CN116949213A - 犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 - Google Patents
犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116949213A CN116949213A CN202310745908.4A CN202310745908A CN116949213A CN 116949213 A CN116949213 A CN 116949213A CN 202310745908 A CN202310745908 A CN 202310745908A CN 116949213 A CN116949213 A CN 116949213A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- channel
- canine
- detection
- distemper virus
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 167
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 91
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 title claims abstract description 72
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 54
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 14
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims description 8
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- OBRMNDMBJQTZHV-UHFFFAOYSA-N cresol red Chemical compound C1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(C)C(O)=CC=2)=C1 OBRMNDMBJQTZHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 3
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 2
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 2
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 2
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 1
- 230000005101 cell tropism Effects 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020470 nervous system symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法。本发明提供的一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列设计的；第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列设计的；第三组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列设计的。上述引物探针组合物可以对待测样本的采集、运输和提取过程中进行监控，避免检测结果的假阴性和假阳性，从而提高检测的准确性、特异性和灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法。
背景技术
犬瘟热是一种在世界范围内发生于犬类的急性、高接触性传染病，其病原体是犬瘟热病毒(caninedistempervirus，CDV)，该病毒于1905年首次报道，其天然宿主包括大多数食肉动物。该病传染性强，易发生继发性细菌和其他病毒混合感染或继发感染，发病率高达80％。该病尚无特定有效药物治疗，已成为危害养犬业的主要疾病之一。CDV属于副粘病毒科麻疹属，是一种负链单链非分段RNA病毒，全基因组长度为15616bp。病毒的蛋白质主要有核衣壳蛋白N、磷蛋白P、基质膜蛋白M、融合蛋白F、附着或血凝蛋白H和大细胞L，其中H蛋白是CDV与细胞受体结合的蛋白,并决定着病毒感染的细胞嗜性，H蛋白基因常作为诊断检测用的靶基因。
犬腺病毒根据血凝结果和中和试验的不同，可分为两种常见的亚型CadV-I和CadV-II，CadV-I感染常导致犬传染性肝炎(ICH)的出现，主要表现为神经系统症状、黄疸、坏死性肝炎、弥漫性血管内凝血和血管炎，也可导致非化脓性脑炎和肾小球肾炎；CadV-II可引起传染性喉气管炎和肠炎，感染CadV-II的犬通常表现为持续高热、咳嗽等。临床表现为扁桃体炎、喉气管炎、肺炎、呕吐和腹泻等，是引起犬病毒性肠炎的主要病原体之一。
目前犬瘟热病毒和犬腺病毒II型在临床上混合感染严重，单靠常规的临床和实验室诊断技术难以快速、准确的作出鉴别诊断，急需要建立新的快速、简便、特异的诊断技术，以提供临床或实验室使用。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法。
为此，本发明提供了如下的技术方案：
一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列设计的；
第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列设计的；
第三组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列设计的。
可选的，第一组引物和探针，包括：正向引物CDV-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物CDV-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或探针CDV-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
