゲン)の影響を受けて増殖しているため、アンドロゲンの分泌や働きを抑えることによって、前立腺癌細胞の増殖を抑制しようとする治療法である。
このホルモン療法は、癌細胞の増殖がアンドロゲン依存性であるうちは有効であるが、数年もすると、前立腺癌はホルモン療法抵抗性を持つ。治療の開始時期や、前立腺癌の進行ステージによっても異なるが、初回のホルモン治療の平均的な効果持続期間は3年と言われている。そしてホルモン非感受性となった癌細胞は浸潤、転移が進みやすい。前立腺癌は特にリンパ節と骨(特に脊柱と骨盤骨)に転移しやすく(これを、「転移性前立腺癌」ともいう)、転移した部位にもよるが制御が困難となりやすく、5年非再発生存率は20%(5年再発率80%)、5年生存率は50%(死亡率50%)とも言われている(The Lancet Oncology (2013), 14, 149-158参照)。そのため、転移性前立腺癌の治療に有効な治療法が必要とされていた。
ところで、前立腺癌にActivator of G-protein signaling 8(以下、「AGS8」ということもある)の発現が認められ、その発現レベルは進行癌や転移性前立腺癌でより高く、また、発現の有無が生命予後と相関することが報告された(非特許文献1参照)。
ところで、前立腺癌にActivator of G-protein signaling 8(以下、「AGS8」ということもある)の発現が認められ、その発現レベルは進行癌や転移性前立腺癌でより高く、また、発現の有無が生命予後と相関することが報告された(非特許文献1参照)。
一方で発明者らは、これまで、心筋細胞の低酸素誘導アポトーシスにおいてAGS8とG蛋白βγサブユニット(以下、「AGS8-Gβγ」ということもある)の相互作用が極めて重要な役割を果たすことを明らかにし、その相互作用を阻害することは、虚血性損傷から心筋を保護するための新しいアプローチとなり得ることを報告してきた(非特許文献2参照)。あるいは、AGS8-Gβγ相互作用を阻害するように設計されたペプチドは、血管内皮増殖因子(VEGF)誘導性の血管形成を阻害することを報告してきた(非特許文献3参照)。
Dibash K.Das et al., "miR-1207-3p regulates the androgen receptor in prostate cancer via FNDC1/fibronectin", Experimental Cell Research, 2016, 348(2):190-200
Motohiko Sato et al., "Protection of Cardiomyocytes from the Hypoxia-Mediated Injury by a Peptide Targeting the Activator of G-Protein Signaling 8", PLos One, 2014、 9(3) :e91980
Hisaki Hayashi et al., "Activator of G-protein signaling 8 is involved in VEGF-mediated signal processing during angiogenesis", Journal of Cell Science, 2016, 129 (6): 1210-1222
非特許文献1では、前立腺癌、特に転移性前立腺癌においてAGS8が高い割合で発現していることが示され、非特許文献3ではAGS8の機能発現のためにはAGS8とGβγの相互作用が極めて重要な役割を果たすことが示唆されたが、具体的に前立腺癌に対する治療方法はこれまで示されていない。さらに、非特許文献3に記載されたような、AGS8-Gβγ相互作用を阻害するようなペプチドでは、生体内での安定性が低いため、治療薬には適さないという課題があった。
そこで本発明においては、AGS8-Gβγ相互作用を阻害することにより癌細胞の増殖を抑える癌治療薬を提供することを課題とする。
そこで本発明においては、AGS8-Gβγ相互作用を阻害することにより癌細胞の増殖を抑える癌治療薬を提供することを課題とする。
上記課題を解決すべく、本発明者らはAGS8が癌治療における新たな標的となると考え、AGS8-Gβγの会合を阻害する化合物のスクリーニングを行い、その有効性を詳細に検討した。その結果、特定の化合物に、癌細胞の増殖を阻害する効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、上述の課題を解決するためになされたものであり、本発明の実施形態は、以下に挙げる構成を含み得る。
すなわち本発明は、上述の課題を解決するためになされたものであり、本発明の実施形態は、以下に挙げる構成を含み得る。
(1)一般式(1)で表される化合物又はその医薬的に許容される塩を含有してなる、癌治療薬。
(2)さらに、医薬的に許容される賦形剤を含有してなる、(1)に記載の癌治療薬。
(3)前記癌が前立腺癌である、(1)又は(2)に記載の癌治療薬。
(4)前記癌が転移性前立腺癌である、(1)~(3)のいずれか1項に記載の癌治療薬。
(5)前記癌が、ヒト正常前立腺上皮細胞に比べてAGS8の発現レベルの上昇を伴う癌である、(1)~(4)のいずれか1項に記載の癌治療薬。
(3)前記癌が前立腺癌である、(1)又は(2)に記載の癌治療薬。
(4)前記癌が転移性前立腺癌である、(1)~(3)のいずれか1項に記載の癌治療薬。
(5)前記癌が、ヒト正常前立腺上皮細胞に比べてAGS8の発現レベルの上昇を伴う癌である、(1)~(4)のいずれか1項に記載の癌治療薬。
本発明の癌治療薬によれば、癌細胞の分化増殖及び移動を阻害することができ、癌細胞の増殖を特異的に抑制することができる。癌の中でも、前立腺癌、特にホルモン療法が効きにくいアンドロゲン非依存的前立腺癌の治療に有効である。そして、このようなアンドロゲン非依存的な癌は転移性があるため、言い換えると転移性前立腺癌の治療に有効である。さらに、本発明の癌治療薬が、AGS8-Gβγの会合を阻害するという作用機序を有することから、アンドロゲン非依存的な転移性前立腺癌の中でも、AGS8が発現している癌細胞に対して特に有効である。また本発明の癌治療薬は毒性が低く、患者への負担も少ない。また、胃や腸で分解されずに血中へと運ばれるため、様々な投与方法を選択することができ、患者にとって手軽な経口投与方法も採用できるというメリットもある。さらに低分子化合物であるため、バイオ医薬品と異なり製造コストを低く抑えることができる。
以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
<Activator of G-protein signaling 8と癌>
<Activator of G-protein signaling 8と癌>
三量体Gタンパク質は、3つのサブユニットα、β及びγからなるヘテロ三量体を形成し、生体内の分子スイッチとして機能し、生理調節に重要な役割を果たす。サブユニットのうち、GβサブユニットとGγサブユニットは安定的に結びつき、Gβγ複合体が1つのサブユニットとして機能する。三量体Gタンパク質は、細胞表面のGタンパク質共役型受容体(GPCR)によって活性化され、GPCRが認識した様々な外部刺激を細胞内シグナルへと変換する。
従来Gタンパク質は、ホルモンや薬剤、物理刺激などを認識した受容体によって活性化される分子スイッチとされてきたが、近年、受容体以外のタンパク質がGタンパク質を活性化し、これが病態生理調節機構として機能していることが明らかとなってきた。そのタンパク質の1つがActivator of G-protein signaling 8(AGS8)である。
本発明者らの研究によれば、低分子干渉RNA(siRNA)によるAGS8のノックダウンは、血管内皮増殖因子(VEGF)によって誘発される管腔形成及びVEGFによって刺激される細胞の増殖と遊走を阻害した。さらに、AGS8-Gβγ相互作用を阻害するペプチドは、血管内皮増殖因子(VEGF)誘導性の血管形成を阻害した(非特許文献3参照)。このことから、本発明者らはAGS8の機能にはGβγとの会合が重要であることを明らかにした。また、AGS8は、癌細胞の中でも特に前立腺癌細胞に発現しており、特に進行した前立腺癌である転移性前立腺癌細胞に高いレベルで発現しているという報告がある(非特許文献1参照)。そして、進行した前立腺癌はアンドロゲン非依存的となることが多いことが知られている。そこで本発明者らは、AGS8と癌との関係に着目し、スクリーニングによりAGS8を治療標的とする癌治療薬を見出し、本発明を完成させた。具体的には、AGS8が機能を発揮するのに必要なAGS8-Gβγサブユニットの会合を阻害する化合物をスクリーニングし、その有効性を確認した。
<癌治療薬>
<癌治療薬>
本発明の癌治療薬は、下記一般式で表される化合物又はその医薬的に許容される塩を含有している。下記一般式で表される化合物又はその塩を有効量含むことが好ましい。(なお、以降、下記一般式で表される化合物を「AGS8阻害薬」ということもある。)
上記基本骨格が維持されているのであれば、置換基を有していても良い。置換基の数は1又はそれ以上でも良い。置換基を2つ以上有する場合は、当該置換はそれぞれ同一又は異なっていても良い。
医薬的に許容される塩とは、過度な毒性、刺激及びアレルギー反応などを起こすことなく、少なくともヒトへの使用に適したものをいう。本発明の効果を損なわないものであればよく、アルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩などの塩基性塩、塩酸塩・硫酸塩・硝酸塩・酢酸塩・クエン酸塩・酒石酸塩・メタンスルホン酸塩・トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩、アミノ酸との塩であってもよい。
上記化合物及びその塩は、既知の方法により製造でき、また、市販のものを入手して用いることができる。日本薬局方に準拠したものを用いることができれば好ましい。有機合成により合成できるため、バイオ医薬品と異なり製造コストを低く抑えることができる。
本発明の癌治療薬は、低分子化合物であるため、生体内でも安定である。非特許文献3に記載されている、AGS8とGβγの間の相互作用を阻害するように設計されたペプチドでは、接種すると体内の酵素により分解されやすく、薬として期待できるほどの効果が出ない。また、一般的に細胞膜は細胞の内外を隔てるバリアとしての役割を持っており、巨大分子はもちろん、タンパク質や核酸などの生体高分子は、親水性が高いために、細胞膜を透過することができない。そのため、医療目的で、任意の物質を細胞内に導入することは一般的には容易ではない。実験室レベルでは、細胞内にタンパク質を送達する方法としてトランスフェクション法が利用されている。導入する細胞や、導入する目的の生体分子の種類など、多様な条件に対応するために、様々なトランスフェクション試薬が販売されているが、導入効率や細胞傷害や毒性を考慮すると、更なる改良が望まれているのが現状である。
例えば、非特許文献3では、ペプチドを細胞へ送達するためにPLUSin(Polyplus)というトランスフェクション試薬が用いられているが、ペプチドに用いるトランスフェクション試薬は脂質親和性小胞に基づいている。この試薬は細胞膜傷害性があり、細胞に強い毒性を示すことがある。また、トランスフェクション試薬による細胞への試料の導入は、試薬と導入対象細胞の数などの諸条件を最適化することが必要で、最適化条件が揃うことで適当な導入が得られる。生体内投与では、均一な導入条件を得ることが難しく、試料導入に不均一性が生じる。
一方本発明の癌治療薬は、低分子化合物であるため、細胞膜を通過して細胞内に取り込まれやすい。トランスフェクション試薬も不要なため、試薬による細胞傷害や毒性の心配もない。
本発明の癌治療薬の投与対象は、癌の治療が望まれる、又は必要とされるヒト及び非ヒト哺乳動物である。非ヒト哺乳動物とは例えばサル、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどであり、ペット動物、家畜、実験動物を含む。好ましい投与対象としてはヒトが挙げられる。
本発明の癌治療薬は、上記AGS8阻害薬を有効成分として含有し、必要に応じ、非毒性で不活性の医薬的に許容される賦形剤、例えば固体状、半固体状もしくは液状の希釈剤、分散剤、充填剤及び担体と混合することにより、製剤化される。さらに本発明の効果を損なわない範囲において、安定剤、保存剤、pH調整剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料防腐剤、媒質、生理食塩水、別な薬効を有する薬剤が添加剤として含んでいてもよい。
<剤形及び投与量>
<剤形及び投与量>
本発明の癌治療薬の剤形は特に限定されず、経口投与用製剤(錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤など)、経気道投与用製剤、腹腔内投与用製剤、経静脈投与用製剤、注射剤、坐剤、貼付剤、軟膏剤等が例示できるが、経口投与用製剤、経気道投与用製剤又は経静脈投与用製剤が好ましい。経静脈投与用製剤としては、静脈注射製剤や点滴静脈注射製剤が挙げられる。ヒトにおいては経口投与用製剤又は経静脈投与用製剤が好ましい。
本発明の癌治療薬の投与量は、使用目的、投与対象、投与対象の性別、年齢、体重、癌の進行ステージ等を考慮して適宜調製することができるが、ヒトに対して投与する場合は、患者の体重に対してAGS8阻害薬を1回当たり1~10mg/kg、好ましくは3~10 mg/kg含んでいることが好ましい。前記範囲であれば、本発明の効果を奏しやすく、毒性も小さいため副作用が少ない。投与レジメとしては、上記範囲内の量を、1日1回毎日投与してもよく、1日~2日おきに間欠的に投与することが挙げられる。なお、この投与量は、種々の条件で変動するので、上記範囲より少ない投与量や投与回数で充分な場合もあるし、また上記範囲を超えた投与量や投与回数が必要な場合もある。
本発明の癌治療薬を投与する際は、他の癌治療薬と併用投与してもよい。例えば、経口癌治療薬であるイクスタンジ(登録商標)、ザイティガ(登録商標)、注射薬であるタキソテール(登録商標)、ジェブタナ(登録商標)、骨転移治療薬であるゾーフィゴ(登録商標)と併用投与してもよい。
併用投与とは、本発明の癌治療薬の投与と同時、又は本発明の癌治療薬投与の前後に投与することである。あるいは、本発明の癌治療薬と、上記他の癌治療薬を混合して一つの製剤とすることもできる。
<適用対象>
併用投与とは、本発明の癌治療薬の投与と同時、又は本発明の癌治療薬投与の前後に投与することである。あるいは、本発明の癌治療薬と、上記他の癌治療薬を混合して一つの製剤とすることもできる。
<適用対象>
本発明の癌治療薬は、例えば、前立腺癌、悪性黒色腫(メラノーマ)、扁平上皮癌、基底細胞癌、肺癌(小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌が挙げられる)、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌(gastric or stomach cancer)(胃腸癌を含む)、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌(kidney or renal cancer)、外陰部癌、甲状腺癌、眼瞼腫瘍(脂腺癌や基底細胞癌を含む)、結膜腫瘍、眼窩腫瘍(涙腺腫瘍を含む)、眼内腫瘍(網膜芽細胞腫や脈絡膜悪性黒色腫を含む)、悪性リンパ腫、眼部転移性腫瘍が或いは種々のタイプの頭頚部癌(口腔癌、咽頭癌、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、鼻・副鼻腔癌、唾液腺癌、甲状腺癌などを含む)への適用が挙げられる。中でも前立腺癌への適用が好ましく、ホルモン療法が効きにくいアンドロゲン非依存的前立腺癌への適用がより好ましく、さらにアンドロゲン非依存的転移性前立腺癌への適用が好ましい。
