CN116925925A - 白腐菌与褐腐菌复合菌剂及其在防治松材线虫病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了白腐菌与褐腐菌复合菌剂及其在防治松材线虫病中的应用，属于松材线虫病的生物防治领域。所述复合菌剂由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成。本发明提供的由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的木腐菌复合菌剂对于木块有较高的腐蚀率，能够高效分解伐桩，在分解伐桩的同时有效杀灭伐桩内松材线虫，具有高效、无任何污染、快速简捷等优点，在防治松材线虫病疫木伐桩内残存的松材线虫方面具有应用前景。

Description

白腐菌与褐腐菌复合菌剂及其在防治松材线虫病中的应用

技术领域

本发明涉及木腐菌复合菌剂，尤其涉及由囊孔附毛菌(Trichaptum biforme)和绵腐卧孔菌(Postia placenta)组成的复合菌剂及其在防治松材线虫中的应用，属于松材线虫病的生物防治领域。

背景技术

松材线虫病是由松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]引起的一种松树毁灭性病害。近几年来，该病在江苏、安徽、广东、江西、浙江、福建等省有关地区为害、蔓延，引起马尾松、湿地松、黑松等多种松树大量枯萎死亡，对林业生产及生态安全构成了严重威胁。

疫木的调运是松材线虫病在地区间扩散的主要方式，而在疫区当地，当年残存的病死木是次年该病发生的主要侵染来源，即松材线虫病病死树及其伐桩、枯枝等，均是次年病害的侵染来源，松褐天牛是其主要媒介昆虫。伐桩中同样含有松材线虫和松褐天牛幼虫，是松材线虫病重要侵染源之一(朱克恭，姚仕义，张井义.关于松材线虫病侵染源的研究[J].山东林业科技，1992(4):45－48)；现有的生物防治方法对于松材线虫病疫木伐桩的防治效果较差，因此，亟待研发更为有效的松材线虫病疫木伐桩的防治方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种能够分解松材线虫病疫木伐桩、杀灭松材线虫的木腐菌复合菌剂；

本发明的目的之二是将所述的木腐菌复合菌剂应用于分解松材线虫病疫木伐桩或杀灭松材线虫；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供了一种木腐菌复合菌剂，由囊孔附毛菌(Trichaptum biforme)和绵腐卧孔菌(Postia placenta)组成。

为了实现更好的技术效果，按照体积比计，囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌的比例为(0.5-4)：(0.5-4)；更优选的，囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌的比例为1：1。

本发明将多个白腐菌与褐腐菌配对分析出不产生拮抗效果的菌种组合；将不产生拮抗效果的菌种组合进一步验证其对松材线虫繁殖的影响，试验结果表明，从菌株囊孔附毛菌与绵腐卧孔菌的组合的菌落上完全没有分离到松材线虫，也即是说，由囊孔附毛菌与绵腐卧孔菌的组合完全抑制了松材线虫的繁殖。本发明进一步将各种菌剂的组合进行木块的分解作用试验，结果发现，将囊孔附毛菌与绵腐卧孔菌进行组合的复合菌剂对于红松木块的腐蚀率达到22.46％，显著高于其它的菌剂组合对于红松木块的腐蚀率；本发明在松材线虫病疫木伐桩上接种由囊孔附毛菌与绵腐卧孔菌进行组合的复合菌剂，接菌处理60d后测定了松材线虫病疫木伐桩内松材线虫数量以及对伐桩的分解率，结果发现，由囊孔附毛菌与绵腐卧孔菌进行组合的复合菌剂能够有效杀灭松材线虫病疫木伐桩内松材线虫并有效分解伐桩。

由此，本发明所提供的由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的木腐菌复合菌剂能够应用于防治松材线虫病，包括：将该木腐菌复合菌剂接种到松材线虫病疫木伐桩内，在分解伐桩的同时杀灭伐桩内松材线虫；其中，可根据各个木腐菌的培养特点在松材线虫病疫木伐桩上进行接种，接种时将事先准备好的菌剂涂抹在伐桩表面然后盖上透气薄膜以利保湿。

本发明提供的由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的木腐菌复合菌剂对于木块有较高的腐蚀率，能够高效分解疫木伐桩，在分解松材线虫病疫木伐桩的同时杀灭伐桩内松材线虫，具有高效、无任何污染、快速简捷等优点，在防治松材线虫病疫木伐桩内残存的松材线虫方面具有重要的应用前景。

