CN117064920A - Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肿瘤的产品中的应用 - Google Patents

Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肿瘤的产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肿瘤的产品中的应用。所述的Akkermansia muciniphila的保藏编号为CGMCC No.20955。本发明首次公开了上述的Akkermansia muciniphila对于抗结直肠癌的应用，其可以缓解AOM/DSS诱导的脾脏和肝脏指数的升高和体重的降低，有效减少结直肠癌的肿瘤数目和直肠组织的病变程度，可以上调caspase‑9、Bid和Bim的mRNA表达水平，降低肠道炎症程度，影响结直肠癌的发生发展。

Description

Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗 肿瘤的产品中的应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肿瘤的产品中的应用。
背景技术
阿克曼氏菌属于疣菌门，是定植于胃肠道粘膜表面以胃粘液蛋白为碳源的一种革兰氏阴性、严格厌氧、不运动、不形成孢子、可以单独或成对生长的卵圆形细菌。嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila，AKK)在健康人粪便标本中发现，定居于肠道黏膜层，对上皮细胞具有黏附力，能降解肠上皮表面的粘蛋白。
结直肠癌(colorectal cancer，CRC)，又名大肠癌，包括升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠，是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤。早期的结直肠癌的临床表现多为无明显症状，少数仅表现为腹痛、腹胀和腹泻等，中晚期表现为大便性质的变化、腹痛、腹部肿块和肠梗阻等。目前手术切除是结直肠癌主要的治疗方式，但手术切除可能会增加肿瘤扩散和转移的风险。放疗和化疗是晚期结直肠癌转移病人的常用治疗方法，但容易产生耐药性和副作用。基因治疗、细胞治疗和免疫治疗的成本较高。目前亟需一种接受度较高、治疗效果较好的治疗结直肠癌的方法。
中国专利CN108367031A中公开了嗜黏蛋白阿克曼氏菌用于治疗炎症病况的用途，其中具体公开了包含一种或多种嗜黏蛋白阿克曼氏菌菌株的组合物具有预防和/或治疗以下病况相关的胃肠炎症：炎性肠病如克罗恩氏病或溃疡性结肠炎、肠易激综合征、囊袋炎、感染后结肠炎。
中国专利CN116211896A中公开了嗜黏蛋白阿克曼菌JF3在干预放射性直肠病中改善组织纤维化和修复黏膜破损的应用，所述嗜黏蛋白阿克曼菌JF3的保藏号为CCTCC No：M20221499。该专利中研究发现，嗜黏蛋白阿克曼菌JF3可以有效改善放射性直肠病引起的直肠纤维化、直肠粘膜破损、肛门损伤和结直肠炎症。可将嗜黏蛋白阿克曼菌JF3作为针对治疗放射性直肠病引起的直肠纤维化、直肠粘膜破损、肛门损伤和结直肠炎症的药物。
目前现有技术中并未公开保藏编号为CGMCC No.20955的Akkermansiamuciniphila具有抗肿瘤的作用。
本发明系发明人针对自开发的微生物资源：保藏编号为CGMCC No.20955的Akkermansia muciniphila(已同日递交其他专利)，所进行的下游应用技术开发。
发明人在获得Akkermansia muciniphila后，进行了包含抗肿瘤、认知疾病、代谢疾病、炎症疾病、骨关节疾病、心血管疾病等多个领域应用实验并在部分领域获得了正向实验结果。
考虑到专利法单一性的相关规定，对其中不具备单一性的各适应症分别请求保护。
本发明为针对抗肿瘤应用技术的保护。
由于微生物鉴定、性能试验等相关证据公布于同日递交的微生物专利中，为便于本发明的审查工作，快速了解发明人的前期工作，在本发明发明内容中对Akkermansiamuciniphila的相关信息进行简要披露。
Akkermansia muciniphila：
本部分的结论性信息为便于对本发明的审查工作，而非对本发明保护范围的限制。具体实验过程、实验结果记载于与本发明同日递交的微生物专利中。
1、Akkermansia muciniphila经本发明人分离筛选获得；
2、Akkermansia muciniphila的保藏信息：保藏编号为：CGMCC No.20955。
3、Akkermansia muciniphila的16srRNA：SEQ ID NO.1。
4、Akkermansia muciniphila生理生化性质：
(1)疏水性：随时间的上升而上升，在60min时达到30％以上。
(2)自聚集性：随时间的上升而上升，在20h时趋于稳定，保持在52％左右。
(3)胃肠液耐受：
在胃液中的存活率随时间的延长呈下降趋势，在240min时存活率在85％左右；
在肠液中的存活率整体上呈下降趋势，在240min时存活率在80％以上。
(4)生物膜形成能力：弱性。
(5)急毒实验：
细菌回复突变试验结果显示，该菌株无致突变性；
小鼠通过急性灌胃高、中、低剂量的Akkermansia muciniphila，未出现死亡现象；
受试组小鼠每天的体重变化与对照生理盐水组之间无显著性差异；
在急性灌胃期间，每天受试小鼠的摄食量变化与对照生理盐水组小鼠之间无显著性差异；
在急性灌胃期间，每天受试小鼠的血糖变化与对照生理盐水组小鼠之间无显著性差异；
急性灌胃组与对照生理盐水组小鼠的各项血液指标无显著差异；
肝脏中，受试小鼠肝脏中甘油三酯水平均极显著低于其对照生理盐水组小鼠；
血清中甘油三酯水平在受试小鼠与对照小鼠中无显著差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的胆固醇水平在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的胆汁酸水平在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的葡萄糖水平在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的总蛋白水平在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的谷丙转氨酶酶活力在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的谷草转氨酶酶活力在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的肌酐含量在血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的尿素氮浓度在血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、大脑、睾丸、肺、胃及肠等主要器官重量基本无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的肝脏和肾脏无显著病理损伤。
(6)亚慢性毒性试验：
小鼠通过连续90天灌胃高、中、低剂量的AKK.pro，未出现死亡现象；
受试组小鼠每周的体重变化与对照生理盐水组之间无显著性差异；
在连续灌胃期间，每周受试小鼠的摄食量变化与对照生理盐水组小鼠之间无显著性差异；
在连续灌胃期间，每周中剂量灌胃小鼠的血糖变化与对照生理盐水组小鼠之间存在显著差异，其他组与对照组之间无显著性差异；
灌胃组与对照生理盐水组小鼠的各项血液指标无显著差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的甘油三酯水平在肝脏和血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的胆固醇水平在肝脏和血清中均无显著性差异；
灌胃中剂量小鼠与其对照组小鼠的胆汁酸水平在肝脏中具有显著性差异，而其他组与对照组在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的葡萄糖水平在肝脏和血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的总蛋白含量在肝脏和血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的谷丙转氨酶酶活力在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的谷草转氨酶酶活力在血清和肝脏中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的肌酐含量在血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的尿素氮浓度在血清中均无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、大脑、睾丸、肺、胰腺、胃及肠等主要器官重量基本无显著性差异；
受试小鼠与其对照组小鼠的肝脏和肾脏无显著病理损伤；
受试小鼠与其对照组小鼠的血糖调节能力无显著性差异。
(7)Akkermansia muciniphila的药物敏感性分析：
经测定Akkermansia muciniphila对氨苄西林、头孢曲松、头孢噻污、美罗培南、四环素、莫西沙星、氯霉素均敏感。
发明内容
本发明的目的是提供Akkermansia muciniphila在抗肿瘤中的制备应用，本发明的Akkermansia muciniphila缓解AOM/DSS诱导的脾脏和肝脏指数的升高和体重的降低，减少了结直肠癌的肿瘤数目和直肠组织的破坏程度，并且上调结肠组织中caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达水平，对结直肠癌的治疗具有重要的作用。
本发明系针对Akkermansia muciniphila的下游应用技术请求保护。
具体为Akkermansia muciniphila在抗肿瘤中的应用。
具体地，从应用领域而言，前述应用包括：
1、以治疗方法、制药用途将Akkermansia muciniphila应用于肿瘤的预防、治疗、辅助预防、辅助治疗；
2、以食品制备用途将Akkermansia muciniphila应用于肿瘤的辅助预防、辅助治疗；
3、以保健品制备用途将Akkermansia muciniphila应用于肿瘤的辅助预防、辅助治疗；
4、以原料制备用途将Akkermansia muciniphila应用于肿瘤的预防、治疗、辅助预防、辅助治疗。
本发明以模型小鼠为例，验证了Akkermansia muciniphila在抗肿瘤中的应用，不应基于动物实验在医药领域的常用性而将本发明的用途范围限制于治疗方法或制药用途。
具体地，从肿瘤的类型而言，前述应用包括但不限于：运动系统肿瘤、消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、神经系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、生殖系统肿瘤和/或内分泌系统肿瘤。
基于各种肿瘤的发生均是由于机体受到多种因素的共同作用导致基因异常改变，包括原癌基因激活、抑癌基因失活、多种基因异常的累积，最终形成肿瘤。本领域技术人员根据Akkermansia muciniphila在某种具体的肿瘤(结直肠癌)的实验，可以合理归纳或推测其能够等同的应用于或至少具备应用潜力于其系统、器官、组织的肿瘤。
更具体地，所述的肿瘤可按性质分为良性肿瘤和恶性肿瘤。
所述的良性肿瘤为腺瘤、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、血管瘤、淋巴管瘤、软骨瘤、胶质瘤和/或节细胞神经瘤。
所述的恶性肿瘤为乳腺癌、鼻咽癌、肺癌、结直肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、恶性黑色素瘤、
具体地，从原料形式而言，前述应用包含使用Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌、死菌和/或任何直接或间接来源于Akkermansiamuciniphila的成分、组分、组成物、代谢物；以及含有或不含有在某项具体应用领域上所允许的当前的、未来的辅料。
更具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体。
更具体地，所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用。
更具体地，所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质。
更具体地，所述的活菌也称活性菌群，可在肠道内定植、繁衍，有利于增加有益菌的数。
更具体地，所述的死菌已经失去生命活力的微生物，无法进行生长和繁殖，由生产过程导致益生菌失去活力，如高温处理或过度干燥。
具体地，从食品领域而言，所述的食品包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、食品学上可接受的辅料。
更具体地，所述的食品学上可接受的辅料选自乳化剂、悬浮液稳定剂、香料、润湿剂、赋形剂、防腐剂、润滑剂、甜味剂以及稀释剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述食品学上可接受的辅料为选硅酸钙、细结晶纤维素、蔗糖、山梨糖醇、矿物油、淀粉、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、自乳糖、葡萄糖、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、糖浆、纤维素、水、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和甘露糖中的至少一种。
更具体地，所述的食品包括但不限于：巧克力、固体饮料、液体饮料、冰激淋、硬质糖果、酥质糖果、焦香糖果、凝胶糖果、奶糖糖果、胶基糖果、充气糖果、压片糖果、果冻、凝胶颗粒和/或晶球。
具体地，从药物领域而言，所述的药物包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、药学上可接受的辅料。
更具体地，所述的药学上可接受的辅料选自防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、增溶剂、增稠剂、香料、甜味剂以及稳定剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述药学上可接受的辅料为选自阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、乳糖、甘露糖、淀粉、细结晶纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、矿物油、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素和羟基苯甲酸甲酯中的至少一种。
更具体地，所述的药物的剂型可以是口服制剂或注射制剂。
优选地，所述口服制剂可以是片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、固体饮料或口服液。
更具体地，所述的药物包含其他治疗肿瘤的药物。
具体地，从保健品而言，所述的保健品包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、保健品中可接受的辅料。
更具体地，所述的辅料选自甜味剂、填充剂、稳定剂、色素、溶剂、赋味剂、胶囊壳材料一种或两种以上的组合。
优选地，所述的甜味剂选自天然甜味剂、人工甜味剂中的至少一种；
所述的填充剂选自淀粉、玉米粉、葡萄中的至少一种；
所述的稳定剂选自抗氧剂、防腐剂中的至少一种；
所述的色素选自天然色素、人工色素中的至少一种；
所述的溶剂选自水、酒精、甘油、乙醇中的至少一种；
所述的赋味剂选自天然香料、人工香精中的至少一种；
所述的胶囊壳材料选自明胶、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇中的至少一种。
具体地，以上领域从活性剂量而言，所述的Akkermansia muciniphila的活菌数不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
优选地，所述Akkermansia muciniphila的活菌数为1×108-1×1012CFU/g或1×108-1×1012CFU/mL。
进一步优选地，所述Akkermansia muciniphila的活菌数为1×109-1×1012CFU/g或1×109-1×1012CFU/mL，如1×109CFU/g(CFU/mL)、2×109CFU/g(CFU/mL)、3×109CFU/g(CFU/mL)、4×109CFU/g(CFU/mL)、5×109CFU/g(CFU/mL)、6×109CFU/g(CFU/mL)、7×109CFU/g(CFU/mL)、8×109CFU/g(CFU/mL)、9×109CFU/g(CFU/mL)、10×109CFU/g等，该数值范围内的其他点值均可选择。
本发明还提供了一种治肿瘤的方法，该方法是向肿瘤患者施用Akkermansiamuciniphila。
具体地，所述的肿瘤患者为经过临床诊断患运动系统肿瘤、消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、神经系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、生殖系统肿瘤和/或内分泌系统肿瘤的患者。
具体地，所述的施用的方法选自口服给药、静脉注射给药、局部给药、皮内给药和/或皮下给药。
具体地，向肿瘤患者施用的的药物包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、药学上可接受的辅料。
更具体地，所述的药学上可接受的辅料选自防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、增溶剂、增稠剂、香料、甜味剂以及稳定剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述药学上可接受的辅料为选自阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、乳糖、甘露糖、淀粉、细结晶纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、矿物油、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素和羟基苯甲酸甲酯中的至少一种。
更具体地，所述的药物的剂型可以是口服制剂或注射制剂。
优选地，所述口服制剂可以是片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、固体饮料或口服液。
本发明还提供了基于上述应用所产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila对肿瘤的治疗方法。
具体地，基于Akkermansia muciniphila治疗或预防肿瘤的用途，还可以对菌株进行改良，产生、派生、衍生出治疗或预防肿瘤效果更好的Akkermansia muciniphila，所述的改良方法为传统方法和遗传工程方法。
进一步具体地，所述的传统方法可以是物理方法，化学方法和/或选择方法。
更进一步具体地，所述的物理方法是指利用辐射或高压手段来诱发突变，从而实现菌种改良。
优选地，所述的辐射方法包括紫外线辐射和/X射线辐射；
所述的高压法可以是将微生物暴露在高压环境下，使其产生适应性变化。
更进一步具体地，所述的化学方法是指利用化学药剂来诱发菌种突变。
优选地，所述的化学药剂可以是亚硝酸盐、乙酰胆碱和/或氮芥。
更进一步具体地，所述的选择方法是指通过筛选出具有优良性状的微生物进行繁殖，从而实现菌种改良。
优选地，所述的选择方法是用于改良微生物的代谢途径和/或生长条件，获得治疗或预防肿瘤效果更好的Akkermansia muciniphila。
进一步具体地，所述的遗传工程方法可以是基因克隆、基因敲除、基因编辑和/合成生物学，从而获得治疗或预防肿瘤的效果更优的菌株。
更进一步具体地，所述的基因克隆是指将目标基因从一个细胞剪出来，并将其插入另一个细胞中，实现目标基因在新的宿主中的表达，以增强原有菌株的治疗或预防肿瘤的效果。
更进一步具体地，所述的基因敲除是指通过技术手段将目标基因删除，实现对微生物性状的调控，以获得治疗或预防肿瘤的效果更好的菌株。
更进一步具体地，所述的基因编辑是指通过技术手段精准地修改目标基因序列，实现对微生物性状的调控，以获得治疗或预防肿瘤的效果更好的菌株。
更进一步具体地，所述的合成生物学是指利用化学合成机技术构建新型基因序列，并将其导入微生物中，实现对微生物性状的调控，以获得治疗或预防肿瘤的效果更好的菌株。
本发明还提供了基于上述应用所产生、派生、衍生出的包含Akkermansiamuciniphila的产品。
具体地，一种治疗或预防肿瘤的药物，所述的药物包含：
(1)、产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、药学上可接受的辅料。
更具体地，所述的药学上可接受的辅料选自防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、增溶剂、增稠剂、香料、甜味剂以及稳定剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述药学上可接受的辅料为选自阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、乳糖、甘露糖、淀粉、细结晶纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、矿物油、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素和羟基苯甲酸甲酯中的至少一种。
更具体地，所述的药物的剂型可以是口服制剂或注射制剂。
优选地，所述口服制剂可以是片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、固体饮料或口服液。
更具体地，所述的药物包含其他治疗肿瘤的药物。
具体地，一种治疗或预防肿瘤的食品，所述的食品包含：
(1)、产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、食品学上可接受的辅料。
更具体地，所述的食品学上可接受的辅料选自乳化剂、悬浮液稳定剂、香料、润湿剂、赋形剂、防腐剂、润滑剂、甜味剂以及稀释剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述食品学上可接受的辅料为选硅酸钙、细结晶纤维素、蔗糖、山梨糖醇、矿物油、淀粉、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、自乳糖、葡萄糖、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、糖浆、纤维素、水、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和甘露糖中的至少一种。
更具体地，所述的食品包括但不限于：巧克力、固体饮料、液体饮料、冰激淋、硬质糖果、酥质糖果、焦香糖果、凝胶糖果、奶糖糖果、胶基糖果、充气糖果、压片糖果、果冻、凝胶颗粒和/或晶球。
更具体地，所述的食品包括但不限于：巧克力、固体饮料、液体饮料、冰激淋、硬质糖果、酥质糖果、焦香糖果、凝胶糖果、奶糖糖果、胶基糖果、充气糖果、压片糖果、果冻、凝胶颗粒和/或晶球。
具体地，一种治疗或预防肿瘤的保健品，所述的保健品包含：
(1)、产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、保健品中可接受的辅料。
更具体地，所述的辅料选自甜味剂、填充剂、稳定剂、色素、溶剂、赋味剂、胶囊壳材料一种或两种以上的组合。
优选地，所述的甜味剂选自天然甜味剂、人工甜味剂中的至少一种；
所述的填充剂选自淀粉、玉米粉、葡萄中的至少一种；
所述的稳定剂选自抗氧剂、防腐剂中的至少一种；
所述的色素选自天然色素、人工色素中的至少一种；
所述的溶剂选自水、酒精、甘油、乙醇中的至少一种；
所述的赋味剂选自天然香料、人工香精中的至少一种；
所述的胶囊壳材料选自明胶、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇中的至少一种。
具体地，以上领域从活性剂量而言，所述的产生、派生、衍生出的Akkermansiamuciniphila的活菌数不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
优选地，所述Akkermansia muciniphila的活菌数为1×108-1×1012CFU/g或1×108-1×1012CFU/mL。
进一步优选地，所述Akkermansia muciniphila的活菌数为1×109-1×1012CFU/g或1×109-1×1012CFU/mL，，如1×109CFU/g(CFU/mL)、2×109CFU/g(CFU/mL)、3×109CFU/g(CFU/mL)、4×109CFU/g(CFU/mL)、5×109CFU/g(CFU/mL)、6×109CFU/g(CFU/mL)、7×109CFU/g(CFU/mL)、8×109CFU/g(CFU/mL)、9×109CFU/g(CFU/mL)、10×109CFU/g等，该数值范围内的其他点值均可选择。
具体地，用于治疗或预防肿瘤的食品原料，所述的食品原料为产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌。
具体地，用于治疗或预防肿瘤的药物原料，所述的药物原料为产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌。
具体地，用于治疗或预防肿瘤的工业原料，所述的工业原料为产生、派生、衍生出的Akkermansia muciniphila发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌。
本发明的有益效果为：
本发明首次公开了Akkermansia muciniphila(AKK PROBIO，保藏编号为CGMCCNo.20955)对于抗结直肠癌的应用，并且通过实验验证了其对结直肠癌有明显的调节作用，可以缓解AOM/DSS诱导的脾脏和肝脏指数的升高和体重的降低，有效减少结直肠癌的肿瘤数目和直肠组织的病变程度；可以上调结肠组织中caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达水平，降低肠道炎症程度，对结直肠癌的发生和发展具有重要的作用。
保藏说明
菌株名称：AKK PROBIO；
保藏编号：CGMCC No.20955；
分类命名：Akkermansia muciniphila；
保藏时间：2020年10月26日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
保藏单位简称：CGMCC；
保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1为各组小鼠体重(body weight)变化统计图。
图2为各组小鼠结直肠长度(colon length)统计图。
图3各组小鼠结直肠重量与长度的比值(colon weight/length)统计图。
图4为各组小鼠的肿瘤数目(tumor number)统计图。
图5为各组小鼠的脾脏指数(splenic index)。
图6为各组小鼠的肝脏指数(Liver index)。
图7为各组小鼠的肾脏指数(Kidney index)。
图8为正常组小鼠的直肠组织病理学图像。
图9为模型组小鼠的直肠组织病理学图像。
图10为阿司匹林药物处理组小鼠的直肠组织病理学图像。
图11为低剂量AKK PROBIO处理组小鼠的直肠组织病理学图像。
图12为高剂量AKK PROBIO处理组小鼠的直肠组织病理学图像。
图13为各组小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)的含量。
图14为各组小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)的含量。
图15为各组小鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)的含量。
图16为各组小鼠血清中诱导型NO合酶(iNOS)的含量。
图17为各组小鼠血清中核因子κB(NF-κB)的含量。
图18为各组小鼠结肠组织炎症通路相关基因p50 mRNA的相对表达量。
图19为各组小鼠结肠组织炎症通路相关基因p52 mRNA的相对表达量。
图20为各组小鼠结肠组织炎症通路相关基因p65 mRNA的相对表达量。
图21各组小鼠结肠组织炎症通路相关基因IκBβmRNA的相对表达量。
图22为各组小鼠的caspase-9mRNA的相对表达量。
图23为各组小鼠的Bid mRNA的相对表达量。
图24为各组小鼠的Bim mRNA的相对表达量。
上图中，Normal为正常组，Control为AOM/DSS诱导结直肠癌模型组，Aspirin为阿司匹林药物(67mg/kg)处理组，AKK PROBIO-L(AKKP-L)为低剂量AKK PROBIO处理组(108CFU/只)，AKK PROBIO-H(AKKP-H)为高剂量AKK PROBIO处理组(109CFU/只)。
上图中，a-c不同字母表示根据邓肯检验有显著差异(p<0.05)。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中，若无特殊说明，所用的操作方法均为常规操作方法，所用设备均为常规设备，各个实施例所用设备材料均相同。
白细胞介素1β(IL-1β)：是由活化的巨噬细胞以前蛋白的形式产生的,并由半胱天冬酶-1(CASP1/ICE)蛋白水解加工成活性形式。IL-1β是炎症反应的重要介质，参与多种细胞活动，包括细胞增殖、分化和凋亡。
白细胞介素6(IL-6)：是一种白介素,既可作为促炎性细胞因子,又可作为抗炎性肌因子，是目前临床上检测感染性疾病常用指标。
γ干扰素(IFN-γ)：是一种细胞因子，它是由T淋巴细胞、自然杀伤细胞和一些其他免疫细胞产生的蛋白质。IFN-γ在免疫系统中发挥着重要的作用，能够增强机体的免疫力，抵抗病原体的侵袭。
诱导型NO合酶(iNOS)：是利用一氧化氮的氧化应激(自由基)，协助巨噬细胞在免疫系统中对抗病原体的一类酶。iNOS是一种信使分子，它可以产生一氧化氮(NO)，当DSS引起体内炎症时，大量的NO表达会加剧炎症，促进iNOS的高表达。
核因子κB(NF-κB)：参与细胞对外界刺激的响应，如细胞因子、辐射、重金属、病毒等。在细胞的炎症反应、免疫应答等过程中NF-κB起到关键性作用。NF-κB由五种转录因子组成，这些转录因子调节参与多种生物过程的各种基因的表达。这些过程包括炎症、细胞发育和分化、细胞周期进程、细胞迁移等。
本发明中的Akkermansia muciniphila即为AKK PROBIO，简称为AKKP。
下述实施例中，以诱变剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)与致炎剂硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulfate，DSS)联合使用建立的AOM/DSS小鼠模型，能够模拟小鼠结肠从正常黏膜到炎症发生，进而转变为肿瘤的全过程。模型肿瘤位置多发于结肠远端，先以息肉状生长，其病理学特征与人类CRC相似(Snider AJ，Bialkowska AB，Ghaleb AM，etal.Murine model for colitis-associated cancer of the colon[J].Methods MolBiol，2016，1438:245-254.)，能够反映人类由结肠炎症进展为肿瘤的发展模式。
实施例1
1.1实验材料
氧化偶氮甲烷，购自Sigma-Aldrich公司，货号为A5486；
葡聚糖硫酸钠，购自MP Biomedicals，货号为02160110-CF；
阿司匹林肠溶片，购自拜耳医药保健有限公司，货号为83141248；
RNase-Free water，购自北京索莱宝科技有限公司；
qPCR SYBR Green Master Mix，购自上海翊圣生物科技有限公司；
Trizol Reagent、RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，购自ThermoFisher Scientific公司；
白细胞介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号为ml001814；
白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号为ml002293；
γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号为ml002277；
诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号为ml001216；
核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号为ml000331；
其余试剂均为国产生化试剂或分析纯。
1.2实验仪器
6D45415正置显微镜，日本奥林巴斯仪器有限公司；
Bioprep-24生物样品均质仪、Nano-300微量分光光度计，杭州奥盛仪器有限公司；
A200梯度PCR仪，杭州朗基科学仪器有限公司；
VLBL0TD1多功能酶标仪、StepOnePlus Real-Time PCR System，赛默飞世尔科技(苏州)有限公司。
1.3实验方法
1.3.1动物的分组与处理
SPF级雄性C57BL/6小鼠，6周龄，购于重庆莱彼特生物科技有限公司。饲养于室温25±2℃、相对湿度50±5％、12h光照/12h黑暗的标准化实验室中，适应性喂养1周后随机分为5组：正常组、模型组、阿司匹林阳性对照组、AKK PROBIO低剂量(AKKP-L)组和AKK PROBIO高剂量(AKKP-H)组，每组8只小鼠。
实验过程中小鼠自由摄食和饮水，实验造模第一天对模型组、阿司匹林组、AKKPROBIO低剂量组和AKK PROBIO高剂量组按照10mg/kg进行氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)腹腔注射，并分别在第2周、第5周、第8周喂饲2.5％硫酸葡聚糖钠(dextran sodiumsulfate，DSS)水溶液。
正常组和模型组小鼠每日灌胃无菌生理盐水；阿司匹林组小鼠按67mg/kg灌胃阿司匹林溶液；AKK PROBIO低剂量组和AKK PROBIO高剂量组小鼠分别按1×108CFU/只和1×109CFU/只的剂量进行灌胃，持续10周。
在实验过程中观察各组小鼠的饮食、活动、精神，毛发情况及小鼠的粪便性状，每周称量小鼠的体重并记录。实验结束后，通过眼球取血并脱脊椎处死小鼠，解剖取小鼠大肠、脾脏、肝脏、肾脏组织待测。
1.3.2检测指标
1.3.2.1脏器指标的测定
小鼠解剖后，取出大肠、脾脏、肝脏、肾脏组织并称重，通过公式计算小鼠脏器指数(脏器指数＝肝脏重量(mg)/体重(g))，同时测量小鼠结直肠长度和记录小鼠结直肠肿瘤发生数量。
1.3.2.2直肠组织病理学观察
小鼠直肠于组织固定液中固定24h后，移入95％的乙醇中脱水，再放入二甲苯中置换出组织中的酒精使直肠组织透明化，然后进行石蜡包埋，经切片机切片后用H&E染色并固定，即制成厚度为2-3μm的小鼠直肠病理组织切片，并在正置显微镜下进行观察。
1.3.2.3结直肠肿瘤发生数量
小鼠解剖后，记录小鼠结直肠肿瘤发生数量。
1.3.2.4小鼠血清中炎症相关因子水平测定
通过眼球收集全血，在4000r/min、4℃离心10min，分离出上层血清。根据ELISA试剂盒说明书，测定小鼠血清中IL-1β、IL-6、IFN-γ、iNOS和NF-κB的水平。
1.3.2.5小鼠结肠组织中炎症和细胞凋亡相关基因的表达水平测定
(1)取50mg结肠组织用生理盐水清洗干净后置于装有6颗氧化锆珠的匀浆管中，加入500μL Trizol试剂对组织中的RNA进行提取。通过微量分光光度计对RNA的纯度和浓度进行测定。A260/A280作为核酸检测的指示值，其比值位于1.8-2.0之间表明RNA纯度较高，可进行后续试验。
(2)通过反转录生成cDNA后，配制含1μL cDNA的反应体系，其余试剂包括qPCRSYBR Green Master Mix 10μL、无菌蒸馏水7μL和上、下游引物各1μL。qRT-PCR扩增反应条件：95℃、10s，60℃、30s，40个循环；95℃、15s，60℃、60s，95℃、15s。以Eef2为内参基因，根据公式2-△△Ct计算各目的基因的mRNA相对表达量。下表1为本实验中用到的引物序列。
表1.
1.4数据分析
实验中所有结果表示为平均值±标准偏差，同时采用IBM SPSS27.0软件中单因素方差法检验各组实验结果间在p<0.05水平上是否有显著差异。
1.4.1AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠体重的影响
正常组小鼠体格健康，活动自如，毛色黝黑有光泽，进食饮水均正常，无腹泻及便血，其余4组小鼠出现出现稀便、脱肛、血便、体重下降等情况。如图1所示，为各组小鼠的体重变化的统计图。给予浓度为2.5％DSS期间，造模各组小鼠的体重出现下降趋势，停止后各组小鼠的体重呈现逐渐增加的趋势。实验期末，造模各组小鼠的体重均显著低于正常组小鼠体重，其中模型组小鼠的体重下降的最低，而阿司匹林和AKK PROBIO干预组小鼠体重有所回升。与正常组相比，其余4组小鼠实验期末的体重具有显著性差异(p<0.05)。结果表明，AOM/DSS会引起小鼠体重下降，阿司匹林和AKK PROBIO干预能够在一定程度上缓解小鼠体重下降。
1.4.2AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠结直肠的影响
如图2所示，为各组小鼠结直肠的变化。小鼠结直肠发生炎症时，小鼠结直肠长度有一定程度的缩短，从结直肠长度可以分析结直肠炎症情况。与正常组相比，其余4组结直肠长度较短(P<0.05)。与模型组相比，阿司匹林组和AKKP组的结直肠长度较长(P<0.05)。由上可知，AKKP干预可缓解小鼠结直肠的缩短。
如图3所示，正常组小鼠结直肠重量与小鼠结直肠长度的比值为2.81±0.34，模型组为4.34±0.35，阿司匹林组为3.17±0.50，AKKP-L组和AKKP-H组分别为3.18±0.31和2.97±0.18。模型组与正常组、阿司匹林组、AKKP组相比具有显著性(p<0.05)。由此说明，AKKP干预可以降低小鼠结直肠重量与小鼠结直肠长度的比值。
实验结果如图4所示，从图中可以看出，与正常组相比，其余4组的结直肠肿瘤发生数量明显较多(p<0.05)，正常组的结直肠肿瘤发生数量为0。与模型组相比，阿司匹林组和AKK PROBIO组的结直肠肿瘤发生数量较少(p<0.05)。结果表明，AKK PROBIO干预可以有效减少小鼠肠道肿瘤数目。
1.4.3AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠脾脏、肝脏和肾脏指数的影响
脏器指数是生物医学研究的基本指标之一。如图5-图7所示，分别为各组小鼠脾脏、肝脏和肾脏指数的统计图。与正常组相比，模型组小鼠的脾重和肝重显著增加(p<0.05)，差异具有统计学意义。与模型组相比，阿司匹林组和AKK PROBIO组脾重和肝重均减轻，差异有统计学意义(p<0.05)。5组小鼠肾脏组织结构如常，且各组之间无显著性差异(p>0.05)。可见，AKK PROBIO可以有效缓解AOM/DSS造成结直肠癌的脾脏和肝脏指数的升高。
1.4.4AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠直肠组织病理学形态的影响
如图8-图12所示，正常组小鼠直肠组织黏膜上皮细胞完整，隐窝正常，腺体排列整齐，无溃疡。模型组观察到直肠粘膜严重侵蚀，几乎所有的隐窝都被破坏，杯状细胞急剧减少，出现炎性细胞浸润，腺体紊乱，并观察到严重溃疡。阿司匹林组、AKK PROBIO低剂量组、AKK PROBIO高剂量组小鼠直肠黏膜未见明显糜烂，隐窝相对完整，腺体排列整齐，杯状细胞较为完整。组织学结果表明，AKK PROBIO有效降低AOM/DSS诱导小鼠对直肠的组织病理损伤。
1.4.5AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠血清炎症因子水平的影响
细胞因子是免疫细胞及某些非免疫细胞合成的一类小分子蛋白质，可以与相应受体结合来调控免疫应答，介导炎症并参与组织修复。结肠粘膜和巨噬细胞的中性粒细胞浸润分泌大量促炎细胞因子，并在炎症期间抑制抗炎细胞因子的分泌，从而加剧炎症状态。如图13-17所示为CRC模型小鼠血清中相关促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IFN-γ、iNOS和NF-κB的水平测定结果。
模型组小鼠血清中的IL-1β含量最高，正常组、阿司匹林组和AKKP组小鼠血清中的IL-1β含量均低于模型组，且存在显著性差异(P<0.05)。由此说明AKKP可明显降低CRC小鼠血清中的IL-1β的水平。
与正常组相比，模型组小鼠血清中的IL-6含量最高，两者之间存在显著差异(P<0.05)。阿司匹林组和AKKP组小鼠血清中的IL-6含量均降低，但各组间不存在显著性差异(P>0.05)。由此说明AKKP可明显降低CRC小鼠血清中的炎症因子。
与正常组相比，模型组小鼠血清中的IFN-γ含量最高，两者之间存在显著差异(P<0.05)，阿司匹林组和AKKP组小鼠血清中的IFN-γ含量与模型组相比均降低(P<0.05)，且AKKP-H组与正常组含量相近，组间无显著差异(P>0.05)。
模型组小鼠血清中的iNOS含量最高，正常组、阿司匹林组和AKKP组小鼠血清中的iNOS含量与模型组相比均降低，且与模型组存在显著差异(P<0.05)。
模型组小鼠血清中的NF-κB含量最高，正常组、阿司匹林组和AKKP组小鼠血清中的NF-κB含量与模型组相比均降低(P<0.05)，且AKKP-H组与阿司匹林组含量相近，组间无显著差异(P>0.05)。
1.4.6AKK PROBIO对结直肠癌模型小鼠结肠组织中相关因子mRNA表达水平的影响
1.4.6.1结肠组织中炎症通路相关因子的mRNA表达水平
NF-κB家族的成员包括RelA/p65、RelB、c-Rel、NF-κB1(p50/p105)和NF-κB2(p52/p100)。研究表明，在AOM/DSS的诱导下，小鼠的NF-κB信号通路被激活，其表现为体内炎症水平升高。因此可以通过抑制NF-κB信号通路，保护小鼠免受炎症刺激，干预CRC的发生发展。
图18-21为p50、p52、p65和IκBβ的mRNA表达水平。
模型组小鼠结肠组织中p50和IκBβ的mRNA表达水平最高，阿司匹林组和AKKP-H组小鼠结肠组织中p50和IκBβ的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05)，且高浓度组小鼠结肠组织中p50和IκBβ相对表达量与正常组之间无显著差异(P>0.05)。
模型组小鼠结肠组织中p52和p65的mRNA表达水平最高，正常组、阿司匹林组和AKKP组小鼠结肠组织中p52和p65的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05)，且AKKP-H组小鼠结肠组织中p52和p65相对表达量与阿司匹林组之间无显著差异(P>0.05)。
1.4.6.2结肠组织中细胞凋亡通路相关因子的mRNA表达水平
半胱天冬酶是细胞凋亡机制的核心，因为它们是细胞死亡的引发剂(caspase-2、caspase-8、caspase-9和caspase-10，主要负责细胞凋亡途径的开始)和执行剂(caspase-3、caspase-6和caspase-7，负责细胞成分的明确切割)。内在途径受到细胞内蛋白B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)家族的密切调节。Bid是Bcl-2家族的促凋亡成员，在CRC细胞中直接受miR-20a调节，诱导线粒体细胞凋亡。Bim介导的内在细胞凋亡调节CRC细胞的凋亡。
图22-图24分别为caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达水平。模型组小鼠结肠中caspase-9、Bid和Bim的mRNA相对表达量最低，正常组、阿司匹林组和AKK PROBIO组小鼠结肠组织中caspase-9、Bid和Bim的mRNA相对表达量均显著升高(p<0.05)，且AKK PROBIO组的mRNA表达量呈浓度依赖趋势，随着AKK PROBIO灌胃浓度的升高，AKK PROBIO高剂量组小鼠结肠中caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达量均显著增加(p<0.05)。由此说明给CRC小鼠灌胃AKK PROBIO可提高结肠组织中caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达，进而降低肠损伤程度。
综上，AKK PROBIO对小鼠结直肠癌有明显的调节作用，可以在一定程度上缓解AOM/DSS诱导的小鼠体重下降、结直肠长度缩短，脾脏和肝脏指数的升高，有效减少CRC小鼠的肿瘤数目和直肠组织的破坏程度；可以显著降低小鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6、IFN-γ、iNOS和NF-κB的表达水平；在基因层面上可显著下调结肠组织中p50、p52、p65和IκBβ的mRNA表达水平，上调结肠组织中caspase-9、Bid和Bim的mRNA表达水平，降低肠道炎症程度，影响结直肠癌的发生发展。AKK PROBIO对结直肠癌具有较好的干预作用。
对比例
参照实施例1中三的实验方法，将菌株替换为ATCC标准菌株(ATCC BAA 835)，ATCC标准菌株组小鼠灌胃的剂量为1×109CFU/只，其余皆与实施例1相同。
实验结果如下表所示：
表2.
组别 肿瘤数目
ATCC标准菌株组 10
从上表中可以看出，ATCC标准菌株的结直肠肿瘤发生数量较模型组减少，但是效果并不如本发明的AKK PROBIO菌株。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
应用实施例1：AKK PROBIO活菌制备方法
AKK PROBIO活菌的培养方法
(1)培养基
固体平板培养：BHI(脑心浸出液(Brain Heart Infusion)，OXOID，货号：CM1032B))+5％羊血
按成品要求称取一定体积所需的BHI粉末，以20g/L的比例加入琼脂粉末，定容至相应体积，121℃20min灭菌。灭菌完成后冷却至53℃(手握不烫)时加5％无菌脱纤维羊血，摇匀倾注15-20mL至平皿备用。
(2)培养条件
培养温度：37℃；
培养条件：完全厌氧；
液体发酵液培养：BHI；
培养温度：37℃；
培养条件：8层纱布完全厌氧培养。
(3)菌种扩大培养
一级：取一支2ml甘油管，以10％的接种量接种至含有9mL BHI试管中，37℃厌氧培养24-48h。
二级：取一级发酵试管，以5％的接种量接种至含有90mL BHI的三角瓶中，37℃厌氧培养24h。
三级：取二级三角瓶发酵液，以5％的接种量接种至含有300mL BHI的三角瓶中，37℃厌氧培养13h，20％甘油管-80℃冷冻保藏。
(4)发酵罐培养
将活化好的菌种于大型发酵罐中，培养条件如上。培养结束后离心获得湿菌体。
应用实施例2：AKK PROBIO死菌制备方法
将应用实施例1制备得到的湿菌体用化学或物理方法将菌体杀死，获得死菌；
所述的化学方法可以是气体杀菌和/或液体杀菌；
具体地，所述的气体杀菌可以是臭氧、环氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油或过氧乙酸蒸汽；
所述的液体杀菌为化学试剂，如乙醇；
所述的物理方法可以是热力杀菌，光照杀菌和/或微波杀菌；
具体地，所述的热力杀菌法可以是燃烧法、干烤法、煮沸法和/或压力蒸汽灭菌法；
所述的光照杀菌可以是日光暴晒、紫外照射和/或电离辐射。
应用实施例3：一种包含AKK PROBIO的口服药物
将应用实施例1制备得到的湿菌体按照一定的比例与辅料混合，将混合物通过冷冻干燥或喷雾干燥、压片等工艺制成活菌片，或者制成胶囊、颗粒等；
或者将实施例1制备得到的湿菌体进行细胞破碎，然后以适当的技术提取有益成分；提取方式包括离心，蒸馏，浸提，萃取等，具体选择取决于益生菌中所含的成分；将提取的成分按照临床使用需要，药物可以制成胶囊、口服液、颗粒剂、注射液等不同剂型。
应用实施例4：一种包含AKK PROBIO的酸奶。
原材料：实施例1制备得到的湿菌体，牛奶、酸奶、豆浆或牛奶粉(新鲜的)，酸奶发酵剂(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)；
以牛奶制备为例：
新鲜牛奶、酸奶发酵剂和湿菌体按照一定的比例混合，搅拌均匀，保鲜膜覆盖后于温暖的地方(最好30-40℃)发酵6-8小时(或过夜)，发酵后冰箱冷藏。

Claims (23)

1.Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肿瘤的产品中的应用，其特征在于，所述的Akkermansia muciniphila的保藏编号为CGMCCNo.20955。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品包含Akkermansiamuciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的发酵液沉淀包含蛋白质、核酸和/或脂质。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的应用，其特征在于，所述的产品为药物、食品、保健品、医药原料、工业原料、食品原料或保健品原料。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为实体瘤或非实体瘤。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的实体瘤为运动系统肿瘤、消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、神经系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、生殖系统肿瘤和/或内分泌系统肿瘤。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为乳腺癌、鼻咽癌、肺癌、结直肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、恶性黑色素瘤、腺瘤、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、血管瘤、淋巴管瘤、软骨瘤、胶质瘤和/或节细胞神经瘤。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为结直肠癌。
9.一种治肿瘤的方法，其特征在于，向肿瘤患者施用Akkermansia muciniphila。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的肿瘤患者为经过临床诊断患运动系统肿瘤、消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、神经系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、生殖系统肿瘤和/或内分泌系统肿瘤的患者。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述的施用的方法选自口服给药、静脉注射给药、局部给药、皮内给药和/或皮下给药。
12.根据权利要求9-11任意一项所述的方法，其特征在于，向肿瘤患者施用包含下述(1)和(2)的药物：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、药学上可接受的辅料。
13.一种治疗和/或预防肿瘤的药物，其特征在于，所述的药物包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、药学上可接受的辅料。
14.根据权利要求13所述的药物，其特征在于，所述的药物的剂型为口服制剂或注射制剂。
15.根据权利要求13或14所述的药物，其特征在于，所述的药物中Akkermansiamuciniphila的活菌数不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
16.根据权利要求15所述的药物，其特征在于，所述的药物中Akkermansiamuciniphila的活菌数为1×108-1×1012CFU/g或1×108-1×1012CFU/mL。
17.根据权利要求13-16任意一项所述的药物，其特征在于，所述的药物包含其他治疗肿瘤的药物。
18.根据权利要求13-17任意一项所述的药物，其特征在于，所述的药学上可接受的辅料选自润湿剂、乳化剂、防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、赋形剂、稀释剂、润滑剂、抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、甜味剂以及香料中的一种或两种以上的组合。
19.一种辅助治疗和/或预防肿瘤的食品，其特征在于，所述的食品包含：
(1)、Akkermansia muciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌；
(2)、食品学上可接受的辅料。
20.根据权利要求19所述的食品，其特征在于，所述的食品为巧克力、固体饮料、液体饮料、冰激淋、硬质糖果、酥质糖果、焦香糖果、凝胶糖果、奶糖糖果、胶基糖果、充气糖果、压片糖果、果冻、凝胶颗粒和/或晶球。
21.根据权利要求18所述的食品，其特征在于，所述的食品中Akkermansiamuciniphila的活菌数不低于1×108CFU/g或1×108CFU/mL。
22.根据权利要求19-21任意一项所述的食品，其特征在于，所述的食品学上可接受的辅料料选自润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、赋形剂、稀释剂、润滑剂、防腐剂、甜味剂以及香料中的一种或两种以上的组合。
23.一种医药原料、工业原料、食品原料或保健品原料，其特征在于，包含Akkermansiamuciniphila的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和/或死菌。
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