アンドロゲン非依存的前立腺癌とは、アンドロゲン依存性を示す癌が、一定期間のホルモン療法(アンドロゲン除去療法)が行われた後に、抵抗性(耐性)を獲得した癌を示す。アンドロゲン非依存的前立腺癌か否かについては、本明細書においては、前立腺癌診療ガイドライン2016年版(日本泌尿器科学会編、メディカルレビュー社)に示される基準に照らし、4週以上空けて測定した癌特異抗原の値(例えば、PSA値)が最低値から25%以上、かつ上昇幅が特定値(例えば、2.0ng/mL)以上である場合に、抵抗性を示す癌と判断する。本明細書において特に言及しない場合には、PSA値が最低値から25%以上、かつ上昇幅が、2.0ng/mL以上である場合に、アンドロゲン非依存的前立腺癌と判断する。
そして、癌がアンドロゲン非依存的になると、病勢の進行により転移が多く認められる。癌の進行度は病期と言われ、一般的にTMN分類(T(tumor):前立腺の癌の状態、N(nodes):リンパ節転移の有無、M(metastasis):遠隔転移)という分類法が使用される。これらは各種画像診断により行われる。本明細書においても、前立腺癌が転移しているか否かは、MRI、CT、そして骨転移が疑われる場合は骨シンチグラフィーの各種画像診断により診断される。
本発明の癌治療薬はAGS8-Gβγの会合を阻害するという作用機序を有することから、アンドロゲン非依存的前立腺癌の中でも、ヒト正常前立腺上皮細胞に対して、AGS8の発現レベルが上昇している癌に対して有効である。なお、アンドロゲン非依存的になると転移が多く認められるが、本明細書においてはヒト正常前立腺上皮細胞に対してAGS8の発現レベルが上昇していれば、転移性前立腺癌か否かは問わない。
AGS8の発現レベルは、生検により採取された、又は手術により切除された検体において、AGS8の発現量が定量できればその方法は特に限定されないが、例えば定量的real-time (qRT) PCRやマイクロアレイ等を用いることができる。qRT-PCRは、例えば市販の試薬と装置を用いて行うことができる。具体的には細胞からmRNAを抽出し、cDNAを合成する。合成したcDNAを鋳型として、リアルタイムPCR装置を用いてqRT-PCRを行うことができる。プライマーの配列は5’-TTCCGTAACCCTCTCCCG-3’ (センス) 、 5’-AACCCACGATCAAGGTCCAC-3’ (アンチセンス)を用いることができる。
癌細胞及びヒト正常前立腺上皮細胞に対してAGS8発現量を測定し、癌細胞のヒト正常前立腺上皮細胞に対するmRNAの発現比率が2fold以上であれば、本発明におけるAGS8の発現レベルが上昇している癌であると言える。好ましくは5fold以上である。さらに好ましくは100fold以上であればよい。
以下に示す実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
(AGS8阻害薬)
(AGS8阻害薬)
理化学研究所化合物バンクNPDepoからパイロットライブラリーを入手し、AGS8とGβγサブユニットの会合阻害活性を有する化合物のスクリーニングに供し、本発明のAGS8阻害薬を特定した。特定したAGS8阻害薬はナミキ商事株式会社を介して、海外のサプライヤー(Asinex(ロシア)、Sundia MediTech Company(中国、上海))から購入し、試験に用いた。
(細胞)
(細胞)
アンドロゲン非依存性転移性癌細胞PC-3(骨転移前立腺癌細胞由来)及びDU-145(脳転移前立腺癌細胞由来)は、医用細胞資源センター(東北大学加齢医学研究所)から入手した。5%CO2、95%O2、37℃の加湿インキュベーター内で、10%胎児ウシ血清(FBS; GIBCO)、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン(いずれもGIBCO)を添加したRPMI-1640培地(Life Technologies、 Inc.)を用いて単層培養した。
ヒトの正常な前立腺上皮細胞(PrEC)は、 ロンザから購入し、10%FBS及び100U/mLペニシリンと100μg/mLストレプトマイシン(いずれもGIBCO)を添加したPrEGM Bullet Kit Medium(ロンザ)で37℃条件下にて培養した。ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)はロンザより入手した。本実施例において、全ての実験において用いた細胞は60%~70%のコンフルエンスまで増殖させた。
(AGS8発現量の確認試験)
(AGS8発現量の確認試験)
PC-3、DU-145 及びPrECにおけるAGS8発現量は、定量的real-time (qRT) PCRを用いて測定した。具体的には、PureLink RNA Mini Kit(Ambion)を使用して培養細胞の懸濁液からTotal RNAを抽出し、High-Capacity cDNA逆転写キット(Thermo Fisher Scientific)を使用して逆転写を行い、qRT-PCR分析を行った。qRT-PCRは、Step One PlusリアルタイムPCRシステム(Applied Biosystem)を用い、TB Green Premix Ex Taq II(タカラバイオ)のプロトコルに従って行った。特定のPCRプライマーは次のように設計された。
