CN117070397A - 一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法，属于发酵工程领域。该培养基包含氨基葡萄糖母液0.1‑0.5L/L、水0.1‑0.9L/L、氯化钠60‑150g/L、微量元素10‑15g/L、碳酸钙0.5‑1.0g/L和消泡剂0.5g/L，调pH至5‑9。本发明使用该生产依克多因发酵培养基，控制发酵温度为37℃，pH初始为8，当发酵到11h时，通过流加废乙酸原液和发酵培养基，发酵60hOD600值达80，依克多因产量为7421±521mg/L；本发明培养基原料来源于工厂生产废料，培养方法简单，产生可观的依克多因合成量，具有很好的资源化利用前景。

Description

一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法
技术领域
本发明涉及发酵工程领域，特别是涉及一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法。
背景技术
依克多因化妆品备案名叫做四氢甲基嘧啶羧酸，是一种氨基酸的衍生物。依克多因在化妆品和医疗领域应用广泛。现有的研究发现，依克多因能够消炎、抵抗紫外线、修复肌肤屏障以及保护DNA的功效。目前主要通过中度嗜盐菌采用“细菌挤奶”工艺进行依克多因商业化生产。中度嗜盐菌是依克多因的良好生产者，但是利用生物法生产依克多因的原料(例如酵母粉和蛋白胨)价格昂贵，用量比较大，且依克多因生产的过程中操作复杂，具有染菌的风险，染菌会导致原材料的浪费，增加企业成本。
氨基葡萄糖，是天然的氨基单糖，为人体关节软骨基质中合成蛋白聚糖所必需的物质，分子式C6H13NO5，分子量179.2。有研究表明，氨基葡萄糖可用于治疗类风湿关节炎、肺部污染、过敏性感染、伤口、颞下颌关节问题和背痛。目前，生产氨基葡萄糖的方法主要为酸水解法、酶解法及微生物发酵法。微生物发酵法由于原材料广泛、污染相对较小而被广泛用于氨基葡萄糖的生产。发酵法提取氨基葡萄糖的一般流程为：利用过量的酸酸化发酵液，使其中的氨糖衍生物转化为氨基葡萄糖，利用碱性物质中和多余的酸，得到氨基葡萄糖盐溶液，对盐溶液进行脱色处理，最后加入乙醇等有机溶剂，利用氨基葡萄糖盐酸盐或硫酸盐不溶于乙醇的特点使其结晶析出。提取氨糖后的液相中仍然含有约8％-15％的氨基葡萄糖，该液相即为氨基葡萄糖母液。同时反应过程中会产生大量的废酸(卢健行.一种从母液中高效提取氨基葡萄糖的工艺：CN115558004A[P].2023-01-03.)。
培养基的组分及浓度对微生物发酵培养至关重要。然而目前所用的培养基成分复杂，价格昂贵。虽然常规的含有一定浓度氯化钠的合成培养基均可以用作嗜盐菌生产依克多因，但是存在染菌的风险，因此不利于工业发酵成本控制。因此，急需要一种价格低廉，操作简单且不易染菌的生产依克多因的培养基及嗜盐菌的培养条件。
本发明基于上述发酵废液为原料，通过培养基优化，确定了最适生产依克多因的培养基，并在此基础上，通过优化发酵条件，探究了不同初始pH、不同盐浓度以及添加不同废乙酸浓度下，高附加值产物依克多因生产情况。本发明的培养基原料易得，价格极低且操作简单。
发明内容
本发明的目的是提供一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本发明所述的培养基原料来源于工厂生产废料，价格低廉，且发酵培养方法简单，产生可观的依克多因合成量，具有很好的资源化利用前景。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种发酵生产依克多因的培养基，包含以下组分：
氨基葡萄糖母液0.1-0.5L/L、0.1-0.9L/L、氯化钠60-150g/L、微量元素10-15g/L、碳酸钙0.5-1.0g/L和消泡剂0.5g/L，调pH至5-9；
所述氨基葡萄糖母液包含80g/L的氨基葡萄糖。
进一步地，所述培养基中氨基葡萄糖母液和水的体积比为1：4；所述氯化钠的浓度为60g/L；用固态氢氧化钠调pH至8。
进一步地，所述微量元素包含无水硫酸铜0.60g/L，碘化钾0.088g/L，氯化锰0.12g/L，钼酸钠0.20g/L，硼酸0.02g/L，氯化钴0.50g/L，氯化锌0.10g/L，硫酸亚铁6.50g/L，生物素0.25g/L和硫酸5.00g/L。
本发明还提供一种高密度发酵生产依克多因的方法，包括将活化后的延长盐单胞菌接种至所述的培养基进行发酵培养的步骤。
进一步地，所述发酵培养具体为：发酵前期，于所述培养基中，在通气量为3L/min，转速为600rpm/min，发酵温度为37℃的条件下进行发酵培养；发酵培养11h后，流加乙酸原液和所述培养基，控制pH为8.0，发酵60h即可。
进一步地，所述乙酸原液的质量浓度为20％-30％；所述乙酸原液的流加速率为25.17mL/L/h，流加量为3.7L；所述培养基的流加速率为68.02mL/L/h，流加量为10L。
本发明还提供一种所述的培养基在发酵生产依克多因中的应用。
本发明公开了以下技术效果：
本发明生产依克多因发酵培养基的主要成份为稀释5倍的氨糖废母液，氨基葡萄糖16g/L，氯化钠60g/L，微量元素约13g/L，碳酸钙0.6g/L，初始pH为8；基于前述培养基，温度为37℃，pH初始为8，当发酵到10.5h时，用废乙酸自控pH为8，并采用转速联动将溶氧控制在30％以上，依克多因产量达到1890.35±10mg/L。最后优选采用在发酵至11h，流加废乙酸原液和发酵培养基，发酵60h时OD600值达80，依克多因产量为7421±521mg/L。本发明培养基原料来源于工厂生产废料，价格低廉易得，且发酵培养方法简单，产生可观的依克多因合成量，具有很好的资源化利用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为不同母液：水(v:v)下H.elongata细胞的OD600、氨糖降解率、氨氮含量和依克多因含量；
图2为不同盐浓度下H.elongata细胞的OD600、氨糖降解率、氨氮含量和依克多因含量；
图3为不同初始pH下H.elongata细胞的OD600、氨糖降解率、氨氮含量和依克多因含量；
图4为不同废乙酸浓度下H.elongata细胞的OD600和依克多因含量；
图5为OD600随时间变化图；
图6为高密度培养H.elongata OD600随时间变化图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1
1材料与方法
1.1材料
1.1.1出发菌株
Halomonas elongata ATCC 33173，延长盐单胞菌，属于革兰氏阴性细菌，由中科院微生物所馈赠。
1.1.2培养基与培养条件
活化培养基(g/L)：蛋白胨10、酵母浸膏5、氯化钠60、琼脂16，pH 7.0±0.1。培养温度为37℃，培养12h。
种子培养基(g/L)：蛋白胨10、酵母浸膏5、氯化钠80，pH 7.0±0.1，培养温度为37℃，220rpm条件下培养20h。
发酵培养基：氨基葡萄糖母液100-500mL(参照专利文献“CN115558004A一种从母液中高效提取氨基葡萄糖的工艺”，将发酵液经过酸解后用DNS法测得母液氨基葡萄糖的浓度，该母液中含有80g/L的氨基葡萄糖，其余为水，以及发酵液中的蛋白质等杂质)，用水补足至1000mL，相当于用水稀释母液(母液与水分别按照体积比(v:v)1：1，1：2，1：4，1：7，1：9稀释)，之后加入氯化钠60-150g/L、微量元素(无水硫酸铜0.60g/L，碘化钾0.088g/L，氯化锰0.12g/L，钼酸钠0.20g/L，硼酸0.02g/L，氯化钴0.50g/L，氯化锌0.10g/L，硫酸亚铁6.50g/L，生物素0.25g/L，硫酸5.00g/L)、0.6g/L碳酸钙、消泡剂(格雷特消泡剂，化学成分：聚醚多元醇(组分信息：环氧乙烷、环氧丙烷))0.5g/L，最后用固体氢氧化钠调pH为5-9。
1.2方法
1.2.1培养方法
1.2.1.1种子平板培养
取保种甘油管接入60g/LNaCl浓度的LB培养基中，220rpm，37℃条件下活化24小时，然后取活化后的发酵液稀释至10-7涂布在预先倒置30mL活化培养基的平板上，37℃下培养24h，然后挑出生长良好的单菌落在平板上涂布均匀，37℃下培养24h。
1.2.1.2种子培养
用10mL无菌的60g/LNaCl水溶液将培养好的种子平板上的细菌冲洗至预先灭菌的含玻璃珠50mL离心管内，在旋涡振荡器上震荡30s获得菌悬液，然后将10ml菌悬液接种至含有90mL种子培养基的500mL烧瓶，37℃、220rpm下培养20h。
1.2.1.3发酵培养
摇瓶在121℃条件下灭菌30分钟，接入45mL 1.1.2中的发酵培养基，接入5mL菌悬液。置于37℃，220rpm摇床上培养34h。
1.2.1.45L搅拌发酵罐培养
采用具有3L工作体积的5L发酵罐(上海国强生化工程装备有限公司)，按照发酵培养基配方配置3L的培养基组分，其中，发酵培养基无需灭菌。接种1.2.1.2培养好的种子液300mL，初始通气量为3L/min，初始转速600rpm/min，发酵过程中温度控制为37℃，罐压控制为0.05MPa，生长后期pH控制在8.0，后期设置溶氧转速联动对溶氧进行控制在30％以上，发酵培养29-60h。
1.2.2检测方法
1.2.2.1发酵液OD600测定
将取出的培养菌液用等渗溶液(盐浓度与培养基相同)稀释一定倍数，用酶标仪测量OD600值，并保证测量值小于0.8，OD600＝酶标仪测量值×稀释倍数。
1.2.2.2依克多因的测定
取一定发酵液至装有玻璃研磨珠的EP管内，放入冷冻研磨仪内，75HZ条件研磨30min，然后4℃下12000rpm离心10min分离细胞碎片，取上清稀释一定倍数后过0.22μm滤膜移至液相小瓶中通过岛津液相色谱仪检测，色谱柱为wondaSil C185μm 4.6X250mm，以水：乙腈(98:2)溶液为流动相，流速为0.5mL/min，柱温设为30℃，检测器为SPD-20AV，检测波长210nm。
1.2.2.3氨糖的测定
氨糖的测定使用DNS(二硝基水杨酸)测定。取一定发酵液装入2毫升EP管，在12000rpm离心5min，取上清液稀释一定倍数，使氨糖浓度为0.1-1.0g/L，0.22微米滤膜过滤备用。
取稀释后的发酵液0.5mL于5ml刻度试管中，加DNS试剂1.0ml，沸水煮沸5min，冷却后用水定容至5mL，在550nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出氨糖g/L数。
2结果分析
2.1不同氨基葡萄糖母液浓度对H.elongata产依克多因的影响
