CN117098762A - 用于制备双环酮化合物的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于制备式(I)的双环酮化合物或其立体异构体：或其药用盐的方法，其中R¹、R²、R³和n如本文所定义；以及通过这些方法制备的化合物。

Description

用于制备双环酮化合物的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年4月2日提交的美国专利临时申请号63/170,422的优先权的权益，该临时专利申请的内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

本文提供了制备可用于哺乳动物的疗法和/或预防的双环酮化合物的方法，还提供通过这些方法制备的化合物。具体地，双环酮化合物是RIP1激酶抑制剂的手性化合物，可用于治疗与炎症、细胞死亡等相关联的疾病和疾患。

背景技术

受体相互作用蛋白1(“RIP1”)激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。此外，RIP1是细胞信号传导的调节因子，参与程序性细胞死亡途径例如坏死性凋亡的介导。坏死性细胞死亡的最佳研究形式是由TNFα(肿瘤坏死因子)引发，但坏死性凋亡也可由TNFα死亡配体家族的其他成员(Fas和TRAIL/Apo2L)、干扰素、Toll样受体(TLR)信号传导和病毒感染经由DNA传感器DAI(干扰素调节因子的DNA依赖性活化剂)诱导[1-3]。TNFα与TNFR1(TNF受体1)的结合促使TNFR1三聚化作用以及形成细胞内复合物，复合物-I。TRADD(TNF受体相关联死亡结构域蛋白)与TNFR1的细胞内死亡结构域结合，并且通过两种蛋白质中存在的死亡结构域募集蛋白激酶RIP1(受体相互作用蛋白1)[4]。在初始募集至TNFR1相关联信号复合物后，RIP1易位至次级细胞质复合物，复合物-II[5-7]。复合物-II由含有蛋白质FADD(Fas相关联蛋白)、RIP1、胱天蛋白酶-8和cFLIP的死亡结构域形成。若胱天蛋白酶-8未完全活化或其活性被阻断，则蛋白激酶RIP3会被募集到复合物，形成坏死体，此将导致坏死性细胞死亡开始[8-10]。一旦形成坏死体，RIP1和RIP3就会参与一系列对坏死性细胞死亡至关重要的自身和交叉磷酸化事件。坏死性凋亡可以通过两种激酶中任一者的激酶失活突变来完全阻断，或者通过RIP1激酶抑制剂(坏死抑制素)或RIP3激酶抑制剂以化学方式完全阻断[11-13]。RIP3的磷酸化允许假激酶MLKL(混合谱系激酶结构域样)(坏死性细胞死亡的关键组分)的结合和磷酸化[14、15]。

坏死性凋亡在心肌梗死、中风、动脉粥样硬化、缺血-再灌注损伤、炎症性肠病、视网膜变性和许多其他常见的临床病症中具有重要的病理生理学相关性[16]。因此，需要RIP1激酶活性的选择性抑制剂作为由该途径介导并与炎症和/或坏死性细胞死亡相关联的疾病的潜在治疗。

之前已经描述了RIP1激酶的抑制剂。RIP1激酶活性的首先公开的抑制剂是坏死抑制素1(Nec-1)[17]。此初步发现之后是具有多种阻断RIP1激酶活性能力的经修饰版本的Nec-1[11、18]。最近，已经描述了其他RIP1激酶抑制剂，它们在结构上与坏死抑制素类化合物不同[19、20、21]。

然而，包括例如特定立体异构体的抑制剂的合成是困难的。据此需要新的合成方法来制备抑制剂。

本文引用的参考文献，其每一者都通过引用全文并入本文：

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21)国际专利公开号WO 2014/125444。

22)国际专利公开号WO 2017/004500。

发明内容

本文所提供对这些和更多的问题的解决方法。

在一个方面，本文提供了制备式(I)或式(II)的手性双环酮化合物或其药用盐的方法：

其中：

R¹选自由以下项组成的组：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、苯基、苄基、4元至8元杂环基和5元至6元杂芳基，其中R¹通过碳原子结合至相邻羰基，并且R¹任选地经选自由以下项组成的组的一个或两个取代基取代：F、Cl、Br、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、羟基、羟基甲基、氰基、氰基甲基、氰基乙基、C(O)C₁-C₆烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；

每个R^N独立地选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷基；或两个R^N可与相邻N一起形成4元至6元环；

R²选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆硫代烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂-(4元至6元杂环基)、CH₂CH₂-(4元至6元杂环基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；其中当存在苯环时，其可经选自由以下项组成的组的1至3个取代基取代：卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基和氰基；

R³选自由以下项组成的组：D、卤素、OH、CN、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、环丙基、C₁-C₄烷氧基和C₁-C₄卤代烷氧基；并且

n为1、2或3。

在另一方面，本文提供了制备式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体或其药用盐的方法，其中R¹、R²、R³和n如本文所定义，该方法包括：

(a)使手性N-氨基内酰胺式p化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂和醇溶剂的存在下与式c的亚氨酸酯盐化合物或其盐接触：

以形成式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；并且

该式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体为该式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体的制备中的中间化合物。

在另一方面，本文提供了一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法：

或其盐，其中R²和n如本文所述，该方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；以及

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²任选地经C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基或芳基取代；

Pg³为任选的羟基保护基团团并且在每次出现时可为相同或不同；

Pg⁴为任选的胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式l的经保护的腙化合物或其立体异构体的制备中的中间体；并且

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在另一方面，本文提供了一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在另一方面，本文提供了一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在另一方面，本文提供了制备式b的亚氨酸酯盐化合物的方法：

该方法包括：

(a)使式a的氰基甲酸酯化合物：

在无水酸源的存在下在醇溶剂中反应，以形成该式b的亚氨酸酯盐化合物，其中该无水酸源为TMSCl，该酸为HCl，并且Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同。

在另一方面，本文提供了制备式(III)或式(IV)的手性双环酮化合物：

或其药用盐的方法，其中R¹、R²和R³如本文所定义。

在另一方面，本文提供了一种制备式j,的羟基酮酯化合物或其立体异构体的方法：

该方法包括：

(a)使式hh的二酮酯化合物：

在酮还原酶的存在下反应以形成式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体或其盐，其中R²、Pg³和n如本文所定义。

在另一方面，本文提供了通过本文描述的方法制备的化合物。

本发明方法在制备式(I)、式(II)、式(III)或式(IV)的化合物或其药用盐中提供出乎意料地更好的总产率，并且通过避免潜在的外消旋化事件而提供提高的产物纯度、提高的非对映异构体比率、提高的立体异构体过量、和提高的产率。下面提供了额外的实施例和细节。

具体实施方式

定义

如本文所提供的，所有化学式和通用化学结构应被解释为提供如所属领域普通技术人员通常理解的原子之间的适当化合价和化学稳定键。在适当的情况下，取代基可以与多于一个相邻原子键合(例如，烷基包括存在两个键的亚甲基)。

在本文提供的化学式中，“卤素”或“卤代”是指氟、氯和溴(即，F、Cl、Br)。

“烷基”，除非另外特别定义，否则是指任选地取代的直链或支链C₁-C₁₂烷基基团。在一些实施例中，“烷基”是指C₁-C₆烷基基团。示例性烷基基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。本文提供的经取代的烷基基团被选自由以下项组成的组的一或多个取代基取代：卤素、氰基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、C₃-C₆环烷基、苯基、OH、CO₂H、CO₂(C₁-C₄烷基)、NH₂、NH(C₁-C₄烷基)、N(C₁-C₄烷基)₂、NH(C＝O)C₁-C₄烷基、(C＝O)NH(C₁-C₄烷基)、(C＝O)N(C₁-C₄烷基)₂、S(C₁-C₄烷基)、SO(C₁-C₄烷基)、SO₂(C₁-C₄烷基)、SO₂NH(C₁-C₄烷基)、SO₂N(C₁-C₄烷基)₂和NHSO₂(C₁-C₄烷基)。在一些实施例中，经取代的烷基基团具有1或2个取代基。在一些实施例中，烷基基团未经取代。

“环烷基”，除非另有特别定义，否则是指任选地经取代的C₃-C₁₂环烷基基团，且包括稠合、螺环和桥联双环基团，其中取代基选自由以下项组成的组：卤素、氰基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、C₃-C₆环烷基、苯基、OH、CO₂H、CO₂(C₁-C₄烷基)、NH₂、NH(C₁-C₄烷基)、N(C₁-C₄烷基)₂、NH(C＝O)C₁-C₄烷基、(C＝O)NH(C₁-C₄烷基)、(C＝O)N(C₁-C₄烷基)₂、S(C₁-C₄烷基)、SO(C₁-C₄烷基)、SO₂(C₁-C₄烷基)、SO₂NH(C₁-C₄烷基)、SO₂N(C₁-C₄烷基)₂和NHSO₂(C₁-C₄烷基)。在一些实施例中，环烷基是指C₃-C₆环烷基基团。在一些实施例中，C₃-C₆环烷基基团任选地经1至3个卤素原子取代。在一些实施例中，C₃-C₆环烷基基团任选地经1至3个氟原子取代。示例性C₃-C₆环烷基基团包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。示例性C₃-C₁₂环烷基基团进一步包括双环[3.1.0]己基、双环[2.1.1]己基、环庚基、双环[4.1.0]庚基、螺[4.2]庚基、环辛基、螺[4.3]辛基、螺[5.2]辛基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基、十氢萘基和螺[5.4]癸基。在适当的情况下，环烷基基团可以与其他基团稠合，使得环烷基基团与另一环系统(例如，式I的C环)之间存在多于一个化学键。在一些实施例中，环烷基基团未经取代。

“卤代烷基”，除非另外特别定义，否则是指直链或支链C₁-C₁₂烷基基团，其中一或多个氢原子被卤素取代。在一些实施例中，“卤代烷基”是指C₁-C₆卤代烷基基团。在一些实施例中，卤代烷基基团的1至3个氢原子被卤素取代。在一些实施例中，卤代烷基基团的每个氢原子被卤素(例如，三氟甲基)取代。在一些实施例中，卤代烷基如本文所定义，其中卤素在每种情况下为氟。示例性卤代烷基基团包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基和五氟乙基。

“烷氧基”，除非另外特别定义，否则是指直链或支链C₁-C₁₂烷基基团，其中在每种情况下在两个碳原子之间存在一或多个氧原子。在一些实施例中，“烷氧基”是指C₁-C₆烷氧基基团。在一些实施例中，本文提供的C₁-C₆烷氧基基团具有一个氧原子。示例性烷氧基基团包括甲氧基、乙氧基、CH₂OCH₃、CH₂CH₂OCH₃、CH₂OCH₂CH₃、CH₂CH₂OCH₂CH₃、CH₂OCH₂CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₂OCH₃、CH₂OCH(CH₃)₂、CH₂OC(CH₃)₃、CH(CH₃)OCH₃、CH₂CH(CH₃)OCH₃、CH(CH₃)OCH₂CH₃、CH₂OCH₂OCH₃、CH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃和CH₂OCH₂OCH₂OCH₃。

“环烷氧基”，除非另外特别定义，否则是指如上定义的C₄-C₁₀或C₄-C₆烷氧基基团，其中该基团为环状的并且含有一个氧原子。示例性环烷氧基基团包括氧杂环丁烷基、四氢呋喃基和四氢哌喃基。

“卤代烷氧基”，除非另外特别定义，否则是指如上定义的C₁-C₆卤代烷基基团，其中在每种情况下在两个碳原子之间存在一个或两个氧原子。在一些实施例中，本文提供的C₁-C₆卤代烷氧基基团具有一个氧原子。示例性卤代烷氧基基团包括OCF₃、OCHF₂和CH₂OCF₃。

“硫代烷基”，除非另外特别定义，否则是指如上定义的C₁-C₁₂或C₁-C₆烷氧基基团，其中氧原子被硫原子取代。在一些实施例中，硫代烷基基团可以包括被一个或两个氧原子取代的硫原子(即，烷基砜和烷基亚砜)。示例性硫代烷基基团为在上述烷氧基定义中示例的那些，其中每个氧原子在每种情况下被硫原子取代。

“硫代环烷基”，除非另外特别定义，否则是指如上定义的C₄-C₁₀或C₄-C₆硫代烷基基团，其中该基团为环状的并且含有一个硫原子。在一些实施例中，硫代环烷基基团的硫原子被一个或两个氧原子取代(即，环状砜或亚砜)。示例性硫代环烷基基团包括硫杂环丁烷基、硫杂环戊烷基、硫杂环己烷基、1,1-二氧杂硫杂环戊烷基和1,1-二氧代硫杂环戊烷。

“杂环基”，除非另外特别定义，否则是指在环中具有除碳以外的至少一个原子的单个饱和或部分不饱和4元至8元环，其中该原子选自由氧、氮和硫组成的组；该术语还包括具有至少一个此种饱和或部分不饱和环的多重稠环系统，这些多重稠环系统具有7至12个原子并且在下文进一步描述。因此，该术语包括在环中具有约1至7个碳原子以及选自由氧、氮和硫组成的组的约1至4个杂原子的单个饱和或部分不饱和环(例如，3、4、5、6、7或8元环)。该环可为C-支链的(即，被C₁-C₄烷基取代)。该环可经一或多个(例如1、2或3个)氧代基团取代，并且硫原子和氮原子也可以以它们的氧化形式存在。示例性杂环包括但不限于氮杂环丁烷基、四氢呋喃基和哌啶基。当化合价要求允许时，多重稠环系统的环可以经由稠合、螺环和桥键彼此连接。应当理解，多重稠环系统的各个环可以相对于彼此以任何顺序连接。亦应理解，多重稠环系统(如上文针对杂环所定义)的连接点可以在多重稠环系统的任何位置。还应当理解，杂环或杂环多重稠环系统的连接点可以在包括碳原子和氮原子的杂环基基团的任何合适的原子处。示例性的杂环包括但不限于氮丙啶基、氮杂环丁烷基，吡咯烷基、哌啶基、高哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、二氢噁唑基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、1,2,3,4-四氢喹啉基、苯并噁嗪基、二氢噁唑基、苯并二氢吡喃基、1,2-二氢吡啶基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二噁唑基、1,4-苯并二氧杂基、螺[环丙烷-1,1'-异吲哚基]-3'-酮、异吲哚基-1-酮、2-氧杂-6-氮杂螺并[3.3]庚基、咪唑啉丁-2-酮、N-甲基哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、1,4-二噁烷、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、吡喃、3-吡咯啉、噻喃、吡喃、四氢噻吩、奎宁环、托烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷、(1s,4s)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷、(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.2]辛烷和吡咯烷-2-酮。

在一些实施例中，杂环基是具有选自由氮、氧和硫组成的组的1至3个杂原子的C₄-C₁₀杂环基。在一些实施例中，杂环基基团既不是双环也不是螺环。在一些实施例中，杂环基是具有1至3个杂原子的C₅-C₆杂环基，其中若存在3个杂原子，则至少2个是氮。

“芳基”，除非另外特别定义，否则是指单个全碳芳环或多重稠合全碳环系统，其中环中的至少一者为芳族的，并且其中芳基基团具有6至20个碳原子、6至14个碳原子、6至12个碳原子或6至10个碳原子。芳基包括苯基。芳基还包括具有约9至20个碳原子的多重稠环系统(例如，包含2、3或4个环的环系统)，其中至少一个环是芳族的，且其中其他环可以是芳族或非芳族的(即碳环)。这样的多重稠环系统可选地在该多重稠环系统的任何碳环部分上被一个或多个(例如1、2或3)氧代基团取代。当化合价要求允许时，多重稠环系统的环可以经由稠合、螺环和桥键彼此连接。应当理解，如上文所定义的，多重稠环系统的连接点可以在环系统的任何位置，包括环的芳族部分或碳环部分。示例性芳基基团包括苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、蒽基等。

“杂芳基”，除非另外特别定义，否则是指在环中具有除碳以外的至少一个原子的5元至6元芳环，其中该原子选自由氧、氮和硫组成的组；“杂芳基”还包括具有8至16个原子的多重稠环系统，其具有至少一个此种芳环，这些多重稠环系统在下文进一步描述。因此，“杂芳基”包括具有约1至6个碳原子和选自氧、氮和硫的约1至4个杂原子的单个芳环。若环为芳族的，则硫原子和氮原子也可以以氧化形式存在。示例性杂芳基环系统包括但不限于吡啶基、嘧啶基、恶唑基或呋喃基。“杂芳基”还包括多重稠环系统(例如，包含2或3个环的环系统)，其中如上定义的杂芳基基团与选自杂芳基(以形成例如萘啶基，诸如1,8-萘啶基)、杂环(以形成例如1,2,3,4-四氢萘啶基，诸如1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基)、碳环(以形成例如5,6,7,8-四氢喹啉基)和芳基(以形成例如吲唑基)的一或多个环稠合以形成多重稠环系统。因此，杂芳基(单个芳环或多重稠环系统)在杂芳环内具有1至15个碳原子和约1至6个杂原子。这样的多重稠环系统可以可选地在该稠环的碳环或杂环部分上被一个或多个(例如1、2、3或4)氧代基团取代。当化合价要求允许时，多重稠环系统的环可以经由稠合、螺环和桥键彼此连接。应当理解，多重稠环系统的各个环可以相对于彼此以任何顺序连接。还应理解，多重稠环系统(如上文针对杂芳基所定义)的连接点可以在多重稠环系统的任何位置，包括多重稠环系统的杂芳基、杂环、芳基或碳环部分。还应理解，杂芳基或杂芳基多重稠环系统的连接点可以在杂芳基或杂芳基多重稠环系统的任何合适的原子处，包括碳原子和杂原子(例如，氮)。示例性杂芳基包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基，异喹啉基，苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑基、5,6,7,8-四氢异喹啉基苯并呋喃基、苯并咪唑基、噻吩基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮、三唑基、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑和3b,4,4a,5-四氢-1H-环丙烷[3,4]环戊[1,2-c]吡唑。

如本文所用，术语“手性”是指具有与镜像配偶体不重叠性的分子，而术语“非手性”是指与其镜像配偶体可重叠的分子。

如本文所用，术语“立体异构体”是指具有相同化学组成，但原子或基团在空间的排列不同的化合物。

如本文所用，与化学结构中的键相交的波浪线表示波浪形键在化学结构中相交的键与分子的其余部分的连接点。

如本文所用，术语“C-连接的”意指该术语所描述的基团通过环碳原子连接分子的其余部分。

如本文所用，术语“N-连接的”意指该术语所描述的基团通过环氮原子连接至分子的其余部分。

“非对映异构体”指代具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如，熔点、沸点、光谱特性和反应性。非对映异构体的混合物可以在高分辨率分析程序(诸如电泳和色谱法)下分离。

“镜像异构体”指代化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。

本文所使用的立体化学定义和惯例通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds,”John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明的化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体，以及它们的混合物，例如外消旋混合物，形成本发明的一部分。许多有机化合物以旋光活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子围绕其手性中心的绝对构型。前缀d和l或者(+)和(-)用于表示该化合物对平面偏振光的旋转符号，其中(-)或1表示该化合物为左旋。带有(+)或d前缀的化合物为右旋。对于给定的化学结构，此等立体异构体是相同者，但它们是彼此的镜像。特定的立体异构体也可以称为镜像对映异构体，并且这些对映异构体的混合物通常称为镜像对映异构体混合物。镜像对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋物，它们可能出现在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性之处。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种无旋光活性的对映体种类的等摩尔混合物。

当以非立体化学方式(例如扁平)绘制本文化合物式中的键时，与该键连接的原子包括所有立体化学可能性。当以限定的立体化学方式(例如，粗体、粗体-楔形、虚线或虚线楔形)绘制本文化合物式中的键时，应理解，除非另有说明，否则立体化学键所连接的原子富含所描绘的绝对立体异构体。在一个实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少51％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少80％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少90％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少95％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少97％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少98％。在另一实施例中，该化合物可为所示绝对立体异构体的至少99％。

如本文所用，术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指通过低能垒相互转化的具有不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子异变的互变异构体)包括经由质子迁移的相互转化，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体包括通过一些键合电子的重组而进行的相互转化。

如本文所用，术语“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合物或复合物。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。在一些实施例中，本文提供的化合物的水合物为酮水合物。

如本文所用，术语“保护基团(protective group)”或“保护基团(protectinggroup)”是指通常用于阻断或保护化合物上的特定官能基团的取代基。例如，“氨基保护基团”是连接至氨基的取代基，其阻断或保护化合物中的氨基官能团。合适的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBZ)和9-芴基亚甲基氧羰基(Fmoc)。类似地，“羟基保护基团”是羟基的取代基，其阻断或保护羟基官能团。合适的保护基团包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基保护基团”是指阻断或保护羧基官能团的羧基的取代基。常见的羧基保护基团包括苯基磺酰基乙基、氰基乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基苯基亚磺酰基)乙基、2-(二苯基膦基)-乙基、硝基乙基等。对于保护基团和其用途的一般描述，请参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene,Greene's Protective Groups in Organic Synthesis第4版，Wiley-Interscience,New York,2006。

如本文所用，术语“哺乳动物”包括但不限于人、小鼠、大鼠、豚鼠、猴子、狗、猫、马、牛、猪和绵羊。

如本文所用，术语“药用盐”是指包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于在本文所述的化合物上发现的特定取代基。当本发明的化合物含有相对酸性的官能团时，可以通过使这种化合物的中性形式与足够量的纯净的或在合适的惰性溶剂中的所需碱接触来获得碱加成盐。衍生自药用无机碱的盐的实例包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌等。衍生自药用有机碱的盐包括伯、仲和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、肼苯胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺，三乙醇胺等。当本发明的化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这种化合物的中性形式与足够量的纯净的或在合适的惰性溶剂中的所需酸接触来获得酸加成盐。药用酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢氟酸或亚磷酸等，以及衍生自相对无毒的有机酸的盐，例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐，例如精氨酸盐等，以及有机酸的盐，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等(例如参见Berge,S.M.等人，"Pharmaceutical Salts",Journal ofPharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性官能团，这使得该化合物可以转化为碱或酸加成盐。

化合物的中性形式可以优选地通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生。化合物的母体形式在某些物理性质(例如在极性溶剂中的溶解度)方面与各种盐形式不同，但是对于本发明的目的，这些盐与化合物的母体形式等效。

除盐形式外，本发明还提供前药形式的化合物。如本文所用，术语“前药”是指在生理条件下容易发生化学变化以提供本发明的化合物的那些化合物。另外，可以在离体环境中通过化学或生化方法将前药转化为本发明的化合物。例如，当将前药与合适的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储库中时，可以将其缓慢转化为本发明的化合物。

本发明的前药包括这样的化合物，其中氨基酸残基或两个或多个(例如，两个，三个或四个)氨基酸残基的多肽链通过酰胺或酯键与本发明化合物的游离氨基、羟基或羧酸基团共价连接。氨基酸残基包括但不限于通常由三个字母符号表示的20种天然氨基酸，还包括磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、4-羟基脯氨酸、羟赖氨酸、脱氢葡萄糖、异十二烷、γ-羧基谷氨酸、马尿酸、八氢吲哚-2-羧酸、他汀、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、青霉胺、鸟氨酸、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、甲基丙氨酸、对苯甲酰基苯丙氨酸、苯甘氨酸、炔丙基甘氨酸、肌氨酸、蛋氨酸砜和叔丁基甘氨酸。

还包括其他类型的前药。例如，本发明的化合物的游离羧基可衍生为酰胺或烷基酯。作为另一实例，包含游离羟基基团的本发明的化合物可以通过将羟基基团转化成基团而衍生为前药，诸如但不限于磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲氨基乙酸酯或磷酰氧基甲氧基羰基，如以下文献中所述：Fleisher,D.等人，(1996)Improved oral drug delivery:solubility limitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug DeliveryReviews,19:115。还包括羟基和氨基基团的氨基甲酸酯前药，如羟基基团的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。还涵盖羟基基团衍生为(酰氧基)甲基和(酰氧基)乙基醚，其中酰基基团可以是任选地被一些基团取代的烷基酯，这些基团包括但不限于醚、胺和羧酸官能团，或者其中酰基基团是如上所述的氨基酸酯。此类前药描述于J.Med.Chem.(1996),39:10中。更具体的实例包括用诸如以下项的基团取代醇基团的氢原子：(C_1-6)烷酰基甲基、1-((C_1-6)烷酰基)乙基、1-甲基-1-((C_1-6)烷酰基)乙基、(C_1-6)烷氧基羰氧基甲基、N-(C_1-6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C_1-6)烷酰基、α-氨基(C_1-4)烷酰基、芳基和α-氨基酰基、或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中α-氨基酰基基团各自独立地选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)₂、-P(O)(O(C_1-6)烷基)₂或糖基(由除去碳水化合物的半缩醛形式的羟基产生的自由基)。

对于前药衍生物的其他实例，参见例如：a)Design of Prodrugs,H.Bundgaard编辑,(Elsevier,1985)和Methods in Enzymology,42卷,309-396页,K.Widder,等人编辑(Academic Press,1985)；b)A Textbook of Drug Design and Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编辑,第5章“Design and Application of Prodrugs,”H.Bundgaard编辑，第113-191页(1991)；c)H.Bundgaard,Advanced Drug Delivery Reviews,8:1-38(1992)；d)H.Bundgaard,等人,Journal of Pharmaceutical Sciences,77:285(1988)；以及e)N.Kakeya,等人,Chem.Pharm.Bull.,32:692(1984)，通过引用将它们各自具体地并入本文。

另外，本发明提供了本发明化合物的代谢物。如本文所用，“代谢物”是指通过特定化合物或其盐在体内代谢产生的产物。此类产物可以例如由所施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯、酶促裂解等产生。

代谢产物通常通过制备本发明化合物具有放射性标记(例如，¹⁴C或³H)的同位素进行鉴定，并以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)肠胃外施用于动物(诸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人，使其有足够的时间新陈代谢(通常约30秒至30小时)，并从尿液、血液或其他生物学样品中分离出其转化产物。由于这些产物已被标记，因此很容易分离(通过使用能够结合在代谢物中存活的表位的抗体来分离其他产物)。以常规方式，例如，通过MS、LC/MS或NMR分析，来确定代谢物的结构。通常，代谢物的分析以与本领域技术人员熟知的常规药物代谢研究相同的方式进行。代谢产物只要在体内未被发现，就可用于本发明化合物治疗给药的诊断测定。

本发明的某些化合物可以非溶剂化的形式以及包括水合形式在内的溶剂化的形式存在。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化形式等效，并旨在涵盖于本发明的范围内。某些本发明的化合物可以多种结晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所设想的用途皆为等效，并且旨在并入本发明的范围内。

本发明的某些化合物具备不对称碳原子(手性中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体、位置异构体和个体异构体(例如，分离的对映异构体)全部旨在为本发明范围所涵盖在内。

如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的指定成分的组合产生的任何产品。“药用”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害。

术语“治疗”和“处理”(treat,treatment)是指治疗处理和/或预防处理或防护性措施，其中目的是阻止或减慢(减轻)不期望的生理变化或疾患，例如癌症的发展或扩散。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状缓解、疾病或病症程度减轻、疾病或病症状态稳定(即不恶化)、疾病进展延缓或减慢、改善或减轻疾病状态或病症、和缓解(无论是部分还是完全缓解)，无论是可检测的还是不可检测的。与未接受治疗的预期生存期相比，“治疗”还可能意味着生存期延长。需要治疗的人包括已患有疾病或病症的人，以及易于有疾病或病症的人或待预防疾病或病症的人。

短语“治疗有效量”或“有效量”是指本发明之化合物的量，其(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减轻、改善、或消除特定疾病、病症或疾患的一或多种症状，或(iii)预防或延迟如本文中所述该特定疾病、病症或疾患的一或多种症状的发作。对于癌症疗法，可例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或测定缓解率(RR)来测量疗效。

术语“生物利用度”是指施用于患者的给定量药物的全身性利用度(即血液/血浆水平)。生物利用度为绝对性术语，表示药物从施用剂型到达全身循环的时间(速率)和总量(程度)的量度。

“酮还原酶”和“KRED”在本文中可互换使用，是指具有将羰基基团还原为其相应醇的酶促能力的多肽。例如，已发现某些属于酮还原酶(KRED)或羰基还原酶类别(EC1.1.1.184)的酶可用于将前立体异构体醛或酮底物立体选择性地转化为相应的手性醇产物。KRED通常将酮或醛底物转化为相应的醇产物，但也可以催化逆反应，将醇底物氧化为相应的酮/醛产物，然后有时称为例如醇脱氢酶(ADH)。醇脱氢酶(EC 1.1.1.1)属于一组促进醇与醛或酮之间转化的酶。酮和醛的还原以及醇通过酶诸如KRED的氧化需要辅因子，最常见的是还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，以及用于氧化反应的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)。NADH和NADPH用作电子供体，而NAD和NADP用作电子受体。KRED越来越多地用于将酮和醛立体选择性地转化为用于生产关键药物化合物的手性醇化合物。

使用KRED产生有用化学化合物的实例包括4-氯乙酰乙酸酯的不对称还原(例如，Zhou等人，J.Am.Chem.Soc.(1983),105(18):5925-5926；Santaniello等人，J.Chem.Res.,Synop.(1984),4:132-133；美国专利号5,559,030；美国专利号5,700,670和美国专利号5,891,685)、二氧代羧酸的还原(例如，美国专利号6,399,339)、(S)-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的还原(例如，美国专利号6,645,746和国际专利公开号WO 01/40450)、基于吡咯并三嗪的化合物的还原(例如，美国专利申请公开号2006/0286646)、经取代的苯乙酮的还原(例如，美国专利号6,800,477)和酮基硫杂环戊烷的还原(例如，国际专利公开号WO 2005/054491和Noey等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2015),112(15):E7065-E7072)。

在一些实施例中，酮还原可以在醇诸如异丙醇存在下进行，以提供用于逆氧化反应(醇脱氢)的底物。在一些实施例中，在酮还原反应中消耗的NADH/NADPH通过逆氧化反应而再生。在一些实施例中，KRED能够立体选择性地将2,4-二氧代-4-苯基-丁酸乙酯还原为相应的醇，(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯。在一些实施例中，KRED利用辅因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)作为还原剂。在其他实施例中，在酮还原反应中消耗的NADH/NADPH由辅酶诸如葡萄糖脱氢酶或甲酸脱氢酶而再生。例如，葡萄糖脱氢酶的底物为葡萄糖，而甲酸为甲酸脱氢酶的底物。如本文所用的酮还原酶和辅酶包括天然存在的(野生型)以及经工程改造的酮还原酶和辅酶。经工程改造的酮还原酶的实例描述于例如美国专利号7,820,421中。

在一些实施例中，当使用宿主生物的全细胞进行该方法时，全细胞天然或重组地提供KRED、辅酶和/或辅因子。在一些实施例中，经工程改造的酮还原酶和/或辅酶以纯化酶、用编码酶的基因转化的全细胞和/或此类细胞的细胞提取物和/或裂解物的形式加入至反应混合物中。编码经工程改造的酮还原酶和/或辅酶的基因可以单独转化至宿主细胞中或一起转化至同一宿主细胞中。例如，可以用编码经工程改造的酮还原酶的基因转化一组宿主细胞，并且可以用编码辅酶的基因转化另一组宿主细胞。两组经转化的细胞可以以全细胞的形式，或以来源于其的裂解物或提取物的形式一起用于反应混合物中。在其他实施例中，宿主细胞可以用编码经工程改造的酮还原酶和辅酶的基因来转化。

在一些实施例中，用编码经工程改造的酮还原酶或辅酶的基因或其细胞提取物和/或裂解物转化的全细胞以多种不同形式使用，包括固体(例如，冻干、喷雾干燥等)或半固体(例如，粗制糊)。例如，细胞提取物或细胞裂解物可以通过沉淀(硫酸铵、聚乙烯亚胺、热处理等，然后在冻干之前进行脱盐过程(例如，超滤、透析等))进行部分纯化。任何细胞制剂皆可以通过使用已知交联剂诸如例如戊二醛进行交联或固定至固相(例如Eupergit C等)来稳定。