ヒトAGS8リアルタイムPCRのプライマー配列は、以下を用いた。
5'-TTCCGTAACCCTCTCCCG-3 '(センス)及び
5'-AACCCACGATCAAGGTCCAC-3'(アンチセンス)
ヒト正常前立腺上皮細胞(PrEC)に対するPC-3及びDU-145のAGS8相対的発現量は、比較Ct値法によって決定された。
ヒトAGS8リアルタイムPCRのプライマー配列は、以下を用いた。
5'-TTCCGTAACCCTCTCCCG-3 '(センス)及び
5'-AACCCACGATCAAGGTCCAC-3'(アンチセンス)
ヒト正常前立腺上皮細胞(PrEC)に対するPC-3及びDU-145のAGS8相対的発現量は、比較Ct値法によって決定された。
その結果を図1に示す。ヒト正常前立腺上皮細胞に比べ、アンドロゲン非依存性転移性癌細胞PC-3は、AGS8が5.7 fold、DU-145が240 fold発現しており、何れの細胞もヒト正常前立腺上皮細胞に対してAGS8の発現レベルが上昇していることが分かる。
(AGS8-Gβγサブユニット会合阻害確認試験)
(AGS8-Gβγサブユニット会合阻害確認試験)
本発明の癌治療薬が、AGS8-Gβγサブユニットの会合を阻害するかをプルダウンアッセイにより確認した。AGS8(AGS8のC端372アミン酸)をコードする遺伝子をpGEX-4T vector (Amersham Biosciences)に組み込み、GSTタグ融合蛋白として大腸菌(Esche-richia coli BL21、 Amersham Biosciences)に発現させた。菌体破壊後、溶出したGST-AGS8をGlutathione-Sepharose 4Bを用いてアフィニティ精製した。G蛋白β1γ2サブユニットは昆虫細胞に合成させたものを用いた。100nMのGST-AGS8、10nMのGβ1γ2、本発明の癌治療薬(最終濃度16μg/ml)およびAGS8-Gβγサブユニットの会合を阻害しない化合物(最終濃度16μg/ml)を添加し、4℃、300μlの反応液中(20mM Tris-HCl、pH7.4、0.6mM EDTA、1mM dithiothreitol、70mM NaCl、0.01% Lubrol、 10μm GDP、and 10mM MgCl2)で18時間反応させた。反応後、Glutathione-Sepharose 4Bを反応チューブ内に加え、1時間GST-AGS8Cを吸着させた。Glutathione-Sepharose 4Bは3回反応液で洗浄し、非特異的吸着を除去し、吸着していた蛋白質をLaemmli サンプルバッファーに溶出した。サンプルは全量をウェルにロードし、10%ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。分離したタンパク質はImmobilon-P PVDFメンブレンに転写し、一次抗体として抗Gβサブユニット抗体(1:1,000; AC-74; Sigma-Aldrich)、二次抗体としてHRP(西洋ワサビペルオキシダーゼ)で標識化し、ImmunoStar LD(Fujifilm Wako Pure Chemical Corp.)を使用して検出、Amersham Imager 600システム(GE Healthcare Life Sciences)を使用して画像を分析した。
その結果を図2に示す。InputはGST-AGS8とGβ1γ2を含む1/50量の混合反応液である。GST-AGS8はGβγサブユニットを共沈降させたが、本発明の癌治療薬(図2ではAGS8阻害薬と記載)16μg/mlの存在下では、レジンに沈降してくるGβサブユニットの量が減少している。一方、同濃度のAGS8-Gβγサブユニットの会合を阻害しない化合物(図2では対照群と記載)は、GST-AGS8によるGβサブユニットの共沈降に影響を与えなかった。したがって、本発明の癌治療薬はAGS8-Gβγサブユニットの会合を阻害することが明らかとなった。
(細胞毒性試験)
(細胞毒性試験)
細胞が薬剤の毒性により破壊されると、酵素であるLDHが培養液中に溶出される。そこで、ほとんどすべての細胞が傷害を受けるであろう条件で溶出されるLDHの濃度を100%として、本発明の癌治療薬の細胞毒性を評価した。
HUVEC又はDU-145細胞を96ウェル培養プレートに6,000細胞/ウェルの密度で播種した。一晩培養した後、細胞を、本発明癌治療薬(1、3、10、13、100μg/mL)を含む培地中で48時間インキュベートした。細胞毒性は、LDHアッセイキット(同仁化学研究所)を使用して培地に放出されたLDH量を評価した。得られた結果は、SpectraMax M3(Molecular Devices)を使用して450nmの吸光度で比色定量した。
その結果を図3に示す。本発明の癌治療薬を投与しても、正常細胞及びDU-145細胞いずれにおいても、LDHの濃度依存的な上昇が見られず、1~100μg/mLの範囲において、有意な細胞毒性は認められなかった。
(DU-145細胞の生存率確認試験)
(DU-145細胞の生存率確認試験)
DU-145細胞の生存率に対する本発明の癌治療薬の効果を確認した。DU-145細胞を96ウェルプレートを用いて10%ウシ胎児血清含DMEM培地で培養し、異なる用量の本発明の癌治療薬で処理した。48時間後に処理し、Cell Counting Kit-8アッセイを使用して細胞生存率を評価した。6回の実験の平均±SEMで示した。
その結果を図4に示す。本発明の癌治療薬を投与すると、用量依存的にDU-145細胞の細胞生存率が有意(p<0.01)に下がったことから、細胞増殖を抑制したことが分かる(一元配置分散分析 (ANOVA)にて解析)。
(DU-145細胞の遊走阻害試験)
(DU-145細胞の遊走阻害試験)
5×104細胞/200μlで懸濁されたDU-145を、3%BSAで前処理された8μmポア(BD Biosciences)のフィブロネクチンコーティングされたトランスウェルインサートに播種した。 細胞遊走は、24ウェルプレートの下部チャンバーに150 ng/mlのPDGF-BBを添加することにより誘導した。18時間後、脱脂綿スワブを使用して、フィルターの上面に残存する細胞を除去した。トランスウェルインサートは4%PFAで固定し、1%クリスタルバイオレットで染色した。コントロールとして、リン酸緩衝生理食塩水を添加したものを用いた。ランダムに各トランスウェルインサートの下側をデジタル顕微鏡画像として撮影し、染色された細胞をカウントした。データは、独立して7回行い、平均±SEMとして表した。(一元配置分散分析 (ANOVA) にて解析)
その結果を図5に示す。本発明の癌治療薬であるAGS8阻害薬を添加すると、遊走細胞数を有意(p<0.01)に抑えた。一般的に癌細胞は、発生した組織から離脱し、基底膜を壊して周辺の組織に浸潤していく。その後癌細胞は血管内を遊走し、血液によって体内の別の場所へ運ばれ、運ばれた先で増殖することにより転移する。本発明の癌治療薬は癌細胞の遊走を阻害するため、癌細胞転移抑制剤として有用である。
(in vivoでの腫瘍形成抑制試験)
(in vivoでの腫瘍形成抑制試験)
雄のBALB /cヌードマウス(5週齢)(日本SLC株式会社)を入手した。DU-145細胞(4×106細胞/200μL)を無血清RPMI-1640培地に懸濁し、マトリゲル(1:1比)と混合し、マウスの脇腹領域に皮下移植した。本発明の癌治療薬を0.9%生理食塩水に懸濁し、毎日腫瘍に10μg、30μgずつ皮下注射した。
1週間おきにDU-145細胞移植部分を切開して腫瘍を取り出し、腫瘍体積及び重量を測定した。腫瘍体積(mm3)は、長径、短径をノギスで測定し、長径×(短径)2/2で算出した(各n=6)
1週間おきにDU-145細胞移植部分を切開して腫瘍を取り出し、腫瘍体積及び重量を測定した。腫瘍体積(mm3)は、長径、短径をノギスで測定し、長径×(短径)2/2で算出した(各n=6)
図6(A)に、コントロールとして0.1%生理食塩水を投与したもの及び10 μg、30μgの本発明の癌治療薬を1~4週間投与した後の代表的な腫瘍を示す。図6(B)にはコントロール及び本発明の癌治療薬を1~4週間投与した後の腫瘍体積、(C)には腫瘍重量を示す。各時点における処置群間の統計的な差は、二元配置分散分析(ANOVA)とTukey’s correction検定によって検出した。
コントロールでは、1週目~4週目にかけて腫瘍増殖が見られた。一方、本発明の癌治療薬を投与したところ、腫瘍体積及び重量を有意に(**p <0.01)抑制した。(図6(A)~(C))。なお試験中、いずれのマウスも外観異常は認められず、本発明の安全性が示された。
コントロールでは、1週目~4週目にかけて腫瘍増殖が見られた。一方、本発明の癌治療薬を投与したところ、腫瘍体積及び重量を有意に(**p <0.01)抑制した。(図6(A)~(C))。なお試験中、いずれのマウスも外観異常は認められず、本発明の安全性が示された。
一般式(1)で表される化合物又はその医薬的に許容される塩は癌の治療に適用できる。
Claims (5)
- 一般式(1)で表される化合物又はその医薬的に許容される塩を含有してなる、癌治療薬。
- さらに、医薬的に許容される賦形剤を含有してなる、請求項1に記載の癌治療薬。
- 前記癌が前立腺癌である、請求項1又は2に記載の癌治療薬。
- 前記癌が転移性前立腺癌である、請求項1~3のいずれか1項に記載の癌治療薬。
- 前記癌が、ヒト正常前立腺上皮細胞に比べてAGS8の発現レベルの上昇を伴う癌である、請求項1~4のいずれか1項に記載の癌治療薬。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023522767A JP7345151B1 (ja) | 2022-01-23 | 2023-01-20 | 癌治療薬 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022008336 | 2022-01-23 | ||
JP2022-008336 | 2022-01-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2023140355A1 true WO2023140355A1 (ja) | 2023-07-27 |
Family
ID=87348348
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2023/001710 WO2023140355A1 (ja) | 2022-01-23 | 2023-01-20 | 癌治療薬 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7345151B1 (ja) |
WO (1) | WO2023140355A1 (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014150252A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Methods of treatment associated with the granulocyte colony-stimulating factor receptor |
-
2023
- 2023-01-20 WO PCT/JP2023/001710 patent/WO2023140355A1/ja active Application Filing
- 2023-01-20 JP JP2023522767A patent/JP7345151B1/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014150252A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Methods of treatment associated with the granulocyte colony-stimulating factor receptor |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DAS DIBASH K.; NAIDOO MICHELLE; ILBOUDO ADEODAT; PARK JONG Y.; ALI THAHMINA; KRAMPIS KONSTANTINOS; ROBINSON BRIAN D.; OSBORNE JOSE: "miR-1207-3p regulates the androgen receptor in prostate cancer via FNDC1/fibronectin", EXPERIMENTAL CELL RESEARCH, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 348, no. 2, 29 September 2016 (2016-09-29), AMSTERDAM, NL , pages 190 - 200, XP029772450, ISSN: 0014-4827, DOI: 10.1016/j.yexcr.2016.09.021 * |
DATABASE REGISTRY ANONYMOUS : "- 1-Naphthalenesulfonic acid, 2-[2-[1,5-dihydro-3-methyl-5-oxo-1-(4-phenyl-2- thiazolyl)-4H-pyrazol-4-ylidene]hydrazinyl]- (CA INDEX NAME)", XP093079406, retrieved from STN * |
SATO MOTOHIKO, HIRAOKA MASAHIRO, SUZUKI HIROKO, SAKIMA MIHO, MAMUN ABDULLAH AL, YAMANE YUKIKO, FUJITA TAKAYUKI, YOKOYAMA UTAKO, OK: "Protection of Cardiomyocytes from the Hypoxia-Mediated Injury by a Peptide Targeting the Activator of G-Protein Signaling 8", PLOS ONE, vol. 9, no. 3, pages e91980, XP093079469, DOI: 10.1371/journal.pone.0091980 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7345151B1 (ja) | 2023-09-15 |
JPWO2023140355A1 (ja) | 2023-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Muñoz et al. | The substance P/neurokinin-1 receptor system in lung cancer: focus on the antitumor action of neurokinin-1 receptor antagonists | |
Assefnia et al. | Cadherin-11 in poor prognosis malignancies and rheumatoid arthritis: common target, common therapies | |
CN110194787B (zh) | 靶向抑制Wnt/β-catenin信号活性的多肽及其用途 | |
Yan et al. | Blockade of Her2/neu binding to Hsp90 by emodin azide methyl anthraquinone derivative induces proteasomal degradation of Her2/neu | |
JP2009538317A (ja) | 癌治療のための置換ジアリールウレアを用いた薬物の組み合わせ | |
JP2018508196A (ja) | 抗老化化合物及びその使用 | |
US10166203B2 (en) | Pharmaceutical composition for treating cancer including 2-methoxy-4-(3-(4-methoxyphenyl)prop-1-en-1-yl)phenol as active ingredient | |
KR20210049014A (ko) | 인테그린 알파 6 와 알파 x를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물 | |
Lin et al. | Ibrutinib potentiates antihepatocarcinogenic efficacy of sorafenib by targeting EGFR in tumor cells and BTK in immune cells in the stroma | |
ES2905360T3 (es) | Composiciones y métodos para detectar, tratar y prevenir enfermedades y trastornos | |
AU2017327994B2 (en) | Cell death biomarker | |
Tada et al. | The novel IκB kinase β inhibitor IMD-0560 prevents bone invasion by oral squamous cell carcinoma | |
WO2023140355A1 (ja) | 癌治療薬 | |
US10265276B2 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating arthritis or inflammatory disease containing 2-methoxy-4-(3-(4-methoxyphenyl)propyl-1-en-1-yl)phenol as active ingredient | |
KR20170104398A (ko) | Glypican-3에 선택적으로 결합하는 압타머 및 이의 용도 | |
EP4329777A1 (en) | Combination therapies comprising c/ebp alpha sarna | |
Han et al. | The combination of tetracyclines effectively ameliorates liver fibrosis via inhibition of EphB1/2 | |
US9782394B2 (en) | Inhibitors for ERG oncogene positive cancers | |
CN117157063A (zh) | 用于治疗癌症和癌前乳头瘤病毒病变的2-s金刚乙胺和2-r金刚乙胺 | |
KR102110454B1 (ko) | microRNA-550a-3-5p 및 항암제를 유효성분으로 포함하는 암 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
CN108619488B (zh) | 一种治疗肿瘤的联合用药方法 | |
WO2012078982A2 (en) | Xzh-5 inhibits constitutive and interleukin-6-induced stat3 phosphorylation in human hepatocellular carcinoma cells | |
US8871721B2 (en) | Methods for inhibiting peritoneal dissemination of cancer cells | |
ES2331800T3 (es) | Utilizacion de inhibidores de tirosina-quinasa para el tratamiento de la diabetes. | |
JP2006348006A (ja) | Ras信号伝達経路を標的にする血管新生、細胞増殖及び細胞転移抑制剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2023522767 Country of ref document: JP |
|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 23743347 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |