CN116970054A - 一种感溃疡病转录因子AcWRKY76及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于基因工程技术领域，涉及一种感溃疡病转录因子AcWRKY76及其应用。本发明提供了一种感溃疡病转录因子AcWRKY76，其受Psa诱导，负调控Psa对猕猴桃的感染。感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码基因AcWRKY76基因在瞬时过表达感溃疡病转录因子AcWRKY76后，对Psa表现出感病，病斑面积、生物量有显著增加，瞬时沉默AcWRKY76基因后，对Psa表现出抗病，病斑面积、生物量有显著降低。感溃疡病转录因子AcWRKY76能用于猕猴桃抗溃疡病种质资源材料选育和创制，提高猕猴桃对Psa的抗病性，解决了猕猴桃易感细菌性溃疡病，以及猕猴桃细菌性溃疡病防治依赖于农药防治的技术问题。
Description
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，涉及一种感溃疡病转录因子AcWRKY76及其应用。
背景技术
猕猴桃是隶属于猕猴桃科（Actinidia chinensis）猕猴桃属（Actinidia）的落叶藤本果树。猕猴桃果实中富含Vc、Mg及微量元素，是一种低钠高钾水果，其中的Ve及Vk含量被定为优良，脂肪含量低且无胆固醇。目前广泛用于商业化栽培的品种是美味猕猴桃（Actinidia deliciosa）和中华猕猴桃（A. chinensis），然而由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringaepv. actinidiae，Psa）引起的猕猴桃细菌性溃疡病（kiwifruit bacterial canker）已成为这些猕猴桃品种生产中最具毁灭性的病害之一。猕猴桃细菌性溃疡病可导致叶斑、花腐、树干流脓甚至枝枯树死园毁，还可导致果皮增厚，果实畸形，果味变酸，使猕猴桃的产量及品质受到严重的影响。
猕猴桃细菌性溃疡病病菌致病能力极强，目前所栽培的猕猴桃品种中尚未发现对其具有完全免疫的抗性品种。植物的生长环境中存在大量的生物和非生物胁迫，针对不同的致病生物体（真菌、细菌和病毒），植物也进化出了相应的免疫系统。商业化栽培的猕猴桃品种普遍抗溃疡病能力弱，尤其是红心猕猴桃“红阳”易受到Psa的侵害。目前，主要通过化学防治以及生物防治的手段限制猕猴桃细菌性溃疡病病菌的扩散，但缺点在于都不能从根本上消除猕猴桃细菌性溃疡病菌的危害。
WRKY转录因子是一类发现于高等植物中特有的转录因子超家族，广泛参与植物种子萌发与休眠、叶片衰老、代谢、激素信号转导。WRKY转录因子通过WRKY结构域与下游目标基因启动子区的W-box进行特异性结合从而激活或抑制下游基因的表达，这些基因包括编码具有抗菌活性的蛋白质的发病机制相关（PR）基因，以及参与植物激素生物合成的基因，如SA、JA和ETH。此外，WRKY转录因子调节参与细胞壁增强、ROS清除和次级代谢相关基因的表达。因此研究猕猴桃与Psa互作过程中转录因子调控抗病信号通路，为猕猴桃抗Psa育种提供有应用潜力的功能基因和新方向，为猕猴桃溃疡病绿色持续防控具有重要意义。
发明内容
合理选育和科学种植抗性品种是防治猕猴桃细菌性溃疡病最直接、有效、安全、经济的方法。本发明的目的在于为猕猴桃抗溃疡病种质资源材料选育和创制提供一种思路。
基于上述目的，本发明提供了一种感溃疡病转录因子AcWRKY76及其应用来满足本领域内的这种需要，克服通过化学防治以及生物防治的手段限制猕猴桃细菌性溃疡病病菌扩散的技术缺陷。
一方面，本发明涉及感溃疡病转录因子AcWRKY76，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码区序列为AcWRKY76基因，所述AcWRKY76基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。感溃疡病转录因子AcWRKY76属于WRKY转录因子，参与生物和非生物胁迫等生理生化反应过程的调控等功能，涉及到猕猴桃与Psa互作过程中转录因子调控抗病信号通路。
进一步地，本发明提供的感溃疡病转录因子AcWRKY76，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
另一方面，本发明涉及一种表达载体，其包含感溃疡病转录因子AcWRKY76。
进一步地，本发明提供的表达载体中，其包含感溃疡病转录因子AcWRKY76和/或用于沉默AcWRKY76基因的特异性序列。
本发明通过对猕猴桃基因组和转录组分析，获得猕猴桃AcWRKY76的编码基因序列，明确了其在不同组织部位的表达，验证了感溃疡病转录因子AcWRKY76在猕猴桃与Psa互作过程中发挥重要作用，由此本发明请求保护一种表达载体，其用于表达或沉默AcWRKY76基因。示例性地，该表达载体在猕猴桃与Psa互作过程的研究以及猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中具有重要的应用价值。
另一方面，本发明涉及一种重组菌，其包含上述的表达载体。
另一方面，本发明涉及一种重组农杆菌，其包含上述的表达载体或包含上述重组菌的质粒。
另一方面，本发明涉及感溃疡病转录因子AcWRKY76在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76负调控猕猴桃溃疡病的病原菌对猕猴桃的感染，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码区序列为AcWRKY76基因，所述AcWRKY76基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
另一方面，本发明涉及上述的表达载体在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
另一方面，本发明涉及上述重组菌在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
另一方面，本发明涉及上述重组农杆菌在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具备以下有益效果或优点：
本发明提供了一个可以响应溃疡病菌，且在猕猴桃抗溃疡病免疫反应中具有负调控作用的转录因子基因AcWRKY76，该基因可以应答Psa侵染。本发明涉及感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码基因AcWRKY76基因、AcWRKY76基因编码的蛋白质、用于沉默AcWRKY76基因的序列和用于过表达AcWRKY76基因的序列。
感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码基因AcWRKY76基因在瞬时过表达感溃疡病转录因子AcWRKY76后，对Psa表现出感病，病斑面积、生物量有显著增加，瞬时沉默AcWRKY76基因后，对Psa表现出抗病，病斑面积、生物量有显著降低。感溃疡病转录因子AcWRKY76能用于猕猴桃抗溃疡病种质资源材料选育和创制，提高猕猴桃对Psa的抗病性，解决了猕猴桃易感细菌性溃疡病，以及猕猴桃细菌性溃疡病防治依赖于农药防治的技术问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是感溃疡病转录因子AcWRKY76的全长序列的琼脂糖凝胶电泳结果图。
图2是最大似然法构建得到的感溃疡病转录因子AcWRKY76的进化树图。
图3是AcWRKY76基因在抗病和感病品种中受Psa诱导的表达差异图。Hongyang为感病品种红阳，HWD为抗病品种海沃德；hpi为时间单位，表示感染持续小时。
图4是融合表达载体构建示意图。
图5是瞬时沉默的荧光定量实验结果图。
图6是瞬时过表达的荧光定量实验结果图。
图7是不同重组农杆菌介导叶片后感染Psa的叶片图。
图8是不同重组农杆菌介导叶片后感染Psa的试验结果图。a为AcWRKY76后接种Psa5d病斑面积的统计图；b为沉默感病基因AcWRKY76后接种Psa5d生物量的统计图；c为过表达感病基因AcWRKY76后接种Psa5d病斑面积的统计图；d为过表达感病基因AcWRKY76后接种Psa5d生物量的统计图。
具体实施方式
下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
以下实施例中涉及的pTRV1、pTRV2-GFP、pCAMBIA1302载体、猕猴桃品种“红阳”、测试菌株丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. Actinidiae，Psa）由申请人的实验室分离并提供。下述各实施例中所述实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
实施例1
本实施例提供了感溃疡病转录因子AcWRKY76分析验证。
（1）感溃疡病转录因子AcWRKY76的全长序列获取
基于猕猴桃基因组（V3.0）获取感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码区序列为AcWRKY76基因，AcWRKY76基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。AcWRKY76基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
使用RNA试剂盒（北京华越洋生物科技有限公司，货号0416-50）提取“红阳”猕猴桃叶片的RNA；使用反转录试剂盒（ThermoFisher Scientific，货号K1162）获得cNDA。以cDNA为模版，对目的片段，即感溃疡病转录因子AcWRKY76的全长序列，设计引物并进行PCR扩增。
反应体系为：2× Phanta Flash Master Mix(Dye Plus) 25μL，T-AcWRKY76-BamHI-F（10μM） 2μL，T-AcWRKY76-EcoRI-R（10μM）2μL，cNDA 4μL，ddH2O 17μL。
T-AcWRKY76-BamHI-F（SEQ ID NO:4）：
GTGAGCTCGGTACCGGATCCCGGGAAAGGGTAATGGAAAAG；
T-AcWRKY76-EcoRI-R（SEQ ID NO:5）：
TGAGTAAGGTTACCGAATTCACCATAGCCATCTTCCGTAGA。
PCR反应程序为：95℃预变性3min，95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸15s，35个循环，72℃延伸5min。琼脂糖凝胶电泳结果如图1所示，电泳结果符合预期。
（2）感溃疡病转录因子AcWRKY76的同源进化分析
通过PCR凝胶电泳获得的基因AcWRKY76的cDNA与AcWRKY76基因的基因组编码区序列一致，全长852bp，编码283个氨基酸。利用Phytozome（https://phytozome.jgi.doe.gov/）数据库中比对该基因在不同物种的同源基因，包括双子叶植物：葡萄（Vitis vinifera）、胡杨（Populus trichocarpa）、核桃（Juglans regia）、甘蓝（Brassica oleracea）、番茄（Solanum lycopersicum）、油菜（Brassica napus）、苹果（Malus domestica）、拟南芥（Arabidopsis thaliana），单子叶植物：玉米（Zea mays）、水稻（Oryza sativ）、普通野生稻（Oryza rufipogo）、谷子（Setaria italic）、高粱（Sorghum bicolo）、二穗短柄草（Brachypodium distachyo）、大麦（Hordeum vulgar）、小麦（Triticum aestivum）。MEGAX用于构建基于最大似然法（ML）的进化树，构建结果如图2所示。
由图2可知，感溃疡病转录因子AcWRKY76与已报道的这些基因进化关系较远，该基因为猕猴桃中新发现的WRKY转录因子。通过多序列比对和NCBI（美国国家生物技术信息中心） CD search（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）保守结构域分析，发现AcWRKY76基因具有典型的W-box结构域。
实施例2
本实施例提供了感溃疡病转录因子AcWRKY76在猕猴桃抗病品种和感病品种中受Psa诱导表达的验证。
取猕猴桃感病品种“红阳”和抗病品种“海沃德”（2年生），选取大小均一、长势一致、健康的叶片。用自来水冲洗干净，0.6%次氯酸钠表面消毒10min，无菌水漂洗3次，至无刺鼻气味，最后使用无菌滤纸吸干叶表残余水分。
使用无菌打孔器（φ=11mm）制备叶盘，叶盘分别置于装有60mL的不同侵染液的100mL离心管中，每管装30~50个叶盘。0.1MPa真空泵渗透至叶背面浸湿达90%以上（剔除未达侵染要求的叶盘），用无菌滤纸吸干叶盘表面水分，叶正面朝下紧贴于0.5%~0.8%水琼脂平板上，置于28℃培养箱培养，分别取侵染后0、6、12、24、48、96小时的叶盘，提取RNA反转后进行qRT-PCR定量分析，试验结果如图3所示。图3显示了AcWRKY76基因在猕猴桃抗病和感病品种中受Psa诱导的表达模式图，发现AcWRKY76基因在感病品种中受Psa侵染后显著上调表达。
实施例3
本实施例提供了感溃疡病转录因子AcWRKY76的瞬时表达和瞬时沉默分析。
猕猴桃总RNA的提取及cNDA的获得参照试剂盒说明书进行（北京华越洋生物科技有限公司，Quick RNA isolation Kit；赛默飞，RevertAid First Strand cDNA SynthesisKit）。
（1）AcWRKY76基因的获取
用于沉默AcWRKY76基因的特异性核苷酸序列，用于VIGS沉默的AcWRKY76片段设计上下游引物并添加BamHI和EcoRI酶切位点，扩增引物为T-AcWRKY76-BamHI-F、T-AcWRKY76-EcoRI-R。目的片段PCR扩增反应体系为：2×Phanta Flash Master Mix(Dye Plus) 25μL，T-AcWRKY76-BamHI-F（10μM） 2μL，T-AcWRKY76-EcoRI-R（10μM）2μL，cNDA 4μL，ddH2O 17μL。PCR反应程序为：95℃预变性3min，95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸15s，35个循环，72℃延伸5min。
用于过表达的AcWRKY76片段设计上下游引物并添加Spe I和Nco I酶切位点，扩增引物为1302-AcWRKY76-NcoI-F、1302-AcWRKY76-SpeI-R。
1302-AcWRKY76-NcoI-F（SEQ ID NO:6）：
GGGGACTCTTGACCATGGTAATGGAGTCATGCACCAATCGG；
1302-AcWRKY76-SpeI-R（SEQ ID NO:7）：
CTCACCATCCTAGGACTAGTTAAATCTTTGGAAACCTTGAGTTGGC。
目的片段PCR扩增反应体系为：2×Phanta Flash Master Mix(Dye Plus) 25μL，T-AcWRKY76-BamHI-F（10μM） 2μL，T-AcWRKY76-EcoRI-R（10μM）2μL，cNDA 4μL，ddH2O 17μL。PCR反应程序为：95℃预变性3min，95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸5min。扩增后的PCR产物通过1%的凝胶电泳鉴定，对阳性目的条带进行胶回收纯化（Magen胶回收试剂盒HiPure Gel Pure DNA Mini Kit）。
（2）载体线性化
同时对pTRV2-GFP和pCAMBIA1302空载体分别用TaKaRa的限制性内切酶（QuickCut™ EcoR I、QuickCut™ BamH I、QuickCut™Spe I、QuickCut™Nco I）进行酶切，酶切反应体系见表1。
表1：酶切反应体系
PCR反应程序为：30℃孵育5min，85℃终止反应10min。反应结束后加入QuickCut™BamH I 1.5μL，置于PCR仪中，37℃孵育5min，85℃终止反应10min失活酶活性，用1%胶回收后于-20℃冰箱备用。
（3）融合表达载体的构建与转化
如图4所示进行融合表达载体的构建，将上述纯化后的目的片段与双酶切后的pTRV2-GFP、pCAMBIA1302质粒使用南京诺唯赞生物科技有限公司的C112连接酶进行连接，连接体系见表2。
表2：连接反应体系
混合物置于PCR仪中37℃反应30min，连接质粒通过热激法迅速转化到大肠杆菌感受态Trelief ® 5α中，转化方法参照北京擎科生物公司Trelief ® 5α ChemicallyCompetent Cell使用说明书。转化的大肠杆菌涂布含50μg/mL Kana 抗性的 LB 固体培养基中，倒置 37℃培养12h，挑取单克隆进行菌落PCR检测，用于沉默AcWRKY76基因的特异性序列如SEQ ID NO:3所示，沉默检测引物为TRV2-F、TRV2-R，过表达检测引物为1302-F、1302-R。
TRV2-F（SEQ ID NO:8）：
TACACACTGAGAAGGGGGCT；
TRV2-R（SEQ ID NO:9）：
TGTTCAGGCGGTTCTTGT；
1302-F（SEQ ID NO:10）：
TAAGGGATGACGCACAAT；
1302-R（SEQ ID NO:11）：
CGGACACGCTGAACTTGT。
菌落PCR扩增反应体系（购自南京诺唯赞生物科技有限公司，Green Taq Mix）为：2×Rapid Taq Master Mix 25μL，TRV2-F/1302-F（10μM） 2μL，TRV2-R/1302-R（10μM） 2μL，无菌牙签挑单克隆，ddH2O 19μL。菌落PCR反应程序为：95℃预变性3min，95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸15s/30s，35个循环，72℃延伸5min。选取转化成功的阳性单克隆送往北京擎科生物公司进行测序比对，挑取验证正确的单克隆接种于加有卡纳霉素（50μg/mL）的5mL LB培养液中，37℃、200rpm震荡14~16h，使用质粒提取试剂盒提取大肠杆菌中的质粒（北京庄盟国际生物基因科技有限公司，小量DNA产物纯化试剂盒，MiniquickPurification Kit）。将重组质粒pTRV2-GFP-35S:AcWRKY76、pCAMBIA1302-35S:AcWRKY76转化到农杆菌GV3101（上海唯地生物技术有限公司, GV3101(pSoup) Chemically CompetentCell）中。置于28℃培养箱，暗培养48h后挑取单克隆进行菌落PCR检测，检测引物为TRV2-F、TRV2-R、1302-F、1302-R，检测成功的单菌落置于含有卡那霉素（50μg/mL）和利福平（50μg /mL）LB培养液中28℃、220rpm培养，保存备用。
（4）农杆菌侵染
接种前2天，将含有不同质粒（TRV1、TRV2-GFP、TRV2-AcWRKY76、pCAMBIA1302-GFP、pCAMBIA1302-AcWRKY76）的GV3101农杆菌接种于含卡那霉素（50μg/mL）和利福平（50μg /mL）LB培养液中28℃、220rpm培养至所需OD600值为0.5。然后使用10mM MgCl2缓冲液清洗3次，再使用现配的农杆菌侵染液MMA（0.2mM AS（乙酰丁香酮），10mM MgCl2，10mM MES，pH5.6）重悬。将pTRV1:pTRV2-GFP（v/v=1:1）、pTRV1:pTRV2-AcWRKY76（v/v=1:1）、pCAMBIA1302-GFP、pCAMBIA1302-AcWRKY76用锡箔纸包裹置于室温避光处理3h后备用。
取猕猴桃感病品种“红阳”大小均一、长势一致、健康的叶片。用自来水冲洗干净，0.6%次氯酸钠表面消毒10min，无菌水漂洗3次，至无刺鼻气味，最后使用无菌滤纸吸干叶表残余水分。
使用无菌打孔器（φ=11 mm）制备叶盘，叶盘分别置于装有60mL的不同侵染液的100mL离心管中，每管装30~50个叶盘。沉默实验以pTRV1:pTRV2-GFP为对照，过表达实验以pCAMBIA1302-GFP为对照。0.1MPa真空泵渗透至叶背面浸湿达90%以上（剔除未达侵染要求的叶盘），用无菌滤纸吸干叶盘表面水分，叶正面朝下紧贴于0.5%~0.8%水琼脂平板上，置于28℃培养箱培养。
分别提取pTRV1：pTRV2-GFP（v/v=1:1）、pTRV1：pTRV2-AcWRKY76（v/v=1:1）、pCAMBIA1302-GFP、pCAMBIA1302-AcWRKY76侵染的猕猴桃叶片总RNA，反转录获得的cDNA为模板，每个处理分别取三个生物学重复，三个试验重复，以Actin为内参基因，采用RT-PCR定量对AcWRKY76基因的表达量进行检测。所用的引物为QAcWRKY76-F、QAcWRKY76-R。在冰上依次加入10μL 2 × ChamQ SYBR qPCR Master Mix，0.4μL Q-AcWRKY76-F，0.4μL Q- AcWRKY76-R, 2μL Template DNA/cDNA, 7.2μL ddH2O，建立20μL qPCR体系并进行扩增反应。相关引物如下：
扩增反应程序见表3。
表3：扩增反应程序
瞬时沉默的荧光定量实验结果如图5所示，由图5可知，pTRV1:pTRV2-AcWRKY76在侵染5d后达到沉默要求，与对照pTRV1:pTRV2-GFP相比，沉默效率为64%。
瞬时过表达的荧光定量实验结果如图6所示，由图6可知，pCAMBIA1302-AcWRKY76侵染3d后达到过表达要求，与对照pCAMBIA1302-GFP相比AcWRKY76的表达量提高了6倍。
明确目的基因达到沉默和过表达条件后，采用叶盘真空渗透法接种Psa-M228（1×104cfu/mL）置于0.8%水琼脂平板上，放入人工气候箱培养，5d后观察病菌侵染情况并统计病斑面积和病菌生物量，试验结果如图7和图8所示。由图7、图8的a和图8的b可知，沉默AcWRKY76基因后发病明显减轻，病斑面积较对照TRV-GFP相比明显下降，仅有14.1%，Psa生物量明显降低，仅有对照组生物量0.6倍。由图7、图8的c和图8的d可知，过表达AcWRKY76基因后与对照相比发病明显更严重，病斑面积较对照pCAMBIA1302-GFP相比明显上升，大约提高了2倍，Psa生物量明显升高，约为对照组生物量的1.6倍。
综上所述，感溃疡病转录因子AcWRKY76受溃疡病菌诱导显著上调表达，与品种的感病性紧密相关。实施例1中明确了该基因的来源，通过与8种双子叶植物和8种单子叶植物进行系统发育分析发现AcWRKY76单独聚为一枝，推测该基因WRKY转录因子中独特的部分。实施例2中定量分析结果表明AcWRKY76基因在Psa侵染的不同时间点表达量均高于抗病品种。实施例3中分别沉默和过表达AcWRKY76基因而后接种Psa，从表型观察、发病面积、病菌生物量统计均表明该基因是一个潜在的感病基因。AcWRKY76基因的发现为猕猴桃抗溃疡病育种提供有应用潜力的功能基因和新方向，为溃疡病绿色持续防控提供重要的理论依据。
如上所述，较好的描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。上述实施例和说明书仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，本发明不受上述实施例的限制，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (10)
1.感溃疡病转录因子AcWRKY76，其特征在于，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码区序列为AcWRKY76基因，所述AcWRKY76基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的感溃疡病转录因子AcWRKY76，其特征在于，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求1所述的感溃疡病转录因子AcWRKY76和/或用于沉默AcWRKY76基因的特异性序列。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，包含如SEQ ID NO:3所示的用于沉默AcWRKY76基因的特异性序列。
5.一种重组菌，其特征在于，包含权利要求3~4任一项所述的表达载体。
6.一种重组农杆菌，其特征在于，包含权利要求3~4任一项所述的表达载体或包含权利要求5所述重组菌的质粒。
7.感溃疡病转录因子AcWRKY76在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用，其特征在于，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76负调控猕猴桃溃疡病的病原菌对猕猴桃的感染，所述感溃疡病转录因子AcWRKY76的编码区序列为AcWRKY76基因，所述AcWRKY76基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
8.权利要求3~4任一项所述的表达载体在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
9.权利要求5所述的重组菌在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
10.权利要求6所述的重组农杆菌在猕猴桃抗细菌性溃疡病品种培育中的应用。
Priority Applications (1)
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Publications (2)
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
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- 2023-09-22 CN CN202311229240.4A patent/CN116970054B/zh active Active
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| CN116970054B (zh) | 2023-11-28 |
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