第二组引物和探针，包括：正向引物CadV-II-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物CadV-II-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；和/或探针CadV-II-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
第三组引物和探针，包括：正向引物CRPP-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；反向引物CRPP-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；和/或探针CRPP-P，其核苷酸序列如SEQID NO.9所示。
可选的，所述探针FCoV-P、探针FPV-P、探针CRPP-P的5’端标记有荧光基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述探针FCoV-P、探针FPV-P、探针CRPP-P的荧光基团不同。
可选的，所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的至少1种；
和/或，所述荧光淬灭基团选自BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或MGB中的至少1种。
一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，包括所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物。
可选的，还包括DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、ROX染料、PCR增强剂、PCR稳定剂、PCR缓冲液、样本采集液、阴性质控品或阳性质控品。
可选的，样本采集液包括碳酸氢钠浓度范围为5 -7g/L、碳酸钠浓度范围为10-14g/L、吐温-20浓度范围为0.01％-0.05％(v/v)、甲酚红浓度范围为0.01％-0.05g/100mL、盐酸胍范围为3M-5M，余量为无菌无酶水；采用上述样本采集液处理待测样本，可以省略核酸提取步骤；
和/或，PCR缓冲液为含Tris为10mM-500mM、氯化盐为10mM-500mM、(NH4)2SO4为10mM-500mM、甘油为1v/v％-50v/v％、BSA为0.001mg/mL-1mg/mL、Tween 20为0.1v/v％-10v/v％、二硫苏糖醇为1mM-100mM、甜菜碱为0.1M-3M、DMSO为0.1v/v％-10v/v％，pH值为7.5-9.5；
和/或，阴性质控品为无菌无酶水；
和/或，阳性质控品为分别包含如SEQ ID NO.10～12所示的核苷酸序列的混合阳性参考质粒。
包括PCR扩增反应体系，以25μL为计：
PCR混合液，体积为12.5μL，含DNA聚合酶，酶活为0.5-1U；dNTP，每种碱基的浓度范围为200-300μM；Mg2+，浓度范围为1.5-2mM；PCR缓冲液，pH值为7.5-9.5；
犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，体积为7.5μL，每条引物浓度为0.1-0.5μM，每条探针的浓度为0.05-0.25μM；
待测样本，体积为5μL。
所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物或所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒在制备犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测产品中的用途。
一种非疾病诊断的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测方法，包括如下步骤：
以待测样本为模板，利用所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物或所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，配制PCR扩增反应体系，进行荧光定量PCR检测。
可选的，将采集的样本加入样本采集液中处理，得到所述待测样本，可选的，处理时间为0.5-3分钟；
可选的，所述荧光定量PCR检测中，PCR扩增程序为：反转录，50℃保持300秒；预变性，95℃保持30秒；95℃变性5秒，60℃退火、延伸30秒，45个循环；
和/或，所述荧光定量PCR检测中，包括定性或定量检测方法；
所述定性方法为：第一组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为A通道；第二组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为C通道；第三组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为B通道；判定方法为：
若待测样本在A通道中Ct值≤40，B通道中Ct值＜40，C通道中Ct值≤40，则待测样本为犬瘟热病毒和犬腺病毒II型双阳性；
若待测样本在A通道中无Ct值或Ct值＞40，B通道中Ct值＜40，C通道中无Ct值或Ct值＞40，则待测样本为犬瘟热病毒和犬腺病毒II型双阴性；
若待测样本在A通道中Ct值≤40，B通道中Ct值＜40，C通道中无Ct值或Ct值＞40，则待测样本为犬瘟热病毒阳性，犬腺病毒II型阴性；
若待测样本在A通道中无Ct值或Ct值＞40，B通道中Ct值＜40，C通道中Ct值≤40，则待测样本为犬瘟热病毒阴性，犬腺病毒II型阳性；
若待测样本在A通道、B通道和C通道中均无Ct值，则进行重新测试；
若待测样本在A通道、B通道和C通道中任意一个的Ct值为35-40范围内时，则进行重复测试，若重复测试后，A通道、B通道和/或C通道的Ct值为35-40范围内，且具有明显指数增长期，则判定A通道、B通道和/或C通道为阳性；
所述定量检测方法为
建立标准曲线：将分别包含如SEQ ID NO.10～11所示的核苷酸序列的各标准品等浓度混合，将得到的混合标准品稀释至不同的浓度；以不同浓度的混合标准品作为模板，进行荧光定量PCR检测，检测结束后，以混合标准品中各标准品的浓度为横坐标，其相应的Ct值为纵坐标，绘制标准曲线；
将待测样本的Ct值代入对应的标准曲线中，得到待测样本的定量结果。
