CN110358776A - 一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用 - Google Patents

一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用。本发明提供了一种水稻纹枯病菌致病相关基因，以及该水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp，以该片段为靶点可沉默致病相关基因从而显著抑制水稻纹枯病菌的致病力。所述沉默靶基因片段Rstpp的dsRNA，可用于制备防治水稻纹枯病菌的产品。基于此，本发明还提供了以dsRNA构建得到的重组载体，可转化至植物，所得转基因植物对水稻纹枯病菌具有显著的抗病性。因此，本发明的水稻纹枯病菌致病相关基因及其沉默靶基因片段Rstpp在防治水稻纹枯病菌包括构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中，具有广泛的推广应用前景。

Description

一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用
技术领域
本发明属于生物防治技术领域。更具体地，涉及一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用。
背景技术
水稻纹枯病是世界性的水稻三大病害之一，给水稻生产造成了严重的经济损失。目前该病在我国稻区普遍发生，田间一般发病率为20％～70％，严重时高达90％以上甚至绝收。水稻纹枯病菌(R.solani AG1-IA)是一种重要的腐生性土传病原真菌，该菌主要以菌丝和菌核的形式存在于土壤和病残体中。由于寄主范围广、腐生性强、缺乏高水平的抗源、接种鉴定操作困难等原因，目前能稳定高抗纹枯病的水稻品种比较少。
RNAi是一种在小干扰RNA(RNA small interfering RNAs,siRNAs)的指导下进行的一种同源mRNA配对并发生降解的、非常保守的调节机制。RNAi目前已经被广泛运用于植物保护领域，如植物抗病毒和害虫防治。病毒诱导基因沉默技术(Virus-induced genesilencing)简称VIGS技术，基于同源RNA互补结合降解的RNAi原理，是利用植物对病毒的天然防御机制发展的一种瞬时、快速鉴定植物基因功能的技术，是用基因序列验证基因功能的一种反向遗传学方法。然而该技术最大的核心依赖于筛选到精准、合适的水稻纹枯病菌致病相关基因。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中的缺陷和不足，提供一种水稻纹枯病菌致病相关基因，得到该水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp，以该片段为靶点可沉默致病相关基因，从而显著抑制水稻纹枯病菌的致病力。该水稻纹枯病菌致病相关基因及其沉默靶基因片段Rstpp在抑制水稻纹枯病菌、制备水稻纹枯病菌抑制剂或构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中具有广泛的应用前景。
本发明的第一个目的是提供一种水稻纹枯病菌致病相关基因。
本发明的第二个目的是提供一种水稻纹枯病菌致病相关基因编码蛋白。
本发明的第三个目的是提供所述水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp。
本发明的第四个目的是提供所述水稻纹枯病菌致病相关基因或所述沉默靶基因片段Rstpp在防治水稻纹枯病菌或制备水稻纹枯病菌防治产品中的应用。
本发明的第五个目的是提供所述水稻纹枯病菌致病相关基因或所述沉默靶基因片段Rstpp在构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中的应用。
本发明的第六个目的是提供一种水稻纹枯病菌防治制剂。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明首先提供了一种水稻纹枯病菌致病相关基因，所述水稻纹枯病菌致病相关基因的全长cDNA序列如SEQ ID NO：1所示，序列长度为3972bp。
所述水稻纹枯病菌致病相关基因的全长DNA序列如SEQ ID NO：2所示，序列长度为5671bp，包含21个内含子，分别位于第824～138位、233～286位、431～486位、644～688位、739～792位、956～1010位、1064～1115位、1267～1397位、1606～1767位、1885～1926位、2414～2469位、2633～2724位、3012～3061位、3211～3266位、3434～3495位、3792～4085位、4332～4383位、4675～4726位、4804～4966位、5178～5236位、5309～5362位，剪切位置均符合“GT-AG法则”。
所述水稻纹枯病菌致病相关基因的编码序列如SEQ ID NO：3所示，序列长度为3972bp。
所述水稻纹枯病菌致病相关基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，共为1323个氨基酸，蛋白分子量为144.73kDa。
本发明还提供了所述水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp，其DNA序列如SEQ ID NO：5所示，序列长度为310bp。
所述沉默靶基因片段Rstpp是水稻纹枯病菌与致病力有关的基因片段，在水稻纹枯病菌侵染水稻过程的早期显著上调。
另外，所述水稻纹枯病菌致病相关基因或所述沉默靶基因片段Rstpp在防治水稻纹枯病菌或制备水稻纹枯病菌防治产品中的应用，以及在构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中的应用，均应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述构建抗水稻纹枯病菌转基因植物的方法为：将所述沉默靶基因片段Rstpp构建到载体中，然后将该载体转化至植物中，获得抗水稻纹枯病菌转基因植物。
更优选地，所述转基因植物为烟草、水稻或十字花科蔬菜中的任意一种或几种。
本发明还提供了一种水稻纹枯病菌防治制剂，含有可抑制所述水稻纹枯病菌致病相关基因表达的物质。
优选地，含有可靶向所述沉默靶基因片段Rstpp从而抑制所述水稻纹枯病菌致病相关基因表达的物质；优选地，所述物质为dsRNA或包含该dsRNA的重组载体或重组菌。
优选地，所述dsRNA的核酸序列如SEQ ID NO：6所示。
优选地，所述重组载体为TRV2-Rstpp载体。
根据本发明提供的水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp，本领域技术人员可以通过以下方法获得与该基因等同的基因：(1)通过数据库检索获得；(2)以沉默靶基因片段Rstpp为探针，筛选其它丝核菌基因组文库或cDNA文库获得；(3)根据沉默靶基因片段Rstpp的序列信息设计寡核苷酸引物，用PCR扩增的方法从丝核菌或其它近缘真菌的基因组、mRNA和cDNA中获取；(4)在沉默靶基因片段Rstpp的基础上，用基因工程方法改造获得；(5)用化学合成的方法获得。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用。本发明首先提供了一种水稻纹枯病菌致病相关基因，该水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp在水稻纹枯病菌侵染水稻过程前期被显著诱导表达，以该片段为靶点可沉默致病相关基因从而显著抑制水稻纹枯病菌的致病力。
本发明还提供了一种水稻纹枯病菌防治制剂，含有可抑制水稻纹枯病菌致病相关基因表达的物质；其中，高效沉默靶基因片段Rstpp的dsRNA能够显著抑制水稻纹枯病菌菌丝的生长，降低水稻纹枯病菌的致病力；基于此，本发明还提供了以dsRNA构建得到的重组载体，该重组载体可转化至植物，所得转基因植物受水稻纹枯病菌侵害时，对水稻纹枯病菌具有显著的抗病性。因此，本发明的水稻纹枯病菌致病相关基因及其沉默靶基因片段Rstpp在防治水稻纹枯病菌或制备水稻纹枯病菌防治产品，以及在构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中，均具有广泛的应用前景。
另外，本发明获得的水稻纹枯病菌致病相关基因是土传真菌病害的致病关键基因，利用该基因构建得到抗水稻纹枯病菌转基因植物品种，可以解决生产上土传真菌病害的难题，有效地防控土传真菌病害，具有重要的推广应用价值。
附图说明
图1是水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp的扩增结果图。
图2是水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp在水稻纹枯病菌侵染水稻过程中的基因表达分析结果图。
图3是水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp转录得到的dsRNA对水稻纹枯病菌菌丝生长抑制分析结果图。
图4是VIGS载体信息图。
图5是构建得到的TRV2-Rstpp载体图谱。
图6是TRV2-Rstpp载体转化至根癌农杆菌GV3101的菌落验证结果图。
图7是烟草体内真菌生物量分析结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1水稻纹枯病菌致病相关基因及其沉默靶基因片段Rstpp的克隆
1、实验方法
S1.水稻纹枯病菌RNA的提取
水稻纹枯病菌RNA的提取使用TaKaRa总RNA提取试剂盒(货号9769)，具体实验步骤如下：
称取0.1g水稻纹枯病菌菌丝于液氮中迅速研磨成粉末，加入到含有BufferRL裂解液的1.5mL灭菌离心管中，将裂解液12,000rpm，4℃离心5min。将上清液小心吸取到新的1.5mL灭菌离心管中。加入样品裂解步骤中上清液1/2体积的无水乙醇，立即将混合液(含沉淀)全部转入到RNA Spin Column(含2mLCollection Tube)中。12,000rpm，离心1min，弃滤液。依次将500μL的BufferRWA，600μL的RWB缓冲液，600μL的Buffer RWB加入至RNA SpinColumn中，12,000rpm离心30s，弃滤液。然后空管12,000rpm离心1min。将RNA SpinColumn安置于1.5mL的无RNase酶收集管，在RNA Spin Column膜中央处加入50～200μL的无RNase酶水(65℃预热)，室温静置5min。12,000rpm离心2min洗脱RNA。
S2.cDNA第一链的合成
以步骤S1得到的水稻纹枯病菌的总RNA为模板，利用TARAKA PrimeScript反转录试剂盒(货号6210A)合成cDNA，具体实验步骤如下：
在微量离心管中加入2000ng Total RNA、1μLOligo dT、1μL dNTP(10mM)、补充无RNase酶水至10μL。轻轻混匀，离心数秒后，65℃保温5min，冰上迅速冷却。依次加入4μL 5×PrimeScript II Buffer、0.5μL RNase Inhibitor(40U/μL)、1μL PrimeScript II RTase(200U/μL)、补充无RNase酶水至20μL，缓慢混匀。42℃保温50min，95℃保温5min(酶失活)，冰上冷却后-20℃保存备用。
S3.cDNA靶标克隆
以步骤S2得到的水稻纹枯病菌cDNA为模板，设计沉默靶基因片段Rstpp克隆引物4214F/4214R(如SEQ ID NO：7～8所示)，使用擎科(货号TP001)高保真聚合酶，进行PCR扩增反应。反应条件为：98℃，2min；98℃，10s，58℃，15s，40个循环；最后72℃，10min。
引物4214F(SEQ ID NO：7)：ACGCTGCTGATGACGGAA；
引物4214R(SEQ ID NO：8)：AGACGGCTAACGATGGGTAA。
然后，使用TAE缓冲液制作1.0％的琼脂糖凝胶，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。使用Axygen PCR纯化试剂盒进行PCR产物纯化、测序。
2、实验结果
水稻纹枯病菌致病相关基因的全长cDNA序列如SEQ ID NO：1所示，其全长DNA序列如SEQ ID NO：2所示，其编码序列如SEQ ID NO：3所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp的扩增结果如图1所示，可以看出，应用沉默靶基因片段Rstpp克隆引物4214F/4214R，可以扩增出单一、明亮的条带。经过序列对比，将该基因归于海藻糖-6-磷酸磷酸酶基因家族，因此命名为水稻纹枯病菌海藻糖-6-磷酸磷酸酶基因。
水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp的DNA序列如SEQ IDNO：5所示；dsRNA的核酸序列如SEQ ID NO：6所示。
实施例2水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp在水稻纹枯病菌侵染水稻过程中的表达分析
S1.水稻纹枯病菌接种体的制备
首先使用PDA平板将本实验室保存的水稻纹枯病菌菌株GD118活化，黑暗条件下，28℃培养2d。同时将水稻谷粒浸泡24h后放入250mL锥形瓶中，121℃，30min，高压蒸汽灭菌。将灭菌后的谷粒均匀平铺在培养2d后的PDA平板上，黑暗条件下，28℃培养7d至谷粒表面布满菌丝及菌核，即可用于接种。
S2.水稻的种植和水稻纹枯病菌的接种
分别使用10％的次氯酸钠、30％的双氧水对水稻种子(中抗品种9311)进行消毒，再将种子置于无菌培养皿内，使用无菌水浸泡3d以上直至发芽，然后将发芽的种子转移至含有10cm厚无菌土的方盆(长：80cm；宽：40cm；高：15cm)内。接种选择水稻三叶一心期，在盆内无水干燥条件下，使用步骤S1制备得到的接种体进行接种，在水稻茎基部放置两枚接种体，温度30℃、湿度90％以上利于发病。
S3.样品的荧光定量PCR分析
为了验证不同基因在水稻纹枯病菌侵染水稻过程中的表达量，选取了接种后的6个时间点10h，18h，24h，32h，48h，72h后，收集活体接种的水稻茎基部作为样品。使用TaKaRaMiniBEST Plant RNA Extraction Kit(货号9769)进行不同时间的水稻样品总RNA的提取，具体方法同“实施例1的步骤S1”。利用TARAKA PrimeScript反转录试剂盒(货号6210A)进行RNA反转录，具体方法同“实施例1的步骤S2”，将反转录所得的cDNA产物稀释10倍后，作为模板，利用Primer Premier 5.0软件设计扩增沉默靶基因片段Rstpp的荧光定量PCR引物F/R(如SEQ ID NO：9～10所示)，进行实时荧光定量PCR。
引物F(SEQ ID NO：9)：CACCTTGGTCACTTCAAGCA；
引物R(SEQ ID NO：10)：CCACCTATGCAAGGGCTGT。
引物的特异性通过凝胶电泳、测序和溶解曲线检验。荧光定量PCR反应体系为20μL，包含10μLBio-Rad CFX real-time PCR system、0.2μM上/下游引物、2μL cDNA模板和适量的纯水。每个样品进行三次技术重复。
水稻纹枯病菌的内参基因使用GAPDH进行样品间的基因表达的均一化处理，应用引物GAPDH F/GAPDH R(如SEQ ID NO：11～12所示)，结果采用2-ΔΔCt法进行分析。
引物GAPDH F(SEQ ID NO：11)：GGTCGGCAAAGTCATACCAT；
引物GAPDH R(SEQ ID NO：12)：TCTGCGTCCTTCTTGGAGATA。
2、实验结果
水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp在水稻纹枯病菌侵染水稻过程中的基因表达分析结果如图2所示，可以看出，沉默靶基因片段Rstpp在水稻纹枯病菌侵染水稻的过程前期被诱导表达，在侵染后第18h时的表达量最高。
实施例3水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp双链RNA的合成和抑菌实验
1、实验方法
S1.沉默靶基因片段Rstpp双链RNA的体外合成
使用T7RNA Polymerase(Thermo Fisher Scientific,Catalog number:EP011)合成靶基因Rstpp得双链RNA(dsRNA)。通过在任一扩增引物的5'末端添加T7启动子序列，可以使用PCR将T7RNA聚合酶启动子添加到任何DNA序列中。最小的T7RNA聚合酶启动子序列是：5'-TAATACGACTCACTATAGG-3'。在上下游引物5'末端分别添加T7启动子序列，得到引物T7-4214F/T7-4214R(如SEQ ID NO：13～14所示)。
引物T7-4214F(SEQ ID NO：13)：TAATACGACTCACTATAGGACGCTGCTGATGACGGAA；
引物T7-4214R(SEQ ID NO：14)：TAATACGACTCACTATAGGAGACGGCTAACGATGGGTAA。
以水稻纹枯病菌的cDNA为模板进行PCR扩增，得到dsRNA的模板，经过转录纯化后，得到沉默靶基因片段Rstpp的dsRNA。
S2.dsRNA对水稻纹枯病菌的抑制分析
使用PDB培养基培养水稻纹枯病菌菌株GD118的新鲜菌丝，取极少量新鲜菌丝与30μL步骤S1得到的dsRNA(浓度为800ng/μL)孵育12h后，转移至1/4营养浓度的PDA平板上，28℃条件下黑暗培养36h，测量培养基上单个菌落直径，同时使用不含dsRNA的无菌水作为阴性对照。每次处理重复三次，实验重复三次。
2、实验结果
水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp转录得到的dsRNA对水稻纹枯病菌菌丝生长抑制分析结果如图3所示，可以看出，与不接种dsRNA相比，接种dsRNA时的水稻纹枯病菌菌落直径显著减小；说明沉默靶基因片段Rstpp的dsRNA可显著抑制水稻纹枯病菌的生长。
实施例4TRV2-Rstpp载体构建和转化烟草研究
1、实验方法
S1.TRV2-Rstpp载体构建及农杆菌转化
根据水稻纹枯病菌致病相关基因的编码序列，设计引物两端包含EcoRI和Bam HI酶切位点的特异性引物VIGS-4214F/VIGS-4214R(如SEQ ID NO：15～16所示)。
引物VIGS-4214F(SEQ ID NO：15)：CCG gaattcACGCTGCTGATGACGGAA；
引物VIGS-4214R(SEQ ID NO：16)：CGC ggatccAGACGGCTAACGATGGGTAA。
以水稻纹枯病菌cDNA为模板，利用擎科(货号TP001)高保真酶进行PCR扩增，将扩增产物回收后，和载体pYL156同时在37℃下双酶切5h。将酶切后的目的片段和载体利用T4DNA连接酶，16℃过夜连接，将连接好的产物转化入E.coil DH 5α感受态，测序确定无误后，扩繁提取质粒，保存备用。
S2.根癌农杆菌感受态的制备及电击转化
将根癌农杆菌单菌落接于4mL含Rif(25μg/mL)的LB液体培养基中，28℃，200r/min振荡培养2d。取培养液3mL的接种量转接至200mL LB培养液中，200r/min，28℃振荡培养至对数生长期(细胞浓度OD600为0.5～0.6左右)。离心弃去废液，收集菌体。用预冷的无菌双蒸水将菌液重悬洗涤3次，后用2mL无菌预冷的10％(w/v)甘油重悬菌体。取100μL菌悬液于1.5mL离心管，于-70℃保存备用。加3μL质粒于菌液中，轻轻混匀并转移至无菌预冷的电击杯中，电击后迅速加入1mL LB液体培养基，混匀并转移细胞至1.5mL的离心管中，在28℃摇床中200r/min培养2～3h；取100μL菌液涂布于含Rif(25μg/mL)和Kan(50μg/mL)的LB平板中，倒置放于28℃培养箱中培养2天，观察转化子生长情况，取未质粒DNA的农杆菌在同样电击条件下的结果作为对照。挑取单菌落使用pYL156载体引物PYL156F/PYL156R进行PCR验证，载体引物PYL156F/PYL156R的序列如SEQ ID NO：17～18所示。
引物PYL156F(SEQ ID NO：17)：AATTCACTGGGAGATGATACGCTG；
引物PYL156R(SEQ ID NO：18)：CCTATGGTAAGACAATGAGTCGGC。
S3.农杆菌培养和烟草瞬时转化
农杆菌单克隆加入5mL的液体LB培养基(25μg/mL Rif和50μg/mL Kan)中，放于28℃摇床中进行200r/min过夜培养，将1mL菌液加入50mL LB(25μg/mL Rif和50μg/mL Kan)中，放于28℃摇床中进行200r/min振荡培养。当培养物OD600到0.5～0.6时，以6000rpm低温离心5min收集菌体，弃去废液。将菌体重悬于注射基质(10mM MES、10mM MgCl2、100μM乙酰丁香酮)中，使OD600为0.8～1.0。把两种农杆菌菌株(TRV1与TRV2+靶基因片段)以1：1混合，室温静置3～5h，不要摇动。最后利用注射器将含有注射基质的农杆菌注射于最嫩的叶片中。
S4.烟草致病力检测和生物量测定
从注射后的第10天起，本氏烟草的白化现象就非常明显，这表明了在本氏烟草体内VIGS载体已经产生出大量dsRNA，并发挥着干扰作用。因此，我们选择了从注射VIGS系列载体后的第10天，进行活体接种。对接菌后的第4天(post-inoculation day，dpi)、第5天和第6天进行本氏烟草的病情指数统计，通过统计叶片病斑和凋萎叶片的数量进行致病力的检测。提取接种水稻纹枯病菌8d后本氏烟草(转基因植物和阴性对照)中根茎(营养土以上0～3cm处)的总DNA，以水稻纹枯病菌内部转录间隔区序列为靶标片段，设计特异性引物RsF/RsR(如SEQ ID NO：19～20所示)。同时，以烟草actin基因为内参基因，应用引物EF1a/EF1b(如SEQ ID NO：21～22所示)，具体方法同实施例2的步骤S3，结果采用2-ΔΔCt法进行分析。
引物Rs F(SEQ ID NO：19)：GCCTTTTCTACCTTAATTTGGCAG；
引物Rs R(SEQ ID NO：20)：GTGTGTAAATTAAGTAGACAGCAAATG；
引物EF1a(SEQ ID NO：21)：TGGTGTCCTCAAGCCTGGTAT；
引物EF1b(SEQ ID NO：22)：ACGCTTGAGATCCTTAACCGC。
2、实验结果
VIGS载体信息图如图4所示，构建得到的TRV2-Rstpp载体图谱如图5所示，TRV2-Rstpp载体转化至根癌农杆菌GV3101的菌落验证结果如图6所示，可以看出，扩增出单一、明亮的条带，说明TRV2-Rstpp载体已转化至根癌农杆菌GV3101。烟草体内真菌生物量分析结果如图7所示，可以看出，与未接种水稻纹枯病菌的烟草相比，接种水稻纹枯病菌时，烟草体内的真菌生物量显著降低。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> 一种水稻纹枯病菌致病相关基因及其应用
<160> 22
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 4014
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgccggttt tgggtcacgt agctggcgag gttgtctttg ccgaagttct ggttactcca 60
accggggtga gcaaaggctg cgggattgtg gaattcagta cacatgaaga ggctcagcgt 120
gccattcgag acttatccga aacgccactt ctgggtcgcc ctatttttat tcgtgaggac 180
cgcgaatccg aagcccgatt cggcgcacca tcggtacctg gcaagatggg agctgcaatg 240
gcgcacacag ggtattctac ccctcctcca cgttcggcac ttgcaggtac caatcctggt 300
aatcagctct atgtcggcaa cttgccctac caagcgggct ggcaagacct caaggacctt 360
ttccgtactg ccggcgccat cgttcgtgct gacattaacg ttggctatga cggacgtcct 420
aagggcagcg gcaccgttat attcgagact gccaaggatg cgcaagcagc tattcaaatg 480
tacaacggat atgactggta cgggcggatc attgaggttc gtgaggaccg ttacgctggt 540
ctctcaggcg gacgagggcg tggccgcggt cgtggctctg accgtggttt ccgtggcggc 600
cgcggggggt atggcggtcg cggagggtat ggtggcgtgt caaatgccga tttatatgcc 660
gattattctg gtcctgacca gcaaatgggt ggtggattcg gtgcaatgcc tgaacctagc 720
caacaaatta tggttcgcaa cctcccttgg tcgactctca acgatgacct agtagaacta 780
tttgagacta ctgggaatgt cgagcaggcc gagattctct atgatggctc ccgttccaag 840
ggcgctggag ttgtccagtt ctcgacagta gaggaagcag aaactgcgat tggagaacga 900
agggctaatc atcgcgggaa tattagatgt gcgcttcaac gatcgatggc acgaattcac 960
ttcctcctct gcgaagggcg gtcaaacagc ccttgcatag gtgggcaaca ggctgaatcg 1020
ggagagaact ggtcccatct acagtgcctc tctcggttgt gcggaggatg gttaagatcc 1080
gtgtcagatg agttggatgg cacgttcgta aggttccggt ccagcccgta tttacctgaa 1140
tacgtacggg atgacgctgc tgatgacgga aacggtaatc catcgattac attagtcgag 1200
gcgccctacc agaataggcg catatataag gtctaagcat tcggtgttac aactccaaga 1260
ccacgatcga gagaacttac tctagcgatg gacgactttt ccgcatcgac acagaatcgg 1320
aagcgcgagc ccgctgggcc ggaatcgctc gaagatattc gcgcagccat tgcaaacatc 1380
gaggccgact accgggcgaa gggtgtcact ctaagtggcc gcatcgtgca cgcatgtcac 1440
tacttaccca tcgttagccg tctgaatact ggcgagacac caagagtcga acgcagcggc 1500
ctcgctacgc ctccccgcac ccccgatttt ttgccccgct ctccagaacc tgatgtcgta 1560
tcccctggcc cttctctcga cggagcgatt ctcgaccagg agaagagtgc gccccctcgc 1620
tgggtactag cacctcgtcg gggtcactcg actatgacct ctggcatccg ctccctgtct 1680
gcaacacacg aacaattaat tgttggatgg actggggaat tccgcagcat tgcatctgac 1740
gaaaagattg caacaaactc cgtgaccgat agcgaccggg cgttgctcga gacagaaatt 1800
gaaagctaca agccatctga cgcagagaat ccagaaaaaa tcacctacaa gcccgtgtgg 1860
ctggacgacg cgatttctgc ggggcactat gaaggatatt gtaagactaa cgttacttcc 1920
gaaatccctg ttaaagacga gggcttttcg gcttacaaac aagcaaacca agcatatgcc 1980
aatgcaattc ttgcgatcct caaaccgggc gaccttgttt gggtccatga ctaccattta 2040
ctccttgttc ctcgtatggt tcgtaccggc gctccggagg cacacattgg actttttgtc 2100
catacacctt tccccagtag tgaagtcttc cgttgcctcc caaggagaaa ggaaatctta 2160
gatgggatgc ttggcgccaa tctggtctgc ttccagacgt actcgtattc tcgtcacttt 2220
gcctccactt gcatcagggt ttgtggatat gaagctgccc cacttggtat cgatgtacat 2280
ggagcgctag ttgcaatctc tcatagtcct gttggaattg acgctgttcg cgttgaacgg 2340
gactctcaac gtcctggtat tcagcccaaa ctccagtccc tgcgctccat ctatcaaggc 2400
aagaagatca tcgttggtag ggataaactt gatgcagtga aaggcgtcgt ccagaagctt 2460
cgtgcttttg aaaaactcct gcaagactat cccgaatgga tcggaaacgt ggttacatct 2520
cctgctctga ctgattcccc taaacttgag cgtcaagttt cggaactggt agcccacata 2580
aatggcgaat atggttcact cgactttatt ccggttcatc actatcacca aacaattaag 2640
aaagacgaat tctacgcact tctttcggtt gcagacctgg cgctcatcac acccttgcgt 2700
gacggaatga acaccacttc aatggaattc gtcatctgcc aacagcgcac ggggaaaagc 2760
cctatcgtct taagcgagtt tatgggtaca tcccatcaca tgtctcaaga cgtggctgca 2820
tctatccacc gcggcctgac catgtctatc gaggataagg agactcgtca atctgctctt 2880
tataagattg ttacgaccta tacgtcatac agctgggctt caatgttggt caaaaaactg 2940
ttgcaacagg ttggggctga gaatactgcg cacaacacac ctgtgctgga ccgctcgctc 3000
atgacctcga tgtacgaaaa ggcttccaag cggttgatgc tcttcgatta cgatggtact 3060
ctcactccca ttgtaaaaac acccagcgcc gctgtaccct ccaaggatac cctccgtgcc 3120
ttggaaaagc tgtcgtcgga cccgaaaaac gtggtttata ttatttcagg gcgagacggc 3180
ggcttcttgg atcaacacct tggtcacttc aagcaggtcg ggttttcggc cgagcatgga 3240
tgctttgtgc gggagccagg ccagtccgag tggaacaatc tagcagcgag cttggatatg 3300
agctggatgc cagaagtcca cgagattttc aaatactata ccgaacggac aacaggtagc 3360
tttgtagaac tgaagaagag ctcaataaca tggcactacc gcgcgagtga tcctgactgg 3420
gggggacctc cgcctccccg tcttgtccca tgcaatgtgg ttcacagctt tctctctaaa 3480
actattggac tggctgcccc ccttttttcc atgggcaccc agaccacttt gccactcata 3540
ccaaccacgt tcacgttcgt ctcacacaaa ttcgcatttg tagtactcgt cggcaagaaa 3600
aacctcgaag ttcggcccat agcaattaac aagggagaga tcgtgaaacg cctaatgtat 3660
gctaatcctg acgccgaatt cgtcttttgt gctggagacg acaagactga cgaagatatg 3720
ttccgtgcac ttggctctct tttcccctct ggcgtgacaa ctgcgactat ggagcctcct 3780
ctctcggcag cgctcactgc tggtgtagag cagtcgtccc tgaaacccgt gcaacttgcc 3840
atgcctccta atggtatatt ctcgactaca gttggagcga gtagcaagaa gactcttgcg 3900
cggtggcatg tcacaagccc ctatgctatt gtagagaata tgctgagttt agtgggagaa 3960
acgcccaccg cggcagagga gcctggcgag ccagactcca aggcaaatct gtag 4146
<210> 2
<211> 5671
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgccggttt tgggtcacgt agctggcgag gttgtctttg ccgaagttct ggttactcca 60
accggggtga gcaaaggctg cgggtaagct ttattgatct gtagtgctgg aagttgtttt 120
tgatcacccg tggtgcagga ttgtggaatt cagtacacat gaagaggctc agcgtgccat 180
tcgagactta tccgaaacgc cacttctggg tcgccctatt tttattcgtg aggtaggcat 240
tcagctcagc tcttcatact tttaccctga tttgtatcca tcctaggacc gcgaatccga 300
agcccgattc ggcgcaccat cggtacctgg caagatggga gctgcaatgg cgcacacagg 360
gtattctacc cctcctccac gttcggcact tgcaggtacc aatcctggta atcagctcta 420
tgtcggcaac gtacgtctgt tcgatcatta ttcgcacaga gtctgactta catcgcgggt 480
caatagttgc cctaccaagc gggctggcaa gacctcaagg accttttccg tactgccggc 540
gccatcgttc gtgctgacat taacgttggc tatgacggac gtcctaaggg cagcggcacc 600
gttatattcg agactgccaa ggatgcgcaa gcagctattc gtaagttgtt gtgtttgttg 660
tggggaattg tataccaaac atgactagaa atgtacaacg gatatgactg gtacgggcgg 720
atcattgagg ttcgtgaggt atgtattttc ttatactagc tcagtgcttc gctcattttg 780
ttcttacaac aggaccgtta cgctggtctc tcaggcggac gagggcgtgg ccgcggtcgt 840
ggctctgacc gtggtttccg tggcggccgc ggggggtatg gcggtcgcgg agggtatggt 900
ggcgtgtcaa atgccgattt atatgccgat tattctggtc ctgaccagca aatgggtgag 960
tcaatttgcc tagcatatgc gtactagcac ttagtattcg aatatcatag gtggtggatt 1020
cggtgcaatg cctgaaccta gccaacaaat tatggttcgc aacgtgagtg tactacgata 1080
gatcactgaa cgtttgttaa atttgtttcg ataagctccc ttggtcgact ctcaacgatg 1140
acctagtaga actatttgag actactggga atgtcgagca ggccgagatt ctctatgatg 1200
gctcccgttc caagggcgct ggagttgtcc agttctcgac agtagaggaa gcagaaactg 1260
cgattggtat gtcttccgag gcttcacgtg tactcaattg ctaaacatgt ataacatcgg 1320
attttagcca agttccaatc atatatgtat ggaggtcgtc ctttgggtga gttttcacta 1380
ctcgtgatct tatttaggag aacgaagggc taatcatcgc gggaatatta gatgtgcgct 1440
tcaacgatcg atggcacgaa ttcacttcct cctctgcgaa gggcggtcaa acagcccttg 1500
cataggtggg caacaggctg aatcgggaga gaactggtcc catctacagt gcctctctcg 1560
gttgtgcgga ggatggttaa gatccgtgtc agatgagttg gatgggccga aaaatctatc 1620
tgggttcaga aacaacggag aatttctgga tcgatgaatg ttggtagatg agacttggct 1680
ctgattagga gatgatattg agctcgaagg actgtttgtt atgtatgttc cgatataaat 1740
gcgccttgat tctggtaaat tgcctagcac gttcgtaagg ttccggtcca gcccgtattt 1800
acctgaatac gtacgggatg acgctgctga tgacggaaac ggtaatccat cgattacatt 1860
agtcgaggcg ccctaccaga ataggcgcat atataaggtc taagcattcg gtgttacaac 1920
tccaagacca cgatcgagag aacttactct agcgatggac gacttttccg catcgacaca 1980
gaatcggaag cgcgagcccg ctgggccgga atcgctcgaa gatattcgcg cagccattgc 2040
aaacatcgag gccgactacc gggcgaaggg tgtcactcta agtggccgca tcgtgcacgc 2100
atgtcactac ttacccatcg ttagccgtct gaatactggc gagacaccaa gagtcgaacg 2160
cagcggcctc gctacgcctc cccgcacccc cgattttttg ccccgctctc cagaacctga 2220
tgtcgtatcc cctggccctt ctctcgacgg agcgattctc gaccaggaga agagtgcgcc 2280
ccctcgctgg gtactagcac ctcgtcgggg tcactcgact atgacctctg gcatccgctc 2340
cctgtctgca acacacgaac aattaattgt tggatggact ggggaattcc gcagcattgc 2400
atctgacgaa aaggtaggcc aagtttcctc aaaatttatt ataccgcagt ctaatgtaag 2460
attttttaga ttgcaacaaa ctccgtgacc gatagcgacc gggcgttgct cgagacagaa 2520
attgaaagct acaagccatc tgacgcagag aatccagaaa aaatcaccta caagcccgtg 2580
tggctggacg acgcgatttc tgcggggcac tatgaaggat attgtaagac tagtaagtga 2640
tgtcattttg cctcaaccat acggggactc aatactatat tattacagca ctctggccac 2700
tttttcacta ccttctttgg caagacgtta cttccgaaat ccctgttaaa gacgagggct 2760
tttcggctta caaacaagca aaccaagcat atgccaatgc aattcttgcg atcctcaaac 2820
cgggcgacct tgtttgggtc catgactacc atttactcct tgttcctcgt atggttcgta 2880
ccggcgctcc ggaggcacac attggacttt ttgtccatac acctttcccc agtagtgaag 2940
tcttccgttg cctcccaagg agaaaggaaa tcttagatgg gatgcttggc gccaatctgg 3000
tctgcttcca ggtaagccta ctctcaaatt ggactaccat ggctcttaca aggcttcata 3060
gacgtactcg tattctcgtc actttgcctc cacttgcatc agggtttgtg gatatgaagc 3120
tgccccactt ggtatcgatg tacatggagc gctagttgca atctctcata gtcctgttgg 3180
aattgacgct gttcgcgttg aacgggactc gtaagttgtt cgaatcggtt gtgtgatcat 3240
atgtcttgac ctcacttgtt tcacagtcaa cgtcctggta ttcagcccaa actccagtcc 3300
ctgcgctcca tctatcaagg caagaagatc atcgttggta gggataaact tgatgcagtg 3360
aaaggcgtcg tccagaagct tcgtgctttt gaaaaactcc tgcaagacta tcccgaatgg 3420
atcggaaacg tgggcgtttg tattgagccc tagtttagag aaactgacga ttgctctagg 3480
tggtccttat ccaagttaca tctcctgctc tgactgattc ccctaaactt gagcgtcaag 3540
tttcggaact ggtagcccac ataaatggcg aatatggttc actcgacttt attccggttc 3600
atcactatca ccaaacaatt aagaaagacg aattctacgc acttctttcg gttgcagacc 3660
tggcgctcat cacacccttg cgtgacggaa tgaacaccac ttcaatggaa ttcgtcatct 3720
gccaacagcg cacggggaaa agccctatcg tcttaagcga gtttatgggt acatcccatc 3780
acatgtctca agctttgtgg gtcctctagt ttagcacgtt caattttcga tcgctgaccc 3840
ccaattattt cttggtttcg tttccgtgtg gggaatttct tatcgtgtct ggcctccttc 3900
cttttatgga aacgtcctct attgatccgc cctcgcaacc atttttggat ctttaggcag 3960
ataaacccat ggaacctggg ggtgcgtcat cgtctcgatg attatgatcc attccaaaac 4020
tgactcgcgg atttcatgcc ctctttgacc tcgtgccccc aactatttaa acctaccgga 4080
tccaggacgt ggctgcatct atccaccgcg gcctgaccat gtctatcgag gataaggaga 4140
ctcgtcaatc tgctctttat aagattgtta cgacctatac gtcatacagc tgggcttcaa 4200
tgttggtcaa aaaactgttg caacaggttg gggctgagaa tactgcgcac aacacacctg 4260
tgctggaccg ctcgctcatg acctcgatgt acgaaaaggc ttccaagcgg ttgatgctct 4320
tcgattacga tgtgtgtgcc tctttttccg tgtgtgtttt cttgcgtact cattatcgtc 4380
tagggtactc tcactcccat tgtaaaaaca cccagcgccg ctgtaccctc caaggatacc 4440
ctccgtgcct tggaaaagct gtcgtcggac ccgaaaaacg tggtttatat tatttcaggg 4500
cgagacggcg gcttcttgga tcaacacctt ggtcacttca agcaggtcgg gttttcggcc 4560
gagcatggat gctttgtgcg ggagccaggc cagtccgagt ggaacaatct agcagcgagc 4620
ttggatatga gctggatgcc agaagtccac gagattttca aatactatac cgaagtacgt 4680
cgattttgtc cccgttaatt tcacattgtc ttacaccaat gaacagcgga caacaggtag 4740
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ggggtaagca gcccagttat tgtctacacg cacgatcact aaccctcaat ccatactagc 4860
tccttccagt gtaaccaatg tctcgacctc ttgcaaacaa acattgcacc taagcgacca 4920
attgagggta agtttgttca cttattttga tttacctggg atccagggga cctccgcctc 4980
cccgtcttgt cccatgcaat gtggttcaca gctttctctc taaaactatt ggactggctg 5040
cccccctttt ttccatgggc acccagacca ctttgccact cataccaacc acgttcacgt 5100
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ccatagcaat taacaaggtg ggtttagttt gtaagaaaac tgttgcgtgg aaaactcact 5220
tcagtctcca ctatagggag agatcgtgaa acgcctaatg tatgctaatc ctgacgccga 5280
attcgtcttt tgtgctggag acgacaaggt atattatctc tattcttgaa cttgcgaagt 5340
ttacattgat ccctgtttat agactgacga agatatgttc cgtgcacttg gctctctttt 5400
cccctctggc gtgacaactg cgactatgga gcctcctctc tcggcagcgc tcactgctgg 5460
tgtagagcag tcgtccctga aacccgtgca acttgccatg cctcctaatg gtatattctc 5520
gactacagtt ggagcgagta gcaagaagac tcttgcgcgg tggcatgtca caagccccta 5580
tgctattgta gagaatatgc tgagtttagt gggagaaacg cccaccgcgg cagaggagcc 5640
tggcgagcca gactccaagg caaatctgta g 5859
<210> 3
<211> 4014
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atgccggttt tgggtcacgt agctggcgag gttgtctttg ccgaagttct ggttactcca 60
accggggtga gcaaaggctg cgggattgtg gaattcagta cacatgaaga ggctcagcgt 120
gccattcgag acttatccga aacgccactt ctgggtcgcc ctatttttat tcgtgaggac 180
cgcgaatccg aagcccgatt cggcgcacca tcggtacctg gcaagatggg agctgcaatg 240
gcgcacacag ggtattctac ccctcctcca cgttcggcac ttgcaggtac caatcctggt 300
aatcagctct atgtcggcaa cttgccctac caagcgggct ggcaagacct caaggacctt 360
ttccgtactg ccggcgccat cgttcgtgct gacattaacg ttggctatga cggacgtcct 420
aagggcagcg gcaccgttat attcgagact gccaaggatg cgcaagcagc tattcaaatg 480
tacaacggat atgactggta cgggcggatc attgaggttc gtgaggaccg ttacgctggt 540
ctctcaggcg gacgagggcg tggccgcggt cgtggctctg accgtggttt ccgtggcggc 600
cgcggggggt atggcggtcg cggagggtat ggtggcgtgt caaatgccga tttatatgcc 660
gattattctg gtcctgacca gcaaatgggt ggtggattcg gtgcaatgcc tgaacctagc 720
caacaaatta tggttcgcaa cctcccttgg tcgactctca acgatgacct agtagaacta 780
tttgagacta ctgggaatgt cgagcaggcc gagattctct atgatggctc ccgttccaag 840
ggcgctggag ttgtccagtt ctcgacagta gaggaagcag aaactgcgat tggagaacga 900
agggctaatc atcgcgggaa tattagatgt gcgcttcaac gatcgatggc acgaattcac 960
ttcctcctct gcgaagggcg gtcaaacagc ccttgcatag gtgggcaaca ggctgaatcg 1020
ggagagaact ggtcccatct acagtgcctc tctcggttgt gcggaggatg gttaagatcc 1080
gtgtcagatg agttggatgg cacgttcgta aggttccggt ccagcccgta tttacctgaa 1140
tacgtacggg atgacgctgc tgatgacgga aacggtaatc catcgattac attagtcgag 1200
gcgccctacc agaataggcg catatataag gtctaagcat tcggtgttac aactccaaga 1260
ccacgatcga gagaacttac tctagcgatg gacgactttt ccgcatcgac acagaatcgg 1320
aagcgcgagc ccgctgggcc ggaatcgctc gaagatattc gcgcagccat tgcaaacatc 1380
gaggccgact accgggcgaa gggtgtcact ctaagtggcc gcatcgtgca cgcatgtcac 1440
tacttaccca tcgttagccg tctgaatact ggcgagacac caagagtcga acgcagcggc 1500
ctcgctacgc ctccccgcac ccccgatttt ttgccccgct ctccagaacc tgatgtcgta 1560
tcccctggcc cttctctcga cggagcgatt ctcgaccagg agaagagtgc gccccctcgc 1620
tgggtactag cacctcgtcg gggtcactcg actatgacct ctggcatccg ctccctgtct 1680
gcaacacacg aacaattaat tgttggatgg actggggaat tccgcagcat tgcatctgac 1740
gaaaagattg caacaaactc cgtgaccgat agcgaccggg cgttgctcga gacagaaatt 1800
gaaagctaca agccatctga cgcagagaat ccagaaaaaa tcacctacaa gcccgtgtgg 1860
ctggacgacg cgatttctgc ggggcactat gaaggatatt gtaagactaa cgttacttcc 1920
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aatgcaattc ttgcgatcct caaaccgggc gaccttgttt gggtccatga ctaccattta 2040
ctccttgttc ctcgtatggt tcgtaccggc gctccggagg cacacattgg actttttgtc 2100
catacacctt tccccagtag tgaagtcttc cgttgcctcc caaggagaaa ggaaatctta 2160
gatgggatgc ttggcgccaa tctggtctgc ttccagacgt actcgtattc tcgtcacttt 2220
gcctccactt gcatcagggt ttgtggatat gaagctgccc cacttggtat cgatgtacat 2280
ggagcgctag ttgcaatctc tcatagtcct gttggaattg acgctgttcg cgttgaacgg 2340
gactctcaac gtcctggtat tcagcccaaa ctccagtccc tgcgctccat ctatcaaggc 2400
aagaagatca tcgttggtag ggataaactt gatgcagtga aaggcgtcgt ccagaagctt 2460
cgtgcttttg aaaaactcct gcaagactat cccgaatgga tcggaaacgt ggttacatct 2520
cctgctctga ctgattcccc taaacttgag cgtcaagttt cggaactggt agcccacata 2580
aatggcgaat atggttcact cgactttatt ccggttcatc actatcacca aacaattaag 2640
aaagacgaat tctacgcact tctttcggtt gcagacctgg cgctcatcac acccttgcgt 2700
gacggaatga acaccacttc aatggaattc gtcatctgcc aacagcgcac ggggaaaagc 2760
cctatcgtct taagcgagtt tatgggtaca tcccatcaca tgtctcaaga cgtggctgca 2820
tctatccacc gcggcctgac catgtctatc gaggataagg agactcgtca atctgctctt 2880
tataagattg ttacgaccta tacgtcatac agctgggctt caatgttggt caaaaaactg 2940
ttgcaacagg ttggggctga gaatactgcg cacaacacac ctgtgctgga ccgctcgctc 3000
atgacctcga tgtacgaaaa ggcttccaag cggttgatgc tcttcgatta cgatggtact 3060
ctcactccca ttgtaaaaac acccagcgcc gctgtaccct ccaaggatac cctccgtgcc 3120
ttggaaaagc tgtcgtcgga cccgaaaaac gtggtttata ttatttcagg gcgagacggc 3180
ggcttcttgg atcaacacct tggtcacttc aagcaggtcg ggttttcggc cgagcatgga 3240
tgctttgtgc gggagccagg ccagtccgag tggaacaatc tagcagcgag cttggatatg 3300
agctggatgc cagaagtcca cgagattttc aaatactata ccgaacggac aacaggtagc 3360
tttgtagaac tgaagaagag ctcaataaca tggcactacc gcgcgagtga tcctgactgg 3420
gggggacctc cgcctccccg tcttgtccca tgcaatgtgg ttcacagctt tctctctaaa 3480
actattggac tggctgcccc ccttttttcc atgggcaccc agaccacttt gccactcata 3540
ccaaccacgt tcacgttcgt ctcacacaaa ttcgcatttg tagtactcgt cggcaagaaa 3600
aacctcgaag ttcggcccat agcaattaac aagggagaga tcgtgaaacg cctaatgtat 3660
gctaatcctg acgccgaatt cgtcttttgt gctggagacg acaagactga cgaagatatg 3720
ttccgtgcac ttggctctct tttcccctct ggcgtgacaa ctgcgactat ggagcctcct 3780
ctctcggcag cgctcactgc tggtgtagag cagtcgtccc tgaaacccgt gcaacttgcc 3840
atgcctccta atggtatatt ctcgactaca gttggagcga gtagcaagaa gactcttgcg 3900
cggtggcatg tcacaagccc ctatgctatt gtagagaata tgctgagttt agtgggagaa 3960
acgcccaccg cggcagagga gcctggcgag ccagactcca aggcaaatct gtag 4146
<210> 4
<211> 1323
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Pro Val Leu Gly His Val Ala Gly Glu Val Val Phe Ala Glu Val
1 5 10 15
Leu Val Thr Pro Thr Gly Val Ser Lys Gly Cys Gly Ile Val Glu Phe
20 25 30
Ser Thr His Glu Glu Ala Gln Arg Ala Ile Arg Asp Leu Ser Glu Thr
35 40 45
Pro Leu Leu Gly Arg Pro Ile Phe Ile Arg Glu Asp Arg Glu Ser Glu
50 55 60
Ala Arg Phe Gly Ala Pro Ser Val Pro Gly Lys Met Gly Ala Ala Met
65 70 75 80
Ala His Thr Gly Tyr Ser Thr Pro Pro Pro Arg Ser Ala Leu Ala Gly
85 90 95
Thr Asn Pro Gly Asn Gln Leu Tyr Val Gly Asn Leu Pro Tyr Gln Ala
100 105 110
Gly Trp Gln Asp Leu Lys Asp Leu Phe Arg Thr Ala Gly Ala Ile Val
115 120 125
Arg Ala Asp Ile Asn Val Gly Tyr Asp Gly Arg Pro Lys Gly Ser Gly
130 135 140
Thr Val Ile Phe Glu Thr Ala Lys Asp Ala Gln Ala Ala Ile Gln Met
145 150 155 160
Tyr Asn Gly Tyr Asp Trp Tyr Gly Arg Ile Ile Glu Val Arg Glu Asp
165 170 175
Arg Tyr Ala Gly Leu Ser Gly Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly
180 185 190
Ser Asp Arg Gly Phe Arg Gly Gly Arg Gly Gly Tyr Gly Gly Arg Gly
195 200 205
Gly Tyr Gly Gly Val Ser Asn Ala Asp Leu Tyr Ala Asp Tyr Ser Gly
210 215 220
Pro Asp Gln Gln Met Gly Gly Gly Phe Gly Ala Met Pro Glu Pro Ser
225 230 235 240
Gln Gln Ile Met Val Arg Asn Leu Pro Trp Ser Thr Leu Asn Asp Asp
245 250 255
Leu Val Glu Leu Phe Glu Thr Thr Gly Asn Val Glu Gln Ala Glu Ile
260 265 270
Leu Tyr Asp Gly Ser Arg Ser Lys Gly Ala Gly Val Val Gln Phe Ser
275 280 285
Thr Val Glu Glu Ala Glu Thr Ala Ile Gly Glu Arg Arg Ala Asn His
290 295 300
Arg Gly Asn Ile Arg Cys Ala Leu Gln Arg Ser Met Ala Arg Ile His
305 310 315 320
Phe Leu Leu Cys Glu Gly Arg Ser Asn Ser Pro Cys Ile Gly Gly Gln
325 330 335
Gln Ala Glu Ser Gly Glu Asn Trp Ser His Leu Gln Cys Leu Ser Arg
340 345 350
Leu Cys Gly Gly Trp Leu Arg Ser Val Ser Asp Glu Leu Asp Gly Thr
355 360 365
Phe Val Arg Phe Arg Ser Ser Pro Tyr Leu Pro Glu Tyr Val Arg Asp
370 375 380
Asp Ala Ala Asp Asp Gly Asn Gly Asn Pro Ser Ile Thr Leu Val Glu
385 390 395 400
Ala Pro Tyr Gln Asn Arg Pro Leu Ser Arg Glu Leu Thr Leu Ala Met
405 410 415
Asp Asp Phe Ser Ala Ser Thr Gln Asn Arg Lys Arg Glu Pro Ala Gly
420 425 430
Pro Glu Ser Leu Glu Asp Ile Arg Ala Ala Ile Ala Asn Ile Glu Ala
435 440 445
Asp Tyr Arg Ala Lys Gly Val Thr Leu Ser Gly Arg Ile Val His Ala
450 455 460
Cys His Tyr Leu Pro Ile Val Ser Arg Leu Asn Thr Gly Glu Thr Pro
465 470 475 480
Arg Val Glu Arg Ser Gly Leu Ala Thr Pro Pro Arg Thr Pro Asp Phe
485 490 495
Leu Pro Arg Ser Pro Glu Pro Asp Val Val Ser Pro Gly Pro Ser Leu
500 505 510
Asp Gly Ala Ile Leu Asp Gln Glu Lys Ser Ala Pro Pro Arg Trp Val
515 520 525
Leu Ala Pro Arg Arg Gly His Ser Thr Met Thr Ser Gly Ile Arg Ser
530 535 540
Leu Ser Ala Thr His Glu Gln Leu Ile Val Gly Trp Thr Gly Glu Phe
545 550 555 560
Arg Ser Ile Ala Ser Asp Glu Lys Ile Ala Thr Asn Ser Val Thr Asp
565 570 575
Ser Asp Arg Ala Leu Leu Glu Thr Glu Ile Glu Ser Tyr Lys Pro Ser
580 585 590
Asp Ala Glu Asn Pro Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Pro Val Trp Leu Asp
595 600 605
Asp Ala Ile Ser Ala Gly His Tyr Glu Gly Tyr Cys Lys Thr Asn Val
610 615 620
Thr Ser Glu Ile Pro Val Lys Asp Glu Gly Phe Ser Ala Tyr Lys Gln
625 630 635 640
Ala Asn Gln Ala Tyr Ala Asn Ala Ile Leu Ala Ile Leu Lys Pro Gly
645 650 655
Asp Leu Val Trp Val His Asp Tyr His Leu Leu Leu Val Pro Arg Met
660 665 670
Val Arg Thr Gly Ala Pro Glu Ala His Ile Gly Leu Phe Val His Thr
675 680 685
Pro Phe Pro Ser Ser Glu Val Phe Arg Cys Leu Pro Arg Arg Lys Glu
690 695 700
Ile Leu Asp Gly Met Leu Gly Ala Asn Leu Val Cys Phe Gln Thr Tyr
705 710 715 720
Ser Tyr Ser Arg His Phe Ala Ser Thr Cys Ile Arg Val Cys Gly Tyr
725 730 735
Glu Ala Ala Pro Leu Gly Ile Asp Val His Gly Ala Leu Val Ala Ile
740 745 750
Ser His Ser Pro Val Gly Ile Asp Ala Val Arg Val Glu Arg Asp Ser
755 760 765
Gln Arg Pro Gly Ile Gln Pro Lys Leu Gln Ser Leu Arg Ser Ile Tyr
770 775 780
Gln Gly Lys Lys Ile Ile Val Gly Arg Asp Lys Leu Asp Ala Val Lys
785 790 795 800
Gly Val Val Gln Lys Leu Arg Ala Phe Glu Lys Leu Leu Gln Asp Tyr
805 810 815
Pro Glu Trp Ile Gly Asn Val Val Thr Ser Pro Ala Leu Thr Asp Ser
820 825 830
Pro Lys Leu Glu Arg Gln Val Ser Glu Leu Val Ala His Ile Asn Gly
835 840 845
Glu Tyr Gly Ser Leu Asp Phe Ile Pro Val His His Tyr His Gln Thr
850 855 860
Ile Lys Lys Asp Glu Phe Tyr Ala Leu Leu Ser Val Ala Asp Leu Ala
865 870 875 880
Leu Ile Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Thr Thr Ser Met Glu Phe
885 890 895
Val Ile Cys Gln Gln Arg Thr Gly Lys Ser Pro Ile Val Leu Ser Glu
900 905 910
Phe Met Gly Thr Ser His His Met Ser Gln Asp Val Ala Ala Ser Ile
915 920 925
His Arg Gly Leu Thr Met Ser Ile Glu Asp Lys Glu Thr Arg Gln Ser
930 935 940
Ala Leu Tyr Lys Ile Val Thr Thr Tyr Thr Ser Tyr Ser Trp Ala Ser
945 950 955 960
Met Leu Val Lys Lys Leu Leu Gln Gln Val Gly Ala Glu Asn Thr Ala
965 970 975
His Asn Thr Pro Val Leu Asp Arg Ser Leu Met Thr Ser Met Tyr Glu
980 985 990
Lys Ala Ser Lys Arg Leu Met Leu Phe Asp Tyr Asp Gly Thr Leu Thr
995 1000 1005
Pro Ile Val Lys Thr Pro Ser Ala Ala Val Pro Ser Lys Asp Thr Leu
1010 1015 1020
Arg Ala Leu Glu Lys Leu Ser Ser Asp Pro Lys Asn Val Val Tyr Ile
1025 1030 1035 1040
Ile Ser Gly Arg Asp Gly Gly Phe Leu Asp Gln His Leu Gly His Phe
1045 1050 1055
Lys Gln Val Gly Phe Ser Ala Glu His Gly Cys Phe Val Arg Glu Pro
1060 1065 1070
Gly Gln Ser Glu Trp Asn Asn Leu Ala Ala Ser Leu Asp Met Ser Trp
1075 1080 1085
Met Pro Glu Val His Glu Ile Phe Lys Tyr Tyr Thr Glu Arg Thr Thr
1090 1095 1100
Gly Ser Phe Val Glu Leu Lys Lys Ser Ser Ile Thr Trp His Tyr Arg
1105 1110 1115 1120
Ala Ser Asp Pro Asp Trp Gly Gly Pro Pro Pro Pro Arg Leu Val Pro
1125 1130 1135
Cys Asn Val Val His Ser Phe Leu Ser Lys Thr Ile Gly Leu Ala Ala
1140 1145 1150
Pro Leu Phe Ser Met Gly Thr Gln Thr Thr Leu Pro Leu Ile Pro Thr
1155 1160 1165
Thr Phe Thr Phe Val Ser His Lys Phe Ala Phe Val Val Leu Val Gly
1170 1175 1180
Lys Lys Asn Leu Glu Val Arg Pro Ile Ala Ile Asn Lys Gly Glu Ile
1185 1190 1195 1200
Val Lys Arg Leu Met Tyr Ala Asn Pro Asp Ala Glu Phe Val Phe Cys
1205 1210 1215
Ala Gly Asp Asp Lys Thr Asp Glu Asp Met Phe Arg Ala Leu Gly Ser
1220 1225 1230
Leu Phe Pro Ser Gly Val Thr Thr Ala Thr Met Glu Pro Pro Leu Ser
1235 1240 1245
Ala Ala Leu Thr Ala Gly Val Glu Gln Ser Ser Leu Lys Pro Val Gln
1250 1255 1260
Leu Ala Met Pro Pro Asn Gly Ile Phe Ser Thr Thr Val Gly Ala Ser
1265 1270 1275 1280
Ser Lys Lys Thr Leu Ala Arg Trp His Val Thr Ser Pro Tyr Ala Ile
1285 1290 1295
Val Glu Asn Met Leu Ser Leu Val Gly Glu Thr Pro Thr Ala Ala Glu
1300 1305 1310
Glu Pro Gly Glu Pro Asp Ser Lys Ala Asn Leu
1315 1320
<210> 6
<211> 310
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
acgctgctga tgacggaaac ggtaatccat cgattacatt agtcgaggcg ccctaccaga 60
ataggcgcat atataaggtc taagcattcg gtgttacaac tccaagacca cgatcgagag 120
aacttactct agcgatggac gacttttccg catcgacaca gaatcggaag cgcgagcccg 180
ctgggccgga atcgctcgaa gatattcgcg cagccattgc aaacatcgag gccgactacc 240
gggcgaaggg tgtcactcta agtggccgca tcgtgcacgc atgtcactac ttacccatcg 300
ttagccgtct 320
<210> 7
<211> 310
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
acgcugcuga ugacggaaac gguaauccau cgauuacauu agucgaggcg cccuaccaga 60
auaggcgcau auauaagguc uaagcauucg guguuacaac uccaagacca cgaucgagag 120
aacuuacucu agcgauggac gacuuuuccg caucgacaca gaaucggaag cgcgagcccg 180
cugggccgga aucgcucgaa gauauucgcg cagccauugc aaacaucgag gccgacuacc 240
gggcgaaggg ugucacucua aguggccgca ucgugcacgc augucacuac uuacccaucg 300
uuagccgucu 320
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
acgctgctga tgacggaa 18
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
agacggctaa cgatgggtaa 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
caccttggtc acttcaagca 20
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ccacctatgc aagggctgt 19
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ggtcggcaaa gtcataccat 20
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tctgcgtcct tcttggagat a 21
<210> 13
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
taatacgact cactatagga cgctgctgat gacggaa 37
<210> 14
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
taatacgact cactatagga gacggctaac gatgggtaa 39
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
ccggaattca cgctgctgat gacggaa 27
<210> 16
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cgcggatcca gacggctaac gatgggtaa 29
<210> 17
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
aattcactgg gagatgatac gctg 24
<210> 18
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
cctatggtaa gacaatgagt cggc 24
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gccttttcta ccttaatttg gcag 24
<210> 20
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gtgtgtaaat taagtagaca gcaaatg 27
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
tggtgtcctc aagcctggta t 21
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
acgcttgaga tccttaaccg c 21

Claims (10)

1.一种水稻纹枯病菌致病相关基因，其特征在于，其全长cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种水稻纹枯病菌致病相关基因，其特征在于，其全长DNA序列如SEQ ID NO：2所示。
3.一种水稻纹枯病菌致病相关基因，其特征在于，其编码序列如SEQ ID NO：3所示。
4.一种水稻纹枯病菌致病相关基因编码蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO：4所示。
5.权利要求1所述水稻纹枯病菌致病相关基因的沉默靶基因片段Rstpp，其特征在于，其DNA序列如SEQ ID NO：5所示。
6.权利要求1～3任一所述水稻纹枯病菌致病相关基因或权利要求5所述沉默靶基因片段Rstpp在防治水稻纹枯病菌或制备水稻纹枯病菌防治产品中的应用。
7.权利要求1～3任一所述水稻纹枯病菌致病相关基因或权利要求5所述沉默靶基因片段Rstpp在构建抗水稻纹枯病菌转基因植物中的应用。
8.一种水稻纹枯病菌防治制剂，其特征在于，含有可抑制权利要求1～3任一所述水稻纹枯病菌致病相关基因表达的物质。
9.根据权利要求8所述水稻纹枯病菌防治制剂，其特征在于，含有可靶向权利要求6所述沉默靶基因片段Rstpp从而抑制权利要求1～3任一所述水稻纹枯病菌致病相关基因表达的物质；所述物质为dsRNA或包含该dsRNA的重组载体或重组菌。
10.根据要求9所述的水稻纹枯病菌防治制剂，其特征在于，所述dsRNA的核酸序列如SEQ ID NO：6所示。
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