氨糖母液作为发酵生产依克多因的培养基的主要成份，其具有较高的盐度和极强的酸性。但利用固体氢氧化钠调节pH为中性，待冷却至室温后。具体是先将母液与水分别按照体积比(v:v)1：1，1：2，1：4，1：7，1：9配置。之后用氢氧化钠调节pH至中性。嗜盐菌生长受盐度影响，利用氯化钠调节使所有体系盐浓度一致(盐浓度为100g/L)，保证所有实验组中只有母液浓度不同。参照1.2.1.3发酵培养方法培养。结果由图1可知，32h内，氨糖母液：水(v:v)为1：4的条件下，嗜盐菌生长最好，OD600始终高于其他组并在28h达到最大(6.5)。母液浓度较低的两组在22h左右OD600达到最大值，且氨糖母液：水(v:v)为1：7的OD600高于1：9组。当氨糖母液：水(v:v)超过1：4时，OD600在短时间内并未超过氨糖母液：水(v:v)为1：4组别。32h内，氨糖母液：水(v:v)为1：1组别OD600增长缓慢。氨糖降解率随氨糖母液：水的比例不同呈现出先升高在降低的趋势，并在氨糖母液：水为1：4的条件下32h内达到48％。对不同氨糖母液：水的各个组别氨氮情况进行分析，母液：水为1：4的条件下对氨氮的去除量最高。但依克多因的含量变化在母液：水为1：2达到最高，母液：水为1：4的条件下依克多因的含量也达到997mg/L。总的来说，氨糖母液：水(v:v)为1：4在较短的时间内OD600达到最大，氨糖利用率较高，同时产生了较多依克多因，因此该配比组成是制备依克多因培养基的最佳配比。
表1不同母液：水(v:v)下OD600和依克多因
2.2不同盐浓度对H.elongata产依克多因的影响
盐浓度是影响H.elongata依克多因产量的重要因素。进一步，在氨糖母液：水(v:v)为1：4的比例下，利用氯化钠调节盐浓度控制盐度为60g/L,80g/L,100g/L,120g/L,150g/L。
如图2所示，盐浓度对H.elongata的生长、氨糖代谢、氨氮降解以及依克多因合成有着明显的影响。当盐浓度为60g/L时，菌体OD600明显地高于其他盐浓度条件下，OD600在28h达到最高为5.52。而随着盐浓度的增加，菌体的生长速率和最高OD600都在降低(表2)。盐浓度增加到150g/L时，H.elongata的生长受到严重地抑制，生长速度十分缓慢。同时，依克多因产量也随盐度的增加而逐渐减少。H.elongata在60g/L的盐浓度下，依克多因产量最高为918.76±89mg/L。此外，氨糖降解率在盐浓度为60g/L时最大，达到55％，说明此盐浓度下也利于嗜盐菌对培养基中氨氮的利用。因此，培养基的氯化钠浓度确定为60g/L，该浓度下最适合H.elongata的生长和依克多因合成，同时也能对氨糖母液中的氨氮达到很好的降解效果。
表2不同盐浓度下OD600和依克多因
2.3不同初始pH对H.elongata产依克多因的影响
微生物生长有一定的最适条件，例如温度、供氧、pH等。因此本发明进一步优化了培养基中的pH。氨糖母液pH＜0.01呈强酸性，且含有较高的氯离子，即使氨糖母液：水(v:v)为1：4处理后，其pH计示数仍小于0.01，本发明采用固体颗粒状氢氧化钠调节氨糖母液：水(v:v)为1：4的培养基的pH，分别调控其初始pH分别为5，6，7，8，9，调节pH后的溶液作为发酵培养基，由于嗜盐菌前期会产酸，因此添加0.6g/L碳酸钙作为中和剂。
结果表明，过酸过碱条件均会影响的生长，如图3所示，在酸性条件下(pH＝5，pH＝6)H.elongata生长明显受到了抑制。在初始pH＝8时，OD600达到最大值约为5.5。当pH不低于7时，氨糖的降解率均在55％以上，且在pH为8时达到最大，氨糖去除率近60％，表明碱性环境有利于H.elongata利用培养基中有机物。初始氨氮浓度一致的条件下，随着pH的升高，最终的氨氮含量逐渐降低，且在pH为9达到最低值，这说明碱性环境更有利于H.elongata利用培养基中的氨氮。当pH小于7时，菌体几乎不生长，因此依克多因的产量较低；而当初始pH超过7时，依克多因产量均超过800mg/L。其中，pH＝8时依克多因产量最高，可达到900mg/L。因此，pH＝8是处理该母液废水的最佳条件，不仅有较高的菌浓，还可以合成较高浓度的依克多因。
表3不同初始pH下OD600和依克多因
2.4乙酸不同加入浓度对H.elongata产依克多因的影响
嗜盐菌H.elongata发酵后的培养基氨氮浓度较高，而且随着发酵的进行pH升高。此外，氨糖的生产过程中产生了大量废乙酸，在利用氨基葡萄糖母液作为培养基制备依克多因的过程中，若能将废乙酸与氨基葡萄糖母液同时利用，不仅能够调控pH，而且有利于资源化利用。因此本发明进一步研究了废乙酸原液(废乙酸原液来自工厂利用乙酸水解发酵液，最终无法进一步回收利用的乙酸)是否有助于促进H.elongata细胞的生长和代谢以及氨氮的去除。具体流程为：以不添加乙酸为对照组，废乙酸或稀释液添加量为40mL/L，在发酵过程中，当pH达到8.0±0.05时将废乙酸原液或稀释液加入发酵液，其中废乙酸原液含乙酸20wt％-30wt％。
结果如图4所示，以不添加乙酸为对照组，以添加不同浓度的废乙酸为实验组，总体而言，不同浓度废乙酸对菌浓及依克多因均有促进作用。菌浓随着乙酸添加浓度不同呈现出先升高后降低的趋势；且加入乙酸原液达到最大，OD600为6.78(比对照组提高20.21％)。依克多因在添加废乙酸原液时达到最大为842mg/L，比对照组提高20.78％。培养基中加入废乙酸的不仅提高了依克多因的产量，而且促进了培养基中有机物和氨氮的去除。
表4不同废乙酸浓度下OD600和依克多因
2.55L发酵罐水平放大验证以及依克多因生成工艺
将1.1.1中的发酵培养基调整为氨糖母液：水(v:v)为1：4，氯化钠浓度为60g/L，固体颗粒状氢氧化钠调节发酵培养基pH为8，参照1.2.1.4的培养方法，利用5L搅拌式反应器培养10.5h开始流加废乙酸原液、稀释两倍废乙酸或稀释五倍废乙酸，以流加盐酸(浓度3mol/L)为对照组。OD600随时间变化如图5，10.5h开始流加，盐酸组H.elongata菌浓在16.5-25h内维持在5.92左右，25h之后菌浓开始降低。而乙酸组H.elongata在10.5-21.5h持续增长，OD600在21.5h达到最大为12，此时反应器内产生泡沫，消泡剂的加入使OD600降低，21.5-25h短暂的稳定后，菌浓也开始降低。整个过程废乙酸消耗量约300mL(盐酸消耗量也约300mL)。乙酸组最高OD600为盐酸组的2.02±0.1倍，表明废乙酸的加入一方面可以调控H.elongata处理氨糖母液培养基的pH，另一方面可以作为碳源提高H.elongata菌浓。添加废乙酸的培养基有利于提高依克多因的产量。
盐酸组和废乙酸组处理效果如表5，废乙酸的加入使OD600、氨糖降解率、氨氮去除率和依克多因均有提高。废乙酸组氨糖降解率为71.93％，比盐酸组提高约14.29％。氨氮去除率达到45.87％，是盐酸组1.91±0.1倍。而依克多因产量达到了1890.35±118mg/L，与对照组相比提升了约35％。加入废乙酸使氨糖的转化率达到163.8±14.00。
表5盐酸组和废乙酸组处理效果
2.65L发酵罐水平H.elongata的高密度培养
将1.1.1中的发酵培养基调整为氨糖母液：水(v:v)为1：4，氯化钠浓度为60g/L，固体颗粒状氢氧化钠调节发酵培养基pH为8，参照1.2.1.4的培养方法，利用5L搅拌式反应器进行H.elongata高密度培养生产依克多因。发酵培养11h开始流加废乙酸原液和优化后的发酵培养基(废乙酸流加速率为25.17mL/L/h，发酵培养基流加速率为68.02mL/L/h，废乙酸用量为3.7L，发酵培养基用量为10L)，控制生长后期pH为8.0。如图6，30-45h OD600增长迅速，60h OD600达到80。此刻，依克多因产量为7421±521mg/L。高密度培养条件下，OD600和依克多因均处于较高水平。与2.5仅流加废乙酸相比，高密度培养条件下OD600为仅流加废乙酸组的6.7倍，依克多因提高约292.64％。
本发明提供了一种培养基及利用其发酵生产依克多因的方法。通过实验探究表明，氨糖浓度为氨糖母液：水(v:v)1：4的条件下H.elongata对母液中有机物有较高的去除率，同时产生了大量依克多因。以氨糖母液为发酵培养基的原料来源，通过优化不同氨基葡萄糖母液浓度、不同初始pH、不同盐浓度以及添加不同废乙酸浓度，确立了氨基葡萄糖母液：水(v:v)1:4，初始pH 8.0，盐浓度60g/L，添加废乙酸原液为最优条件，添加废乙酸原液不仅有利于调节pH，而且有利于氨糖和氨氮的去除，发酵生产的依克多因的产量为842mg/L，比对照组提高20.78％。在5L罐验证，获得了依克多因产量达到了1890.35±10mg/L，与对照组相比提升了约35％的结果。最后通过流加废乙酸原液和发酵培养基，实现高密度培养，得到依克多因7421±521mg/L。
本发明提供的用于H.elongata生产依克多因的培养基，以氨基葡萄糖母液为碳源和氮源，通过稀释一定倍数进行培养H.elongata，并且废乙酸对于依克多因存在促进作用，利用含有废乙酸的培养基进行H.elongata发酵和高密度培养，得到依克多因7421±521mg/L，效果显著。该培养基原料价格低廉，来源广泛，且成分简单，反应稳定，能够获得较高浓度的更高附加值产品依克多因，具有一定的经济效益。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种发酵生产依克多因的培养基，其特征在于，包含以下组分：
氨基葡萄糖母液0.1-0.5L/L、水0.1-0.9L/L、氯化钠60-150g/L、微量元素10-15g/L、碳酸钙0.5-1.0g/L和消泡剂0.5g/L，调pH至5-9；
所述氨基葡萄糖母液包含80g/L的氨基葡萄糖。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基中氨基葡萄糖母液和水的体积比为1：4；所述氯化钠的浓度为60g/L；用固态氢氧化钠调pH至8。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述微量元素包含无水硫酸铜0.60g/L，碘化钾0.088g/L，氯化锰0.12g/L，钼酸钠0.20g/L，硼酸0.02g/L，氯化钴0.50g/L，氯化锌0.10g/L，硫酸亚铁6.50g/L，生物素0.25g/L和硫酸5.00g/L。
4.一种高密度发酵生产依克多因的方法，其特征在于，包括将活化后的延长盐单胞菌接种至权利要求1-3任一项所述的培养基进行发酵培养的步骤。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养具体为：发酵前期，于所述培养基中，在通气量为3L/min，转速为600rpm/min，发酵温度为37℃的条件下进行发酵培养；发酵培养11h后，流加乙酸原液和所述培养基，控制pH为8.0，发酵60h即可。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述乙酸原液的质量浓度为20％-30％；所述乙酸原液的流加速率为25.17mL/L/h，流加量为3.7L；所述培养基的流加速率为68.02mL/L/h，流加量为10L。
7.一种如权利要求1-3任一项所述的培养基在发酵生产依克多因中的应用。
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