本发明技术方案，具有如下优点：
1、本发明提供的一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列设计的；第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列设计的；第三组引物和探针，为基于如SEQ IDNO.12所示的核苷酸序列设计的。上述如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列为犬瘟热病毒的保守序列，基于该序列设计的引物和探针可以特异性检测犬瘟热病毒；上述如SEQ IDNO.11所示的核苷酸序列为犬腺病毒II型的保守序列，基于该序列设计的引物和探针可以特异性检测犬腺病毒II型；上述如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列为犬源性样本管家基因CRPP的保守序列，将该序列作为内源性内标，基于该序列设计的引物和探针进行检测，可以通过内标对待测样本的采集、运输和提取过程中进行监控，避免检测结果的假阴性和假阳性，从而提高检测的准确性、特异性和灵敏度。
2、本发明提供了一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，第一组引物和探针，包括：正向引物CDV-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物CDV-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；探针CDV-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；第二组引物和探针，包括：正向引物CadV-II-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物CadV-II-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；探针CadV-II-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；第三组引物和探针，包括：正向引物CRPP-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；反向引物CRPP-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；探针CRPP-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；上述特别设计的引物探针组合物中，各引物之间无干扰，可以在同一个反应体系内进行多重PCR检测多个靶标，达到节省实验成本的目的，且具有高特异性、灵敏度和准确度。
3、本发明提供了一种非疾病诊断的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测方法，以待测样本为模板，利用所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物或所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，配制PCR扩增反应体系，进行荧光定量PCR检测；上述检测方法的原理为：设计的探针的5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团。正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基团淬灭而不能发出荧光，PCR扩增时，引物与探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间。当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5'外切酶活性，将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此，根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实验例1中犬瘟热病毒的标准曲线；
图2是本发明实验例1中犬腺病毒II型的标准曲线；
图3是本发明实验例1中不同浓度的犬瘟热病毒的扩增曲线；
图4是本发明实验例1中不同浓度的犬腺病毒II型的扩增曲线；
图5是本发明实验例2中临床确诊为犬腺病毒II型和犬瘟热病毒阳性的样本核酸的检测结果。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
下述实施例中：
包含CDV基因(包含SEQ ID NO.10)的阳性参考质粒是由通用生物(安徽)股份有限公司提供；
包含CadV-II基因(包含SEQ ID NO.11)的阳性参考质粒是由通用生物(安徽)股份有限公司提供；
包含CRPP基因(包含SEQ ID NO.12)的阳性参考质粒是由通用生物(安徽)股份有限公司提供；
下述实施例中涉及的引物和探针由通用生物(安徽)股份有限公司合成。
实施例1
本实施例提供了一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，包括：
第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列设计的如下：正向引物CDV-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物CDV-R，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；探针CDV-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；
第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列设计的如下：正向引物CadV-II-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物CadV-II-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；探针CadV-II-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，其5’端标记有荧光基团CY5，3’端标记有荧光淬灭基团MGB；
第三组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列设计如下：正向引物CRPP-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；反向引物CRPP-R，其核苷酸序列如SEQ IDNO.8所示；探针CRPP-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，其5’端标记有荧光基团VIC，3’端标记有荧光淬灭基团MGB。
实施例2
本实施例提供了一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，包括利用实施例1中的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，所述试剂盒中包括独立包装的试剂，见下表：
表1
实施例3
本实施例提供了一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，包括利用实施例1中的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，所述试剂盒中包括独立包装的试剂，见下表：
表2
实施例4
本实施例提供了一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，包括利用实施例1中的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，所述试剂盒中包括独立包装的试剂，见下表：
表3
实施例5
本实施例提供了一种非疾病诊断的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测方法，包括利用实施例2中的试剂盒，所述步骤如下：
样本类型：包括口腔拭子、粪便、肛拭子和其它可疑标本。
样本采集：按照《微生物标本采集手册》要求进行样本采集；
样本保存：标本应在收集后一小时内冷藏(2至8℃或冷冻(-20℃或更低)，并尽快进行检测。能在一周以内检测的标本可置于4℃保存；无法检测的标本，短期可在-20℃中保存，长期应置于-70℃以下保存(收集后＞60天)。全血分离血浆前冷藏(2至8℃),然后-20℃或以下保存。应设立专库或专柜单独保存标本。标本应避免反复冻融。
样本处理：使用试剂盒自带样本采集液，将样本试子浸入样本处理液(5μL)轻柔转动试子5次，作用约1分钟，得到待测样本。阳性质控品和阴性质控品不参与提取，直接作为模板使用。
核酸检测：实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测犬腺病毒II型和犬瘟热病毒核酸(PCR实验室进行)。
(1)反应体系的准备：每反应管中加入主反应液和引物探针液，按照比例配制反应混合液：每次PCR反应，除了检测样本外，应加阴阳性质控品；所有样本，包括质控品，应设平行的反应管。
表4
(2)加样：每反应管中加入待测样本或质控品各5μL后，盖紧管盖，置于荧光定量PCR检测仪上。
(3)扩增参数设定：
表5
(4)仪器检测通道选择:使用荧光定量PCR检测仪，选择FAM、VIC、CY5三个通道进行实时荧光信号的采集，收集设在60℃(具体设置方法请参照各仪器使用说明书)。
(5)本发明反应系统的质量控制，如下表所示:
表6
定性检测结果判定方法，如下表所示：
表7
且，若待测样本在A通道、B通道和C通道中任意一个的Ct值为35-40范围内时，则进行重复测试，若重复测试后，A通道、B通道和/或C通道的Ct值为35-40范围内，且具有明显指数增长期，则判定A通道、B通道和/或C通道为阳性(即认定为A通道Ct值≤40、B通道Ct值＜40和/或C通道Ct值≤40)，然后继续按照上表7进行判断；
定量检测方法为：
建立标准曲线：将分别包含如SEQ ID NO.10～11所示的核苷酸序列的各标准品(前述阳性参考质粒)等浓度混合，将得到的混合标准品稀释至不同的浓度；以不同浓度的混合标准品作为模板，进行荧光定量PCR检测，检测结束后，以混合标准品中各标准品的拷贝数的对数值(log10)为横坐标，其相应的Ct值为纵坐标，绘制标准曲线；
将待测样本的Ct值代入对应的标准曲线中，得到待测样本的定量结果。
实施例6
本实施例与实施例5的区别在于，利用实施例3的试剂盒进行检测。
实施例7
本实施例与实施例5的区别在于，利用实施例4的试剂盒进行检测。
实验例1
使用犬腺病毒II型和犬瘟热病毒的混合阳性参考质粒，将质粒用去RNA酶水(RNase-Free H2O)进行10倍梯度稀释，混合阳性参考质粒溶液中每种质粒的浓度分别为1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101、1×100copies/mL，采用实施例5中的方法进行检测，建立的标准曲线，犬瘟热病毒的标准曲线如图1所示，标准曲线方程为y＝-3.2564x+39.716，R2＝0.9932，犬腺病毒II型的标准曲线如图2所示，标准曲线方程为y＝-3.187x+36.14，R2＝0.9967。上述标准曲线的相关系数R2均大于0.99，说明本发明的检测方法的检测结果稳定。
将犬腺病毒II型和犬瘟热病毒均为阳性临床样本核酸采用无菌无酶水分别稀释到浓度依次为1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101、1×100、1×10-0.5copies/μL，采用本发明实施例5的方法检测结果如图3，图4所示，检测均扩增出S型曲线，犬腺病毒II型和犬瘟热病毒最低的检测限为1×100copies/μL。
实验例2
将临床确诊为犬腺病毒II型和犬瘟热病毒阳性的核酸样本，采用本发明实施例5进行检测，检测结果如图5所示，检测结果和临床结果一致，说明本发明的试剂盒的准确性较好。
实验例3
应用上述实施例5方法和常规PCR/RT-PCR方法(使用PowerPol 2XPCR Mix试剂盒，由武汉爱博泰克生物科技有限公司提供，引物和探针采用本发明的SEQ ID NO.1-6，不使用本发明内标的引物和探针SEQ IDNO.7-9)对犬呼吸道疑似患病咽拭子样本35份进行检测，检测结果如下表所示，该方法对CDV的检出率为48.6％，对CAdV-2的检出率为25.7％，对CDV与CAV-2双阳性的检出率为8.5％，阳性的样品经测序及核酸序列BLAST分析与本发明检测结果一致。该方法相比较常规PCR/RT-PCR检出率更高，假阳性率和假阴性率低。
表8
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，其特征在于，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列设计的；
第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列设计的；
第三组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列设计的。
2.根据权利要求1所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，其特征在于，
第一组引物和探针，包括：正向引物CDV-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物CDV-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或探针CDV-P，其核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；
第二组引物和探针，包括：正向引物CadV-II-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物CadV-II-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；和/或探针CadV-II-P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
第三组引物和探针，包括：正向引物CRPP-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；反向引物CRPP-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；和/或探针CRPP-P，其核苷酸序列如SEQ IDNO.9所示。
3.根据权利要求2所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，其特征在于，所述探针FCoV-P、探针FPV-P、探针CRPP-P的5’端标记有荧光基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述探针FCoV-P、探针FPV-P、探针CRPP-P的荧光基团不同；
可选的，所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的至少1种；
可选的，所述荧光淬灭基团选自BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或MGB中的至少1种。
4.一种犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，其特征在于，还包括DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、ROX染料、PCR增强剂、PCR稳定剂、PCR缓冲液、样本采集液、阴性质控品或阳性质控品。
6.根据权利要求5所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，其特征在于，
样本采集液包括碳酸氢钠浓度范围为5-7g/L、碳酸钠浓度范围为10-14g/L、吐温-20浓度范围为0.01％-0.05％(v/v)、甲酚红浓度范围为0.01-0.05g/100ml、盐酸胍范围为3M-5M，余量为无菌无酶水；
和/或，PCR缓冲液为含Tris为10mM-500mM、氯化盐为10mM-500mM、(NH4)2SO4为10mM-500mM、甘油为1v/v％-50v/v％、BSA为0.001mg/mL-1mg/mL、Tween 20为0.1v/v％-10v/v％、二硫苏糖醇为1mM-100mM、甜菜碱为0.1M-3M、DMSO为0.1v/v％-10v/v％，pH值为7.5-9.5；
和/或，阴性质控品为无菌无酶水；
和/或，阳性质控品为分别包含如SEQ ID NO.10～12所示的核苷酸序列的混合阳性参考质粒。
7.根据权利要求5或6所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，其特征在于，包括PCR扩增反应体系，以25μL为计：
PCR混合液，体积为12.5μL，含DNA聚合酶，酶活为0.5-1U；dNTP，每种碱基的浓度范围为200-300μM；Mg2+，浓度范围为1.5-2mM；PCR缓冲液，pH值为7.5-9.5；
犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物，体积为7.5μL，每条引物浓度为0.1-0.5μM，每条探针的浓度为0.05-0.25μM；
待测样本，体积为5μL。
8.权利要求1-3任一项所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物或权利要求4-7任一项所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒在制备犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测产品中的用途。
9.一种非疾病诊断的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
以待测样本为模板，利用权利要求1-4任一项所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测引物探针组合物或权利要求5-8任一项所述的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测试剂盒，配制PCR扩增反应体系，进行荧光定量PCR检测。
10.根据权利要求9所述的非疾病诊断的犬瘟热病毒和犬腺病毒II型检测方法，其特征在于，
将采集的样本加入样本采集液中处理，得到所述待测样本；
和/或，所述荧光定量PCR检测中，PCR扩增程序为：反转录，50℃保持300秒；预变性，95℃保持30秒；95℃变性5秒，60℃退火、延伸30秒，45个循环；
和/或，所述荧光定量PCR检测中，包括定性或定量检测方法；
所述定性方法为：第一组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为A通道；第二组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为C通道；第三组引物和探针中的探针的荧光基团所对应的通道为B通道；判定方法为：
