CN116983407A - 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺 - Google Patents

一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN116983407A
CN116983407A CN202310970340.6A CN202310970340A CN116983407A CN 116983407 A CN116983407 A CN 116983407A CN 202310970340 A CN202310970340 A CN 202310970340A CN 116983407 A CN116983407 A CN 116983407A
Authority
CN
China
Prior art keywords
therapeutic agent
cdr
antibody
stem cell
new generation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310970340.6A
Other languages
English (en)
Inventor
蔡俊
喻长杰
贾鹏飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aiketaike Zhejiang Holding Co ltd
Original Assignee
Aiketaike Zhejiang Holding Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aiketaike Zhejiang Holding Co ltd filed Critical Aiketaike Zhejiang Holding Co ltd
Priority to CN202310970340.6A priority Critical patent/CN116983407A/zh
Publication of CN116983407A publication Critical patent/CN116983407A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

本发明提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。本发明首次发现所述治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的I L‑1β、TNF‑ɑ和I L‑6水平，抑制I L‑1β、TNF‑ɑ和I L‑6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。

Description

一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺
技术领域
本发明涉及膝关节炎治疗技术领域，特别涉及一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。
背景技术
间充质干细胞是来源于中胚层的一类多能干细胞，最早从骨髓中分离得到，因其易于在体外扩增，无致瘤性，在免疫调节及组织再生方面显示出强大的临床应用前景。MSCs主要有两个特征：自我更新和分化潜能；同时它还可分泌一些重要的细胞因子，表达特异性受体，能够被基因修饰，从而改变其自然行为的分子易感性。因此，MSCs日益受到人们的关注。许多学者先后从人脐带华通氏胶、脐带血管周围组织中通过不同方法分别分离获得类似细胞。与骨髓间充质干细胞相比，脐带具有来源广泛、采集容易，且能够变废为宝的特点。
膝关节炎已经是伴随和困扰现代人的一个常见病。一般膝关节软骨在青春期时期软骨厚度为2.5公分，随着年龄的慢慢的增长和使用劳损，软骨厚度会变得越来越薄，一般在55岁时软骨厚度只剩下仅仅0.5公分，而且如果膝关节受损或者长期受压的话，软骨厚度可能更薄，严重时还可能会出现骨刺或破裂。
常规的治疗为通过NSAIDs类药物、润滑剂及类固醇激素关节腔注射、软骨保护剂为主的治疗方法，但是这些治疗方法的疗效较为有限，不能够有效的阻止疾病的进展，随着干细胞研究的不断发展和普及，越来越多的研究者将干细胞技术扩展至骨关节炎治疗之中，通过干细胞治疗，有效的解决上述的这些问题。但是目前现有技术中所涉及到的膝关节炎干细胞药物治疗方法，仍然存在一些问题，比如在诱导分化过程中，诱导分化效果仍然较差，膝关节干细胞药物疗效仍然不稳定，治疗效果仍然不能达到我们所预期的效果等等。
发明内容
针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。该治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的I L-1β、TNF-ɑ和IL-6水平，抑制I L-1β、TNF-ɑ和I L-6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。
本发明的首要目的是提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其特征在于，所述治疗剂包括：25％-45％骨髓间充质干细胞、5-10％硫酸软骨素、5-10％抗CD47抗体、0.1-1％吐温-80、0.1-1％助悬剂、0.1-1％乳化剂、0.1-1％稳定剂、0.2-0.6％pH调节剂、0.6-2％抗氧化剂，余量为生理盐水。
优选地，所述所述治疗剂包括：25％％骨髓间充质干细胞、5％硫酸软骨素、5％抗CD47抗体、0.1％吐温-80、0.1％助悬剂、0.1％乳化剂、0.1％稳定剂、0.2％pH调节剂、0.6％抗氧化剂，余量为生理盐水。
优选地，所述所述治疗剂包括：30％骨髓间充质干细胞、8％硫酸软骨素、8％抗CD47抗体、0.5％吐温-80、0.5％助悬剂、0.5％乳化剂、0.5％稳定剂、0.4％pH调节剂、1％抗氧化剂，余量为生理盐水。
优选地，所述所述治疗剂包括：45％骨髓间充质干细胞、10％硫酸软骨素、10％抗CD47抗体、1％吐温-80、1％助悬剂、1％乳化剂、1％稳定剂、00.6％pH调节剂、2％抗氧化剂，余量为生理盐水。
进一步优选地，所述助悬剂选自甲基纤维素，羧甲基纤维素钠的一种或几种。
进一步优选地，所述乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯80、聚维酮、聚乙二醇-40、卵磷脂。