在一些实施例中，本发明的酶以各种形式使用，包括纯化酶、粗制酶、微生物培养物、细菌细胞及其经处理对象。本文使用的经处理对象的实例包括冻干的细菌细胞、丙酮干燥的细菌细胞、研磨的细菌细胞、细菌细胞的自消化物质、细菌细胞的经超声处理的对象、细菌细胞提取物或细菌细胞的经碱处理的对象。在其他实施例中，可以将如上所述的各种纯度或形式的酶固定化以供使用，例如，通过已知方法，包括对无机载体诸如硅胶和陶瓷、纤维素、离子交换树脂等的吸附方法，聚丙烯酰胺法、含硫多糖凝胶法(例如卡拉胶凝胶法)、海藻酸凝胶法、琼脂凝胶法等。所属技术领域中通常已知的任何固定酶的方法都可以用于将酶固定至载体。例如，酶可以直接结合至具有一或多个官能基团的树脂的膜、颗粒等，或者它可以通过具有一或多个官能基团的桥接化合物例如戊二醛结合至树脂。此类酶固定化反应描述于例如第2版Microbial Enzymes and Biotechnology(Elsevier AppliedScience 1990；编辑W.M.Fogarty和C.T.Kelly)第369-394页。

“天然存在”或“野生型”是指在自然界中发现的形式。例如，天然存在的或野生型多肽或多核苷酸序列是存在于生物体中的序列，该序列可以从自然界的来源中分离出并且未通过人为操纵而被有意地修饰。

如本文所用的“工程化酮还原酶”是指具有通过人为操纵产生的变体序列(例如，通过天然存在的亲本酶的定向进化或先前衍生自天然存在的酶的变体的定向进化而产生的序列)的酮还原酶。

如本文所用的“高度立体选择性”是指能够将底物转化或还原为相应产物(例如，将2,4-二氧代-4-苯基-丁酸乙酯转化或还原为(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯)的酮还原酶)，具有至少约99％的立体异构体过量。在一些实施例中，KRED是高度立体选择性的。在一些实施例中，如本文所用的“立体异构体过量”是指对映异构体过量。“对映异构体过量”或“ee”在本文中可互换使用，是指样本与其相应的不可重叠镜像化合物相比含有一种对映异构体的程度。外消旋混合物具有0％的ee，而仅包含一种对映异构体的样本具有100％的ee。

制备RIP1激酶抑制剂的方法

本文提供了制备可用于治疗与炎症、细胞死亡、神经病症和其他疾病相关联的疾病和病症的化合物的方法。在一些实施例中，所制备的化合物包括可用于治疗此类疾病和病症的RIP1激酶抑制剂。在一些实施例中，所制备的化合物包括例如在美国专利申请公开US2019/0100530中例示的化合物，该专利申请公开的内容全文并入本文。本文所述的方法例如提高最终产物和其合成中的关键中间体的产物纯度、非对映异构体比率(dr)、立体异构体过量和/或产率。参考以下几个反应方案将更充分地理解本文所述的方法。在一些实施例中，这些方法出乎意料地提供提高的产品纯度、提高的非对映异构体比率、提高的立体异构体过量和/或提高的产率。提高的产物纯度包括例如反应产物的提高的手性纯度。

在一些实施例中，本文提供了制备式(I)或式(II)的化合物的方法：

或其药用盐，其中：

R¹选自由以下项组成的组：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、苯基、苄基、4元至8元杂环基和5元至6元杂芳基，其中R¹通过碳原子结合至相邻羰基，并且R¹任选地经选自由以下项组成的组的一个或两个取代基取代：F、Cl、Br、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、羟基、羟基甲基、氰基、氰基甲基、氰基乙基、C(O)C₁-C₆烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；

每个R^N独立地选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷基；或两个R^N可与相邻N一起形成4元至6元环；

R²选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆硫代烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂-(4元至6元杂环基)、CH₂CH₂-(4元至6元杂环基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；其中当存在苯环时，其可经选自由以下项组成的组的1至3个取代基取代：卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基和氰基；

R³选自由以下项组成的组：D、卤素、OH、CN、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、环丙基、C₁-C₄烷氧基和C₁-C₄卤代烷氧基；并且

n为1、2或3。

在一些实施例中，本文提供了制备式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体或其药用盐的方法，其中R¹、R²、R³和n如本文所定义，该方法包括：

(a)使手性N-氨基内酰胺式p化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂和醇溶剂的存在下与式c的亚氨酸酯盐化合物或其盐接触：

以形成式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；并且

该式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体为该式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体的制备中的中间化合物。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法：

或其盐，其中R²和n如本文所述，该方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的有机酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；以及

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²任选地经C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基或芳基取代；

Pg³为任选的羟基保护基团团并且在每次出现时可为相同或不同；

Pg⁴为任选的胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式l的经保护的腙化合物或其立体异构体的制备中的中间体；并且

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的有机酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一些实施例中，一种制备式b的亚氨酸酯盐化合物的方法：

该方法包括：

(a)使式a的氰基甲酸酯化合物：

在无水酸源的存在下在醇溶剂中反应，以形成该式b的亚氨酸酯盐化合物，其中该无水酸源为TMSCl，该酸为HCl，并且Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同。

在一些实施例中，本文提供了制备选自由以下项组成的组的化合物的方法：

或其药用盐，其中：

R¹、R³和n如本文所定义；

每个R⁴选自由以下项组成的组：H、F、Cl、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷氧基；并且

m为0、1、2或3。

在一些实施例中，本文提供了制备为下列的化合物：

或其药用盐的方法，其中R¹、R⁴、m和n如本文所定义。

在本文所述实施例中的一些实施例中，R¹选自由C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆卤代烷基、苯基、苄基、氧杂环丁烷基、氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基、噻吩基和吡唑基；其中R¹任选地被以下取代：(i)选自由F、Cl、甲基、羟基、羟基甲基、氰基和三氟甲基组成的组的一个取代基，或(ii)两个F取代基。在一些实施例中，R¹任选地被选自由F、Cl、甲基、乙基、羟基、羟基甲基、甲氧基甲基、氰基、三氟甲基、二氟甲氧基和三氟甲氧基组成的组的一个或两个取代基取代。在一些实施例中，R¹为C₁-C₆烷基。在一些实施例中，R¹为C₁-C₄烷基。在一些实施例中，R¹为C₃-C₅环烷基。在一些实施例中，R¹为C₃-C₄环烷基。在一些实施例中，R¹为甲基。在一些实施例中，R¹为乙基。在一些实施例中，R¹为CF₃CH₂。在一些实施例中，R¹为2-丙基。在一实施例中，R¹为叔丁基。在一些实施例中，R¹为(2-羟基)-2-丙基。在一些实施例中，R¹为(2-氰基)-2-丙基。在一些实施例中，R¹为C₁-C₆卤代烷基。在一些实施例中，R¹为C₁-C₄卤代烷基。在一些实施例中，R¹优选为环丙基。在一些实施例中，R¹为单-或二-氟环丙基。在一些实施例中，R¹为1-氟环丙基。在一些实施例中，R¹为2-氟环丙基。在一些实施例中，R¹为2,2-二氟环丙基。在一些实施例中，R¹为1-(三氟甲基)环丙基。在一些实施例中，R¹为1-甲基环丙基。在一些实施例中，R¹为1-(羟基甲基)环丙基。在一些实施例中，R¹为环丁基。在一些实施例中，R¹为环戊基。在一些实施例中，R¹为苯基。在一些实施例中，R¹为苄基。在一些实施例中，R¹为氧杂环丁烷-3-基。在一些实施例中，R¹为3-甲基氧杂环丁烷-3-基。在一些实施例中，R¹为氧杂双环[3.1.0]己烷-6-基。在一些实施例中，R¹为2-吡啶基。在一些实施例中，R¹为1-甲基吡唑-4-基。在一些实施例中，R¹为2-噻吩基。

在本文所述实施例中的一些实施例中，每个R^N独立地选自由H和C₁-C₆烷基组成的组。在一些实施例中，每个R^N为C₁-C₄烷基。在一些实施例中，每个R^N为甲基。

在本文所述实施例中的一些实施例中，R²优选地为苯基。在一些实施例中，R²为单-或二氟苯基。在一些实施例中，R²为单-或二氯苯基。在一些实施例中，R²为吡啶基。在一些实施例中，R²为氯取代的吡啶基。在一些实施例中，R²为氟取代的吡啶基。在一些实施例中，R²为吡唑基。在一些实施例中，R²为1-甲基-1H-吡唑-4-基。在一些实施例中，R²为4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-基。

在本文所述实施例中的一些实施例中，R³为H。在一些实施例中，R³优选地为F。在一些实施例中，R³为Cl。在实施例中，R^3a和R^3b各自为甲基。在一些实施例中，R³为甲基。在一些实施例中，R³为OH。在一些实施例中，R³为CN。在一些实施例中，R³为D。

在本文所述实施例中的一些实施例中，R⁴选自由H、F、Cl、CH₃、CH₂CH₃、OCH₃、CF₃、OCF₃、CF₂H和OCF₂H组成的组。在一些实施例中，R⁴优选地为F。

在本文所述实施例中的一些实施例中，m优选地为0。在一些实施例中，m为1。在一些实施例中，m为2。在一些实施例中，m为3。

在本文所述实施例中的一些实施例中，n优选地为1。在一些实施例中，n为2。在一些实施例中，n为3。

保护基团一般示于本文中的几个反应方案中，并且所属技术领域中的技术人员将认识到在许多情况下可以交替地使用各种不同的保护和脱保护方案，如“Greene'sProtective Groups in Organic Synthesis,”第五版,2014by John Wiley&Sons,Inc.中所述。在一些实施例中，氨或羟基取代基可存在于本文所述的变量R¹至R⁴和R^N中，并且应理解合适的保护基团可与此类取代基结合使用。

在一些实施例中，制备式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体或药用盐的方法(P1)，其中R¹、R²、R³和n如本文所定义，包括：

(a)使手性N-氨基内酰胺式p化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂和醇溶剂的存在下与式c的亚氨酸酯盐化合物或其盐接触：

以形成式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体：

或其盐；

其中：

Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；并且

该式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体为该式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体的制备中的中间化合物。

在一个优选实施例中，手性N-氨基内酰胺式p是(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮。在一个优选实施例中，式c的亚氨酸酯盐化合物是2-乙氧基-2亚氨基乙酸乙酯。在一个优选实施例中，式x的手性双环三唑化合物是乙基(5S,7R)-7-羟基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-羧酸叔丁酯。

在一些实施例中，酸添加剂是羧酸、磺酸或无机酸。在一些实施例中，酸添加剂是乙酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、异丁酸、新戊酸、水杨酸、恶唑酸、2-吡啶甲酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、甲酸、盐酸或三甲基氯硅烷。在一个优选实施例中，酸添加剂是乙酸。在一些实施例中，酸添加剂是异丁酸。在一些实施例中，酸添加剂是水杨酸。

在一些实施例中，方法(P1)的步骤(a)的式c的亚氨酸酯盐化合物被另一种试剂取代。在一些实施例中，取代试剂是硫代草氨酸乙酯、氰基甲酸乙酯、氰基甲酸甲酯或1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。在一些实施例中，取代试剂为硫代草氨酸乙酯。在一些实施例中，取代试剂是1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。在一些实施例中，取代试剂为硫代草氨酸乙酯并且酸添加剂为异丁酸。在一些实施例中，取代试剂是1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯并且酸添加剂是水杨酸。

在个优选实施例中，方法(P1)的步骤(a)的式x的手性双环三唑化合物的产率为至少80％。在一个特别优选实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。在一些实施例中，产率为至少95％。在一些实施例中，产率为至少98％。

在一个优选实施例中，方法(P1)的步骤(a)的醇溶剂是EtOH。在一个特别优选实施例中，酸添加剂和醇溶剂是EtOH与乙酸的混合物。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(a)进一步包括在将温度冷却至约25±10℃之前将温度保持在约60℃。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(a)进一步包括加入水。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(a)进一步包括加入式x的手性双环三唑化合物的晶种。

在一些实施例中，方法(P1)进一步包括：

(b)使该式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体在卤化剂的存在下脱氧卤化，以形成式y的手性卤化双环化合物或其立体异构体：

或其盐，其中X为卤素。

在一个优选实施例中，式y的手性卤化双环化合物为环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-基]甲酮。在一些实施例中，卤化剂为氟化剂。氟化剂的实例由M.K.Nielsen等人在J.Am.Chem.Soc.140(15):5004–5008(2018)中描述。在一些实施例中，卤化剂为磺酰氟。在一个优选实施例中，卤化剂为PBSF。在一些实施例中，卤化剂为PyFluor(2-吡啶磺酰氟)。在一些实施例中，卤化剂为二乙氨基三氟化硫(DAST)。在一些实施例中，卤化剂为双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(Deoxo-Fluor或BAST)。

在一些实施例中，方法(P1)的步骤(b)在有机碱和有机溶剂的存在下进行。在一个优选实施例中，有机碱为N,N-二异丙基乙胺，且有机溶剂为乙腈。在一些实施例中，存在添加剂。在一个优选实施例中，添加剂为三乙胺三氢氟酸盐。在一些实施例中，添加剂为N,N-二异丙基乙胺三氢氟酸。在一些实施例中，添加剂用作氟化物源。

在一些实施例中，方法(P1)的步骤(b)进一步包括在室温下历经至少一小时缓慢加入试剂以减少蒸发。在一个优选实施例中，方法(P1)的步骤(a)的式y的手性卤化双环化合物的产率为至少80％。在一个特别优选实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。在一些实施例中，产率为至少95％。在一些实施例中，产率为至少98％。

在一些实施例中，方法(P1)进一步包括：

(c)使该式y的手性卤化双环化合物或其立体异构体在醚溶剂/水混合物的存在下与酸接触，以形成式z的卤化双环羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐。

在一个优选实施例中，式z的卤化双环羧酸化合物是(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-羧酸。在一个优选实施例中，该醚溶剂/水混合物为THF/水混合物并且该酸为HCl。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(c)进一步包括在将温度冷却至约35±10℃之前将温度保持在约50℃。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(c)进一步包括将温度冷却至约20±10℃并加入水，然后加入KOH溶液。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(c)进一步包括在加入水和KOH溶液的后将温度保持在约30℃。

在一些实施例中，方法(P1)进一步包括：

(d)使该式z的卤化双环羧酸化合物或其立体异构体与式aa化合物：

/>

或其盐在偶联剂的存在下接触，以形成式bb的手性双环酰胺化合物或其立体异构体：

或其盐，其中每个Pg⁵为胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同。

在一个优选实施例中，式aa化合物为N,O-二甲基羟胺盐酸盐。在一个优选实施例中，偶联剂为EDCI。在一个优选实施例中，式bb的手性双环酰胺化合物是(5S,7S)-7-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-甲酰胺。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(d)进一步包括将温度维持在约65℃。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(d)在添加剂的存在下进行。在一些实施例中，添加剂为NMI。

在一些实施例中，方法(P1)的步骤(d)进一步包括加入式bb的手性双环酰胺化合物的晶种。在一个优选实施例中，加入式bb的手性双环酰胺化合物的晶种是在CPME的存在下进行。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(d)进一步包括在将温度冷却至约0℃之前加入反溶剂。在一个优选实施例中，反溶剂为庚烷。

在一些实施例中，方法(P1)进一步包括：

(e)使该式bb的手性双环酰胺化合物或其立体异构体与式cc化合物：

R¹—MgBr _CC

或其盐接触，以形成手性双环酮化合物dd或其立体异构体：

或其盐。

在一个优选实施例中，式cc化合物为环丙基溴化镁。在一个优选实施例中，式dd的手性双环酮化合物为环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-基]甲酮。在一些实施例中，烷基化可以在有机溶剂中进行。在一些实施例中，在烷基化步骤中，有机溶剂为THF。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(e)进一步包括将温度维持在约-5℃±10℃。在一些实施例中，方法(P1)的步骤(e)进一步包括加入式dd的手性双环酮化合物的晶种。在一些实施例中，加入式dd的手性双环酮化合物的晶种是在有机溶剂的存在下进行。在一个优选实施例中，有机溶剂为EtOH。在一个特别优选实施例中，有机溶剂为EtOH水溶液。

在一些实施例中，式(I)的手性双环酮化合物选自由以下项组成的组的化合物：

或其药用盐，其中：

每个R⁴选自由以下项组成的组：H、F、Cl、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷氧基；并且

m为0、1、2或3。

在一些实施例中，式(I)的手性双环酮化合物为：

或其药用盐。

在一个特别优选实施例中，R¹为环丙基。在一个特别优选实施例中，m为0。在一个特别优选实施例中，n为1。

在一些实施例中，式(I)的手性双环酮化合物的立体异构体为式(II)化合物：

或其药用盐。

在一些实施例中，式(II)化合物选自由以下项组成的组的化合物：

或其药用盐，其中：

每个R⁴选自由以下项组成的组：H、F、Cl、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷氧基；并且

m为0、1、2或3。

在一些实施例中，式(II)化合物为：

或其药用盐。

在一个优选实施例中，R¹为环丙基。在一个优选实施例中，m为0。在一个优选实施例中，n为1。

在一些实施例中，本文提供了制备式(II)、式(III)或式(IV)的手性双环酮化合物：

或其药用盐的方法，其中R¹、R²和R³如本文所定义。在一个优选实施例中，R¹为环丙基。在一个优选实施例中，R²为苯基。在一个优选实施例中，R³为F。在一个优选实施例中，n为1。式(III)和式(IV)化合物中的每一者为例如式(I)化合物的非对映异构体和式(II)化合物的非对映异构体。本领域技术人员将容易理解基于本文描述的实施例对这些方法的各种改变和修改。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法(P2)：

其中R²和n如本文所定义，包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的有机酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；以及

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

/>

或其盐；其中：

Pg²任选地经C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基或芳基取代；

Pg³为任选的羟基保护基团团并且在每次出现时可为相同或不同；

Pg⁴为任选的胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同；

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式l的经保护的腙化合物或其立体异构体的制备中的中间体；并且

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的有机酰氯化物或其盐的存在下反应：

以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一些实施例中，一种制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体或其盐的方法，该方法包括：

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²、Pg³和Pg⁴如本文所定义；和

该式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

在一个优选实施例中，式d的手性羟基二羧酸化合物为D-苹果酸。在一个优选实施例中，式e的酰氯化物溶剂为乙酰氯。在一个优选实施例中，式f的手性羧酸环酐化合物为(S)-(-)-2-乙酰氧基-琥珀酸酐。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(a)进一步包括加入i-PrOAc。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(a)进一步包括加入正庚烷。

在一个优选实施例中，式l的经保护的腙化合物为(R,E)-2-(4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基亚丁基)肼-1-羧酸叔丁酯。在一个优选实施例中，式m的手性羟基酯肼化合物为2-((1S,3R)-4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁基)肼-1-羧酸叔丁酯。在一些实施例中，酸添加剂为羧酸。在一些实施例中，酸添加剂为草酸、琥珀酸、苯甲酸、异丁酸、新戊酸、水杨酸、恶唑酸、2-吡啶甲酸、三氟乙酸、甲酸或乙酸。在一个优选实施例中，酸添加剂是酸性酸。在一些实施例中，酸添加剂是对甲苯磺酸。在一些实施例中，酸添加剂是甲磺酸。在一些实施例中，酸添加剂是乙醇中的盐酸。在一些实施例中，酸添加剂是乙醇中的三甲基氯硅烷。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(b)在四甲基铵三乙酰氧基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠的存在下进行。

在一个优选实施例中，方法(P2)的步骤(a)的式f的手性羧酸环酐化合物的产率为至少80％。在一些实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。在一些实施例中，产率为至少92％。在一个特别优选实施例中，产率为至少93％。

在一个优选实施例中，方法(P2)的步骤(b)的式m的手性羟基酯肼化合物的产率为至少70％。在一些实施例中，产率为至少80％。在一个特别优选实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。

在一个优选实施例中，方法(P2)的步骤(b)的式m的手性羟基酯肼化合物与其非对映异构体的非对映异构体比率(dr)为至少10:1。在一些实施例中，dr为至少11:1。在一些实施例中，dr为至少12:1。在一些实施例中，dr为至少13:1。在一个特别优选实施例中，dr为至少14:1。

在一些实施例中，方法(P2)进一步包括：

(c)使该式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体与反应性芳烃化合物接触，以形成式h化合物或其立体异构体：

/>

或其盐。

在一些实施例中，反应性芳烃化合物为苯。在一些实施例中，式h化合物为(R)-2-乙酰氧基-4-氧代-4-苯基丁酸。在一些实施例中，接触步骤(c)是在路易斯酸的存在下在有机溶剂中进行。在一个优选实施例中，路易斯酸为AlCl₃，并且有机溶剂为CH₂Cl₂。在一些实施例中，有机溶剂包括正庚烷。

在一些实施例中，方法(P2)进一步包括：

(d)使该式h化合物或其立体异构体在式i的醇溶剂中反应：

Pg³-OH _i ；

以形成式j化合物或其立体异构体：

或其盐。

在一个优选实施例中，式i的醇溶剂为EtOH。在一些实施例中，反应步骤(d)在酸的存在下进行。在一些实施例中，酸为H₂SO₄。在一个优选实施例中，式j化合物为(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯。

在一些实施例中，方法(P2)进一步包括：

(e)使该式j化合物或其立体异构体与式k的肼化合物或其盐接触：

H₂NNH—P^g _K ；

以形成该式l的经保护的腙化合物或其立体异构体或其盐。

在一些实施例中，接触步骤(e)在酸添加剂的存在下进行。在一些实施例中，酸添加剂为甲酸。在一个优选实施例中，式k的肼化合物为NH₂NHBoc。

在一些实施例中，方法(P2)进一步包括：

(f)使该式l的经保护的腙化合物或其立体异构体反应，以形成式n的手性经保护的N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体：

或其盐；

(g)使该式n的手性经保护的N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体脱保护，以形成式o的盐化合物或其立体异构体：

(h)使该式o的盐化合物或其立体异构体在碱的存在下反应，以形成该式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体。

在一个优选实施例中，式n的手性经保护的N-氨基内酰胺化合物为((3R,5S)-3-羟基-2-氧代-5-苯基吡咯烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯。在一个优选实施例中，式o的盐化合物是(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮盐酸盐。在一个优选实施例中，式p的手性N-氨基内酰胺化合物是(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(g)进一步包括在有机溶剂中加入酸。在一些实施例中，酸是HCl并且有机溶剂是正丙醇。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(g)进一步包括将温度保持在约20-25℃。在一些实施例中，方法(P2)的步骤(h)进一步包括加入碱的水溶液。在一些实施例中，碱为氢氧化钠。

在一个优选实施例中，碱为水性碱溶液中的NaOH。在一些实施例中，任选地胺保护基团Pg⁴为Boc。在一些实施例中，其中n为1。

在一些实施例中，一种制备式b的亚氨酸酯盐化合物的方法(P3)：

包括：

(a)使式a的氰基甲酸酯化合物：

在无水酸源的存在下在醇溶剂中反应，以形成该式b的亚氨酸酯盐化合物，其中该无水酸源为TMSCl，该酸为HCl，并且Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同。

在一些实施例中，方法(P3)的步骤(a)的式a的氰基甲酸酯化合物被另一种试剂取代。在一些实施例中，取代试剂是硫代草氨酸乙酯、氰基甲酸乙酯、氰基甲酸甲酯或1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。在一些实施例中，取代试剂为硫代草氨酸乙酯。在一些实施例中，取代试剂是1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。在一些实施例中，取代试剂为硫代草氨酸乙酯。在一些实施例中，取代试剂是1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。

在一个优选实施例中，醇溶剂是MTBE中的EtOH。

在一个优选实施例中，方法(P3)的步骤(a)的式b的亚氨酸酯盐化合物的产率为至少65％。在一些实施例中，产率为至少70％。在一些实施例中，产率为至少75％。在一个特别优选实施例中，产率为至少78％。

在一些实施例中，一种制备式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体的方法(P4)：

包括：

(a)使式hh的二酮酯化合物：

在酮还原酶(KRED)的存在下反应以形成式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体，其中R²、Pg³和n如本文所定义。

在一些实施例中，方法(P4)进一步包括：

(b)使该式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体反应，以形成式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐。

在一个优选实施例中，KRED为经工程改造的酮还原酶。在一更好实施例中，经工程改造的酮还原酶为ADH-114(c-LEcta GmbH,Germany)或1-200-0-16(Porton PharmaSolutions Ltd,China)。

在一个优选实施例中，式j的羟基酮酯化合物为(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯。在一个优选实施例中，式hh的二酮酯化合物为2,4-二氧代-4-苯基-丁酸乙酯。在一个优选实施例中，式l的经保护的腙化合物为(R,E)-2-(4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基亚丁基)肼-1-羧酸叔丁酯

在一个优选实施例中，KRED为高度立体选择性的。在一些实施例中，方法(P4)的步骤(a)的式j的羟基酮酯化合物的立体异构体过量为至少80％。在一些实施例中，立体异构体过量为至少85％。在一个优选实施例中，立体异构体过量为至少90％。在一更好实施例中，立体异构体过量为至少95％。在一个特别优选实施例中，立体异构体过量为99％。

在一个优选实施例中，方法(P4)的步骤(a)的式j的羟基酮酯化合物的产率为至少80％。在一些实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。在一些实施例中，产率为至少92％。在一个优选实施例中，产率为至少93％。在一个特别优选实施例中，产率为至少95％。

在一个优选实施例中，方法(P4)的步骤(b)的式l的经保护的腙化合物的产率为至少80％。在一些实施例中，产率为至少85％。在一些实施例中，产率为至少90％。在一些实施例中，产率为至少92％。在一个优选实施例中，产率为至少93％。在一个特别优选实施例中，产率为至少95％。

在一些实施例中，方法(P4)进一步包括存在醇。例如，醇用于辅因子的再生。在一个优选实施例中，方法(P4)包括存在醇而不存在辅酶。在一些实施例中，醇为仲醇。例如，仲醇包括低级仲烷醇和芳基-烷基甲醇。低级仲醇的实例包括异丙醇、2-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-戊醇、3-戊醇等。在一个优选实施例中，仲醇是异丙醇。芳基-烷基甲醇的实例包括未取代和经取代的1-芳基乙醇。在一些实施例中，仲醇是手性仲醇的R-对映异构体。在其他实施例中，仲醇是手性仲醇的S-对映异构体。在一些实施例中，方法(P4)进一步包括存在辅酶。在一个优选实施例中，辅酶是葡萄糖脱氢酶。在一更好实施例中，葡萄糖脱氢酶是GDH-105(Codexis,Inc.,California,USA)或1-030-0-05(Porton Pharma Solutions Ltd,China)。在一些实施例中，KRED以固定化形式或以全细胞形式提供。

在一些实施例中，方法(P1-P4)的任何步骤皆是可扩展的。在一个优选实施例中，方法(P1-P4)的至少一个步骤是可扩展到至少千克规模。

方案1

现在参考方案1，示出了中间体亚氨酸酯盐化合物c的合成，其中Pg¹如本文所定义。在方案1的步骤1中，氰基甲酸酯化合物a经历亚氨酸酯盐形成以得到亚氨酸酯盐化合物b。步骤1的盐形成可以用无水酸源(例如用于HCl的TMSCl)在醇(例如EtOH)的存在下，在醚溶剂(例如MTBE)中进行。在一些实施例中，在该步骤中使用的干源是TMSCl并且酸为HCl。

在步骤2中，亚氨酸酯盐用有机碱转化为游离碱化合物c。在一些实施例中，该步骤中的有机碱为三乙胺。在一些实施例中，转化可以在干燥剂的存在下在有机溶剂中进行。在一些实施例中，该步骤中的干燥剂为Na₂SO₄。在一些实施例中，该步骤中的有机溶剂为MTBE。然后可以使用化合物e，如下面的方案3A或3B中所示。

方案2A

方案2A说明手性N-氨基内酰胺化合物p的合成，其中Pg²、Pg³、Pg⁴、R²和n如本文所定义。

在方案2A的步骤1中，手性羟基二羧酸化合物d在有机酰氯化物e中经历环化脱水和酯化，以得到手性羧酸二氢呋喃二酮化合物f。在一些实施例中，该步骤中的酰氯化物溶剂e为乙酰氯。

在方案2A的步骤2中，化合物f在反应性芳烃化合物g的存在下经历Friedel-Crafts反应，得到化合物h。在一些实施例中，Friedel-Crafts反应是在路易斯酸的存在下在有机溶剂中进行。在一些实施例中，芳烃化合物g为苯。在一些实施例中，该步骤中的路易斯酸为AlCl₃。在一些实施例中，该步骤中的有机溶剂为CH₂Cl₂。

在方案2A的步骤3中，化合物h在醇溶剂i中经历酯交换，得到化合物j。在一些实施例中，酯交换可以在酸的存在下进行。在一些实施例中，该步骤中的醇溶剂i为EtOH。在一些实施例中，该步骤中的酸为H₂SO₄。

在方案2A的步骤4中，化合物j经历腙形成以得到经保护的腙化合物l。在一些实施例中，腙形成可以在该步骤中在酸添加剂的存在下进行。在一些实施例中，该步骤中的酸添加剂为甲酸。在一些实施例中，该步骤中的保护基团Pg⁴为Boc。

在方案2A的步骤5中，腙化合物l使用还原剂进行非对映选择性还原，得到手性肼化合物m。在一些实施例中，还原可以在酸添加剂的存在下在有机溶剂中进行。在一些实施例中，该步骤中的还原剂为Me₄NBH(OAc)₃或NaBH(OAc)₃。在一些实施例中，该步骤中的酸添加剂为AcOH。在一些实施例中，该步骤中的有机溶剂为CH₂Cl₂。

在方案2A的步骤6中，手性肼化合物m经历环化以得到手性经保护的N-氨基内酰胺化合物n。在一些实施例中，环化可以在加热时在醇溶剂中进行。在一些实施例中，该步骤中的醇溶剂为EtOH。

在方案2A的步骤7中，手性经保护的N-氨基内酰胺化合物n经历脱保护，得到目标化合物p的盐o。在一些实施例中，该步骤中的盐o是HCl盐。

在方案2A的步骤8中，盐o在碱的存在下进行碱游离，得到N-氨基内酰胺化合物p。在一些实施例中，该步骤中的碱为NaOH。在一些实施例中，步骤8的反应可以在水性碱溶液中进行。

方案2A’

方案2A'说明羟基酮酯化合物j的合成，其中Pg³、R²和n如本文所定义，并且Pg³'为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可以相同或不同。在一些实施例中，Pg^3’为Pg³。

在方案2A'的步骤1中，草酸二酯化合物ff在芳基甲基酮化合物gg的存在下经历缩合得到二酮酯化合物hh。在一些实施例中，该步骤中的芳基甲基酮化合物gg为苯乙酮。

在方案2A’的步骤2中，二酮酯化合物hh经历酶促酮还原，得到羟基酮酯化合物j。在一些实施例中，酶促还原在酮还原酶(KRED)的存在下进行。在一些实施例中，KRED为高度立体选择性的。在一些实施例中，KRED为经工程改造的酮还原酶。在一更好实施例中，经工程改造的酮还原酶为ADH-114(c-LEcta GmbH,Germany)或1-200-0-16(Porton PharmaSolutions Ltd,China)。

在方案2A’的步骤2的一些实施例中，酶促还原在辅因子的存在下进一步进行。在一些实施例中，辅因子为NAD、NADH、NADP或NADPH。在方案2A’的步骤2的一些实施例中，酶促还原在辅酶的存在下进一步进行。在一些实施例中，辅酶为葡萄糖脱氢酶。在一些实施例中，葡萄糖脱氢酶为GDH-105(Codexis,Inc.,California,USA)或1-030-0-05(PortonPharma Solutions Ltd,China)。在方案2A’的步骤2的一些实施例中，酶促还原在醇的存在下进一步进行。在一些实施例中，醇为乙醇。在方案2A’的步骤2的一些实施例中，酶促还原在存在醇而不存在辅酶的情况下进行。

在一些实施例中，方案2A’的步骤2进一步包括存在D-(+)-葡萄糖。在一些实施例中，方案2A’的步骤2进一步包括存在添加剂和/或有机共溶剂。在一些实施例中，该步骤中的有机共溶剂为乙醇或乙腈。在一些实施例中，该步骤中的添加剂为NaOAc、MgCl₂·6H₂O、Na₂CO₃或NaOH。在一些实施例中，方案2A’的步骤2在受控pH和温度下在缓冲溶液中进行。在一些实施例中，缓冲溶液包括K₂HPO₄、KH₂PO₄和水。在一些实施例中，受控pH在6至9的范围内。在一个优选实施例中，受控pH为6.5或7。在一些实施例中，温度在20℃至40℃的范围内。在一个优选实施例中，温度为25℃或30℃

方案2B

方案2B说明手性N-氨基内酰胺化合物w的合成，其中Pg²、Pg³、Pg⁴、R²和n如本文所定义。方案2B的步骤1至7与方案2A的步骤1至7类似，步骤1从手性羟基二羧酸化合物o开始，得到手性化合物p、q、r、s、t、u、v和手性N-氨基内酰胺化合物w。

方案3A

方案3A说明手性双环酮化合物dd的合成，其中Pg¹、Pg⁵、R¹、R²、X和n如本文所定义。在一些实施例中，手性双环酮化合物dd为手性6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,5]三唑酮。

在方案3A的步骤1中，化合物p和c经组合经历三唑形成，得到手性双环三唑化合物x。在一些实施例中，三唑形成可以在酸添加剂和醇溶剂的存在下进行。在一些实施例中，该步骤中的酸添加剂为乙酸。在一些实施例中，该步骤中的醇溶剂为乙醇。

在方案3A的步骤2中，手性双环三唑化合物x在卤化剂的存在下经历脱氧卤化，得到手性卤化双环化合物y。在一些实施例中，脱氧卤化可以在有机碱的存在下在有机溶剂中进行。在一些实施例中，脱氧卤化包括在氟化剂的存在下进行脱氧氟化。在一个优选实施例中，该步骤中的氟化剂为PBSF。在一些实施例中，该步骤中的氟化剂为PyFluor(2-吡啶磺酰氟)。在一个优选实施例中，该步骤中的有机碱为N,N-二异丙基乙胺。在一些实施例中，有机溶剂为乙腈。在一个优选实施例中，存在添加剂。在一个特别优选实施例中，添加剂为三乙胺三氢氟酸盐。在一些实施例中，添加剂为N,N-二异丙基乙胺三氢氟酸。在一些实施例中，添加剂用作氟化物源。在一些实施例中，脱氧卤化通过在室温下历经至少一小时缓慢加入试剂以减少蒸发来进行。

在方案3A的步骤3中，手性卤化双环化合物y经历酯水解和酸化，得到卤化双环羧酸化合物z。在一些实施例中，酯水解和酸化可以在醚溶剂/水混合物与酸的存在下进行。在一些实施例中，该步骤中的溶剂/水混合物为THF/水混合物。在一些实施例中，该步骤中的酸为HCl。

在方案3A的步骤4中，卤化双环羧酸化合物z与酰胺aa形成Weinreb酰胺，得到手性双环酰胺bb。在一些实施例中，Weinreb酰胺形成可以在偶联剂的存在下进行。在一些实施例中，酰胺形成可以在添加剂的存在下在有机溶剂中进行。在一些实施例中，该步骤中的酰胺aa为N,O-二甲基羟胺。在一些实施例中，该步骤中的偶联剂为EDCI。在一些实施例中，在该步骤中，添加剂为N-甲基咪唑，且有机溶剂为CH₂Cl₂。

在方案3A的步骤5中，手性双环酰胺bb在有机金属试剂cc的存在下经过烷基化，得到手性目标化合物dd。在一些实施例中，烷基化可以在有机溶剂中进行。在一些实施例中，该步骤中的有机金属试剂cc为烷基溴化镁。在一些实施例中，该步骤中的烷基溴化镁为环丙基溴化镁。在一些实施例中，该步骤中的有机溶剂为THF。在一些实施例中，该步骤进一步包括加入式dd的手性双环酮化合物的晶种。在一些实施例中，加入式dd的手性双环酮化合物的晶种是在有机溶剂的存在下进行。在一个优选实施例中，有机溶剂为EtOH。在一个特别优选实施例中，有机溶剂为EtOH水溶液。

方案3B

方案3B说明手性双环酮化合物ii的合成，其中Pg¹、Pg⁵、R¹、R²、X和n如本文所定义。方案3B的步骤1至5类似于方案3A的步骤1至5，其中步骤1从化合物w和c开始，得到手性化合物ee、ff、gg、gg和手性双环酮化合物ii。

方案4

方案4说明使用多种亲核试剂(包括但不限于卤化物和氰化物源)制备式(I)-(IV)化合物的额外双环多样形式的合成。

方案1至4的反应的许多变化是可能的，并且对那些技术人员而言是显而易见的。例如，在许多实施例中反应的次序可以改变。在一些实例中，反应包括本文所述方案中所示化合物的立体异构体。在一些情况下，反应产物不需要分离，而是可以原位地用于随后反应。例如，胺和羟基保护基团的化学性质以及保护和脱保护事件的时间安排可以与本文所述的特定实施例不同。

实例

通过参照以下实例将更充分地理解本发明。然而，其不应解释为限制本发明的范围。

这些实例用于为本领域技术人员提供指导以制备和使用本发明的化合物、组合物和方法。尽管描述了本发明的特定实施例，但本领域技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以进行各种改变和修改。

所述实例中的化学反应可以容易地调整以制备本发明的许多其他化合物，并且制备本发明化合物的替代方法被认为在本发明的范围内。例如，根据本发明的非例示性化合物的合成可以通过对本领域技术人员显而易见的修改来成功地进行，例如通过适当地保护干扰基团，通过利用本领域已知的其他合适的试剂，例如，通过使用除所述那些以外的本领域已知的其他合适试剂和/或通过对反应条件进行常规修改来适当地保护干扰基团。

在以下实例中，除非另外说明，否则所有温度都以摄氏度表示。市售试剂购自诸如Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI或Maybridge等供应商，除非另外说明，否则无需进一步纯化即可使用。下面列出的反应通常在氮气或氩气的正压力下或用干燥管(除非另外说明)在无水溶剂中进行，并且反应烧瓶通常配有橡胶隔片，用于经由注射器引入底物和试剂。玻璃器皿经烘箱干燥和/或加热干燥。¹H NMR光谱使用三甲基硅烷(TMS)或残留的非氘代溶剂峰作为参考标准，在氘代CDCl₃、d₆-DMSO、CH₃OD或d₆-丙酮溶剂溶液(以ppm报告)中获得。当报告峰多重性时，使用以下缩写：s(单峰)，d(双重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰，br(宽峰)，dd(双重峰的双重峰)，dt(三重峰的双重峰)。给定的偶联常数以Hz(赫兹)为单位报告。

用于描述试剂、反应条件或设备的所有缩写旨在与以下缩写列表中列出的定义保持一致。本发明的离散化合物的化学名称通常使用ChemDraw命名程序的结构命名特征来获得。

缩写：

ACN： 乙腈

AcOH 乙酸

Boc 叔丁氧基羰基

CPME 环丙基甲醚

DAST 二乙基氨基三氟化硫

DCE 1,2-二氯乙烷

DCM 二氯甲烷

DIPEA或i-Pr₂NEt N,N-二异丙基乙胺

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

DPPH 2,2-二苯基-1-苦基肼基

EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺

ET 外部温度

Et₃N·3HF 三乙胺三氢氟酸盐

EtOH 乙醇

GC 气相色谱法

HPLC 高压液相色谱

IT 内部温度

KF 卡尔费休滴定

KRED 酮还原酶

LCMS 液相色谱质谱

2-MeTHF 2-甲基四氢呋喃

MTBE 甲基叔丁基醚

NAD 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

NADH 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

NADP 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

NADPH 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

NMI N-甲基咪唑

NMR 核磁共振

PBS 磷酸盐缓冲液

PBSF 全氟丁烷磺酰氟

PCC 氯铬酸吡啶鎓

RP 反相

RT或R_T 保留时间

SEM 2-(三甲基甲硅烷基)-乙氧基甲基

SFC 超临界流体色谱法

TBAH 四丁基氟化铵三乙酰氧基硼氢化钠

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TMSCl 三甲基氯硅烷

实例1：乙基-2-乙氧基亚氨基乙酸酯盐酸盐A3的制备

方案5

乙基-2-乙氧基-亚氨基乙酸乙酯A3的合成在方案5中说明。

乙基-2-乙氧基-亚氨基乙酸酯盐酸盐(A2)：

在室温(～30℃)、N₂环境下，向反应器中充填MTBE(28.0kg,6V,KF:360ppm)、氰基甲酸乙酯A1(6.3kg，63.6mol，1.0当量)和TMSCl(21.4kg，197.1mol，3.1当量)。将混合物冷却至0℃至5℃。在0℃至5℃历经30分钟滴加EtOH(12.0kg，4.1当量，KF：200ppm)。加入完成后，将混合物升温至5℃至10℃，然后搅拌23h。通过GC(氰基甲酸乙酯A1<5A％)监测反应。将混合物在N₂环境下过滤，且将滤饼用MTBE(17kg x3,3.7V x3)洗涤。将滤饼在N₂气流下在25℃至30℃下干燥4h，得到白色粉末形式的产物A2(9.0kg，产率为78％)。

乙基-2-乙氧基-亚氨基乙酸酯盐酸盐(A3)：

在室温(～30℃)在N₂环境下，向反应器中充填Na₂SO₄(9.0kg,100wt％)、A2(9.0kg，49.5mol，1.0当量)和MTBE(953.0kg,9.0V)。将混合物冷却至0℃。将Et₃N(5.4kg，1.08当量，KF：360ppm)于MTBE(6.7kg，1V，KF：300ppm)中的溶液在0℃至5℃下历经2h滴加。加入完成后，将混合物升温至20℃，然后搅拌4h。通过GC(cpd.2<0.5A％)监测反应。将混合物在N₂环境下过滤，且将滤饼用MTBE(7.5kg,1.1V)洗涤。将滤液在真空下浓缩并在20℃在真空中干燥，得到液体产物A3，其与其他批次组合(产率为～60％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.77(s,1H),4.30(dq,J＝9.6,7.1Hz,4H),1.36(dt,J＝8.2,7.1Hz,6H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ159.4,158.0,63.4,63.0,14.0,13.9。

实例2：(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮A12的制备

方案6

(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮A12的合成在方案6中说明。

(S)-(-)-2-乙酰氧基琥珀酸酐(A5)：

将乙酰氯(52.8kg,4V)中的D-苹果酸A4(12.0kg，89.5mol，1.0当量)加热至40℃至53℃(IT)并搅拌16h。通过HPLC(D-苹果酸A4<0.5A％)监测反应。将反应混合物在40℃至60℃(ET)在真空下浓缩以除去挥发物。将粗制油溶解在i-PrOAc(10.6kg,1.0V)中。在15℃加入惰性溶剂正庚烷(27.7kg,3.3vol)。在完成加入正庚烷后，沉淀出固体。将悬浮液在0℃再搅拌1h，然后对固体进行过滤并用正庚烷(8.3kg x2,2V x2)冲洗。将滤饼在40℃至45℃在真空下干燥，得到(S)-(-)-2-乙酰氧基琥珀酸酐A5，其与市售样本和文献报道一致(参见例如Shiuey,S.J.；Partridge,J.J.；Uskokovic,M.R.J.Org.Chem.1988,53,1040–1046)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.53(dd,J＝9.6,6.3Hz,1H),3.38(dd,J＝18.9,9.6Hz,1H),3.02(dd,J＝18.9,6.3Hz,1H),2.19(s,3H)。

(R)-2-乙酰氧基-4-氧代-4-苯基丁酸(A6)：

将无水氯化铝(25.3kg，189.8mol，2.5当量)在CH₂Cl₂(320.0kg,20V)中的悬浮液在N₂下在-10℃至-5℃下搅拌。历经15分钟加入(S)-(-)-2-乙酰氧基琥珀酸酐A5(12.0kg，75.9mol，1.0当量)。将混合物在-10℃至-5℃在N₂下搅拌10分钟。将苯(18.7kg，239.1mol，3.15当量)历经30分钟至90分钟在-10℃至-5℃下在N₂下滴加至混合物中。将混合物在-5℃至0℃在N₂下搅拌18h。通过HPLC(酸酐<0.5A％)监测反应。将混合物用HCl水溶液(90.0kg，3.0M，3.5至3.6当量)淬灭。放置2h使有机相沉降，然后从悬浮液中分离出来。用i-PrOAc(52.8kg x2,5V x2)萃取水相。将所有有机相合并并用盐水(68kg x2,5V x2)洗涤。将有机相在35℃至40℃在真空下浓缩。将粗制品在40℃下溶解在i-PrOAc(105.6kg,10V)中持续30分钟。将悬浮液通过硅藻土(2.4kg,20wt％)过滤并且将滤饼用i-PrOAc(10.6kg,1V)洗涤。将滤液在35℃至40℃在真空下浓缩。将粗产物在CH₂Cl₂/正庚烷(15.6kg/42.0kg,2V/10V)的混合物中制浆，过滤并用正庚烷(10.6kg,1V)洗涤，然后在30℃至35℃下干燥以产生白色粉末形式的(R)-2-乙酰氧基-4-氧代-4-苯基丁酸A6(96.1kg，产率为70％)，其与市售样本和文献报道一致(参见例如Wilkins,T.D.；Tucker,K.D.Process for Producing OpticallyActive 2-Hydroxy-4-Arylbutyric Acid or its Ester.美国专利5,959,139,Sept 28,1999)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.26(br s,1H),8.01–7.92(m,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.49(t,J＝7.7Hz,2H),5.74(dd,J＝7.8,3.5Hz,1H),3.66(dd,J＝17.8,7.8Hz,1H),3.54(dd,J＝17.8,3.6Hz,1H),2.11(s,3H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ194.7,174.8,170.1,136.0,133.8,128.8,128.2,67.3,39.6,20.5。针对C₁₂H₁₃O₅[M+H]⁺计算的HRMS(APCI)237.0763；实验值：237.0790.

(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯(A7)：

将浓硫酸(14.6kg，148.17mol，2.5当量)于乙醇(33.4k,3.0V)中的溶液在12℃至14℃(IT)下历经35分钟在搅拌下加入到A6(14.0kg，59.3mol，1.0当量)于乙醇(22.2kg,2.0V)中的溶液中，加热至20℃至25℃(IT)，并搅拌16h至20h。通过HPLC(cpd.A6<0.5A％)监测反应。将反应混合物在0℃至10℃在搅拌下倒入冰水(210kg,1500wt％)中，并且将水相用i-PrOAc(123.2kg x2,10V x2)萃取。将合并的有机相用饱和碳酸氢钠(72.2kg,5V)和盐水(72.2kg,5V)洗涤。将有机相浓缩(不干燥)以除去挥发物并在40℃(ET)下干燥，产生黄色油。将粗制油在搅拌下溶解在MTBE(10.0kg,1V)中并在40℃过滤。在0℃至5℃(IT)历经1h加入正庚烷(49.0kg,5V)。将悬浮液在0℃至5℃(IT)搅拌1h并且将固体过滤。将滤饼用正庚烷(19.6kg x2,2V x2)洗涤。将白色固体在减压下干燥，得到白色固体形式的所需产物(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯A7(10.5kg，产率为83％)，其与市售样本和文献报道一致(参见例如Li,W.；Lu,B.；Xie,X.；Zhang,Z.Org.Lett.2019,21,5509–5513)。

手性HPLC>99％ee。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98–7.90(m,2H),7.62–7.53(m,1H),7.45(dd,J＝10.5,4.8Hz,2H),4.66(dd,J＝6.0,3.9Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),3.53(dd,J＝17.5,3.9Hz,1H),3.45(dd,J＝17.5,6.0Hz,1H),3.42(br s,1H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ197.5,173.7,136.4,133.5,128.6,128.1,67.2,61.8,42.1,14.1。针对C₁₂H₁₄NaO₄[M+Na]⁺计算的HRMS(ESI)245.0790；实验值：245.0786.

(R,E)-2-(4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基亚丁基)肼-1-羧酸叔丁酯(A8)：

将乙醇(552kg,10V)和甲酸(3.6kg，78.2mol，0.25当量)中的化合物A7(70.0kg，315.0mol，1.0当量)和NH₂NHBoc(54.1kg，409.4mol，1.3当量)加热至55℃至60℃(IT)并在N₂下搅拌16h。将反应通过以下方式来监测：HPLC(cpd.A7<2.0A％)监测反应。将反应混合物在40℃至50℃(ET，夹套温度)在真空下浓缩以除去挥发物。使用正庚烷(93kg x2,2V x2)进行共沸蒸馏。向悬浮液中加入更多的正庚烷(186kg,4V)并且将混合物在45℃至50℃下搅拌12h。然后将浆液用MTBE(280kg,5.4V)和庚烷(210kg,4.5V)来处理，并进一步在0℃下再搅拌2h，然后对固体进行过滤并用正庚烷(93kg x2,2V x2)冲洗。将滤饼在40℃至45℃下在真空下干燥16h，得到白色固体形式的(R,E)-2-(4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基亚丁基)肼-1-羧酸叔丁酯A8(95.6kg，产率为92％)。

HPLC:97:3E/Z腙比率。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ9.88(s,1H),7.71–7.64(m,2H),7.43–7.29(m,3H),6.14(d,J＝5.4Hz,1H),4.22(dt,J＝8.1,5.0Hz,1H),4.03–3.86(m,2H),3.17–3.00(m,2H),2.50–2.43(m,1H),1.44(s,9H),1.09(t,J＝7.1Hz,3H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ173.0,153.5,148.9,138.0,129.3,128.8,126.8,80.1,68.8,61.0,31.9,28.6,14.4。针对C₁₇H₂₅N₂O₅[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)337.1758，实验值337.1767。

(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮盐酸盐(A11)：

在N₂和10℃至20℃下，将乙酸(675kg,7.5V)加入到TBAH(123.2kg，468mol，1.75当量)在CH₂Cl₂(712kg,10V)中的悬浮液中。加入完成后，将混合物在20℃至25℃下搅拌1h。在冷却至-5℃后，向所得溶液中，加入化合物A8(90kg，268mol，1.0当量)作为在CH₂Cl₂(90kg,1.5V)中的溶液。将混合物在-5℃(IT)在N₂下搅拌16h。将反应通过以下方式来监测：HPLC(cpd.A8<2.0A％)监测反应。然后将混合物在15℃至20℃下用乙醇(137kg,2V)淬灭。将所得溶液在25℃至30℃在N₂下搅拌16h，得到2-((1S,3R)-4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基丁基)肼-1-羧酸叔丁酯A9。通过HPLC(A9<0.5A％)监测反应。将反应混合物用水(450kg)淬灭，然后用CH₂Cl₂(600kg x2,10V x2)萃取。将有机相用水(450kg x2,5V x2)、10％碳酸钠水溶液(500kg,x3,5V x3；pH＝～10)和盐水(520kg x2,5V x2；pH＝～7)洗涤。将有机相在真空下浓缩以产生粗制((3R,5S)-3-羟基-2-氧代-5-苯基吡咯烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯A10在CH₂Cl₂中的溶液。

将粗制化合物A10(1.0当量)在CH₂Cl₂(320kg)中的溶液冷却至0℃至5℃，然后在60℃下加入6M HCl在正丙醇(200L，6.0当量)中的溶液。将混合物在20℃至25℃下搅拌16h。通过HPLC(cpd.A10<0.5A％)监测反应。对所得混合物进行过滤，并且将滤饼用CH₂Cl₂(200kgx2,2V x2)洗涤。将滤饼在过滤器-干燥器中用N₂气流在40℃至45℃下干燥，得到白色粉末形式的(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮盐酸盐A11(45.3kg，产率为85％，3个步骤)。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.52–7.32(m,5H),5.07(dd,J＝8.2,4.3Hz,1H),4.62(dd,J＝8.0,6.1Hz,1H),2.55(ddd,J＝14.1,8.2,6.1Hz,1H),2.49–2.34(m,1H)。¹³C NMR(101MHz,D₂O)δ175.3,140.1,131.9,131.5,129.1,69.1,63.9,38.9。针对C₁₀H₁₃N₂O₂[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)：193.0977；实验值193.0973。

(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮(A12)：

将粗制化合物A11(21.6kg，1.0当量)在30℃至35℃下溶解在水(16.2kg,0.75V)中，且将溶液通过研磨过滤器(PP,1um)过滤。将滤液冷却至10℃至20℃，然后加入氢氧化钠(1.93kg,52.8mol,0.51当量)在水(2.8kg,0.13V)中的溶液(通过研磨过滤进行预过滤)。将混合物在10℃至20℃下搅拌60分钟。最后加入氢氧化钠(1.93kg，52.8mol，0.51当量)在水(2.8kg,0.13V)中的溶液(通过研磨过滤进行预过滤)，并且将混合物在10℃至20℃下再搅拌60分钟。将所得混合物过滤，且将滤饼用冷水(4.32kg x1,2.16kg x1,0.2V x1,0.1V x1；10℃-15℃)和冷却的n--PrOH(4.24kg x2,0.25v x2；10℃-15℃)洗涤。将滤饼在过滤器-干燥器中用N₂气流在40℃至45℃下干燥，得到白色粉末形式的(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮A12(13.2kg，产率为73％)。

HPLC:>99.5:0.5dr。手性HPLC：>99.5％ee。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ7.35(t,J＝7.5Hz,2H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,2H),5.69(d,J＝4.9Hz,1H),4.66(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),4.35–4.22(m,1H),2.24–2.15(m,1H),2.07(ddd,J＝12.7,8.1,3.6Hz,1H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ171.8,141.5,128.6,127.4,126.3,66.5,61.4,36.9。针对C₁₀H₁₃N₂O₂[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)193.0972，实验值193.0978。

实例3：环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-基]甲酮(A17)的制备：

方案7

环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-基]甲酮A17的合成在方案7中说明。

(5S,7R)-7-羟基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-羧酸乙酯 (A13)：

在氮气下向100L反应器1中充填化合物A12(5.02kg，26.11mol，1.00当量)。将EtOH(15.95kg,20.22L,4.0vol)、化合物A3(5.60kg，38.58mol，1.47当量)、EtOH(15.85kg,20.09L,4.0vol)、AcOH(4.60kg，4.38L，76.60mol，2.93当量)和EtOH(8.15kg,10.33L,2.1vol)充填至反应器中，得到悬浮液。将内部温度调节至80±10℃，并将反应物搅拌21h。在此期间，将反应物澄清，然后再次成为悬浮液。历经30分钟将内部温度调节至60±15℃。将Aurora过滤器加热到60±15℃的夹套温度，并使反应器1内容物的一部分通过Aurora过滤器，在干净的100L反应器2中收集约70L滤液。保留不溶于某些有机溶剂中的不溶性固体。例如，固体是通过固态NMR光谱分析确认的化合物A3(2-乙氧基-2-亚氨基乙酸乙酯)的寡聚物或聚合物。

将反应器2中的滤液的第一部分在减压下浓缩1h至约55L(11vol)的体积，保持内部温度低于60℃。将EtOH(16.30kg,20.66L,3.2vol)加入到反应器1中，并且使剩余的反应器1内容物通过Aurora过滤器，在反应器2中收集额外的约20L滤液，得到约75L的总体积。将反应器2的内容物在减压下浓缩1h至约30L(6vol)的体积，保持内部温度低于60℃。当溶液接近低体积时，可以观察到固体形成。在加入晶种之前，可以观察到悬浮液。在一些批次中，过早的固体形成事件似乎不会影响产物的品质。将反应器冷却至25±10℃的内部温度。历经60±30分钟将水(15.10kg,15.10L,3.0vol)加入到反应器2中。将化合物A13晶种(25g,0.5wt％)和水(150mL)在玻璃瓶中混合并且充填至反应器2中。观察到悬浮液。历经60±30分钟将额外的水(49.15kg,49.15L,9.8vol)加入到反应器2中。

将反应器2搅拌3h。历经3h将内部温度调节至0±5℃，并搅动10h。将浆液转移到过滤器干燥器中，将滤液收集在玻璃坛中。将反应器2用水(23.30kg,23.30L,4.6vol)冲洗，搅动最少5分钟，并将内容物转移到过滤器干燥器中，将滤液收集在玻璃坛中。将过滤器干燥器中的固体滤饼用水(20.55kg,20.55L,4.1vol)冲洗。例如，需要将固体样本中的AcOH最小化，以防止在随后的脱氧氟化步骤中与醇中的氟化物亲核试剂竞争。在一些实例中，高水平的乙酸导致形成乙酸乙酯产物。

将固体滤饼在真空下在氮气吹扫下在50±5℃的夹套温度下在间歇搅动下干燥27h。将过滤器干燥器冷却至20±5℃的夹套温度，并将结晶的灰白色固体形式的产物化合物A13(6.36kg，23.27mol，产率为86％)排出至密封袋中。

HPLC 99.9A％,>99.9:0.1dr.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ7.44–7.32(m,3H),7.25(d,J＝7.3Hz,2H),6.18(d,J＝5.9Hz,1H),5.76(t,J＝6.6Hz,1H),5.33–5.25(m,1H),4.37–4.22(m,1H),2.99–2.86(m,J＝6.3Hz,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ163.6,159.5,158.8,138.6,128.9,128.5,127.0,62.6,61.0,60.2,46.5,14.0。针对C₁₄H₁₆N₃O₃[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)274.1186，实验值274.1195。

评价了其他酸添加剂，包括例如草酸、琥珀酸、苯甲酸、异丁酸、新戊酸、水杨酸、恶唑酸、2-吡啶甲酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、甲酸、乙醇中的盐酸或乙醇中的三甲基氯硅烷。在一些实例中，其他酸添加剂的产率在14％至81％的范围内。在一些实例中，产率为98％，其中酸添加剂为乙酸。

评价了取代化合物A3的其他试剂，包括例如硫代草氨酸乙酯、氰基甲酸乙酯、氰基甲酸甲酯和1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯。在一些实例中，这些试剂的HLPC转化率和产率分别落在90％至100％和40％至76％的范围内。在其他实例中，这些试剂的产率导致产率低于81％。

在一个实例中，酸添加剂为异丁酸，且与化合物A12反应的试剂为硫代草氨酸乙酯，得到72.3％的产率。在另一实例中，酸添加剂为水杨酸，并且试剂为1,3,5-三嗪-2,4,6-三羧酸三乙酯，得到81％的产率。在又一实例中，酸添加剂为甲酸并且试剂为氰基甲酸乙酯，得到14％的产率。

(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-羧酸(A15)：

在氮气下向100L反应器1中充填化合物A13(4.51kg，15.97mol，1.00当量)、CH₃CN(17.90kg,22.77L,5.0vol)和i-Pr₂NEt(12.95kg，100.20mmol，6.27当量)。通过蠕动泵历经1小时缓慢加入Et₃N·3HF(5.30kg，32.88mmol，2.59当量)，通过夹套冷却(Et₃N·3HF的加入是放热的)维持内部温度低于30℃。通过同一蠕动泵管加入CH₃CN(0.36kg,0.45L,0.1vol)。历经1小时缓慢加入PBSF(7.50kg，24.83mmol，1.55当量)，通过夹套冷却(PBSF的加入是放热的)维持温度低于30℃。通过同一蠕动泵管加入CH₃CN(0.36kg,0.45L,0.1vol)。将反应器1的内容物搅动1小时。

将2-MeTHF(31.00kg,36.05L,8.0vol)加入到反应器1中并且将混合物搅拌20分钟。将反应器1的内容物转移到200L反应器2中，该反应器含有K₂HPO₄(7.88kg)在水(32.40kg,32.40L,7.2vol)中的搅拌溶液，通过夹套冷却维持内部温度低于30℃。将2-MeTHF(17.40kg,20.23L,4.5vol)加入到反应器1中，且将冲洗液转移到反应器2，通过夹套冷却维持内部温度低于30℃。停止搅动并且使各层沉降30分钟。分离三相混合物，将两个较低层收集到单独的玻璃坛中(最低层称为致密层并且可能含有氟副产物，而中间层称为水层)。制备NaCl(14.49kg)在水(63.35kg,63.35L,14.0vol)中的溶液。将该NaCl溶液(25.72kg)的一部分转移到反应器2中，并且将内容物搅拌最少5分钟。停止搅动，且使各层沉降至少30分钟(实际时间：30分钟)。

分离双相混合物并且将水相收集到玻璃坛中。将NaCl溶液(25.72kg)的另一部分转移到反应器2中并且将内容物搅拌10分钟。停止搅动并且使各层沉降15分钟。分离双相混合物并且将水相收集到玻璃坛中。将NaCl溶液(25.72kg)的另一部分转移到反应器2中，并且将内容物搅拌最少5分钟。停止搅动并使各层沉降30分钟。分离双相混合物并且将水相收集到玻璃坛中。获得化合物A14在2-MeTHF和CH₃CN中的粗制溶液。

将反应器2中的溶液的一部分(约60L)转移到干净的100L反应器3中。将反应器3的内容物在减压下蒸馏至约30L(6.7vol)，维持内部温度低于50℃。将THF(120.15L,135.15L,29.9vol)加入反应器2中。将反应器2的内容物连续转移到反应器3，以维持27L至45L(6.0vol至10.0vol)的目标体积。蒸馏历经4小时，停止16小时，然后再继续蒸馏1小时，最终体积达到约40L(8.9vol)。继续蒸馏直到体积达到约23L(5.1vol)。将溶液冷却至35±10℃的内部温度。减少2-MeTHF和CH₃CN的含量可促进酯水解。

将反应器3冷却至20±10℃的内部温度并且加入水(22.85kg,22.85L,5.1vol)，然后加入KOH(3.25kg,57.92mmol,4.38当量)在水(11.90kg,11.90L,2.6vol)中的溶液(5M水性KOH)，维持温度低于30℃。将反应混合物搅拌1小时。将水(22.90kg,22.90L,5.1vol)充填至反应器3，并将内容物转移至反应器2。缓慢加入浓HCl(6.75kg)在水(5.80kg,5.80L,1.3vol)中的溶液(6M水性HCl)，维持内部温度低于30℃，同时使蒸气通过带有酚酞指示剂的NaOH洗涤器溶液。烟气可为HCl，其将被NaOH洗涤器(若其形成)中和。将反应物在20±10℃下搅拌13小时。确保pH范围(例如，目标：0≤pH≤2)，例如，完全质子化为羧酸和过滤过程中水洗液损失最小。

将悬浮液转移到过滤器干燥器中，将滤液收集在玻璃坛中。将滤饼用水(40.30kg,40.30L,8.9vol)和THF(3.85kg,4.33L,1.0vol)的溶液冲洗，将滤液收集在玻璃坛中。混合的有机/水洗液用于清除酸化后仍可能存在的残留全氟丁磺酸盐。例如，未采用此种洗涤的使用测试在分离材料的¹⁹FNMR分析中显示出额外的氟信号。将滤饼用水(45.12kg,45.12L,10vol)冲洗，将滤液收集在玻璃坛中。夹套温度升至50±5℃，且将湿滤饼干燥4天。将过滤器干燥器冷却至20±5℃的夹套温度，并将浅褐色固体形式的产物化合物A15(3.76kg，14.66mol，产率为92％)排出至密封袋中。

HPLC 99.8A％,>99.95:0.05dr.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ7.45–7.40(m,2H),7.40–7.35(m,1H),7.24(d,J＝7.5Hz,2H),6.21(ddd,J＝56.6,7.2,1.9Hz,1H),5.69(ddd,J＝9.1,6.7,3.0Hz,1H),3.72(ddd,J＝25.8,15.4,7.8,7.8Hz,1H),2.70(ddd,J＝26.8,15.3,2.4,2.4Hz,1H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ160.5,158.8,138.4,129.0,128.6,126.7,126.7,83.2,60.0,42.9。¹⁹F NMR(565MHz,DMSO-d₆)δ–167.0。针对C₁₂H₁₁FN₃O₂[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)248.0830，实验值248.0837。

在另一实例中，将甲苯(70mL,10vol.)、DBU(7g,0.11mol,2.0当量)和化合物A12(7g,0.11mol,1.0当量)在室温(～24℃)在N₂下充填至250mL烧瓶中。将溶液冷却至0℃至10℃。在0℃至10℃将PyFluor(7g,0.11mol,1.2当量)滴加至上述溶液中。将溶液在0℃至10℃搅拌2小时。反应完成后，将混合物在0℃至20℃用饱和水性NH₄Cl淬灭。将混合物用TBME(70mL,10vol)萃取。将有机相用盐水(70mL,10vol.)洗涤，然后用Na₂SO₄(～5g)干燥。对混合物进行过滤，并且将滤饼用TBME(20mL)洗涤。将滤液在35℃在真空下浓缩，以定量产率提供HPLC纯度为95A％的约10g粗制化合物A14。

(5S,7S)-7-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4] 三唑-2-甲酰胺(A16)：

在氮气下向100L反应器1中加入化合物A15(4.22kg，17.03mol，1.00当量)、N,O-二甲基羟胺HCl(2.09kg，21.00mol，1.23当量)、CH₂Cl₂(16.80kg,12.68L,3.0vol)、1-甲基咪唑(1.25kg，15.22mol，0.89当量)、CH₂Cl₂(2.85kg,2.15L,0.5vol)、EDCI(4.36kg，21.83mol，1.28当量)和CH₂Cl₂(8.75kg,6.60L,1.6vol)。方法优化发现，1-甲基咪唑的减少的电荷可以导致更清晰的反应型态和更快的反应速率，并且EDCI的减少的电荷(在伸缩步骤4/5过程中为1.5当量，相对于在此经修改的过程中为1.3当量)可能不会对反应产生负面影响。将反应器1的内容物搅动2小时。

由水(15.75kg,15.75L)中的浓HCl(6.34kg)制备6M水性HCl溶液。将该6M水性HCl溶液(21.17kg)缓慢充填至反应器1，同时维持内部温度低于30℃。将反应器1的内容物搅拌10分钟。停止搅动并使各相沉降15分钟。将水相排出至玻璃坛中，并且将有机相转移回反应器1。制备K₂HPO₄(2.11kg)在水(19.01kg,19.01L)中的溶液。将该水性K₂HPO₄溶液(21.13kg)的一部分缓慢转移至反应器1，同时维持内部温度低于30℃。将反应器1的内容物搅拌10分钟。停止搅动并使各相沉降15分钟。将水相排出至玻璃坛中，并且将有机相转移回反应器1。将水(21.13kg,21.13L,5.0vol)充填至反应器1。停止搅动并使各相沉降15分钟。

将水相排出至玻璃坛中，并且将有机相转移回反应器1。将反应器1的内容物蒸馏至约12L(2.8vol)体积，维持温度低于50℃。将CPME(18.20kg,21.16L,5.0vol)加入至反应器1。例如，通过HTE溶解度筛选，发现CPME是独特的溶剂，其在高温下提供高溶解度，而在低温下提供低溶解度。将反应器1的内容物在减压下蒸馏至约25L(5.9vol)的目标体积，维持温度低于65℃。将CPME(7.27kg,8.45L,2.0vol)加入至反应器1。将反应器1的内容物在减压下蒸馏至约33L(7.8vol)的目标体积，维持温度低于65℃。

将反应器的温度调节至80±5℃。反应物仍然为溶液。历经40分钟将反应器的温度调节至60±5℃。(5S,7S)-7-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-甲酰胺A16晶种(20.5g,0.071mmol,0.5wt％)在CPME(84.5g,98mL)中的浆液充填至反应器1。反应开始形成悬浮液。将反应器内容物搅动30分钟。历经30分钟将庚烷(8.66kg,12.66L,3.0vol)加入到反应器1。例如，加入庚烷作为反溶剂以进一步减少结晶过程中的母液损失。历经3小时将反应器1调节至0±5℃。将反应器内容物搅动16小时。将庚烷(14.45kg,21.13L,5.0vol)充填至反应器3，冷却至0℃，并搅拌4.5h。将反应器1的内容物转移至维持在20℃的过滤器干燥器中，将滤液收集在反应器1中。将反应器1的内容物转移至过滤器干燥器，并且将滤液再次收集在反应器1中。

将反应器3的内容物转移至过滤器干燥器，将滤液收集在反应器1中。将过滤器干燥器的内容物在环境温度下用氮气吹扫时在真空下干燥21小时。将过滤器干燥器夹套温度提高至50±5℃，并且在间歇搅动湿滤饼条件下将内容物干燥3天。将过滤器干燥器的温度调节至20±10℃，并且将产物(5S,7S)-7-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-甲酰胺A16(4.62kg，15.88mol，产率为93％)，浅棕褐色固体，排出至密封袋中。

HPLC 99.8A％,>99.95:0.05dr.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ7.47–7.32(m,J＝7.7,6.5,1.4Hz,3H),7.26–7.19(m,2H),6.21(ddd,J＝56.7,7.1,1.8Hz,1H),5.74–5.65(m,1H),3.83–3.65(m,1H),3.69(s,3H),3.30(s,3H),2.78–2.62(m,1H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ161.9,158.0,138.5,129.0,128.6,126.5,99.5,83.2,61.6,59.8,43.1,32.3。¹⁹F NMR(565MHz,DMSO-d₆)δ-166.6。针对C₁₄H₁₆FN₄O₂[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)291.1252，实验值291.1265。

环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2- 基]甲酮(A17)：

在氮气下向100L反应器1中充填化合物A16(4.52kg，15.54mol，1.00当量)和THF(47.95kg,10.6vol)。将反应器1调节至-5±10℃的内部温度。历经2小时将环丙基溴化镁溶液(0.69M在2-MeTHF中)(27.84kg，18.80mol，1.21当量)缓慢加入反应器1，维持-5±10℃的内部温度，并根据Sigma Aldrich品质控制SOP用2-丁醇滴定法进行滴定。Sigma Aldrich商用格氏溶液的滴定值历经3个月从0.89M下降至0.69M。在-5±10℃下将反应器1的内容物搅动30分钟。

由水(16.94kg,17.10L)中的浓HCl(6.55kg)制备6M水性HCl溶液。将先前制备的6M水性HCl溶液(23.55kg)的一部分和2-MeTHF(38.15kg,44.3L,9.8vol)充填至反应器2。将反应器2冷却至-15℃。将反应器1的内容物缓慢转移至反应器2，同时维持反应器2的内部温度低于10℃。淬灭为放热的，并且建议缓慢转移。将2-MeTHF(4.29kg,4.98L,1.1vol)充填至反应器1以冲洗并转移至反应器2，维持反应器2的内部温度低于10℃。将反应器2的温度调节至20±5℃。将反应器2的内容物搅拌15分钟。停止搅动并使各相沉降30分钟。

将水相排出至玻璃坛中。制备K₂HPO₄(2.24kg)在水(20.33kg,20.33L)中的溶液。将先前水性K₂HPO₄溶液(22.55kg)的一部分转移至反应器2中。将反应器2的内容物搅拌至少10分钟。停止搅动并使各相沉降10分钟。将水相排出至玻璃坛中。将NaCl(1.19kg)在水(21.46kg,21.45L)中的溶液充填至反应器2。将反应器2的内容物搅拌10分钟。停止搅动并使各相沉降30分钟。将水相排出至玻璃坛中。

将反应器2的内容物泵送通过Graver过滤器外壳中的碳筒，并历经2.0±1.5小时(实际时间：2h)研磨过滤至玻璃坛中。向反应器2中充填THF(32.55kg,36.61L,8.1vol)，并且将反应器2的内容物泵送通过Graver过滤器外壳中的Graver C941碳筒，并历经60分钟±55分钟(实际时间：1小时，报告(HPLC)：cpd.A17％wt/wt：11.46％)研磨过滤到玻璃坛中。11.46％)。

将玻璃坛的内容物充填至反应器1中并在减压下蒸馏至17L(3.8vol)的目标体积。使EtOH(17.05kg,21.61L,4.8vol)通过研磨过滤器并充填至反应器1。将反应器1的内容物在减压下蒸馏至约20L(4.4vol)的目标体积。使EtOH(17.05kg,21.61L,4.8vol)通过研磨过滤器并充填至反应器1。将反应器1的内容物在减压下蒸馏至约21L(4.6vol)的目标体积。

使水(4.00kg,4.00L,0.9vol)通过研磨过滤器并充填至反应器1。历经20分钟将反应器1调节至65±5℃的温度。将化合物A17晶种(19.9g,0.073mmol,0.4wt％)在经研磨过滤的水(201g,201mL)和经研磨过滤的EtOH(156g,198mL)中的浆液充填至反应器1。反应器1的内容物开始形成悬浮液。将反应器1在60±5℃下搅动20分钟。使水(15.65kg,15.65L,3.5vol)通过研磨过滤器并充填至反应器1，维持温度高于55℃。将反应器1在60±5℃下搅动30分钟。历经4.5小时将温度调节至0±5℃。将反应器1的内容物在0±5℃下搅拌8.5小时。

IKA魔法实验室磨机配备了Dispax反应器DR模组和2G4M6F定子/转子。将IKA魔法实验室磨机冷却至0±5℃并设置为26000RPM研磨速度。使反应器1的内容物通过IKA魔法实验室磨机进入过滤器干燥器，将滤液收集在反应器3中。将经研磨过滤的EtOH(12.65kg,16.03L,3.5vol)和经研磨过滤的水(15.85kg,15.85L,3.5vol)充填至玻璃坛中以制备滤饼洗涤溶液。将滤饼洗涤溶液充填至反应器1中，并将反应器1的温度调节至5℃。将内容物搅拌30分钟，并且将反应器1的剩余内容物通过IKA魔法实验室磨机进入过滤器干燥器，将滤液收集在反应器3中。将过滤器干燥器的内容物在环境温度下用氮气吹扫时在真空下干燥19小时。将过滤器干燥器调节至40±5℃，并且将内容物干燥4天。

将过滤器干燥器调节至20±10℃的温度，并且将产物环丙基-[(5S,7S)-7-氟-5-苯基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-2-基]甲酮A17(3.54kg，13.17mol，产率为85％)，浅棕褐色固体，排出至密封袋中。

HPLC 99.1A％,>99.95:0.05dr。手性HPLC>99.9％ee。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ7.48–7.35(m,3H),7.33–7.21(m,2H),6.24(ddd,J＝56.4,7.2,2.0Hz,1H),5.73(ddd,J＝8.5,6.5,3.1Hz,1H),3.75(dddd,J＝25.7,15.6,8.6,7.2Hz,1H),3.04–2.95(m,1H),2.72(dddd,J＝26.8,15.2,3.2,2.0Hz,1H),1.14–0.99(m,4H)。¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ192.7,165.6,159.1,138.3,129.1,128.7,126.7,83.2,60.0,43.0,17.9,11.9,11.8。¹⁹FNMR(565MHz,DMSO-d₆)δ-167.5。针对C₁₅H₁₅FN₃O[M+H]⁺计算的HRMS(ESI)272.1197，实验值272.1202。

实例4：(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮A12的制备

方案8

方案9

(3R,5S)-1-氨基-3-羟基-5-苯基吡咯烷-2-酮A12的合成在方案8和9中说明。

2,4-二氧代-4-苯基-丁酸乙酯(A20)：

在20℃至30℃向玻璃反应器中充填甲苯(80.1kg,10wt./wt.,11.9vol.)和20％EtONa/EtOH溶液(31.5kg,92.6mol,1.4当量)。将内容物从真空循环至氮气三次，然后冷却至-5℃至5℃。在0℃至10℃向混合物中滴加A18(10.1kg，69.1mol，1.1当量)。加入完成后，将混合物搅拌10分钟，然后加入A19(7.7kg，64.1mol，1.0当量)在甲苯(24.1kg,3.1wt./wt.,3.56vol.)中的溶液。加入完成后，将混合物在-5℃至5℃搅拌2小时。用2M HCl(48.2kg,6.3wt./wt.,6.2vol.)将淬灭混合物的pH调节至2至4，并且将混合物的pH调节至4至5。分离双相。用水性10％NaCl洗涤有机层两次(每次用24.0kg，3.1wt./wt.，4.0vol.)。将有机层浓缩至(7.7-15.4L)1-2vol。将(32.0kg,4.15wt/wt.,5vol)EtOH充填至经浓缩的混合物中，然后浓缩至(7.7-15.4L)1-2vol。将(15.2kg,2.4vol.,2.0wt./wt.)EtOH充填至混合物。在5℃至15℃下搅拌混合物。加入(0.16kg,0.01wt./wt.)A18晶种。在6小时内加入(12.8kg,1.7wt./wt.,1.7vol.)水。加入后，将混合物温热至35℃至45℃。在35℃至45℃下将混合物搅拌0.5小时。然后历经5小时将混合物冷却至0℃至5℃。在0℃至5℃下将混合物搅拌5小时。过滤并用EtOH/H₂O(1/5)(15.0kg,2.0wt./wt.,2.4vol.)洗涤。将湿滤饼在25℃至30℃下干燥10至30小时。获得黄色固体(12.6kg，1.6wt./wt.，57.3mol，产率为89.4％，99.5％HPLC纯度，98.3％HPLC测定)。

(-)-乙基(R)-2-羟基-4-氧代-4-苯基丁酸酯(A7)：

备选方案1：

向300L搅拌罐中充填Na₂CO₃(6.8kg，0.54w/w，1.12当量)和H₂O(68.0kg,5.4w/w,5.4vol.)并在室温下搅拌至溶解。装桶并标记为9％Na₂CO₃溶液。向300L搅拌罐中充填Na₂CO₃(10.1kg,0.80w/w,1.66当量)和H₂O(50.4kg,4.0w/w,4.0vol.)并在室温下搅拌至溶解。装桶并标记为16.7％Na₂CO₃溶液。将300L搅拌罐洗涤至中性。向经洗涤的300L搅拌罐中充填HCl(18.0kg，1.43w/w，3.18当量)和H₂O(15.4kg,1.22w/w,1.22vol.)并在室温下搅拌至溶解。装桶并标记为6M HCl溶液。向500L搅拌罐中充填A18(12.6kg，1w/w，57.3mol，1.00当量)和ACN(2.6kg,0.21w/w,0.26vol.)并在室温下搅拌至溶解。

向50L制备容器中充填K₂HPO₄(0.4kg,0.032w/w,0.04当量)、KH₂PO₄(0.6kg，0.048w/w，0.077当量)、葡萄糖(16.8kg,1.33w/w,1.63当量)和H₂O(50.5kg,4.0w/w,4vol.)并在室温下搅拌至溶解。装桶并标记为糖基化缓冲溶液。在25℃至30℃下转移至500L搅拌罐(推荐：28℃)。将容器用H₂O(6.2kg,0.49w/w,0.49vol.)洗涤，然后转移至500L搅拌罐中。在25～30℃下搅拌并通过滴定9％Na₂CO₃将pH调节至6.0至6.5。向50L制备容器中充填NADP(0.069kg，0.0054w/w，0.0015当量)、KRED 1-200-0-16(0.284kg,0.023w/w)、辅酶1-030-0-05(0.035kg,0.0028w/w)和H₂O(3.33kg,0.26w/w,0.26vol.)并在室温下搅拌至溶解。然后转移至500L搅拌罐中。将容器用H₂O(5.0kg,0.40w/w,0.4vol.)洗涤，然后转移至300L搅拌罐中。在25℃至30℃(推荐：28℃)下搅拌并通过滴定9％Na₂CO₃(37.5kg,～2.97vol.)持续7小时将pH维持在6.0至6.5之间(推荐：pH＝6.3)。

通过6M HCI溶液(12.2kg,～0.97vol)将pH调节至1.5～2.0(推荐：pH＝1.7)。搅拌1小时。然后通过16.7％Na₂CO₃溶液(22.6kg,1.79w/w,～1.8vol.)将pH调回6.0～6.5。向100L过滤罐中充填硅藻土(2.1kg,0.17w/w)。过滤反应浆液，得到滤液1和滤饼1。将滤液1转移至500L搅拌罐，且将滤饼1转移至500L搅拌罐。在25～30℃下，向500L搅拌罐中充填MTBE(93.6kg,7.43w/w)并搅拌25至35分钟(推荐：30分钟)。过滤浆液，得到滤液2和滤饼2。将滤液2转移至500L搅拌罐中以萃取滤液1。相分离后，将上层有机相1转移至运输桶中，并且将底部水相1转移至500L搅拌罐中。将滤饼2转移至300L搅拌罐中。向500L搅拌罐中充填MTBE(93.2kg,7.40w/w,10vol.)并搅拌25至35分钟(推荐：30分钟)。过滤浆液得到滤液3和滤饼3。丢弃滤饼3。将滤液3转移至500L搅拌罐中以萃取水相1。相分离后，将上层有机相2转移至运输桶中，并且将底部水相2转移至500L搅拌罐中。

向500L搅拌罐中充填MTBE(93.1kg,7.39w/w,10vol.)并搅拌25至35分钟(推荐：30分钟)。过滤浆液得到滤液4和滤饼4。将滤液4转移至500L搅拌罐中以萃取水相2。相分离后，将上层有机相3转移至运输桶中，并丢弃下层水相3。合并有机相1、2和3并充填至500L搅拌罐。在-0.06MPa至-0.10MPa和30℃至40℃(最佳40℃)下浓缩至3-4V(37.8-57.4L)。将乙醇(～59kg*3,～4.7V*3)充填至500L搅拌罐中，然后浓缩至3-4V(37.8-50.4L)三次以切换溶剂。获得A7，其纯度>95.0％，手性纯度>99.0％(HPLC 97A％，手性HPLC>99％ee)。将获得的溶液直接用于下一步骤。

备选方案2：

向具有顶置搅拌、pH探针、蠕动泵、夹套温度20℃至25℃的30L反应器中充填0.2M乙酸钠水溶液pH 7(3.76kg)，然后充填D-(+)-葡萄糖(1.00kg，5064mmol，1.10当量)。将反应器用额外的0.2M乙酸钠水溶液(3.76kg)然后是0.1M水性氯化镁氯化镁水溶液(0.20kg)冲洗。搅拌反应器1的内容物直至达成溶解(～10分钟)。接下来充填固体形式的A20(1.00kg，90.3wt％，4100mmol，1.0当量)，然后充填乙醇(0.4kg)，并将pH探针设置为连续使用1N氢氧化钠水溶液(最终消耗了0.19kg)将pH调节至7。充填固体形式的NAD(0.01kg,15.0mmol,1wt％)，然后充填GDH-105(0.01kg,1wt％)在0.2M乙酸钠水溶液pH 7(0.2kg)中的溶液以及ADH-114(0.01kg,1wt％)在0.2M乙酸钠pH 7.0(0.2kg)中的溶液。将反应物在T_i＝25℃下搅拌24小时(在24小时：>95A％A7)。

在反应结束时，停止pH控制并将6N盐酸水溶液(1.03kg)加入到反应混合物中直至达到pH<2并搅拌1小时。然后加入MTBE(7.37kg)并将反应物再剧烈搅拌30分钟。分离各层，且将水层用MTBE(7.44kg和3.83kg)反萃取多于2次。然后将有机层在单独的30L反应器中合并，并通过蒸馏(260mbar压力，T_j 60℃-70℃，T_i 40℃-45℃)浓缩至8V。然后加入乙醇(9.32kg)并将反应物浓缩至8V。获得纯度～95％、手性纯度>99.0％(HPLC 95A％，手性HPLC>99％ee)的A7。将获得的溶液直接用于下一步骤。

(R,E)-2-(4-乙氧基-3-羟基-4-氧代-1-苯基亚丁基)肼-1-羧酸叔丁酯(A8)：

备选方案1：

向玻璃反应器中加入EtOH(97.4kg,10vol,7.9wt/wt)和A7(12.3kg，1.0当量55.3mol)。将甲酸(630g，0.25当量13.8mol.)充填至反应器中。将NH₂NHBoc(10.1kg，1.3当量，76.5mol)充填至反应器中EtOH溶液中。将混合物在40℃至50℃下加热14小时。将混合物浓缩至1.5-2.5vol。将IPAc(109.2kg,10vol.,8.9wt/wt)充填至反应器中。将混合物浓缩至3.0-3.5vol。取样检查EtOH的残留量。(规格：≤1.0％)。将混合物在50℃至60℃下搅拌10至20分钟。经由5分钟将正庚烷(67.3kg,8.0vol.5.4wt/wt)加入至反应器中。将混合物在50℃至60℃下搅拌1至3小时。经由5小时冷却至10℃至20℃。将混合物在10℃至20℃下搅拌13至20小时。取样检查正庚烷与IPAc的比率。(规格：2.6～3.5(正庚烷/IPAc从3/1至5/1))。过滤并用正庚烷(21.6kg,2.5vol.,1.75wt/wt)洗涤湿滤饼，获得17.8kg(1.45wt/wt)湿A8。将15.5kg(1.26wt/wt)湿滤饼在40℃至50℃下干燥10至20h。获得固体。(13.7kg，40.7mol，2步产率为81.2％,99.8％HPLC纯度，>99.9％手性纯度，98.8％qNMR测定，EtOH、正庚烷和IPAc的残留物分别为817ppm、834ppm和491ppm。另一种溶剂为N.D。酶的残留量为26ppm。KF为0.10％。ROI为0.08％)。

备选方案2：

在T_i＝25℃下，向含有A7在乙醇中的溶液的30L反应器中充填甲酸(0.05kg，1024.8mmol，0.25当量)、氨基甲酸叔丁酯(0.90kg，6148.8mmol，1.5当量)和乙醇(1.31kg)。将反应混合物加热至T_i＝60℃过夜(A8与A7：>95:5(A％:A％))。将反应混合物在真空(～50℃，内部～275mbar)中浓缩至5V。加入正庚烷(3.26kg)并将反应器2的内容物通过真空蒸馏在真空中浓缩至5V。加入正庚烷(3.26kg)并通过真空蒸馏将30L反应器的内容物真空浓缩至5V。向悬浮液中加入正庚烷(3.40kg)并在45℃至50℃下搅拌。然后加入MTBE(3.00kg)。历经1小时将混合物冷却至0℃至5℃，并且历经1小时加入额外的正庚烷(5.11kg)。将浆液老化过夜，并将其转移至过滤器干燥器并过滤。将滤饼用正庚烷(5.11kg)洗涤，然后在25℃在氮气流下历经周末干燥。以67％的产率获得精细的灰白色固体，通过HPLC得到纯度为96.2A％，且KF＝0.69wt％。

使用以下过程通过分离和重结晶从壁饼中回收额外的产物(产率为15％)。向5L反应器中充填A8在MTBE(1.6kg)中的浆液。将反应器的内容物加热至50℃并搅拌直至达成溶解。然后将温度升至45℃，加入晶种(1wt％)，然后将内容物在40℃老化30分钟。历经1.5小时加入正庚烷(2.41kg)，然后在1小时内在5℃下冷却。将最终浆液在5℃下老化1小时。使用3L玻璃过滤器过滤固体。将滤饼用正庚烷(0.602kg)洗涤，然后在25℃在氮气流下干燥过夜。通过HPLC(HPLC 96.2A％,98.5：1.5dr，手性HPLC>99％ee)以85％的回收率和96.2A％的纯度获得了精细的灰白色固体A8。

通过上述方法制备的示例性化合物在本文中用¹H NMR数据来描述。在某些实例中，为某些立体异构体提供手性柱保留时间(分钟)。除非另外说明，否则每个结构中所示的立体化学表示单个立体异构体的相对构型，且绝对构型(即“R”和/或“S”)是任意指定的。

本说明书中提和的所有美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国专利申请、国际和非专利出版物皆通过引用方式全文并入本文中。

尽管为了便于理解，已经对本发明的前述实施例进行了一些详细的描述，但是很明显，可以在所附权利要求的范围内进行某些改变和改变。因此，所描述的实施例应被认为是说明性的而不是限制性的，并且本发明不限于在此给出的细节，而是可以在所附权利要求的范围和等同物中进行改变。

Claims (70)

1.一种用于制备式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体：

或其药用盐的方法，其中：

R¹选自由以下项组成的组：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、苯基、苄基、4元至8元杂环基和5元至6元杂芳基，其中R¹通过碳原子结合至相邻羰基，并且R¹任选地经选自由以下项组成的组的一个或两个取代基取代：F、Cl、Br、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆烷基-N(R^N)₂、羟基、羟基甲基、氰基、氰基甲基、氰基乙基、C(O)C₁-C₆烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；

每个R^N独立地选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷基；或两个R^N可与相邻N一起形成4元至6元环；

R²选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆硫代烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂-(4元至6元杂环基)、CH₂CH₂-(4元至6元杂环基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；其中当存在苯环时，其可经选自由以下项组成的组的1至3个取代基取代：卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基和氰基；

R³选自由以下项组成的组：D、卤素、OH、CN、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、环丙基、C₁-C₄烷氧基和C₁-C₄卤代烷氧基；并且

n为1、2或3；

所述方法包括：

(a)使手性N-氨基内酰胺式p的化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂和醇溶剂的存在下与式c的亚氨酸酯化合物：

或其盐接触，以形成式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体：

或其盐；

其中：

Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的；并且

所述式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体为所述式(I)的手性双环酮化合物或其立体异构体的制备中的中间化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酸添加剂为乙酸并且有机溶剂为EtOH。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述式x的手性双环三唑化合物的产率为至少80％。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述产率为至少98％。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其进一步包括：

(b)使所述式x的手性双环三唑化合物或其立体异构体在卤化剂的存在下脱氧卤化，以形成式y的手性卤化双环化合物或其立体异构体：

或其盐，其中X为卤素。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述卤化剂为PBSF或2-吡啶磺酰氟。

7.根据权利要求5至6中任一项所述的方法，其中脱氧卤化步骤(b)在有机碱和有机溶剂的存在下进行。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺并且所述有机溶剂为乙腈。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法，其中脱氧卤化步骤(b)进一步在作为氟化物源的添加剂的存在下进行。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述添加剂为三乙胺三氢氟酸盐。

11.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其进一步包括：

(c)使所述式y的手性卤化双环化合物或其立体异构体在醚溶剂/水混合物的存在下与酸接触，以形成式z的卤化双环羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述醚溶剂/水混合物为THF/水混合物并且所述酸为HCl。

13.根据权利要求11至12中任一项所述的方法，其进一步包括：

(d)使所述式z的卤化双环羧酸化合物或其立体异构体与式aa化合物：

或其盐在偶联剂的存在下接触，以形成式bb的手性双环酰胺化合物或其立体异构体：

或其盐，其中每个Pg⁵为胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述偶联剂为EDCI。

15.根据权利要求13至14中任一项所述的方法，其进一步包括：

(e)使所述式bb的手性双环酰胺化合物或其立体异构体与式cc化合物：

R¹-MgBr _cc ；

或其盐接触，以形成手性双环酮化合物dd或其立体异构体：

或其盐。

16.根据权利要求15所述的方法，其进一步包括添加式dd的手性双环酮化合物的种子。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述式(I)的手性双环酮化合物为选自由以下项组成的组的化合物：

或其药用盐，其中：

每个R⁴选自由以下项组成的组：H、F、Cl、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷氧基；并且

m为0、1、2或3。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述式(I)的手性双环酮化合物为：

或其药用盐。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(I)的手性双环酮化合物的所述立体异构体为式(II)化合物：

或其药用盐。

20.根据权利要求1或19所述的方法，其中所述式(II)化合物为选自由以下项组成的组的化合物：

或其药用盐，其中：

每个R⁴选自由以下项组成的组：H、F、Cl、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆卤代烷氧基；并且

m为0、1、2或3。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述式(II)化合物为：

或其药用盐。

22.根据权利要求17、18、20和21中任一项所述的方法，其中m为0。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中R¹为环丙基。

24.一种用于制备式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体：

或其盐的方法；其中：

R²选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆硫代烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂-(4元至6元杂环基)、CH₂CH₂-(4元至6元杂环基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；其中当存在苯环时，其可经选自由以下项组成的组的1至3个取代基取代：卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基和氰基；并且

n为1、2或3；

所述方法包括：

(a)使式d的手性羟基二羧酸化合物或其立体异构体：

或其盐，在式e的有机酰氯化物：

或其盐的存在下反应，以形成式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体：

或其盐；以及

(b)使式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐，在酸添加剂的存在下反应，以形成式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体：

或其盐；其中：

Pg²为任选地经取代的C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基或芳基；

Pg³为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的；

Pg⁴为任选的胺保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的；

所述式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体为所述式l的经保护的腙化合物或其立体异构体的制备中的中间体；并且

所述式m的手性羟基酯肼化合物或其立体异构体为所述式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体的制备中的中间体。

25.根据权利要求24所述的方法，其中步骤(a)的所述式f的手性羧酸环酐化合物的产率为至少80％。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述产率为至少93％。

27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述式m的手性羟基酯肼化合物的产率为至少70％。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述产率为至少90％。

29.根据权利要求24至28中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述式m的手性羟基酯肼化合物与其非对映体的非对映异构体比率为至少10:1。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述非对映异构体比率为至少14:1。

31.根据权利要求24至30中任一项所述的方法，其中所述酸添加剂为AcOH。

32.根据权利要求24至31中任一项所述的方法，其进一步包括：

(c)使所述式f的手性羧酸环酐化合物或其立体异构体与反应性芳烃化合物接触，以形成式h化合物或其立体异构体：

或其盐。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述反应性芳烃化合物为苯。

34.根据权利要求32至33中任一项所述的方法，其中接触步骤(c)在路易斯酸的存在下在有机溶剂中进行。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述路易斯酸为AlCl₃并且所述有机溶剂为CH₂Cl₂。

36.根据权利要求32所述的方法，其进一步包括：

(d)使所述式h化合物或其立体异构体在式i的醇溶剂中反应：

Pg³-OH _i ；

以形成式j化合物或其立体异构体：

或其盐。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述式i的醇溶剂为EtOH。

38.根据权利要求36至37中任一项所述的方法，其中反应步骤(d)在酸的存在下进行。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述酸为H₂SO₄。

40.根据权利要求36至39中任一项所述的方法，其进一步包括：

(e)使所述式j化合物或其立体异构体与式k的肼化合物：

H₂NNH-Pg⁴ _k ；

或其盐接触，以形成所述式l的经保护的腙化合物或其立体异构体或其盐。

41.根据权利要求40所述的方法，其中接触步骤(e)在酸添加剂的存在下进行。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述酸添加剂为甲酸。

43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其进一步包括：

(f)使所述式l的经保护的腙化合物或其立体异构体反应，以形成式n的手性经保护的N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体：

或其盐；

(g)使所述式n的手性经保护的N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体脱保护，以形成式o的盐化合物或其立体异构体：

以及

(h)使所述式o的盐化合物或其立体异构体在碱的存在下反应，以形成所述式p的手性N-氨基内酰胺化合物或其立体异构体。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述碱为水性碱溶液中的NaOH。

45.根据权利要求24至44中任一项所述的方法，其中所述任选的胺保护基团Pg⁴为Boc。

46.根据权利要求1至45中任一项所述的方法，其中n为1。

47.一种用于制备式b的亚氨酸酯盐化合物的方法：

(a)使式a的氰基甲酸酯化合物：

在无水酸源的存在下在醇溶剂中反应，以形成所述式b的亚氨酸酯盐化合物，其中所述无水酸源为TMSCl，所述酸为HCl，并且Pg¹为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的。

48.根据权利要求47所述的方法，其中所述醇溶剂为MTBE中的EtOH。

49.根据权利要求47至48中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述式b的亚氨酸酯盐化合物的产率为至少65％。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述产率为至少78％。

51.一种用于制备式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体的方法：

其中：

R²选自由以下项组成的组：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆卤代烷氧基、C₁-C₆硫代烷基、苯基、苄基、CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂CH₂-(C₃-C₆环烷基)、CH₂-(4元至6元杂环基)、CH₂CH₂-(4元至6元杂环基)、5元至6元杂芳基和CH₂-(5元至6元杂芳基)；其中当存在苯环时，其可经选自由以下项组成的组的1至3个取代基取代：卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基和氰基；并且

n为1、2或3；

所述方法包括：

(a)使式hh的二酮酯化合物：

在酮还原酶(KRED)的存在下反应，以形成所述式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体，其中：

Pg³为任选的羟基保护基团并且在每次出现时可为相同或不同的。

52.根据权利要求51所述的方法，其进一步包括：

(b)使所述式j的羟基酮酯化合物或其立体异构体反应，以形成式l的经保护的腙化合物或其立体异构体：

或其盐。

53.根据权利要求51所述的方法，其中步骤(a)的所述式j的羟基酮酯化合物的产率为至少80％。

54.根据权利要求52所述的方法，其中步骤(b)的所述式l的经保护的腙化合物的产率为至少80％。

55.根据权利要求51至54中任一项所述的方法，其中所述KRED为高度立体选择性的。

56.根据权利要求51至55中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述式j的羟基酮酯化合物的立体异构体过量为至少90％。

57.根据权利要求51至56中任一项所述的方法，其中以固定化形式或以整个细胞的形式提供所述KRED。

58.根据权利要求51至57中任一项所述的方法，其中所述KRED为经工程改造的酮还原酶。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述经工程改造的酮还原酶为ADH-114或1-200-0-16。

60.根据权利要求51至59中任一项所述的方法，其进一步包括辅因子的存在。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述辅因子为NAD、NADH、NADP或NADPH。

62.根据权利要求51至61中任一项所述的方法，其进一步包括辅酶的存在。

63.根据权利要求62所述的方法，其中所述辅酶为葡萄糖脱氢酶。

64.根据权利要求63所述的方法，其中所述葡萄糖脱氢酶为GDH-105或1-030-0-05。

65.根据权利要求51至61中任一项所述的方法，其进一步包括醇的存在。

66.根据权利要求65所述的方法，其中所述醇为仲醇。

67.根据权利要求66所述的方法，其中所述仲醇为异丙醇。

68.根据权利要求1至67中任一项所述的方法，其中所述方法的至少一个步骤可扩展到至少千克规模。

69.一种化合物或其药用盐，其根据权利要求1至68中任一项所述的方法进行制备。

70.如前所述的本发明。