CN116948846A - 一种胶质菌分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种胶质菌分离纯化方法，包括以下步骤：将采集到的胶质菌样本进行清洗，灭菌处理；将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本；夹取并去除子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块，将子实体接种块接种至第一培养基上；对第一培养基内的部分营养基质进行切割去除，露出培养皿的底部，以形成培养孔；将子实体接种块生长至培养孔内的菌丝样本取出，并转接至第二培养基上，以培养得到纯化菌丝。通过在第一培养基内切割部分营养基质形成培养孔，在培养孔内采集菌丝样本，可以有效减少由于胶质菌子实体因富含胶质，容易吸附细菌、酵母菌所带来的污染，提高纯化成功率。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌技术领域，特别涉及一种胶质菌分离纯化方法。
背景技术
子实体富含丰富胶质的真菌称为胶质菌。比如黑木耳，毛木耳。
现有技术当中，目前黑木耳和毛木耳分离方法主要有孢子弹射分离法、耳木分离法、子实体组织分离法。
孢子是经过核配、遗传重组之后的有性繁殖体。成熟的子实体才能弹射孢子，但孢子不一定含有母本的优良性状，故孢子弹射法不易保持母本优良性状。耳木分离法需要从野生或者人工栽培的耳木中选取一小段耳木，削去树皮，用打孔器从断面的韧皮部冲入耳木内，取出耳木之后，将其横锯成薄片，此方法操作步骤繁琐，一是野外携带耳木不方便，二是野生木耳多长在木质腐朽的耳木上，不易分离菌丝；子实体组织分离法最能保持母本优良性状。胶质菌子实体富含丰富胶质，有很强的吸附能力，常规方法为：用无菌小刀、手术剪将子实体切成或剪成小块，然后再挑到培养基上。这个操作的结果是胶质菌丝黏在小刀或者剪刀上很难挑取下来，同时粘在小刀或者手术剪上的胶质菌丝很难处理掉，容易染菌。另一方面，胶质菌子实体因富含胶质，容易吸附细菌、酵母菌等造成污染，纯化成功率较低。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种胶质菌分离纯化方法，旨在解决现有技术中，胶质菌子实体易被细菌、酵母菌等污染，纯化成功率较低的技术问题。
为了实现上述目的，本发明是通过如下技术方案来实现的：一种胶质菌分离纯化方法，包括以下步骤：步骤（1），将采集到的胶质菌样本进行清洗，灭菌处理；步骤（2），将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本，夹取并去除所述子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块；步骤（3），将所述子实体接种块接种至第一培养基上，其中，所述第一培养基包括培养皿及设于所述培养皿内的营养基质；步骤（4），对所述第一培养基内的部分营养基质进行切割去除，露出所述培养皿的底部，以形成培养孔，所述培养孔靠近所述子实体接种块设置；步骤（5），将所述子实体接种块生长至所述培养孔内的菌丝样本取出，并转接至第二培养基上，以培养得到纯化菌丝。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（1）具体包括：
在无菌环境下，在玻璃皿内装入无菌水，并将胶质菌样本置入所述玻璃皿内进行清洗，采用无菌棉对完成清洗后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成清洗，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次，以对所述胶质菌样本进行高温灭菌处理；
将完成高温灭菌处理后的胶质菌样本置入无菌水内浸泡5-8分钟，并采用无菌棉对完成浸泡后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成浸泡，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（2）中，将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本的步骤具体包括：
将完成清洗，灭菌处理的所述胶质菌样本置入超净工作台上，并使所述胶质菌样本的腹面朝上；
将内管径为0.4-0.6cm的第一管体贴在所述胶质菌样本上，向下按压并旋转，以切割得到与所述第一管体对应大小的子实体样本。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（2）中，夹取并去除所述子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块的步骤具体包括：
将镊子的尖头部位在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁边冷却10-15秒，夹取并去除所述第一管体内的子实体样本切割后剥离下来的背面菌丝块，剩下的子实体为子实体接种块。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（3）中，将所述子实体接种块接种至第一培养基上的步骤具体包括：
将所述子实体接种块接种至所述培养皿距离圆心2/3半径处，其中，所述子实体接种块的数量为三个，三个所述子实体接种块间隔式均匀设于所述第一培养基上。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（4）具体包括：
将内管径为0.4-0.6cm的第二管体设于所述子实体接种块靠近所述培养皿的圆心的一侧，向下按压并旋转，以切割并去除部分所述营养基质，形成与所述第二管体对应大小的培养孔。
根据上述技术方案的一方面，所述步骤（5）具体包括：
在将所述子实体接种块接种至第一培养基20小时之后，每隔5小时观察一次，直至观察到所述子实体接种块生长出菌丝样本并延伸至所述培养孔内；
在超净工作台内用无菌的注射器针头将菌丝挑取转接至第二培养基上，40小时后观察，以培养得到菌丝洁白的纯化菌丝。
根据上述技术方案的一方面，所述第一培养基或所述第二培养基包括PDA培养基，
所述PDA培养基的PH值为7，所述PDA培养基包括按照重量份数计的如下原料：马铃薯180-220份、琼脂粉16-20份、葡萄糖16-20份。
根据上述技术方案的一方面，所述第一培养基或所述第二培养基包括松针培养基，
所述松针培养基的PH值为6-6.5，所述松针培养基包括按照重量份数计的如下原料：鲜松针180-220份、高锰酸钾0.5-1.5份、葡萄糖8-12份、蛋白胨4-6份、硫酸镁0.4-0.6份、琼脂粉16-20份。
根据上述技术方案的一方面，所述第一管体为规格为200ul的移液器枪头。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：通常情况下细菌和酵母菌只能在培养基的表面形成菌落，在培养基内不形成菌丝，通过在第一培养基内切割部分营养基质形成培养孔，在培养孔内采集菌丝样本，可以有效减少由于胶质菌子实体因富含胶质，容易吸附细菌以及酵母菌等带来的污染，提高纯化成功率，同时通过采用管体对胶质菌进行切割分离，相对于无菌小刀、手术剪等工具，简化了操作流程，提高了效率且不易染菌，同时采用管体对胶质菌进行切割，背面或者腹面表皮边缘产生断口，容易去除，以便弃除背面菌丝块，获得只剩腹面以及污染少的中间层菌丝，提高了分离效率以及纯化成功率，且每次取样大小一致，增加了实验的严谨性。
附图说明
本发明的上述与/或附加的方面与优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显与容易理解，其中：
图1为本发明第一实施例中胶质菌分离纯化方法的流程示意图；
图2为本发明第一实施例中子实体接种块接种至PDA培养基的示意图；
图3为本发明第一实施例中子实体接种块接种至松针培养基的示意图；
图4为本发明第一实施例中菌丝样本生长并延伸至培养孔的示意图；
图5为本发明第二实施例中子实体接种块接种至PDA培养基的示意图；
如下具体实施方式将结合上述附图进一步说明本发明。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的多个实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本发明的公开内容更加透彻全面。
需要说明的是，当元件被称为“固设于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
请参阅图1至图4，所示为本发明第一实施例中的胶质菌分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤（1），将采集到的胶质菌样本进行清洗，灭菌处理。
步骤（2），将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本，夹取并去除所述子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块。
步骤（3），将所述子实体接种块接种至第一培养基上，其中，所述第一培养基包括培养皿及设于所述培养皿内的营养基质。
步骤（4），对所述第一培养基内的部分营养基质进行切割去除，露出所述培养皿的底部，以形成培养孔，所述培养孔靠近所述子实体接种块设置。
步骤（5），将所述子实体接种块生长至所述培养孔内的菌丝样本取出，并转接至第二培养基上，以培养得到纯化菌丝。
便于理解地，胶质菌子实体耳片有背腹之分，靠近着生部位那面为背面，背面有毛，颜色较浅，远离着生部位那面为腹面，腹面光滑，颜色较深，背面与腹面之间为胶质丰富的中间层。
具体来说，在本实施例的一些应用场景中，上述胶质菌为黑木耳；
在上述步骤（1）之前，菌株的采集步骤具体如下：
在江西省都昌县采集一株野生黑木耳，命名为黑木耳DC（Auriculariaauricula），寄生在猕猴桃枯枝上。用小刀将木耳从寄主枝条上切下，保留一部分基部木片，保持木耳子实体的完整性，避免有伤口增加染菌概率。然后用采样袋将新鲜样品带回实验室。
在进行分离纯化处理之前，实验材料准备具体如下：
将蒸馏水装入玻璃瓶、黄色移液器枪头（200ul）装在移液器枪头盒、棉花装入大口玻璃瓶、90mm玻璃皿用报纸包好、镊子放入高压灭菌锅，121℃，灭菌20分钟。
在本实施例中，上述第一培养基及第二培养基均包括PDA培养基及松针培养基；
培养基的配置：
第一PDA培养基：所述第一PDA培养基的PH值为7，所述PDA培养基包括按照重量份数计的如下原料：马铃薯180-220份、琼脂粉16-20份、葡萄糖16-20份。
在本实施例中，具体配置方法如下：称取马铃薯200g，将土豆洗干净削皮，切成小块，加水煮烂（能被玻璃棒轻松弄烂即可），用纱布过滤，加水至1000ml，分装到3个500ml三角瓶，每瓶333ml，趁热每瓶加入6g琼脂粉，等琼脂溶解完之后加入6g葡萄糖，搅拌均匀。用封口膜外加报纸封口，高压灭菌锅121℃灭菌20分钟，冷却至不烫手，在超净工作台上，然后将每个三角瓶中加入浓度为0.2g/L的链霉素1ml，浓度为0.2g/L的青霉素1ml，作为双抗，然后倒平板（过程要迅速），等培养液凝固，用封口膜封好，标明培养基种类。
松针培养基：所述松针培养基的PH值为6-6.5，所述松针培养基包括按照重量份数计的如下原料：鲜松针180-220份、高锰酸钾0.5-1.5份、葡萄糖8-12份、蛋白胨4-6份、硫酸镁0.4-0.6份、琼脂粉16-20份。
在本实施例中，具体配置方法如下：取鲜松针200g，加水800ml，煮沸1小时，取滤液800ml（煮时加水补足）。称取高锰酸钾1g，葡萄糖10g，蛋白胨5g，硫酸镁0.5g，放入200ml水中，融化后和松针汁混匀，再加琼脂18g，调PH值至6.0到6.5。
将配好的培养基和试管培养皿在灭菌锅里面灭菌，然后在超净台上面进行倒平板，倒完拿封口膜封住备用。
具体来说，上述步骤（1）具体包括：
在无菌环境下，在玻璃皿内装入无菌水，并将胶质菌样本置入所述玻璃皿内进行清洗，采用无菌棉对完成清洗后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成清洗，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次，以对所述胶质菌样本进行高温灭菌处理；
将完成高温灭菌处理后的胶质菌样本置入无菌水内浸泡5-8分钟，并采用无菌棉对完成浸泡后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成浸泡，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次。
进一步地，在本实施例中，具体操作如下：在紫外灯灭菌的超净工作台里面，将6个无菌90mm玻璃皿装入无菌水；第一步，用灭菌镊子将新鲜的木耳放入第1个培养皿，洗去表面的灰尘、木屑等杂质，取出，用无菌棉轻轻擦拭干净；第二步和第三步分别放入第2、第3个培养皿，同第一步操作；第四步，将木耳片在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次；第五步：放入第4个培养皿，用无菌水浸泡5-8分钟，清洗，然后用无菌棉轻轻擦拭干净；第六步同第五步；第七步，将木耳片在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次。
具体来说，上述步骤（2）中，将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本的步骤具体包括：将完成清洗，灭菌处理的所述胶质菌样本置入超净工作台上，并使所述胶质菌样本的腹面朝上；
将内管径为0.4-0.6cm的第一管体贴在所述胶质菌样本上，向下按压并旋转，以切割得到与所述第一管体对应大小的子实体样本。具体来说，在本实施例中，上述第一管体采用规格为200ul的黄色移液器枪头，能轻松将子实体切成小块，而且不用小刀或者剪刀，简化了操作流程，黄色移液器枪头（200 ul）一次性使用，不需要去除粘附在上面的胶质菌丝，而且方便灭菌，提高了效率且不易染菌。
进一步地，在本实施例中，具体操作如下：放在紫外灯灭菌的超净工作台上，腹面朝上，用灭好菌的黄色移液器枪头（200 ul）在距离基部1-2cm 的部位打孔，具体操作步骤为：黄色移液器枪头（200 ul）大头的那端贴在木耳子实体上，往下按压，左旋转1圈，然后右旋转1圈，子实体便被切割下来留在黄色移液器枪头（200 ul）大头端内。
具体来说，上述步骤（3）具体包括：将镊子的尖头部位在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁边冷却10-15秒，夹取并去除所述第一管体内的子实体样本切割后剥离下来的背面菌丝块，剩下的子实体为子实体接种块；
将所述子实体接种块接种至所述培养皿距离圆心2/3半径处，其中，所述子实体接种块的数量为三个，三个所述子实体接种块间隔式均匀设于所述第一培养基上。
上述步骤（4）具体包括：将内管径为0.4-0.6cm的第二管体设于所述子实体接种块靠近所述培养皿的圆心的一侧，向下按压并旋转，以切割并去除部分所述营养基质，形成与所述第二管体对应大小的培养孔。在本实施例中，上述第二管体与第一管体同样采用规格为200ul的黄色移液器枪头。
进一步地，在本实施例中，具体操作如下：将镊子的尖头部位在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁边冷却10-15秒，夹取黄色移液器枪头（200 ul）大头端内的背面菌丝体，弃除，获得只剩腹面以及污染少的中间层菌丝的子实体，接种到第一PDA培养基和松针培养基上，每个皿以圆心为顶点虚划3根线，把圆周角均分成3个120°角，在虚线距圆心三分之二半径处接种，然后在接种块靠近圆心一侧，用灭菌黄色枪头大头端按压培养基，左右旋转各一至二周，培养基即被切割下来，留在黄色枪头内部将其弃除，接种块旁边即形成1个无培养基的小孔。20小时之后，每隔5小时观察一次，直至观察到长出菌丝并伸展到小孔内。由于细菌以及酵母没有基内菌丝，无法在没有培养基的小孔内长出。而木耳子实体的菌丝长出之后可以延伸到小孔内，所以挑取小孔内的菌丝再次转接到合适培养基即可得到纯的菌种。
具体来说，上述步骤（5）具体包括：在将所述子实体接种块接种至第一培养基20小时之后，每隔5小时观察一次，直至观察到所述子实体接种块生长出菌丝样本并延伸至所述培养孔内；
在超净工作台内用无菌的注射器针头将菌丝挑取转接至第二培养基上，40小时后观察，以培养得到菌丝洁白的纯化菌丝。
综上，本发明上述实施例当中的胶质菌分离纯化方法，通过在第一培养基内切割部分营养基质形成培养孔，在培养孔内采集菌丝样本，可以有效减少由于胶质菌子实体因富含胶质，容易吸附细菌以及酵母菌等带来的污染，提高纯化成功率，同时通过采用管体对胶质菌进行切割分离，相对于无菌小刀、手术剪等工具，简化了操作流程，提高了效率且不易染菌，同时采用管体对胶质菌进行切割，背面或者腹面表皮边缘产生断口，容易去除，以便弃除背面菌丝块，获得只剩腹面以及污染少的中间层菌丝的子实体，提高了分离效率以及纯化成功率。
实施例二
本发明第二实施例提供了一种胶质菌分离纯化方法，与实施例一中不同的是：本实施例中，上述胶质菌为毛木耳；
在上述步骤（1）之前，菌株的采集步骤具体如下：
在江西省江西农业大学校园内采集一株野生毛木耳，命名HXY005（Auriculariapolytricha），寄生在合欢枯枝上。用小刀将木耳从寄主枝条上切下，保留一部分基部木片，保持木耳子实体的完整性，避免有伤口增加染菌概率。然后用采样袋将新鲜样品带回实验室。
在进行分离纯化处理之前，实验材料准备具体如下：
将蒸馏水装入玻璃瓶、黄色移液器枪头（200 ul）装在移液器枪头盒、棉花装入大口玻璃瓶、90mm玻璃皿用报纸包好、镊子放入高压灭菌锅，121℃，灭菌20分钟。
在本实施例中，上述第一培养基及第二培养基均仅包括PDA培养基；
在本实施例中，培养基的配置如下：
第二PDA培养基：所述第二PDA培养基的PH值为7，所述PDA培养基包括按照重量份数计的如下原料：马铃薯200份、琼脂粉20份、蔗糖20份、磷酸氢二钾2份。具体配置方法可以参照实施例一中的配置方法，份数采用克重，在此不多赘述。
在本实施例中，具体的子实体分离操作如下：
在紫外灯灭菌的超净工作台里面，将6个无菌90mm玻璃皿装入无菌水，第一步，用灭菌镊子将新鲜的木耳放入第1个培养皿，洗去表面的灰尘、木屑等杂质，取出，用无菌棉轻轻擦拭干净；第二步和第三步分别放入第2、第3个培养皿，同第一步操作；第四步，将木耳片在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次；第五步：放入第4个培养皿，用无菌水浸泡5-8分钟，清洗，然后用无菌棉轻轻擦拭干净；第六步同第五步；第七步，将木耳片在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次，放在紫外灯灭菌的超净工作台上，腹面朝上，用灭好菌的黄色移液器枪头（200 ul）在距离基部1-2cm 的部位打孔，具体操作步骤为：黄色移液器枪头（200 ul）大头的那端贴在木耳子实体上，往下按压，左旋转1圈，然后右旋转1圈，子实体便被切割下来留在黄色移液器枪头（200 ul）大头端内，将1ml注射器针头部位在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁边冷却10-15秒，用镊子夹取切割后剥离下来的背面菌丝块，丢弃。剩余子实体块接种到第二PDA培养基上，用实施例1的打孔方法打孔，20小时之后，每隔5小时观察一次，直至观察到长出菌丝并伸展到小孔内。
在本实施例中，具体的纯化操作如下：
子实体样本长出菌丝并延伸至小孔内，准备好配置好的第二PDA培养基，在超净工作台内用无菌的1ml注射器针头将菌丝挑取处转接到已灭菌的第二PDA培养基，40小时之后观察，菌丝洁白即为纯化好的菌丝。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出多种变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种胶质菌分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤（1），将采集到的胶质菌样本进行清洗，灭菌处理；
步骤（2），将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本，夹取并去除所述子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块；
步骤（3）将所述子实体接种块接种至第一培养基上，其中，所述第一培养基包括培养皿及设于所述培养皿内的营养基质；
步骤（4），对所述第一培养基内的部分营养基质进行切割去除，露出所述培养皿的底部，以形成培养孔，所述培养孔靠近所述子实体接种块设置；
步骤（5），将所述子实体接种块生长至所述培养孔内的菌丝样本取出，并转接至第二培养基上，以培养得到纯化菌丝。
2.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）具体包括：
在无菌环境下，在玻璃皿内装入无菌水，并将胶质菌样本置入所述玻璃皿内进行清洗，采用无菌棉对完成清洗后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成清洗，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次，以对所述胶质菌样本进行高温灭菌处理；
将完成高温灭菌处理后的胶质菌样本置入无菌水内浸泡5-8分钟，并采用无菌棉对完成浸泡后的胶质菌样本进行擦拭；
将完成浸泡，擦拭后的胶质菌样本在酒精灯火焰上迅速穿过2-3次。
3.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（2）中，将完成清洗，灭菌处理的胶质菌样本进行切割，得到子实体样本的步骤具体包括：
将完成清洗，灭菌处理的所述胶质菌样本置入超净工作台上，并使所述胶质菌样本的腹面朝上；
将内管径为0.4-0.6cm的第一管体贴在所述胶质菌样本上，向下按压并旋转，以切割得到与所述第一管体对应大小的子实体样本。
4.根据权利要求3所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（2）中，夹取并去除所述子实体样本的背面的菌丝块，以得到剩余的子实体接种块的步骤具体包括：
将镊子的尖头部位在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁边冷却10-15秒，夹取并去除所述第一管体内的子实体样本切割后剥离下来的背面菌丝块，剩下的子实体为子实体接种块。
5.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（3）中，将所述子实体接种块接种至第一培养基上的步骤具体包括：
将所述子实体接种块接种至所述培养皿距离圆心2/3半径处，其中，所述子实体接种块的数量为三个，三个所述子实体接种块间隔式均匀设于所述第一培养基上。
6.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（4）具体包括：
将内管径为0.4-0.6cm的第二管体设于所述子实体接种块靠近所述培养皿的圆心的一侧，向下按压并旋转，以切割并去除部分所述营养基质，形成与所述第二管体对应大小的培养孔。
7.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述步骤（5）具体包括：
在将所述子实体接种块接种至第一培养基20小时之后，每隔5小时观察一次，直至观察到所述子实体接种块生长出菌丝样本并延伸至所述培养孔内；
在超净工作台内用无菌的注射器针头将菌丝挑取转接至第二培养基上，40小时后观察，以培养得到菌丝洁白的纯化菌丝。
8.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述第一培养基或所述第二培养基包括PDA培养基，
所述PDA培养基的PH值为7，所述PDA培养基包括按照重量份数计的如下原料：马铃薯180-220份、琼脂粉16-20份、葡萄糖16-20份。
9.根据权利要求1所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述第一培养基或所述第二培养基包括松针培养基，
所述松针培养基的PH值为6-6.5，所述松针培养基包括按照重量份数计的如下原料：鲜松针180-220份、高锰酸钾0.5-1.5份、葡萄糖8-12份、蛋白胨4-6份、硫酸镁0.4-0.6份、琼脂粉16-20份。
10.根据权利要求3所述的胶质菌分离纯化方法，其特征在于，所述第一管体为规格为200ul的移液器枪头。
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