若待测样本在A通道中Ct值≤40，B通道中Ct值＜40，C通道中Ct值≤40，则待测样本为犬瘟热病毒和犬腺病毒II型双阳性；
若待测样本在A通道中无Ct值或Ct值＞40，B通道中Ct值＜40，C通道中无Ct值或Ct值＞40，则待测样本为犬瘟热病毒和犬腺病毒II型双阴性；
若待测样本在A通道中Ct值≤40，B通道中Ct值＜40，C通道中无Ct值或Ct值＞40，则待测样本为犬瘟热病毒阳性，犬腺病毒II型阴性；
若待测样本在A通道中无Ct值或Ct值＞40，B通道中Ct值＜40，C通道中Ct值≤40，则待测样本为犬瘟热病毒阴性，犬腺病毒II型阳性；
若待测样本在A通道、B通道和C通道中均无Ct值，则进行重新测试；
且，若待测样本在A通道、B通道和C通道中任意一个的Ct值为35-40范围内时，则进行重复测试，若重复测试后，A通道、B通道和/或C通道的Ct值为35-40范围内，且具有明显指数增长期，则判定A通道、B通道和/或C通道为阳性；
所述定量检测方法为
建立标准曲线：将分别包含如SEQ ID NO.10～11所示的核苷酸序列的各标准品等浓度混合，将得到的混合标准品稀释至不同的浓度；以不同浓度的混合标准品作为模板，进行荧光定量PCR检测，检测结束后，以混合标准品中各标准品的浓度为横坐标，其相应的Ct值为纵坐标，绘制标准曲线；
将待测样本的Ct值代入对应的标准曲线中，得到待测样本的定量结果。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310745908.4A CN116949213A (zh) | 2023-06-21 | 2023-06-21 | 犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310745908.4A CN116949213A (zh) | 2023-06-21 | 2023-06-21 | 犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116949213A true CN116949213A (zh) | 2023-10-27 |
Family
ID=88461087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310745908.4A Pending CN116949213A (zh) | 2023-06-21 | 2023-06-21 | 犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116949213A (zh) |
-
2023
- 2023-06-21 CN CN202310745908.4A patent/CN116949213A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111020064B (zh) | 新型冠状病毒ORF1ab基因核酸检测试剂盒 | |
| CN110273027B (zh) | 诺如病毒gⅰ、gⅱ和gⅳ型核酸分型检测试剂盒及检测方法 | |
| CN112063756A (zh) | 多重检测呼吸道病毒核酸的方法及试剂盒 | |
| CN113943830A (zh) | 一种用于同时检测猫细小病毒、猫疱疹病毒1型和猫杯状病毒的引物探针组及试剂盒 | |
| CN111286559B (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| CN113930547B (zh) | 猪流行性腹泻病毒n基因的rt-raa荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法 | |
| CN112538550B (zh) | 基于RT-RPA和CRISPR/Cas的DHAV-1和DHAV-3检测体系及应用 | |
| CN112831597A (zh) | 用于非洲猪瘟病毒基因鉴别检验的实时荧光pcr扩增引物对、探针引物、及制备的试剂盒 | |
| CN113652505A (zh) | 检测新型冠状病毒及其voc-202012/01突变株的方法和试剂盒 | |
| CN114634996A (zh) | 用于检测牛呼吸道疾病的引物探针组合、试剂盒及其应用 | |
| CN111471800B (zh) | 检测新型冠状病毒的试剂盒及其扩增引物组合物 | |
| CN116814859A (zh) | 鉴别非洲猪瘟病毒基因ⅰ型和ⅱ型的引物探针组合物、试剂盒及方法 | |
| CN111926110B (zh) | 非洲猪瘟病毒实时荧光pcr扩增引物对、探针引物、及制备的试剂盒 | |
| CN111378787A (zh) | 一种新型冠状病毒的检测方法 | |
| CN111647686A (zh) | 肠道病毒ev71、ca16、ev通用型核酸检测试剂 | |
| CN116949213A (zh) | 犬瘟热病毒和犬腺病毒ii型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 | |
| CN112266978A (zh) | 引物探针组合、检测试剂盒及其应用 | |
| CN111500777A (zh) | 一种基于荧光rt-pcr方法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒 | |
| CN116790817A (zh) | 犬冠状病毒和犬细小病毒检测引物探针组合物、试剂盒以及检测方法 | |
| CN117551817B (zh) | 一种检测甲型流感病毒的靶基因、引物探针组合以及试剂盒和应用 | |
| CN116949214A (zh) | 一种猫冠状病毒和猫细小病毒检测引物探针组合物、试剂盒和检测方法 | |
| CN114317835B (zh) | 一种水禽细小病毒、鸭肠炎病毒及鹅星状病毒的多重pcr检测引物组、试剂盒和检测方法 | |
| CN110592267A (zh) | 鲤春病毒血症病毒（svcv）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| CN116855636A (zh) | 一种猫冠状病毒检测引物探针组合物、试剂盒及方法 | |
| CN116200546B (zh) | PRCV、PRRSV、SIV和PRV的多重RT-qPCR试剂盒及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |