CN108619488B

CN108619488B - 一种治疗肿瘤的联合用药方法

Info

Publication number: CN108619488B
Application number: CN201710169956.8A
Authority: CN
Inventors: 熊志奇; 朱志川; 李奎
Original assignee: Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology Chinese Academy of Sciences
Current assignee: Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology Chinese Academy of Sciences
Priority date: 2017-03-21
Filing date: 2017-03-21
Publication date: 2020-12-01
Anticipated expiration: 2037-03-21
Also published as: CN108619488A

Abstract

本发明涉及一种治疗肿瘤的联合用药方法。本发明中，将UMI‑77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合应用，对于治疗肿瘤、特别是胶质瘤具有极其优异的抑制效果。

Description

一种治疗肿瘤的联合用药方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种治疗肿瘤的联合用药方法。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的疾病之一，至今缺少理想的治疗手段和药物，开发新的药物迫在眉睫。其中，胶质瘤是一种发生于脑或脊髓的肿瘤，最常发生部位为脑，因其来源神经胶质细胞而被称为胶质瘤。胶质瘤占脑和中枢神经系统肿瘤的30％、占脑恶性脑肿瘤的80％，是人类健康的严重威胁。脑胶质瘤的治疗通常采用手术，放疗和化疗相结合。胶质瘤常发生于脑，手术需要开颅，手术时间长。胶质瘤和正常神经组织交错生长，边界不清，瘤组织不易清理干净，胶质瘤易复发。对于化疗，由于血脑屏障的存在，使普通的抗肿瘤药物疗效不佳。对于放疗，也存在定位困难和对神经损伤的担心。目前胶质瘤仍是医学界的一个难题。因此寻求新的治疗方法和药物迫在眉睫。

B淋巴瘤2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)家族蛋白可以控制细胞的存活和凋亡。Bcl-2家族蛋白都含有BH(B cell lymphoma(BCL)-2homology)活性域，根据其对凋亡的调控可以分为三类：第一类为抗凋亡蛋白，包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-B、Bcl-W、Mcl-1、Bcl-B和A1/Bfl-1；第二类为促凋亡蛋白，包括Bax和Bak；第三类为唯BH3域(BH-3only)蛋白，包括Bim、Bid、Puma、Noxa、Bad和Bik等。在正常的健康细胞中，抗凋亡蛋白如Bcl-2、Bcl-xL和Mcl-1可以结合并阻止促凋亡蛋白Bax和Bak的激活。应激信号可以激活唯BH3域(BH-3only)蛋白，激活后的BH-3only蛋白可以结合抗凋亡蛋白并解除后者对Bax和Bak的抑制，或者直接激活Bax和Bak。激活后的Bax和Bak同源寡聚化后导致线粒体膜透化、细胞色素c释放到细胞质中，激活Caspase和凋亡。因而，Bcl-2家族抗/促凋亡蛋白严格地控制了线粒体途径的凋亡，打破Bcl的平衡已被证实是Ⅱ型肿瘤细胞获得性TRAIL耐药的主要原因。

因BH3-only蛋白被认为是引起凋亡的起始原因，因此模拟其功能的小分子可能具有很好的抗癌效果。第一个BH3蛋白类似物是ABT-737，类似Bad，对Mcl-1和A1/Bfl-1有较低的亲和性，对Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-W亲和性低。ABT-737不适合病人使用，而其衍生物navitoclax(ABT-263)可口服，且被证实可以结合并抑制Bcl-2和Bcl-xL。ABT-263在淋巴细胞白血病患者中表现出很高的生物活性，但对固体肿瘤如小细胞肺癌的抑制效果有限。服用ABT-263会导致剂量依赖的血小板减少。Bcl-xL的特异性抑制剂A-1155463可以抑制H146小细胞肺癌异位种植肿瘤的生长，但同时也会引起可逆性的小鼠血小板减少。后续开发的Venetoclax(ABT-199)可以特异性抑制Bcl-2，对淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤和骨髓瘤等均有抑制效果，并解决了血小板减少的副作用。

尽管现有技术中已经对于肿瘤凋亡、耐药的机制有很多的研究，但本领域还缺少一些切实有效的促进肿瘤凋亡，逆转肿瘤耐药性的途径及药物，亟待进一步的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗肿瘤的联合用药方法。

在本发明的第一方面，提供UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosis factor-related apoptosis-induced ligand，TRAIL)的用途，用于制备治疗肿瘤或逆转肿瘤耐药性的混合物、药物组合物或药盒。

在本发明的另一方面，提供UMI-77的用途，用于制备逆转肿瘤细胞对TRAIL的耐药性的混合物、药物组合物或药盒。

在一个优选例中，所述的肿瘤包括：胶质瘤。

在另一优选例中，所述的肿瘤是耐药性的肿瘤，较佳地是耐药性胶质瘤。

在另一优选例中，所述的耐药性的胶质瘤是胶质瘤细胞系U87株，胶质瘤细胞系A172株，它们是代表性的耐药细胞株。

在另一优选例中，所述的混合物或药物组合物中，所述的UMI-77的浓度是0.5～15μM，较佳地为1～9μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50ng/ml；较佳地为2～30ng/ml。

在本发明的另一方面，提供一种UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的混合物，其特征在于，该混合物中，所述的UMI-77的浓度是0.5～15μM；较佳地为1～9μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50ng/ml；较佳地为2～30ng/ml。

在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中包括权利要求6所述的UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的混合物；以及药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型是：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂；较佳地为注射剂。

在另一优选例中，所述的药盒中，含有：

UMI-77；以及

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；

所述的药盒用于治疗肿瘤，或用于逆转肿瘤耐药性。

在另一优选例中，所述的药盒中，所述的UMI-77的浓度是0.5～15μM；较佳地为1～9μM。

在另一优选例中，所述的药盒中，所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50ng/ml；较佳地为2～30ng/ml。

在另一优选例中，所述的药盒中含有UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的混合物。

在另一优选例中，所述的药盒中，所述的药盒中含有UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的药物组合物。

在另一优选例中，所述的药盒中还含有：使用说明书，说明治疗肿瘤或逆转肿瘤耐药性的方法。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、MTT法检测UMI-77和TRAIL单独用药以及联合用药的效果的柱形图。

图2A、流式细胞法检测UMI-77和TRAIL单独用药以及联合用药的效果的直方图。

图2B、三次独立实验的统计结果，柱形图用均值±标准误差表示，星号表示P<0.05。

具体实施方式

本发明人经过长期而广泛的研究，将UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合应用，对于治疗肿瘤、特别是胶质瘤具有极其优异的抑制效果。基于此完成了本发明。

UMI-77

UMI-77的CAS NO:518303-20-3，分子量C₁₈H₁₄BrNO₅S₂，分子量为468.34。化学结构式如下：

在本发明中，所述的“UMI-77”可以是纯净形式存在的式(I)所示的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如95％，98％，99％)的式(I)所示的化合物。

在得知其化学结构的情况下，所述的UMI-77也可通过化学合成的方式获得。

此外，现有技术中已经有商品化的UMI-77，因此其是本领域技术人员易于获得的。

在本发明中，还包括UMI-77的前体，所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成结构式(I)的一种化合物，或化学结构式(I)的一个化合物所组成的盐或溶液。

TRAIL

在本发明中，“TRAIL”可以是具有GenBank登录号NP_003801中第1～281位氨基酸序列的多肽。该术语还包括具有与TRAIL相同功能的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(如1-20个；较佳地1-15个；更佳地1-10个；如5个，3个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加或缺失一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。

编码所述TRAIL或其保守性变异蛋白的多核苷酸序列(编码序列)也可以应用到本发明中。“编码基因”可以是包括编码所述蛋白的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。可以利用该多核苷酸给药，在细胞内形成具有活性的TRAIL或其保守性变异蛋白。

包含所述编码序列的载体，以及用所述的载体或TRAIL的编码序列经基因工程产生的宿主细胞也包括在本发明中。本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含所述TRAIL编码序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。包含上述的适当编码序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。可以利用该表达载体或宿主细胞给药，在体内形成具有活性的TRAIL或其保守性变异蛋白。

UMI-77与TRAIL的联用用途

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族第三个成员，可诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，可以显著抑制一些肿瘤细胞的增殖，但TRAIL的增殖抑制效应主要依赖其显著的周期阻滞作用，并不能有效诱导肿瘤细胞凋亡。因此，TRAIL应用时临床前动物实验时的效果尚不十分理想。

为增强TRAIL的抗肿瘤效应，充分发挥其潜在的临床应用价值，本发明人将其与各种化合物联合应用以筛选出能够相互配合发挥增强的抗肿瘤效应的物质。经过大量的筛选工作，发现化合物UMI-77与TRAIL联合处理肿瘤细胞、尤其是胶质瘤细胞，可以显著诱导肿瘤细胞凋亡，增强TRAIL抑制肿瘤的效果，逆转肿瘤、尤其是胶质瘤的耐药性。目前尚未有报道涉及利用UMI-77和TRAIL的联合用药的方法。

因此，本发明提供了UMI-77与TRAIL的混合物或组合物的用途，用于制备治疗肿瘤的药物组合物。

所述的肿瘤可选自：胶质瘤，鼻咽癌、食管癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、肺癌、宫颈癌、白血病、口腔癌、唾液腺肿瘤、鼻腔与鼻旁窦恶性肿瘤、喉癌、耳部肿瘤、眼部肿瘤、甲状腺肿瘤、纵隔肿瘤、胸壁、胸膜肿瘤、小肠肿瘤、胆道肿瘤、胰腺与壶腹周围肿瘤、肠系膜与腹膜后肿瘤、肾脏肿瘤、肾上腺肿瘤、膀胱肿瘤、前列腺癌、睾丸肿瘤、阴茎癌、子宫内膜癌、卵巢恶性肿瘤、恶性滋养细胞肿瘤、外阴癌与阴道癌、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、软组织肿瘤、骨肿瘤、皮肤及附件肿瘤、恶性黑色素瘤、神经系统肿瘤、小儿肿瘤。较佳地为这些类型的肿瘤的耐药株。

作为本发明的优选方式，所述的肿瘤为胶质瘤。本发明人发现，UMI-77能够极为有效地逆转肿瘤细胞对TRAIL的耐药性，因此，作为本发明的优选方式，所述的肿瘤是耐药性的肿瘤。

如本文所用，“所述的逆转肿瘤耐药性”是指使得具有耐药性的肿瘤细胞株对于肿瘤抑制药物敏感、发生凋亡。例如，本发明中，所述的UMI-77通过作用于肿瘤细胞，使得肿瘤细胞对于TRAIL更为敏感。所述的“所述的逆转肿瘤耐药性”与“抑制肿瘤”为不同的两个概念。

在本发明的具体实施例中，以耐药性的胶质瘤细胞株为实验对象，论证了TRAIL和UMI-77联合应用的抗肿瘤以及逆转肿瘤耐药性的活性。

某些肿瘤如胶质瘤对TRAIL治疗不敏感，UMI-77可协助TRAIL更好地发挥疗效。与直接或间接改变Mcl-1基因表达的方法相比，本发明的方法具有明显的优点，靶点明确，副作用小。尽管目前有一些分子间接地降低Mcl-1，可增强TRAIL的疗效，但这些间接影响Mcl-1分子与TRAIL联合用药的手段由于作用于其他分子靶点，容易导致副作用的产生。又因Mcl-1对很多细胞的存活或功能有关键作用，因此直接利用Mcl-1的基因治疗手段(例如shRNA或siRNA法)易于导致严重的后果。因此使用UMI-77联合TRAIL用药，是解决肿瘤细胞对TRAIL的耐药的最适宜选择。

组合物或混合物

本发明提供了一种混合物，含有：TRAIL和UMI-77作为活性组分。较佳地，所述的混合物中，所述的UMI-77的浓度是0.5～15μM，较佳地为1～9μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50ng/ml；较佳地为2～30ng/ml。

本发明提供了一种药物组合物，含有：(a)有效量的UMI-77；(b)有效量的TRAIL；以及(c)药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中，“药学上可接受的载体”是用于将本发明的UMI-77和TRAIL传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

本发明的药物组合物或混合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。比如可选自：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂。其中UMI-77或TRAIL可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。

本发明的UMI-77和TRAIL的混合物或药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。通常，在本发明的药物组合物中，UMI-77和TRAIL作为活性成分可以占药物组合物总重量的0.01-20％，其余可以为药学上可接受的载体。

所用的UMI-77和TRAIL的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常UMI-77和TRAIL构成的混合物每天以约0.001-10mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以1-3次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

必要的时候，UMI-77和TRAIL还可与其它活性成分或药物联合给药。

药盒

本发明还提供了一种用于治疗肿瘤或逆转肿瘤的耐药性的药盒，所述的药盒中，含有：容器1，以及置于容器1中的UMI-77组分；以及容器2以及置于容器2中的TRAIL组分。

或者，所述的药盒中，含有所述的UMI-77和TRAIL的混合物，其中TRAIL与UMI-77的含量如前述。

或者，所述的药盒中，含有包括TRAIL和UMI-77的混合物，以及药学上可接受的载体的药物组合物，其中TRAIL与UMI-77的含量如前述。

此外，所述的药盒中还可以还有一些辅助用药的材料，例如注射用针管等。

此外，所述的药盒中还可含有使用说明书，说明治疗肿瘤或逆转肿瘤的耐药性的方法。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

材料

特异性抑制Mcl-1的抑制剂UMI-77：购自上海Selleck公司。

人重组TRAIL：购自以色列的ProSpec公司。

胶质瘤细胞系U87(耐药细胞株)：购自上海生物化学与细胞生物学研究所。

胶质瘤细胞系A172(耐药细胞株)：购自上海生物化学与细胞生物学研究所。

实施例1、MTT法检测联合用药抑制胶质瘤细胞增殖

四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法)是检测细胞增殖的一种经典实验方法(TimMosmann，Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival:Applicationto proliferation and cytotoxicity assays，Journal of Immunological Methods，1983，65(1-2):55-6,3)。

胶质瘤细胞系U87和A172用96孔板(美国Corning公司生产)培养，加入8μM浓度的UMI-77处理24小时后，换液，加入8μM浓度的UMI-77和不同浓度的TRAIL(浓度如图1所示)的混合液，继续处理24小时。每孔加入15μl浓度为5mg/ml的MTT(上海生工生物工程公司生产)继续孵育4小时。然后吸掉培养物，每孔加入150μl DMSO，在酶标仪的490nm波长下测定吸光度。得到的结果以对照组(未给予TRAIL及UMI-77处理的胶质瘤细胞)为100％进行标准化比较，得到相对存活率。

结果表明，8μM UMI-77可以显著增强TRAIL对耐药的U87和A172细胞的致死作用，逆转肿瘤细胞的耐药性。

实施例2、流式细胞术法检测联合用药对胶质瘤细胞的促凋亡效果

质粒构建

为了更好的展示联合用药的效果，Mcl-1(T92A)过表达质粒被用作阴性对照。Mcl-1(T92A)是Mcl-1基因经过改造防降解的形式。

Mcl-1第92位的苏氨酸(Thr92)的磷酸化是Mcl-1降解所必须的，因此突变该位点Mcl-1(T92A)可有效防止Mcl-1的降解，使蛋白维持在高含量(Harley,M.E.,et al.,Phosphorylation of Mcl-1 by CDK1-cyclin B1 initiates its Cdc20-dependentdestruction during mitotic arrest.EMBO J 2010 Jul 21,29(14),2407-2420)。本发明中使用编码Mcl-1(T92A)的质粒转染细胞作为联合用药的阴性对照。

野生型Mcl-1(GenBank登录号：NM_021960.4中第209～1261位)或防降解型Mcl-1(T92A)(用于突变的引物为：MCL1-CN530-f：ggtggaggtagtggaggatccGCCACCATGTTTGGCCTCAAAAGAAA(SEQ ID NO:1)；MCL1-CN530-r：CATGTACACCTGCAGGGCTAGCCTATCTTATTAGATATGCCA(SEQ ID NO:2)；MCL1-T92A-Df：TCCCCGACGTCACCGCGGCCCCCGCGAGGCTGCTTT(SEQ ID NO:3)；MCL1-T92A-Ur：AAAGCAGCCTCGCGGGGGCCGCGGTGACGTCGGGGA(SEQ ID NO:4))；通过PCR扩增构建然后克隆至慢病毒载体pLOV-EF1a-eGFP(购自纽恩上海生物科技有限公司)的BamHI/NheI位点中，启动子使用质粒上的EF1a。

慢病毒颗粒的包装

在37℃5％CO2的细胞培养箱中培养HEK 293T细胞(下简称293T，购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)，培养基使用添加了10％胎牛血清(美国纽约Gibco公司生产)的DMEM(美国纽约Gibco公司生产)培养基。传代培养293T细胞于直径为10cm的培养皿中，当细胞长到汇合度为50％左右，用无血清的培养基培养4小时。按Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司生产)说明书操作，准备好22.5μg上面得到的野生型Mcl-1或防降解型Mcl-1(T92A)质粒、7.9μg病毒外壳质粒psPAX2(中国上海纽恩生物科技有限公司提供)、14.6μg包装质粒pMD2.G(中国上海纽恩生物科技有限公司提供)的转染混合物。

把混合物添加到已经饥饿培养过的细胞中进行转染，4-6小时后更换为正常的培养基。分别在换液培养24和48小时后收集培养基，经0.22μm孔径的膜过滤后，再用CP 80MX离心机(日本日立公司生产)经4℃、100000g超速离心2小时，得到病毒沉积块。用OPTI-MEM(美国纽约Gibco公司生产)培养基重悬收集得到慢病毒。

慢病毒的滴度测定采用稀释计数法,把293T细胞铺96孔板，每孔约5000个细胞，过夜培养。准备好用培养基10倍梯度稀释的病毒共10份，即最低、最高浓度分别为原液的1/10-10、1/10-1，每份100μl换掉对应孔的培养基培养过夜后更换正常培养基。换掉新鲜培养基再培养两天后，置荧光显微镜下观察最后两个有荧光的孔的荧光细胞的克隆数，用以下公式计算病毒滴度：滴度(TU/ml)＝(X+Y*10)*10/(2*Z)其中X是指倒数第二个有荧光的孔的荧光细胞克隆数，Y是指倒数第一个有荧光的孔的荧光细胞克隆数，Z是指X对应孔所加病毒的稀释率。

联合用药效果检测

U87和A172细胞系在6孔板中培养细胞至大约40％汇合度，加入8μM浓度的UMI-77处理24小时后，换液后加入8μM浓度的UMI-77和一定浓度的TRAIL(A172 10ng/ml，U8730ng/ml)，继续处理24小时后用Annexin V Apoptosis Detection Kit APC试剂盒(eBioscience公司，美国圣地亚哥)检测细胞凋亡。按试剂盒说明书操作，简述实验操作过程如下：用无EDTA的0.25％胰蛋白酶溶液消化细胞，离心收集贴壁细胞和培养基中的悬浮细胞，PBS重悬，离心。细胞计数后，用1×结合缓冲液配成2×10⁶个细胞/ml的细胞悬液，吸取100μl悬液至一离心管中，加入5μl Annexin-V APC抗体，室温下避光孵育15分钟。为防止细胞沉淀，期间不断拍打离心管。离心后用200μl的1×结合缓冲液重悬。用BD LSR II(BDBioscience公司)流式细胞仪检测，每个样品检测10000个细胞。FlowJo软件分析APC荧光强度(FLH4通道)和细胞数，即细胞凋亡水平。

结果如图2A所示，在普通过表达Mcl-1的细胞中给予TRAIL处理的同时抑制Mcl-1显著提高TRAIL对U87和A172胶质瘤细胞的诱凋亡效果，逆转肿瘤细胞的耐药性。

而在过表达防降解型Mcl-1(T92A)的细胞中，由于大量的Mcl-1(T92A)存在，使得联合用药效果有限，这更加说明了联合用药效果是通过抑制Mcl-1而实现。图2B是三次独立实验的统计结果，以均值±标准误差表示，星号表示P<0.05。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 中国科学院上海生命科学研究院

<120> 一种治疗肿瘤的联合用药方法

<130> 171797

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<223> 引物

<400> 1

ggtggaggta gtggaggatc cgccaccatg tttggcctca aaagaaa 47

<210> 2

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<223> 引物

<400> 2

catgtacacc tgcagggcta gcctatctta ttagatatgc ca 42

<210> 3

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<223> 引物

<400> 3

tccccgacgt caccgcggcc cccgcgaggc tgcttt 36

<210> 4

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<223> 引物

<400> 4

aaagcagcct cgcgggggcc gcggtgacgt cgggga 36

Claims

1.UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在制备治疗胶质瘤的混合物、药物组合物或药盒中的用途；其中，所述的混合物、药物组合物或药盒中，UMI-77的浓度是0.5～15 μM，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50 ng/ml。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的胶质瘤是对TRAIL具有耐药性的胶质瘤。

3. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的混合物、药物组合物或药盒中，UMI-77的浓度是1～9 μM。

4. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的混合物、药物组合物或药盒中，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是2～30 ng/ml。

5. 一种UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的混合物，其用于治疗胶质瘤，该混合物中，所述的UMI-77的浓度是0.5～15 μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50 ng/ml。

6. 如权利要求5所述的混合物，其特征在于，该混合物中，所述的UMI-77的浓度是1～9μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是2～30 ng/ml。

7.如权利要求5所述的混合物，其特征在于，所述的胶质瘤是对TRAIL具有耐药性的胶质瘤。

8. 一种用于治疗胶质瘤的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中包括权利要求5所述的UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的混合物；以及药学上可接受的载体；其中所述的UMI-77的浓度是0.5～15 μM；所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度是1～50 ng/ml。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型是：注射剂，片剂，胶囊剂，丸剂。

10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的胶质瘤是对TRAIL具有耐药性的胶质瘤。

11. 一种用于治疗胶质瘤的药盒，其特征在于，所述的药盒中，含有：

UMI-77，其浓度是0.5～15 μM；以及

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体，其浓度是1～50 ng/ml。

12.如权利要求11所述的药盒，其特征在于，所述的胶质瘤是对TRAIL具有耐药性的胶质瘤。

13. 如权利要求11所述的药盒，其特征在于，所述的药盒中，所述的UMI-77的浓度为1～9 μM。

14. 如权利要求11所述的药盒，其特征在于，所述的药盒中，所述的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的浓度为2～30 ng/ml。

15.如权利要求11所述的药盒，其特征在于，所述的药盒中含有UMI-77和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的药物组合物。

16.如权利要求11所述的药盒，其特征在于，所述的药盒中还含有：使用说明书，说明治疗胶质瘤的方法。