附图说明

图1复合菌落平面培养结果；A：S.sanguinolentum和T.pubescens；B：P.betulinus和P.sordida；C：P.adiposa和P.chrysosporium；D：S.Ostrea和P.betulinu；E：P.adiposa和T.biforme；F：P.adiposa和T.pubescens；G：P.adiposa和P.sordida；H：C.subvermispora和P.betulinus；I：S.Ostrea和P.ostreatus；J：P.ostreatus和B.adusta；K：P.adiposa和B.adusta；L：L.betulina和F.pinicola；M：L.betulina和L.edodes；N：T.orientalis和P.placenta；O：P.placenta和P.sordida；P：P.betulinus和P.chrysosporium；Q：L.betulina和P.ostreatus；R：P.placenta和T.biforme。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

菌种来源及培养方法

1菌种

菌种名称：Trichaptum biforme(囊孔附毛菌，保藏编号为CFCC 51100,记为TB5)和Postia placenta(绵腐卧孔菌，保藏编号为CFCC 5608，记为PP8)

菌种来源：由中国林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC)提供；

复合菌剂的最佳配比：1/1。

本发明中所用到的其它菌株均可从中国林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC)获得。

2培养方法

本试验于2021年下半年在中国林业科学研究院森环森保所“植物病原与病害管理”学科组实验室进行。

将己活化的木腐菌菌株菌丝块约0.5cm²接种于平板培养基中心，25℃生化培养箱中培养7d。

试验例1白腐菌与褐腐菌配对拮抗筛选试验

将白腐菌与褐腐菌配对接种在培养皿两侧，统计每日菌丝直径，直至长满平板，试验菌株见表1。

表1试验菌株

分析出不产生拮抗效果的菌种组合有34种，如表2所示，复合培养菌落形态见图1。

表2不产生拮抗作用的菌落

试验例2木腐菌复合菌剂对松材线虫繁殖的影响试验

将松材线虫接入褐腐菌和白腐菌菌株纯培养和木腐菌复合培养的菌落上培养8d后分离的松材线虫数量列入表3(部分)。

试验结果表明，复合培养的菌落对松材线虫的繁殖均有一定的抑制作用。其中，由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的复合菌剂的菌落上完全没有分离到松材线虫，说明该组菌剂组合完全抑制了松材线虫的繁殖。

表3松材线虫在木腐菌菌落上培养8d的数量

试验例3木腐菌复合菌剂组合对木块的分解作用试验

1试验方法

1.1制作厚底PDA培养基。

1.2准备红松木块若干块，尺寸为20x60x2mm，接种之前对每个木块放入温度103±2℃烘箱中烘至恒重，每块称重(精确到0.01g)后，用吸湿纸(或多层纱布)包好，在蒸汽灭菌器中在常压条件下保持30min左右，使试样含水率达到40％～60％，冷却后即用。

1.3进行接种：将木块置于培养皿中间，将白腐菌和褐腐菌菌块分别横向接于木块两侧，每种有三种组合方式：11、22、12(1、2代表两种菌)，并设置纯培养对照组，放置培养箱内，侵染2周后取出，轻轻刮去表面菌丝和杂质，在103±2℃的烘箱中烘至恒重，每块试样分别称重。

1.4计算腐朽后质量损失率

计算每块试样腐朽后质量损失率，以百分数表示，见式(1)。

式中：

W₁——试样试验前的全干质量；

W₂——试样试验后的全干质量。

2.试验结果

试验结果见表4。

表4木腐菌菌种及组合对于木块的腐蚀率

菌种	腐蚀率
		PP8	5.14％
TB5	5.83％
		PP8+LB3	7.24％
PP8+PC6	10.68％
		PP8+PS8	8.32％
PP8+SH7	5.34％
		PP8+SO2	9.60％
PP8+TH7	9.57％
		PP8+TO5	3.22％
PP8+TP9	7.89％
		PP8+TS8	13.60％
PP8+TV73	9.84％
		PP8+TB5	22.46％
CK	0.2％

根据表4的试验结果可见，由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的复合菌剂(PP8+TB5)对红松木块腐蚀率达到了22.46％，极显著的高于其他菌剂组合以及单独培养菌剂对于红松木块的腐蚀率。

试验例5木腐菌复合菌剂组合在分解松材线虫病疫木伐桩中的应用试验

1试验方法

1.1接种材料的准备

用直径12cm，长22cm的聚丙烯原种袋装袋，每袋装100g木屑或300g滑石粉、4g葡萄糖、4g玉米粉、1g蛋白胨、0.6g KH₂PO₄、0.3g MgSO₄·7H₂O、4g果胶和4g L-谷氨酸钠，装袋后将材料混合均匀并封口。在高压灭菌锅中(121℃)重复灭菌2次，每次灭菌40min。待接种材料温度冷却下来以后，在无菌操作台上将上述准备好的菌液按照每袋100mL的接种量加入到每个袋中混合均匀，排出袋内空气并封口。在最初的3个星期每天都要翻动接种材料，之后每个星期翻动2次，这样的接种材料可以在室温下至少保存1年的时间而不破坏其菌种的活性。在进行田间接种试验以前，要对袋内菌种活性进行检测，在无菌操作台上取少许袋内材料在PDA培养基上看其是否生长良好，菌丝生长良好说明该菌株接种材料仍然具有活性，该菌种可进行田间试验。在伐桩上接种木腐菌之前每个袋内都要加入200mL浓度为1％的葡萄糖溶液、100mL植物油和少许鸡蛋，将它们混合均匀后就可以进行接种。

1.2伐桩的准备

选择直径15cm以上无虫蛀、未脱皮腐烂的伐桩15个并作标记。接种前在伐桩木质部没有发现被菌分解的迹象。复合菌剂(由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌按照1:1的体积比组成)接种处理15个伐桩，在接种木腐菌前一个星期用20％的石灰水涂抹伐桩表面，防止杂菌生长，同时在伐桩周围1m范围内喷洒灭白蚁药水(商品名奋斗呐)。15个伐桩不作接菌处理作为对照。

1.3接菌前松材线虫数量的测定

接菌处理前，定量(30g)采回伐桩样品，采样时取每个伐桩接菌部位木样，按照贝尔曼漏斗法分离松材线虫并计数，同时将每一个伐桩样品均制成规则的木块试样(2cm×2cm×1cm)各3个，编号后放入100±5℃的烘箱中烘干至恒重后称取每个木块的重量。

1.4在伐桩上接种木腐菌复合菌剂

接种木腐菌应选择晴天午后或阴天进行，根据各个木腐菌的培养特点在伐桩上进行接种，接种时将事先准备好的接种材料涂抹在伐桩表面然后盖上透气薄膜以利保湿。复合菌剂(由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌按照1:1的体积比组成)接种处理15个伐桩。接菌处理60d。

1.5伐桩内松材线虫数量的测定

接菌处理60d后，将采回的伐桩样品定量(30g)取样，采样时取每个伐桩接菌部位木样，按照贝尔曼漏斗法分离松材线虫并计数，同时定量(30g)取样分离对照伐桩内松材线虫并计数。

1.6木腐菌分解能力的测定

接菌处理60d后，将供试的15个伐桩样品采回实验室做进一步分析，每一个伐桩样品均制成规则的木块试样(2cm×2cm×1cm)各3个，编号后放入100±5℃的烘箱中烘干至恒重后称取每个木块的重量，与对照伐桩木块试样作比较，分析每个木腐菌菌株对伐桩的分解情况。以每个伐桩木块的重量来衡量木腐菌对伐桩分解能力的大小。

试验结束后，分别统计各个伐桩样品重量以及伐桩内松材线虫数量。

2.试验结果

2.1伐桩样品重量

接菌处理60d后15个伐桩样品以及对照样品的重量测定结果见表5；根据表5可见，接种复合菌剂处理60d后15个伐桩样品的重量均显著低于对照伐桩样品重量。

表5伐桩样品重量

2.2伐桩中松材线虫数量

在松材线虫病病死树伐桩上接种复合菌剂处理60d后，统计每个伐桩内分离到的松材线虫数量，统计结果见表6。

表6伐桩样品中松材线虫的数量变化

根据表6的统计结果可见，在松材线虫病病死树伐桩上接种由囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌组成的复合菌剂处理60d后，能够有效杀灭松材线虫病病死树伐桩内的松材线虫。

Claims (10)

1.一种防治松材线虫病的复合菌剂，其特征在于，由囊孔附毛菌(Trichaptumbiforme)和绵腐卧孔菌(Postia placenta)组成。

2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，按照体积比计，囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌的比例为(0.5-4)：(0.5-4)。

3.根据权利要求2所述的复合菌剂，其特征在于，囊孔附毛菌和绵腐卧孔菌的比例为1：1。

4.权利要求1-4任何一项所述的复合菌剂在防治线虫病中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的线虫是松材线虫。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括：将该复合菌剂接种到松材线虫病疫木伐桩内，在分解伐桩的同时杀灭伐桩内松材线虫。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，根据各个木腐菌的培养特点在松材线虫病疫木伐桩上进行接种，接种时将菌剂涂抹在伐桩表面然后盖上透气薄膜。

8.权利要求1-4任何一项所述的复合菌剂在分解或腐蚀木材中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的木材是松材线虫病疫木伐桩。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括：将权利要求1的复合菌剂接种松材线虫病疫木伐桩。