CN117106971A - 用于检测丁型肝炎病毒的核酸组合及试剂盒和应用 - Google Patents

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CN117106971A CN202310590474.5A CN202310590474A CN117106971A CN 117106971 A CN117106971 A CN 117106971A CN 202310590474 A CN202310590474 A CN 202310590474A CN 117106971 A CN117106971 A CN 117106971A
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沈弢
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Abstract

本申请涉及用于检测丁型肝炎病毒的核酸组合及试剂盒和应用，通过对1‑8种基因型HDV病毒基因序列进行分析，在HDVAg下游核酶区设计特异性引物和探针，开发出一种检测HDV核酸的试剂、试剂盒及检测方法，用于HDV疑似感染患者血清或血浆中1‑8种基因型HDV RNA的检测，以10IU/mL的灵敏度实现对丁型肝炎病毒的快速诊断，检测时间短，能达到快速预防病毒传播或对患者进行快速治疗的目的。此外，本申请的试剂盒及检测方法同时具有操作简单、可重复性强、灵敏度高、特异性好、检测结果快速客观等优点，在丁型肝炎病毒体外诊断领域具有极大的应用前景，可有效用于疾病的鉴别诊断，确保不错，提高病毒携带者的阳性检出率，提前用药，减少社会传播的风险。

Description

用于检测丁型肝炎病毒的核酸组合及试剂盒和应用
技术领域
本申请涉及分子诊断技术领域，具体而言，涉及一种用于检测丁型肝炎病毒的核酸组合及试剂盒和应用的核酸组合及试剂盒。
背景技术
丁型肝炎(丁肝)是由丁型肝炎病毒(HDV)感染引起的一种病毒性肝炎，可与乙型肝炎病毒(HBV)联合或重叠感染。慢性乙型肝炎患者重叠感染HDV后，约90％会发展成慢性肝炎，发生肝衰竭、肝硬化和肝癌等不良结局。由于以往对HDV的流行率和疾病负担被普遍低估，使得这一疾病没有得到应有的重视。丁型肝炎的治疗依赖于长期服用高剂量α-干扰素(IFN)，其效力通常通过检测血清中的特异性抗HDV IgM/IgG或HDV基因组对疾病进行评估。
丁型肝炎病毒(HDV)是由意大利Rizzetto等从重症乙型肝炎患者肝组织标本中发现并于1977年首次报道。HDV RNA与HDAg结合为核衣壳，依赖HBsAg包膜进行包装从而进出肝细胞建立感染，即HDV是HBV的卫星病毒。HDV病毒是一种36纳米的病毒颗粒，它依赖于乙型肝炎病毒(HBV)的病毒粒子进行组装和传播。HDV病毒由1672-1697个碱基组成单链负股RNA核苷酸链，与两种病毒蛋白sHD和LHD组装形成核糖核蛋白。广泛的分子内互补导致碱基配对，并使HDV基因组具有伪双链结构。HDV具有广泛的遗传多样性，全基因组序列的变异程度可达40％，但其基因组中仍存在约357核苷酸片段的保守功能区域，已被用于遗传分析。目前通过对已知毒株RNA序列进行系统发育分析将其分为8种基因型(HDV-1～HDV-8)，各基因型还可进一步分为2～4种基因亚型。通常，全基因组核苷酸序列相似度＞80％或基因组R0区域(889～1289)核苷酸序列相似度＞85％的两个毒株同属一个基因型，全基因组核苷酸序列相似度＞90％(HDV-1＞84％)的两个病毒株属于同一个基因亚型。不同HDV基因型和基因亚型的地域分布有所差异，其中HDV-1主要流行于亚洲、欧洲、北美、北非以及中东等地区，HDV-2主要发生在中亚和东南亚，HDV-3目前仅见于亚马逊河流域，HDV-4流行于亚洲，而HDV-5、HDV-6、HDV-7、HDV-8主要发生在非洲。
HDV感染主要有两种形式，一种是患者首次同时暴露于HBV和HDV，称为HBV/HDV联合感染(co-infection)，多数可自发康复，少数转变为重症肝炎；另一种是在既往感染HBV的基础上暴露于HDV，称为重叠感染，其中70％～90％将发展为慢性HDV感染。与HBV单一感染相比，合并HDV感染会加速肝脏炎症进展至肝硬化、肝癌及其他终末期肝病，平均于5年内进展为肝硬化，10年内进展为肝细胞癌。HDV缺乏有效的治疗手段，EASL(2017)和AASLD(2018)均推荐PegIFNα是目前唯一的HDV感染治疗药物，但持续病毒学应答率仅为20-31％，而复发率可高达40％。抗HDV在研新药主要有以下几种：布乐韦肽(Bulevirtide，BLE)是一种“进入抑制剂”，它通过与NTCP结合而阻止HDV病毒进入肝细胞；REP 2139-Ca是一种HBsAg分泌抑制剂，它能阻止HDV病毒进入、抑制HBsAg释放、减少细胞内HBsAg并抑制HDV复制周期；异戊二烯抑制剂(Lonafarnib)可阻止L-HDAg与HBsAg交互，从而干扰病毒粒子组装；新型初免-增强免疫疗法可预防慢性HBV感染者的HDV合并/重复感染。
目前HDV的检测方法包括通过血清学方法检测HDV抗体和HDV抗原，采用生物学方法进行病毒分离培养或电镜检查以及分子诊断技术检测HDV核酸。HDV抗原检测实用性有限，抗原检测仅用于急性感染(在抗体血清转换之前)，或在严重免疫抑制的慢性感染患者中，而对于有免疫力的患者血清中抗原(HBsAg)仅暂时出现，HBsAg很快就会下降难以检测到。而抗体检测也有其局限性，丁型肝炎病毒抗体HDV-IgM在感染后3-9周方可测出，而丁型肝炎病毒抗体HDV-IgG会在感染后持续存在，即使HDV感染终止后仍可存在数年，不能提示HDV的疾病感染状态。HDV抗原和抗体检测在疾病不同阶段有较大差异，常因假阴性结果影响治疗决策；生物学鉴别诊断通常需要2-14天，时效性差，而且具有感染的风险。而分子诊断技术往往具有高灵敏度、高特异性的优点，目前是临床环境中最好的分析技术。血清中的HDV RNA是急性HDV感染的最早诊断标志物，也是慢性肝病中病毒复制的指标。HDV RNA检测在免疫抑制患者中尤其有用，在治疗前和治疗结束时，分别监测初始或残余病毒滴度非常低的治疗患者。但是由于HDV的高度遗传变异，HDV类型之间的差异在基因组的整个核苷酸序列中高达37％，以及HDV-RNA序列的70％以上的分子内碱基配对形成的“棒状”结构往往会损害cDNA合成效率和损害PCR效率。近年来，虽然不乏有开发者报道了一些于HDV检测相关的试剂，但检测灵敏度和包容性往往不足，也易导致假阳性或假阴性结果。
鉴于目前尚无一种可有效检测8种基因型的丁型肝炎病毒检测方法，而血清学的检测往往具有“窗口期”，易因HDV病毒发生的前期无法检测而导致病毒得不到控制，增加生物安全性风险；再者，血清学诊断的灵敏度不高，而丁型肝炎病毒的高度遗传变异，容易导致抗原漂变而导致漏检。因此，开发具有更高包容性和高灵敏度的丁型肝炎病毒检测试剂盒和检测方法对于丁型肝炎患者的病毒检测、病毒预防、与患者治疗具有重要的经济意义和社会意义。
发明内容
基于此，本申请有必要提供一种核酸组合物及试剂盒等产品，可用于1-8种基因型的丁型肝炎病毒的检测，具有包容性强，准确性好，灵敏度高且特异性强。
本申请一方面提供一种核酸组合物，所述核酸组合物包括用于扩增HDV病毒的检测引物和检测探针，所述检测引物的序列如SEQ ID NO：1～3所示，所述检测探针的序列如SEQ ID NO：4所示。
在其中一个实施例中，所述检测探针的两端分别连接有荧光报告染料和淬灭剂染料。
在其中一个实施例中，所述荧光报告染料位于所述检测探针的5’端，所述淬灭剂染料位于所述检测探针的3’端。
本申请另一方面还提供一种用于检测丁型肝炎病毒的检测试剂，所述检测试剂包括所述的核酸组合物。
在其中一个实施例中，所述检测试剂还包括内参基因的检测引物和检测探针。
在其中一个实施例中，，所述内参基因的检测引物的序列如SEQ ID NO：5～6所示，所述内参基因的检测探针的序列如SEQ ID NO：7所示。
在其中一个实施例中，所述检测试剂还包括无核酸酶的蒸馏水、Tris缓冲液、Tween-20、牛血清白蛋白、海藻糖、甜菜碱、dATP、dTTP、dGTP、dCTP、dUTP和Mg2+中的一种或多种。