进一步优选地，所述稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠。
进一步优选地，所述pH调节剂为磷酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、醋酸及其盐、酒石酸及其盐、盐酸及其盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨基丁三醇中的一种或几种。
进一步优选地，所述抗氧化剂为维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。
本发明的新一代干细胞治疗剂配方可制作成无菌注射溶液或悬浮液；例如，制作成适合于以膝关节腔注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射或腹膜内注射等方式施用的溶液。
本发明的另一个目的在于提供了一种抗CD47抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.1，轻链可变区序列如SEQ ID NO:2所示。
优选地，所述抗CD47抗体的重链可变区包括CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，所述CDR-H1-3的序列如SEQ ID NO.3-5所示，轻链可变区包括CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，所述CDR-L1-3的序列如SEQ ID NO.6-8所示。
进一步地，本发明还提供了抗CD47抗体和骨髓间充质干细胞联合在制备用于治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂中的用途。
优选地，所述治疗剂的剂型不限于注射剂。
进一步优选地，所述治疗剂为无菌注射溶液或悬浮液；
所述注射液是通过膝关节腔注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射或腹膜内注射等方式施用的溶液。
本发明的优点如下：本发明首次提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺，本发明所述治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的I L-1β、TNF-ɑ和IL-6水平，抑制I L-1β、TNF-ɑ和I L-6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。
附图说明
图1.不同处理下的大鼠血清中的I L-1β、TNF-ɑ和I L-6的分泌情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
以下各实施例，仅用于说明本发明，并不用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
抗CD47抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.1，轻链可变区序列如SEQ ID NO:2所示。其中抗CD47抗体的重链可变区包括CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，所述CDR-H1-3的序列如SEQ ID NO.3-5所示，轻链可变区包括CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，所述CDR-L1-3的序列如SEQ ID NO.6-8所示。
实施例2
在无菌条件下，取大鼠双侧股骨、胫骨，置于5％双抗(青霉素和链霉素)的低糖DMEM培养基，反复洗涤骨髓腔，反复吹打至单细胞悬液，清洗，离心处理2次去除杂质、油脂。将收集得到的单细胞悬液用含有10％胎牛血清、双抗(终浓度为100U/mL青霉素、0.1mg/mL链霉素)的低糖DMEM重悬，按1×106个/mL接种于T75的培养瓶中，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育，2天后换液，去除未贴壁细胞，之后每隔2天换1次液，观察细胞生长状况，直到细胞融合度达到80％以上，用0.25％胰酶于37℃消化2～5min，细胞完全脱落后，用完全培养基终止消化，获得纯化后的原代骨髓间充质干细胞。将获得的原代骨髓间充质干细胞用2倍体积的含有10％胎牛血清的DMEM进行传代培养，每隔2天换液，直到细胞融合度达到80％以上。反复传代，传至2～5代后，观察细胞生长状态，用胰酶消化后使用PBS缓冲溶液洗涤，离心收集，经冷冻干燥后进行低温保存。
采用显微镜和流式细胞仪进行鉴定，结果显示：骨髓间充质干细胞能够贴壁于培养瓶表面，细胞形态呈现典型的梭样成纤维细胞形态，并且经流式细胞仪测定分析，该分离的骨髓间充质干细胞CD44、CD105、CD73、CD90和HLA-ABC表达呈阳性，阳性率＞95％；CD45、CD34和HLA-DR几乎不表达。
实施例3
一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其包括：25％％骨髓间充质干细胞、5％硫酸软骨素、5％抗CD47抗体、0.1％吐温-80、0.1％助悬剂、0.1％乳化剂、0.1％稳定剂、0.2％pH调节剂、0.6％抗氧化剂，余量为生理盐水。其制备方法包括将上述原料混合后溶解于生理盐水中，pH调节至7.0，经过滤灭菌后，即可得到新一代干细胞治疗剂。
实施例4
一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其包括：30％骨髓间充质干细胞、8％硫酸软骨素、8％抗CD47抗体、0.5％吐温-80、0.5％助悬剂、0.5％乳化剂、0.5％稳定剂、0.4％pH调节剂、1％抗氧化剂，余量为生理盐水。其制备方法包括将上述原料混合后溶解于生理盐水中，pH调节至7.0，经过滤灭菌后，即可得到新一代干细胞治疗剂。
实施例5
一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其包括：45％骨髓间充质干细胞、10％硫酸软骨素、10％抗CD47抗体、1％吐温-80、1％助悬剂、1％乳化剂、1％稳定剂、00.6％pH调节剂、2％抗氧化剂，余量为生理盐水。其制备方法包括将上述原料混合后溶解于生理盐水中，pH调节至7.0，经过滤灭菌后，即可得到新一代干细胞治疗剂。
实施例6
大鼠膝关节炎模型制备，方法包括如下步骤：称重后，向各组大鼠腹腔注射40mg/kg 1％戊巴比妥钠进行麻醉处理，当大鼠出现麻醉症状后，将其固定在鼠台上并使其保持仰卧姿势。进行手术前，剪除大鼠右侧后肢膝关节的毛发，对膝关节处用碘伏进行消毒处理；在显微镜下，将右膝关节近侧1cm处用眼科剪纵切右膝关节内侧髌旁皮肤，避开内侧横纵动脉，切断内侧副初带，打开关节腔，沿着内侧副韧带的上缘切开关节囊；将关节囊切开，露出髌骨，将其外翻固定，继续切开关节囊，直至膝盖骨完全暴露；将大鼠右侧膝关节弯曲，使胫骨前交叉韧带和内侧半月板暴露出来，用手术刀片将前交叉軔带切断，并切除半月板；切除半月板后，对大鼠进行止血处理，并清洗关节腔，然后将髌骨放置在原来的位置并依次缝合各层组织，并在无菌条件下包扎患处；手术后，大鼠肌肉注射氨苄西林(2.0mg/kg)连续3天，以防止切口感染，然后允许大鼠自由进食。
实施例7
一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂的疗效评估，包括如下步骤：
将大鼠膝关节炎模型分为4组，每组5只，其中，空白组为正常大鼠，在整个过程中仅采用生理盐水处理；对照模型组，在整个过程中仅采用生理盐水处理大鼠模型；对照组1是仅采用抗CD47抗体治疗大鼠模型；对照组2是仅采用骨髓间充质干细胞治疗大鼠模型；处理组采用本发明实施例3所述的新一代干细胞治疗剂进行治疗大鼠模型。治疗过程为大鼠膝关节腔注射100μL样品，每个疗程为1周，连续注射3周后，收集大鼠样本血清，并通过ELISA试剂盒分析血清中的I L-1β、TNF-ɑ和I L-6的分泌情况。
结果如图1所示：I L-1β、TNF-ɑ和I L-6在正常大鼠血清中的含量明显很低，而对照模型组大鼠血清中的IL-1β、TNF-ɑ和IL-6显著性增加，相比于空白组具备显著性差异。另外，仅采用抗CD47抗体治疗大鼠模型血清中的I L-1β、TNF-ɑ和IL-6并未出现明显性下降，证明仅抗CD47抗体并不能有效缓解膝关节炎。仅采用骨髓间充质干细胞治疗组中，大鼠血清中的I L-1β、TNF-ɑ和IL-6相比于对照模型组而言，具有一定程度的下降，但是并未出现显著性下降。然而，意外的是，采用实施例3所述的治疗剂进行治疗大鼠模型中，血清中的IL-1β、TNF-ɑ和IL-6呈现急剧性下降。这一结果说明，本发明的新一代干细胞治疗剂能够抑制IL-1β、TNF-ɑ和I L-6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。
在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其特征在于，所述治疗剂包括：25％-45％骨髓间充质干细胞、5-10％硫酸软骨素、5-10％抗CD47抗体、0.1-1％吐温-80、0.1-1％助悬剂、0.1-1％乳化剂、0.1-1％稳定剂、0.2-0.6％pH调节剂、0.6-2％抗氧化剂，余量为生理盐水。
2.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述助悬剂选自甲基纤维素，羧甲基纤维素钠的一种或几种。
3.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯80、聚维酮、聚乙二醇-40、卵磷脂。
4.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠。
5.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述pH调节剂为磷酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、醋酸及其盐、酒石酸及其盐、盐酸及其盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨基丁三醇中的一种或几种。
6.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述抗氧化剂为维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。
7.权利要求1-6任何一项所述治疗剂的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括如下步骤将上述原料混合后溶解于生理盐水中，pH调节至7.0，经过滤灭菌后，即可得到新一代干细胞治疗剂。
8.一种抗CD47抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.1，轻链可变区序列如SEQ ID NO:2所示。
9.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述抗CD47抗体的重链可变区包括CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，所述CDR-H1-3的序列如SEQ ID NO.3-5所示，轻链可变区包括CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，所述CDR-L1-3的序列如SEQ ID NO.6-8所示。
10.抗CD47抗体和骨髓间充质干细胞联合在制备用于治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂中的用途。
11.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述治疗剂为无菌注射溶液或悬浮液。
CN202310970340.6A 2023-08-03 2023-08-03 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺 Pending CN116983407A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310970340.6A CN116983407A (zh) 2023-08-03 2023-08-03 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310970340.6A CN116983407A (zh) 2023-08-03 2023-08-03 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116983407A true CN116983407A (zh) 2023-11-03

Family

ID=88531692

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310970340.6A Pending CN116983407A (zh) 2023-08-03 2023-08-03 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116983407A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6577038B2 (ja) 軟骨細胞に分化されている幹細胞由来のエキソソームを含む軟骨細胞への分化誘導または軟骨組織再生用組成物
JP6382262B2 (ja) 動物の関節修復のための医薬組成物調製への間葉幹細胞の使用法
KR100989109B1 (ko) 골관절염 치료에 사용되는 나트륨 히알루로네이트 및콘드로이친 설페이트의 혼합물의 용도
KR101419961B1 (ko) Ｆｇｆ-18 로 연골 질환의 치료
US20140106447A1 (en) Compositions and methods for recruiting stem cells
JP2020152698A (ja) 間葉系幹細胞のエキソソームおよびその使用
JP7230219B2 (ja) 滑液膜由来の間葉系幹細胞及びその用途
Marino‑Martínez et al. Human amniotic membrane intra‑articular injection prevents cartilage damage in an osteoarthritis model
US20210386791A1 (en) Methods of cellular reprogramming
KR20160116000A (ko) Ｆｇｆ－１８ 화합물 투여 처방
US8709401B2 (en) Primed stem cells and uses thereof to treat inflammatory conditions in joints
JP7562066B2 (ja) 変形性関節症の予防又は治療剤、及び変形性関節症の予防又は治療用医薬組成物
JP6929346B2 (ja) 軟骨無細胞破砕物及び幹細胞を含む軟骨分化促進用複合体及びその用途
CN116983407A (zh) 一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺
Jay et al. Amniotic membrane in clinical medicine: History, current status, and future use
CN115381856A (zh) 脂肪间充质干细胞在制备治疗膝骨关节炎药物或制剂中的用途
Xiao et al. Porcine platelet lysates exert the efficacy of chondroregeneration and SMAD2-mediated anti-chondrofibrosis on knee osteoarthritis
CN108392624B (zh) 活性促进肽以及间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎中的应用
KR20150118785A (ko) 약물 전달체 및 이를 포함하는 성대 재생을 위한 약학적 조성물
WO2020061408A1 (en) Cartilage regeneration by synovial fluid-derived stem cells and their derivatives
US20180117088A1 (en) Composition for treating articular cartilage defects
KR20240101473A (ko) 연골 분화능이 증진된 줄기세포의 선별 방법 및 이를 포함하는 세포 치료제
KR20000072904A (ko) ＴＧＦ-β분비세포를 포함하는 인대손상 치료 및 연골재생 촉진제
Kraus The Effects of Obesity on Stem Cell Function and the Development of Osteoarthritis

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination