CN116925944B - 一株降解粪臭素的菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株降解粪臭素的菌株及其应用,菌株号为3‑YD‑2,分类命名为芬氏纤维微细菌(Celluosimicrobium funkei),已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2021年11月2日,保藏编号为CGMCC No.23708。本发明提供的菌株3‑YD‑2能以粪臭素为唯一碳源生长,将粪臭素降解。将菌株3‑YD‑2与猪粪水混合培养,菌株3‑YD‑2生长效果良好,在臭气度15.96的情况下,对粪臭素的降解率达83.76%,显著降低了臭气特征物质粪臭素的浓度。

Description

一株降解粪臭素的菌株及其应用
技术领域
本发明涉及一株降解粪臭素的菌株及其应用,属于微生物技术领域。
背景技术
随着人民生活水平的提高,猪场臭气已成为社会投诉的重点。据研究报道猪场臭气物质有500多种,臭气组分随着养殖模式和季节的变化而变化,粪臭素是猪场粪水产生臭气排放的21种特征性臭气物质之一,学名3-甲基吲哚,属于挥发性脂肪酸,不溶于水很难消除。近年来,通过高效微生物菌株降解猪场臭气物质的研究成为经济可靠的方法之一,对粪臭素高效降解的微生物菌株筛选尚未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷,提供一株降解粪臭素的菌株及其应用,本发明以猪场特征性臭气物质粪臭素(3-甲基吲哚)为唯一碳源进行高效降解菌株的选育,获得菌株3-YD-2,为猪场臭气物质粪臭素的降解提供菌种资源,将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养,菌株3-YD-2生长效果良好,菌株3-YD-2以猪粪水中的臭气物质粪臭素为碳源生长,将粪臭素降解。
为解决上述技术问题,本发明提供一株降解粪臭素的菌株,菌株号为3-YD-2,分类命名为芬氏纤维微细菌(Celluosimicrobiumfunkei),已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2021年11 月 2日,保藏编号为CGMCC No.23708 保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院。
本发明还提供上述的菌株在降解臭气物质粪臭素中的应用。
进一步地,将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养,菌株3-YD-2以猪粪水中的臭气物质粪臭素为碳源生长,将粪臭素降解。
进一步地,将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养的具体方法为:将菌株3-YD-2以5-10%接种量接种于新鲜猪粪水中,pH为6.5-8.0,C/N为27-35,25-30℃静置培养24-48小时后,检测臭气除臭率。
进一步地,所述菌株3-YD-2的接种量为5%。
进一步地,所述pH为7.2,C/N为31.4。
进一步地,所述培养温度为30℃,培养时间为24小时。
本发明所达到的有益效果:本发明提供的菌株3-YD-2能以猪粪水中的臭气物质粪臭素为碳源生长,将粪臭素降解。将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养,菌株3-YD-2生长效果良好,在臭气度M.OU为15.96的情况下,对粪臭素的降解率达83.76%,显著降低了臭气特征物质粪臭素的浓度。
附图说明
图1为菌株3-YD-2在LB培养基上划线培养24小时生长的单菌落形态;
图2为菌株3-YD-2单菌落,显微观察(10×100)到的菌体形态;
图3为未接种3-YD-2菌株猪粪水中M.OU检测值;
图4为接种3-YD-2菌株培养24小时后M.OU检测值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案,而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1菌株3-YD-2的分离、筛选与鉴定
1. 菌株3-YD-2的分离和筛选
取45ml蒸馏水于250ml三角瓶中,加入一定数量的玻璃珠,121℃灭菌20min,冷却至室温。称取5g保存的土样加入无菌水中,于30℃、180r/min的恒温摇床中打碎混匀1-2h,使细菌游离,取10ml泥水混合物转移至90ml基本培养基,在基本培养基中加入粪臭素0.05g,30℃、180r/min培养。
取富集驯化的菌液,用无菌水稀释成 10-1~10-6不同浓度梯度,取10-4、10-5、10-6三个梯度各0.1ml的含富集液涂布于选择培养基平板上,30 ℃恒温培养箱培养 2-5 d后,选择单菌落利用平板稀释分离法进一步分离纯化,获得纯化后的单一菌落,分类编号,保存在4 ℃斜面以备用。
2. 菌株3-YD-2的鉴定
在LB培养基上纯培养后,观察3-YD-2菌株单菌落和菌体形态,图1为菌株3-YD-2在LB培养基上划线培养24小时生长的单菌落形态;图2为菌株3-YD-2单菌落,显微观察(10×100)到的菌体形态。菌落圆形黄色、表面隆起、不透明,边缘整齐、表面光滑湿润,菌体短杆状、无芽孢。
经生理生化检测,结果表明3-YD-2菌株为革兰氏阳性菌株,水解酶、过氧化氢酶和甲基红反应为阳性,吲哚和氧化酶反应阴性。
经16S rRNA分子生物学鉴定,该菌株特征序列见序列表SEQ ID NO:1。
实施例2菌株3-YD-2在降解猪场臭气物质粪臭素中的应用效果
1. 猪粪水的制备
将20 g新鲜猪粪与80g清洁水混合均匀,制备成含固率5%左右的新鲜猪粪水,将新鲜猪粪水放置于37℃培养箱中静置发酵5天,获得臭气度M.OU为15.96的100ml猪粪水。
2. 菌株3-YD-2的菌悬液降解猪粪水中臭气物质粪臭素
将利用菌株3-YD-2制备的菌悬液5ml,接种到以上100ml的猪粪水中,猪粪水中pH为7.2,C/N为31.4,混合均匀,30℃培养箱中静置培养24小时后,测定猪粪水的臭气度M.OU,测定值为2.591,如图4所示。
3. 菌株3-YD-2对猪粪水中臭气物质降解率的计算
图3为未接种3-YD-2菌株猪粪水中M.OU检测值,菌种N-BA-9对猪粪水中臭气物质降解率为[(15.96-2.591)/ 15.96]×100%=83.76%。
4.菌种3-YD-2在猪粪水中生长状况
通过镜检观察和OD测定评价菌株3-YD-2在猪粪水中的生长情况,采用10分制打分进行综合评价,菌株3-YD-2在猪粪水中的生长状况综合评分为8分。结果表明菌株3-YD-2在粪水中的生长速度较快,繁殖能力较强,对粪臭素有较好的降解能力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变形,这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 南京农业大学
<120> 一株降解粪臭素的菌株及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1408
<212> DNA
<213> 芬氏纤维微细菌(Celluosimicrobium funkei)
<400> 1
tgctaccatg caagtcgaac gatgatgccc agcttgctgg gcggattagt ggcgaacggg 60
tgagtaacac gtgagtaacc tgcccttgac ttcgggataa ctccgggaaa ccggggctaa 120
taccggatat gagccgcctt cgcatggggg tggttggaaa gtttttcggt cagggatggg 180
ctcgcggcct atcagcttgt tggtggggtg atggcctacc aaggcgacga cgggtagccg 240
gcctgagagg gcgaccggcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300
agcagtgggg aatattgcac aatgggcgaa agcctgatgc agcgacgccg cgtgagggat 360
gaaggccttc gggttgtaaa cctctttcag cagggaagaa gcgcaagtga cggtacctgc 420
agaagaagcg ccggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggg cgcaagcgtt 480
gtccggaatt attgggcgta aagagctcgt aggcggtttg tcgcgtctgg tgtgaaaact 540
cgaggctcaa cctcgagctt gcatcgggta cgggcagact agagtgcggt aggggagact 600
ggaattcctg gtgtagcggt ggaatgcgca gatatcagga ggaacaccga tggcgaaggc 660
aggtctctgg gccgcaactg acgctgagga gcgaaagcat ggggagcgaa caggattaga 720
taccctggta gtccatgccg taaacgttgg gcactaggtg tggggctcat tccacgagtt 780
ccgtgccgca gcaaacgcat taagtgcccc gcctggggag tacggccgca aggctaaaac 840
tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggcggagcat gcggattaat tcgatgcaac 900
gcgaagaacc ttaccaaggc ttgacatgca cgagaagcca ccagagatgg tggtctcttt 960
ggacactcgt gcacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 1020
aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgtccc atgttgccag cgggttatgc cggggactca 1080
tgggagactg ccggggtcaa ctcggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc 1140
ttatgtcttg ggcttcacgc atgctacaat ggccggtaca aagggctgcg ataccgtaag 1200
gtggagcgaa tcccaaaaag ccggtctcag ttcggattgg ggtctgcaac tcgaccccat 1260
gaagtcggag tcgctagtaa tcgcagatca gcaacgctgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1320
ttgtacacac cgcccgtcaa gtcacgaaag tcggtaacac ccgaagccca tggcccaacc 1380
gttcgcgggg ggagtggtcg aaggtgga 1408

Claims (7)

1.一株降解粪臭素的菌株,其特征在于,菌株号为3-YD-2,分类命名为芬氏纤维微细菌(Cellulosimicrobium funkei),已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2021年11 月 2日,保藏编号为CGMCC No.23708。
2.权利要求1所述的菌株在降解臭气物质粪臭素中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养,菌株3-YD-2以猪粪水中的臭气物质粪臭素为唯一碳源生长,将粪臭素降解。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,将菌株3-YD-2与猪粪水混合培养的具体方法为:将菌株3-YD-2以5-10%接种量接种于新鲜猪粪水中,pH为6.5-8.0,C/N为27-35,25-30℃静置培养24-48小时后,检测臭气除臭率。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述菌株3-YD-2的接种量为5%。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述pH为7.2,C/N为31.4。
7.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述将菌株3-YD-2以5-10%接种量接种于新鲜猪粪水中,pH为6.5-8.0,C/N为27-35,培养温度为30℃,培养时间为24小时。
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