本申请另一方面还提供一种用于丁型肝炎病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括所述的核酸组合物或所述的检测试剂。
在其中一个实施例中，，所述试剂盒还包括PCR酶液、阳性质控和阴性质控中的一种或多种。
在其中一个实施例中，所述PCR酶液包括Heat-UDG酶、M-MLV逆转录酶、RNase抑制剂和Taq DNA聚合酶中一种或多种。
本申请另一方面还提供以筛查、确诊或患者药物治疗康复监测为目的的用于丁型肝炎病毒的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
以提取的RNA为模板，用所述试剂盒进行检测，根据检测结果判断RNA中是否含有丁型肝炎病毒的扩增信号。
本申请另一方面还提供所述的核酸组合物或所述的检测试剂在制备丁型肝炎病毒的筛查以及丁型肝炎病毒IgM/IgG阳性患者的HDV病毒感染确诊、患者药物治疗康复监测产品中的用途。
在其中一个实施例中，所述丁型肝炎病毒包括HDV-1～HDV-8基因型的丁型肝炎病毒中的至少一种。
本申请通过对1-8种基因型HDV病毒基因序列进行分析，在HDVAg下游核酶区设计特异性引物和探针，开发出一种检测HDV核酸的试剂、试剂盒及检测方法，用于HDV疑似感染患者血清或血浆中1-8种基因型HDV RNA的检测，实现对丁型肝炎病毒的快速筛查、确诊或患者药物治疗康复监测，检测时间短，可在40min中内即可完成反应，特异性为100％，检测灵敏度为10IU/mL，能达到快速预防病毒传播或对患者进行快速治疗的目的。此外，本申请的试剂盒及检测方法同时具有操作简单、可重复性强、灵敏度高、特异性好、检测结果快速客观等优点，在丁型肝炎病毒体外诊断领域具有极大的应用前景，可有效用于疾病的鉴别诊断，提高病毒携带者的阳性检出率，提前用药，减少社会传播的风险。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为引物探针筛选结果，其中，A为组合1，B为组合2，C为组合3；
图2为HDV试剂包容性分析结果；
图3为快速程序检测结果。
具体实施方式
为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。
本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本申请通过对1-8种基因型HDV病毒基因序列进行分析后，选择HDVAg下游核酶区设计特异性引物和探针，并采用简并引物或简并探针、或在同一反应体系中加入多对引物探针等方式，设置多个引物和探针不同组合，最终筛选出一组扩增效率高的引物和探针组合。基于此，开发出一种具有检测灵敏度高、特异性强、准确性高的HDV核酸分子试剂及试剂盒，用于HDV疑似感染患者样本中1-8种基因型HDV RNA的检测，同时具有操作简单、检测时间短、成本低、安全以及易于大范围推广等优点。
因此，本申请一实施方式提供了核酸组合物，该核酸组合物包括用于扩增HDV病毒的检测引物和检测探针，所述检测引物的序列如SEQ ID NO：1～3所示，所述检测探针的序列如SEQ ID NO：4所示。该核酸组合物能够同时检测8种基因型HDV的检测。并且经证实，使用上述核酸组合物扩增效率高，在检测HDV结果准确高，抗干扰能力强，特异性好，灵敏度达到10IU/mL。
本申请一实施方式还提供了一种用于检测丁型肝炎病毒的检测试剂，包括上述的核酸组合物。
在一个具体示例中，该检测试剂还包括内参基因的检测引物和检测探针。
可选地，内参基因的检测引物的序列如SEQ ID NO：5～6所示，内参基因的检测探针的序列如SEQ ID NO：7所示。
在一个具体示例中，检测探针的两端分别连接有荧光报告染料和淬灭剂染料。其中，荧光报告染料位于检测探针的5’端，淬灭剂染料位于检测探针的3’端。
可选地，荧光报告染料选自FAM、HEX、VIC、CY5、ROX、Texsa Red及Quasar 705中的一种。所述淬灭剂染料选自TAMRA、BHQ、Dabcyl、Eclipse以及NFQ-MGB中的一种。需要说明的是，荧光报告染料或淬灭剂染料不限如此，也可以为其他荧光报告染料或淬灭剂染料。
在一个具体示例中，内参基因的检测探针和扩增HDV病毒的检测探针的所标记的荧光染料不同，互不干扰。
其中，扩增HDV病毒的检测探针5’端连接有6-FAM荧光报告染料；为了提高探针的杂交温度和检测灵敏度，该探针的3'端连接有MGB淬灭剂染料。
在一个具体示例中，该检测试剂还包括无核酸酶的蒸馏水，Tris缓冲液、Tween-20、牛血清白蛋白、海藻糖、甜菜碱、dATP、dTTP、dGTP、dCTP、dUTP和Mg2+中的一种或多种。
本申请一实施方式还提供了一种用于丁型肝炎病毒8种基因型核酸的检测试剂盒，其包括上述的核酸组合，或上述的检测试剂。
可选地，丁型肝炎病毒8种基因型包括HDV-1、HDV-2、HDV-3、HDV-4、HDV-5、HDV-6、HDV-7、HDV-8基因型中的至少一种。
在一个具体示例中，试剂盒的检测样本包括血清或血浆。
可选地，该试剂盒还包括PCR酶液、阳性质控和阴性质控中的一种或多种。
进一步可选地，PCR酶液包括Heat-UDG酶、M-MLV逆转录酶、RNase抑制剂和Taq DNA聚合酶中一种或多种。进一步地，PCR酶液包括终浓度为0.008～0.02U/μL的Heat-UDG酶、终浓度为0.05～0.2U/μLM-MLV逆转录酶、终浓度为0.5～2U/μL的RNase抑制剂和终浓度为0.05～0.2U/μL的Taq DNA聚合酶。
在一个具体示例中，以筛查、确诊或患者药物治疗康复监测为目的的用于丁型肝炎病毒的检测试剂盒的检测方法包括以下步骤：
以提取的RNA为模板，用权利要求6～8任一项所述的试剂盒进行检测，根据检测结果判断RNA中是否含有丁型肝炎病毒的扩增信号。
在一个具体示例中，上述核酸组合物或上述的检测试剂在制备丁型肝炎病毒检测产品或丁型肝炎病毒的筛查以及丁型肝炎病毒IgM/IgG阳性患者的HDV病毒感染确诊、患者药物治疗康复监测产品中的用途。可选地，丁型肝炎病毒包括HDV-1、HDV-2、HDV-3、HDV-4、HDV-5、HDV-6、HDV-7、HDV-8基因型中的至少一种。
下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本申请中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
实施例1引物及探针的筛选
本实施例根据对1～8种基因型的HDV病毒基因序列进行比对分析后，在其保守区域设计获得如表1所示的候选引物及探针，所述引物探针委托上海生工进行合成。将HDV-1的质粒用无核酸酶的水由1ng/μL稀释至10-6ng/μL后，按照如下反应体系进行候选引物及探针的扩增效率分析。
表1引物探针序列
表2引物探针筛选反应体系配制表
序号 物料名称 加入量/μL 终浓度
1 10*Anstart Buffer 2.5 1*
2 10mM dNTPs 0.5 0.2mM
3 10μM上游引物 0.5 0.2μM
4 10μM下游引物 0.5 0.2μM
5 10μM探针 0.25 0.1μM
6 Taq DNA聚合酶 0.5 0.1U/μL
7 NF-Water 补足体积至25 /
引物探针筛选研究结果如图1所示，组合1的引物探针扩增效率较高，后续实施例使用组合1作为检测试剂。
实施例2检测丁型肝炎病毒的方法
1、核酸的提取：采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0(Takara:9766)按照说明书指引进行待测样本RNA核酸的提取。
2、PCR反应体系配制及扩增程序：
HDV PCR反应液见表3，HDV PCR酶液配方见表4，反应体系配制见表5。
表3 HDV PCR反应液
表4 HDV PCR酶液
序号 名称 终浓度
1 Heat-UNG酶 0.01U/μL
2 RNasin 1U/μL
3 M-MLV逆转录酶 0.1U/μL
4 Taq DNA聚合酶 0.1U/μL
表5反应体系
序号 名称 单个反应加入量/μL
1 HDV PCR反应液 18
2 HDV PCR酶液 2
3 RNA样本 20
PCR扩增程序，如表6所示：
表6扩增程序
4、结果分析：
(1)目的检测信号为FAM，内参为VIC。
(2)Baseline(对照基准)的设置：Baseline(对照基准)一般设置为3-15个循环，具体可根据实际情况进行调整。其调整原则为：选择指数扩增期荧光信号较稳定的区域，起点避开荧光采集起始阶段的信号波动，终点比最早出现指数扩增的样本Ct减少1-2个循坏。Threshold(临界值)的设置：设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照的最高点。
5、结果判断：
在正常的情况下进行结果分析：
阳性：待测样本检测结果FAM和VIC通道同为Ct≤40且曲线有明显扩增期，结果测定有效，可直接判断样本为阳性；
阴性：待测样本检测结果FAM通道Ct＞40，且VIC通道Ct≤40可直接判断样本为阴性；
可疑：待测样本检测结果FAM通道Ct≤40且曲线有明显扩增期，VIC通道Ct＞40，需重新采样检测。
实施例3对8种基因型丁型肝炎病毒检测包容性分析
用实施例2中所述核酸提取试剂盒及提取方法分别提取丁型肝炎病毒基因1(HDV-1)、丁型肝炎病毒基因2(HDV-2)、丁型肝炎病毒基因3(HDV-3)、丁型肝炎病毒基因4(HDV-4)、丁型肝炎病毒基因8(HDV-8)等5种病毒基因型病毒培养物RNA(病毒培养物由北京大学医学部庄辉院士实验室提供)，提取丁型肝炎病毒基因5(HDV-5)、丁型肝炎病毒基因6(HDV-6)、丁型肝炎病毒基因7(HDV-7)等3种基因型假病毒RNA。提取RNA后，用无核酸酶的蒸馏水按10倍梯度依次稀释至10copies/mL的浓度，按照实施例2的反应体系配制方法及扩增程序在Bio-Rad CFX Opus 96荧光定量PCR仪上进行扩增。HDV试剂包容性分析结果如图2所示，本申请的试剂对HDV-1、HDV-2、HDV-3、HDV-4、HDV-5、HDV-6、HDV-7、HDV-8等8种基因型检测结果一致，对10copies/mL的病毒RNA均有扩增曲线，表现出一致的敏感性。说明本申请能够准确地对1-8种基因型的丁型肝炎病毒进行检测。
实施例4灵敏度分析
将HDV病毒国际参考血浆(PEI code 7657/12：5.75×105IU/mL)按照其说明书要求加入500μL无核酸酶纯化水复溶后，室温平衡15min，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNAExtraction Kit Ver.5.0提取RNA后，用无核酸酶纯化水稀释至100IU/mL，再依次稀释至50IU/mL、25IU/mL、10IU/mL、5IU/mL后，使用本申请的HDV核酸检测试剂盒对每个浓度RNA进行20次重复测试，以95％以上检出率的浓度作为本申请试剂盒的最低检出限。分析结果见表7，本申请的试剂对50IU/mL、25IU/mL的国际参考血浆的检出率均为100％，而对10IU/mL的稀释国家参考血浆的检出率为95％，对5IU/mL的稀释国家参考血浆的检出率为65％。因此，最终确定本申请的试剂盒的最低检出限为10IU/mL。
表7灵敏度分析
实施例5特异性分析
将100例健康人血浆按20例/管混合成5管，提取核酸后用于本申请试剂对人源血浆样本进行特异性分析，将表8中的病毒质控品或细菌质控品按照实施例2所述核酸提取盒提取核酸后进行交叉反应分析。分析结果见表8，本申请试剂与人源血浆样本、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、梅毒螺旋体、单纯疱疹病毒I型、单纯疱疹病毒II型、单纯疱疹病毒III型、EB病毒、人类免疫缺陷病毒、甲型流感病毒、人巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等病毒与细菌均不发生交叉反应，具有较好的特异性。
表8交叉反应分析
注：“-”表示阴性；
实施例6抗干扰研究
为考察样本中可能存在的内源/外源性物质对检测结果的影响，将HDV国际参考血浆用阴性血浆稀释至最低检测限浓度，分成若干份，每份中加入下表中所列的可能存在抑制物或干扰物(以最低检出限浓度的血浆样本为对照)，通过用样本稀释干扰物方法调节干扰物质终浓度如表9所示，以添加阴性血浆样本的待测样本为对照。每个样本重复测试3次，通过与对照样本的比较，评估本申请试剂盒抗干扰能力。分析结果见表9所示，含胆红素、甘油三酯、α-干扰素、奥司他韦等干扰物质的样本经三次重复测试均为阳性，且Ct值与对照物明显的区别，因此可以说明本申请的试剂在该实验条件下，样本中可能存在的上述干扰物质对试剂盒的检测结果无明显干扰。
表9加入干扰物质及浓度
实施例7本申请试剂应用于快速检测
将HDV国际参考血浆RNA用无核酸酶纯化水依次稀释至105IU/mL、104IU/mL、103IU/mL、102IU/mL、101IU/mL的浓度，用本申请的试剂按照实施例2的配制方法配制反应体系后在ABI Q5荧光定量PCR仪上进行快速检测，检测程序如下表10，检测时间小于40min。快速检测结果如图3所示，即使在快速检测程序下执行检测，本申请试剂对国际参考血浆的检测灵敏度也可达到10IU/mL，呈现出与普通程序一致的效果，可有效应用于丁型肝炎病毒的快速检测。
表10快速检测程序
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以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包括用于扩增HDV病毒的检测引物和检测探针，所述检测引物的序列如SEQ ID NO：1～3所示，所述检测探针的序列如SEQ ID NO：4所示。
2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述检测探针的两端分别连接有荧光报告染料和淬灭剂染料；
可选地，所述荧光报告染料位于所述检测探针的5’端，所述淬灭剂染料位于所述检测探针的3’端。
3.一种用于检测丁型肝炎病毒的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括权利要求1或2所述的核酸组合物。
4.根据权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括内参基因的检测引物和检测探针；
可选地，所述内参基因的检测引物的序列如SEQ ID NO：5～6所示，所述内参基因的检测探针的序列如SEQ ID NO：7所示。
5.根据权利要求3或4所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括无核酸酶的蒸馏水、Tris缓冲液、Tween-20、牛血清白蛋白、海藻糖、甜菜碱、dATP、dTTP、dGTP、dCTP、dUTP和Mg2+中的一种或多种。
6.一种用于丁型肝炎病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求1或2所述的核酸组合物，或权利要求3～5任一项所述的检测试剂。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR酶液、阳性质控和阴性质控中的一种或多种。
8.根据权利要求6或7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR酶液包括Heat-UDG酶、M-MLV逆转录酶、RNase抑制剂和Taq DNA聚合酶中一种或多种。
9.以筛查、确诊或患者药物治疗康复监测为目的的用于丁型肝炎病毒的检测试剂盒的检测方法包括以下步骤：
以提取的RNA为模板，用权利要求6～8任一项所述的试剂盒进行检测，根据检测结果判断RNA中是否含有丁型肝炎病毒的扩增信号。
10.权利要求1或2所述的核酸组合物、或权利要求3～5任一项所述的检测试剂在制备丁型肝炎病毒检测产品或丁型肝炎病毒的筛查以及丁型肝炎病毒IgM/IgG阳性患者的HDV病毒感染确诊、患者药物治疗康复监测产品中的用途；
可选地，所述丁型肝炎病毒包括HDV-1～HDV-8基因型的丁型肝炎病毒中的至少一种。
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