CN116904651A - 一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒 - Google Patents

一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒 Download PDF

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CN116904651A CN202210521994.6A CN202210521994A CN116904651A CN 116904651 A CN116904651 A CN 116904651A CN 202210521994 A CN202210521994 A CN 202210521994A CN 116904651 A CN116904651 A CN 116904651A
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Abstract

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测猴痘病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用微流控芯片技术，通过集核酸提取、纯化、扩增和检测为一体的方式，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内结果。

Description

一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试 剂盒
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。
背景技术
猴痘(Monkeypox)是由猴痘病毒(Monkeypox virus，MPXV)引起的人畜共患的一种热性传染病，临床表现与天花相似。科研人员1958年首次从食蟹猴体内分离到猴痘病毒，之后各地多次发生猴痘病毒感染。流行病学表现为在皮肤上开始是斑疹，然后形成丘疹，进一步发展形成结痴，最后结痴脱落。传染途径主要包括血液和体液。猴痘仍然在非洲部分地区散发且人是猴痘病毒的易感群体，所以猴痘病毒仍是人类痘病毒研究的重点。
猴痘病毒属于正痘病毒，有两个不同的分支，即刚果盆地分支和西非分支。由刚果盆地分支病毒引起的猴痘报告死亡率高达10％，而西非分支病毒通常在不到1％的病例中表现出致命结果。刚果盆地和西非菌株具有99％的序列一致性，猴痘病毒是一种双链DNA病毒，基因组全长约197kb。在本研究报道了一种基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR检测方法：主要扩增其J2R基因即肿瘤坏死因子受体基因，具有良好的特异性和敏感性，以便将猴痘感染与其他皮疹快速区分。
目前检查病原体的方法包括病原学检测和分子生物学检查两种方法，但病原学检测操作复杂、耗时长、灵敏度低，且不能用于疾病的早期诊断。实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的用于病原菌筛查的分子检测法，该技术不仅实现了对病原菌核酸的定量，而且具有灵敏度高、特异性强、检测速度快、自动化程度高等特点。例如，专利CN103468830A公开了一种用于检测猴痘病毒的NASBA试剂盒及其应用，该发明可快速筛查猴痘病毒，对口岸输入性疾病筛查具有重要意义。
对于病原菌的核酸检测，市场现有检测系统或方法通常需要在检测前进行样品处理，本申请人基于该问题，经过数年研发，与在先前申请CN202110057507.0中公开了一种新型现场化快速核酸扩增检测仪CarryOn P1000Q，该设备为“手持全自动封闭式核酸qPCR分析系统”，可在60分钟内完成新冠病毒的现场自动化核酸检测，能够实现“样品进，结果出”的快速检测。本申请即在该技术的基础上，进一步研发出的，能够更好的配合该设备的试剂类发明，即猴痘病毒的微流控芯片试剂盒。
现有的检测试剂盒及方法较操作时间长，且操作步骤繁琐，因此，亟需提供一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便、省时且节约成本的猴痘病毒检测试剂盒及其使用方法。
发明内容
为了解决现有技术中的上述问题，本申请提供了一种猴痘病毒检测的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明所述的引物探针组合物同时检测猴痘病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。
为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种检测猴痘病毒的引物探针组合物，所述的引物探针组合物包括检测猴痘病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。
具体地，所述的检测猴痘病毒的引物探针组合物为MPXV引物探针组合物。
具体地，所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。
进一步具体地，
(1)所述的MPXV引物探针组合物为：
F(SEQ ID NO:1)：5'-ACCACATGCACCATCCAA-3'；
R(SEQ ID NO:2)：5'-TGCTATCACATAATCTGGAAGCG-3'；
P(SEQ ID NO:3)：5'-CCCGGAGGACACGATAGACAACA-3'；
(2)所述的IPC引物探针组合物为：
F(SEQ ID NO:4)：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；
R(SEQ ID NO:5)：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；
P(SEQ ID NO:6)：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'。
具体地，所述的猴痘的引物探针组合物用于检测猴痘病毒J2R基因即肿瘤坏死因子受体基因。
具体地，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有淬灭基团；所述荧光报告基团为CY3、CY5、CY5.5、FAM、HEX、VIC、JOE或ROX中的一种或多种，所述淬灭基团为荧光淬灭基团。
进一步具体地，所述的检测猴痘病毒的探针用FAM标记，所述的检测内参IPC的探针用CY5标记。
另一方面，本发明提供了上述引物探针组合物在制备检测猴痘病毒产品中的应用。
具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
又一方面，本发明提供了一种检测猴痘病毒的产品，所述的产品包括上述引物探针组合物。
具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
具体地，所述的产品还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。
进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠。
进一步具体地，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M pH4.7醋酸钠和2％Triton X-100，所述的洗脱液包括10mM pH8.5 Tris-HCl。
进一步具体地，所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸、KCI、Tris-HCI(pH 9.0)、MgCl2、Tween 20。
进一步具体地，所述的IPC质控品以冻干球的形式存在于微流控芯片中；
所述的IPC质控品的人工合成序列为SEQ ID NO:7；
所述的IPC质控品是DNA质粒；
所述的IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、消泡剂、Tris-HCl(pH 8.0)、NaCl、Tween20。
又一方面，本发明还提供了一种检测猴痘病毒的微流控芯片试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物探针组合物。
具体地，所述的试剂盒还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。
所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠；
所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸、KCI、Tris-HCI(pH 9.0)、MgCl2、Tween 20。
所述的IPC质控品以冻干球的形式存在于微流控芯片中；
所述的IPC质控品的人工合成序列为SEQ ID NO:7；
所述的IPC质控品是DNA质粒；
所述的IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、2-羟丙基-β-环糊精、消泡剂、Tris-HCl(pH 8.0)、NaCl、Tween20。
所述的试剂盒在微流控芯片上完成样本的核酸提取、纯化、扩增和检测。
具体地，所述的微流控芯片试剂盒可用于CarryOn P1000Q快速核酸扩增检测仪。
又一方面，本发明提供了上述引物探针组合物、产品或试剂盒在检测猴痘病毒中的应用。
又一方面，本发明提供了一种检测猴痘病毒的方法，所述的方法为非疾病诊断和治疗方法，所述的方法包括利用上述引物探针组合物、产品或试剂盒对待测样本中猴痘病毒进行检测。
具体地，所述的方法包括以下步骤：
(1)提取样本的DNA并采用上述纯化试剂进行纯化；
(2)利用上述引物探针组合物扩增步骤(1)提取并纯化的样本DNA；
(3)对扩增结果进行分析。
进一步具体地，上述步骤采用CarryOn P1000Q快速核酸扩增检测仪，在微流控一体化芯片上进行。
与现有技术相比，本发明提供的试剂盒具有如下有益效果：
(1)采用本发明提供的引物探针组合物同时检测猴痘病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。
(2)利用芯片上微流控的方式解决病原体快速检测的问题，实现“样本进-结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。
附图说明
图1为灵敏度检测结果图。
图2为准确性检测结果图。
图3为特异性检测结果曲线图，其中，A为水痘减毒活疫苗检测结果，B为鸡痘活疫苗检测结果，C为山羊痘活疫苗检测结果。
图4为微流控芯片示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例中未注明具体技术或条件者，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件(如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。
1.试剂及仪器
(1)本申请所用的试剂信息详见下表1。
表1试剂及厂家
(2)本申请所用的仪器信息详见下表2。
表2仪器
仪器 厂家 型号
万分之一天平 梅特勒-托利多公司 AL104
qPCR仪 Thermo Fisher Scientific ABI 7500
涡旋混匀仪 杭州米欧仪器有限公司 MIX-28+
手掌型离心机 江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司 LX-100
冷冻干燥机 四环科仪(天津)科技有限公司 LGJ-20
本申请所用的PCR反应装置详见专利202110057507.0，用于核酸检测的芯片装置详见202110055537.8。
实施例1.一种检测猴痘病毒的引物探针组合物
所述的引物探针组合物包括检测猴痘病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。
所述的检测猴痘病毒的引物探针组合物为MPXV引物探针组合物。
所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。
(1)所述的MPXV引物探针组合物为：
F(SEQ ID NO:1)：5'-ACCACATGCACCATCCAA-3'；
R(SEQ ID NO:2)：5'-TGCTATCACATAATCTGGAAGCG-3'；
P(SEQ ID NO:3)：5'-CCCGGAGGACACGATAGACAACA-3'；
(2)所述的IPC引物探针组合物为：
F(SEQ ID NO:4)：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；
R(SEQ ID NO:5)：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；
P(SEQ ID NO:6)：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'；
本申请所述的猴痘病毒的引物探针组合物用于检测猴痘病毒J2R基因即肿瘤坏死因子受体基因。
实施例2一种检测猴痘病毒的微流控芯片试剂盒
(1)包括实施例1所述的引物探针组合物，各引物探针浓度均为0.2μM。
(2)还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。
1)所述的纯化试剂包括裂解液400μL、洗脱液850μL和磁珠15μL，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M pH4.7醋酸钠和2％Triton X-100，所述的洗脱液包括10mM pH8.5 Tris-HCl，将纯化试剂加入芯片的加样层，所述的磁珠干化方法见专利202110222434.6。
2)所述冻干试剂体系如下表3所示。
表3冻干试剂体系
成分 (1×)
脂多糖 0.05％
羧丙基甲基纤维素 0.006％
甘露醇Mannitol 2.5％
海藻糖Trehalose 2.5％
普鲁兰Pullulan 0.5％
2-羟丙基-β-环糊精 0.5％
脱氧核糖核酸聚合酶Taq Glycerol-free 0.4U/μL
牛血清白蛋白BSA 0.04mg/mL
消泡剂SE-15 0.009％
脱氧核苷三磷酸dNTPs 0.2mM
KCl 70mM
Tris-HCl(pH9.0) 50mM
MgCl2·6H2O 3.2mM
Tween20 0.05％
3)所述IPC质控品包括IPC质粒的制备和冻干体系。
按照IPC基因(SEQ ID NO:7)序列信息，由擎科生物有限公司合成dsDNA并克隆在pUC18载体上，得到携带IPC基因的质粒。
所述IPC质控品冻干体系如下表4所示。
表4IPC质控品冻干体系
成分
IPC质粒 1×105copies/mL
甘露醇Mannitol 10％
海藻糖Trehalose 10％
牛血清白蛋白BSA 0.5mg/mL
2-羟丙基-β-环糊精HP-β-CD 0.1％
消泡剂SE-15 0.009％
Tris-HCl(pH 8.0) 10mM
NaCl 50mM
Tween20 0.05％
将上述表3试剂加入硅胶模具中，将上述表4试剂每5μL滴到液氮中制成冻干球，放入西林瓶中按照下表5的冷冻干燥机冻干程序进行冻干。
表5冻干程序
将冻干片与冻干球放入微流控芯片中，组装成一体化检测试剂盒。
实施例3猴痘病毒检测试剂盒的使用方法
采用CarryOn P1000Q进行本申请所述的猴痘病毒的检测，具体检测步骤如下表6所示。
表6
实时定量PCR反应程序为：55℃10min；95℃1min；(95℃10s，60℃20s)，45cycles。
实验例1灵敏度检测
按照猴痘病毒J2R基因(NCBI ACCESSION NO：NC_003310:194141-194250bp；SEQID NO:8)序列信息，由擎科生物有限公司合成dsDNA并克隆在pUC18载体上，测序正确后，调整质粒浓度为每反应5×106copies、5×105copies、5×104copies、5×103copies、5×102copies，按照上述实施例1-3的体系和步骤对核酸样品进行检测，其检测结果如下表7所示，检测曲线如图1所示。
表7
由上表7可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的灵敏度，可对每反应5×102copies的样品进行检测。
实验例2准确性检测
按照猴痘病毒J2R基因(NCBI ACCESSION NO：NC_003310:194141-194250bp；SEQID NO:8)序列信息，由擎科生物有限公司合成dsDNA并克隆在pUC18载体上，测序正确后，调整其浓度为每反应1×102copies，按照上述实施例1-3的体系和步骤对核酸样品进行检测，重复检测六次，检测结果如下表8所示。
表8
其检测结果图如图2所示，由表8可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的准确性。
实验例3特异性检测
水痘减毒活疫苗购自长春祈健生物制品有限公司；鸡痘活疫苗、山羊痘活疫苗均购自哈药集团生物疫苗有限公司，批号见表9。取200μL病毒疫苗加到CarryOn P1000Q快速核酸扩增检测仪样品仓内，用于核酸检测实验。
按照上述实施例1-3的体系和步骤对上述样品进行检测，其检测结果如下表10所示。
表9
中文名称 厂家 批号
水痘减毒活疫苗 长春祈健生物制品有限公司 国药准字S20000051
鸡痘活疫苗 哈药集团生物疫苗有限公司 兽药生字(2016)080072010
山羊痘活疫苗 哈药集团生物疫苗有限公司 兽药生字(2016)080074003
表10
样品 内对照Ct值 靶标检测结果
水痘减毒活疫苗 30.22 阴性
鸡痘活疫苗 30.35 阴性
山羊痘活疫苗 30.83 阴性
其中，水痘减毒活疫苗、鸡痘活疫苗、山羊痘活疫苗检测结果Ct值为内参扩增结果。本申请所述的猴痘病毒引物探针组合物未扩增到产物。因此，其检测结果为阴性。
其检测结果图如图3所示，由上表10可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的特异性。
以上仅为本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京中科生仪科技有限公司
<120> 一种猴痘病毒检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
accacatgca ccatccaa 18
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
tgctatcaca taatctggaa gcg 23
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
cccggaggac acgatagaca aca 23
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 4
agttgcagtg taaccgtcat gta 23
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 5
tcgacgagac tctgctgtta a 21
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 6
cagtaatctg cgtcgcacgt gtgca 25
<210> 7
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 7
agttgcagtg taaccgtcat gtaccagtaa tctgcgtcgc acgtgtgcac ctagtctaat 60
cacttatgac tcagataact taacagcaga gtctcgtcga 100
<210> 8
<211> 1047
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 8
atgaggtccg tattatactc gtatatattg tttctctcat gtataataat aaacggaaga 60
gatttagcac cacatgcacc atccaatgga aaatgtaaag acaacgaata cagaagccgt 120
aatctatgtt gtctatcgtg tcctccggga acttacgctt ccagattatg tgatagcaag 180
actaatacac aatgtacgcc gtgtggttcg gataccttta catctcacaa taatcattta 240
caggcttgtc taagttgtaa cggaagatgt gatagtaatc aggtagagac gcgatcgtgt 300
aacacgactc acaatagaat ctgtgaatgc tctccaggat attattgtct tctcaaagga 360
tcatcagggt gtagaacatg tatttctaaa acaaagtgtg gaataggata cggagtatcc 420
ggatacacgt ctaccggaga cgtcatctgt tctccgtgtg gtcccggaac atattctcac 480
accgtctctt ccacagataa atgcgaaccc gtaaccagca atacatttaa ctatatcgat 540
gtggaaatta acctgtatcc agtcaacgac acatcgtgta ctcggacgac cactaccggt 600
ctcagcgaat ccatctcaac gtcggaacta actattacca tgaatcataa agattgtgat 660
cccgtctttc gtgcagaata cttctctgtc cttaataatg tagcaacttc aggattcttt 720
acaggagaaa atagatatca gaatacttca aagatatgta ctctgaattt cgagattaaa 780
tgtaacaaca aagattcatc ttccaaacag ttaacgaaaa caaagaatga tactatcatg 840
ccgcattcag agacggtaac tctagtgggc gactgtctat ctagcgtcga catctacata 900
ctatatagta ataccaatac tcaagactac gaaacggata caatctctta tcatatgggt 960
aatgttctcg atgtcaatag ccatatgccc gctagttgcg atatacataa actgatcact 1020
aattcccaga atcccaccca cttatag 1047

Claims (10)

1.一种检测猴痘病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述的引物探针组合物包括检测猴痘病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物；
所述的检测猴痘病毒的引物探针组合物为MPXV引物探针组合物；
所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物；
所述的MPXV引物探针组合物为：
F：SEQ ID NO:1：5'-ACCACATGCACCATCCAA-3'；
R：SEQ ID NO:2：5'-TGCTATCACATAATCTGGAAGCG-3'；
P：SEQ ID NO:3：5'-CCCGGAGGACACGATAGACAACA-3'；
所述的IPC引物探针组合物为：
F：SEQ ID NO:4：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；
R：SEQ ID NO:5：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；
P：SEQ ID NO:6：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'。
2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备检测猴痘病毒产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的产品包括独立试剂、芯片或试剂盒。
4.一种检测猴痘病毒的产品，其特征在于：所述的产品包括权利要求1所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述的产品还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品。
6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠。
7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸、KCI、Tris-HCI(pH 9.0)、MgCl2、Tween 20。
8.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的IPC质控品以冻干球的形式存在于微流控芯片中；
所述的IPC质控品的人工合成序列为SEQ ID NO:7；
所述的IPC质控品是DNA质粒；
所述的IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、2-羟丙基-β-环糊精、消泡剂、Tris-HCl(pH 8.0)、NaCl、Tween20。
9.一种检测猴痘病毒的微流控芯片试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1所述的引物探针组合物；
所述的试剂盒还包括纯化试剂、冻干试剂和IPC质控品；
所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠；
所述的冻干试剂包括脂多糖、羧丙基甲基纤维素、甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸、KCI、Tris-HCI(pH 9.0)、MgCl2、Tween 20；
所述的IPC质控品以冻干球的形式存在于微流控芯片中；
所述的IPC质控品的人工合成序列为SEQ ID NO:7；
所述的IPC质控品是DNA质粒；
所述的IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、2-羟丙基-β-环糊精、消泡剂、Tris-HCl(pH 8.0)、NaCl、Tween20；
所述的试剂盒在微流控芯片上完成样本的核酸提取、纯化、扩增和检测。
10.一种检测猴痘病毒的方法，所述的方法为非疾病诊断和治疗方法，其特征在于：所述的方法包括利用权利要求1所述的引物探针组合物、权利要求4-8任一项所述的产品或权利要求9所述的试剂盒对待测样本中猴痘病毒进行检测。
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