CN116868057A - 肽测定中的品质管理用标准溶液及肽测定的品质管理 - Google Patents

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Abstract

提供肽(包括蛋白质)测定中的品质管理用标准溶液及肽(包括蛋白质)测定的品质管理。一种对象肽测定用QC标准试样，其包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。测定对象的上述肽包含例如选自由Aβ1‑42(序列号9)、Aβ1‑38(序列号11)、Aβ1‑40(序列号7)及APP669‑711(序列号10)组成的组中的至少1种。上述经稳定同位素标记的肽包含例如选自由SIL‑Aβ1‑42、SIL‑Aβ1‑38、SIL‑Aβ1‑40及SIL‑APP669‑711组成的组中的至少1种。

Description

肽测定中的品质管理用标准溶液及肽测定的品质管理
技术领域
本发明属于生物体来源试样分析及肽(包括蛋白质)定量分析领域，涉及肽测定中的品质管理用标准溶液及肽测定的品质管理。
背景技术
各种生物体来源试样分析及肽(包括蛋白质)定量分析利用免疫沉淀法(Immunoprecipitation；IP)-质谱分析联用(IP-MS)、液相色谱-质谱分析联用(LC-MS)及气相色谱-质谱分析联用(GC-MS)等来进行。
在使用这些分析设备对多检体的肽进行测定时，得到的分析数据的品质管理很重要。即，在多检体的肽测定中，不论何时对检体进行测定，对于任一检体，都需要基于某一固定基准得到精度良好的分析数据。
例如，非专利文献1公开了使用与质谱分析相连的气相色谱及液相色谱的、血清及血浆的大规模代谢谱分析的步骤，对于GC-TOF-MS分析，在第1073页的第19项中公开了在各分析批次开始时注入QC样品。另外，对于UPLC-TOF-MS分析，在第1074页的BOX1中公开了在各分析批次开始时注入QC样品。
为了从品质方面判断所得到的分析数据是否应该采用，考虑了在通常的测定中在连续测定多个检体之前和之后进行品质管理用标准溶液的测定的方式。
另一方面，近年发现了作为生物标志物有用的各种肽(包括蛋白质)，需要对它们进行准确的定量分析。
例如，在国际公开WO2015/178398(其同族美国公开为US2017/0184573)、国际公开WO2017/047529(其同族美国公开为US2018/0238909)中，公开了评价脑内淀粉样蛋白β肽(Aβ)积累状态的替代生物标志物及其分析方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开WO2015/178398
专利文献2：美国公开US2017/0184573
专利文献3：国际公开WO2017/047529
专利文献4：美国公开US2018/0238909
非专利文献
非专利文献1：NATURE PROTOCOLS,2011,VOL.6,NO.7,1060-1083,“Proceduresfor large-scale metabolic profiling of serum and plasma using gaschromatography and liquid chromatography coupled to mass spectrometry”
发明内容
发明要解决的问题
在多检体的生物标志物肽测定中，不论何时对检体进行测定，对于任一检体，都需要基于某一固定基准得到精度良好的分析数据。但是，上述各专利文献完全没有言及对多检体的肽进行测定时得到的分析数据的品质管理。
因此，本发明的目的在于，提供肽(包括蛋白质)测定中的品质管理用标准溶液(Quality Control Standard for Peptide Measurement)及肽(包括蛋白质)测定的品质管理(Quality Control for Peptide Measurement)。
用于解决问题的方案
本说明书中，有时将品质管理用标准溶液(Quality Control Standard forPeptide Measurement)记作“QC标准试样”、“QC标准溶液”、“QC试样”或简单记作“标准试样”、“标准溶液”等。
在多检体的肽测定中，不论何时对检体进行测定，对于任一检体，都需要基于某一固定基准得到精度良好的分析数据。因此，在实际试样(检体)测定之前和/或实际试样(检体)测定之后，进行品质管理用标准溶液测定，确认品质管理用标准溶液的测定结果无实质变动或变动少。品质管理用标准溶液的测定结果如果无实质变动或变动少，则认为在这些品质管理用标准溶液测定期间所进行的实际试样(检体)的测定结果在品质管理方面是合适的。
期望品质管理用标准溶液与实际试样(检体)的组成条件尽量相同或接近。从该观点出发，在多检体分析中，期望少量地采集各检体的一部分并且合并，来作为品质管理用标准溶液。但是，在多检体分析项目开始前尚未采集全部检体以及各检体的量仅为少量等情况下，难以采集各检体的一部分来制备品质管理用标准溶液。
由于这些情况，使用市售的(人)血液样品(血清样品、血浆样品)来作为品质管理用标准溶液。
但是，在使用市售的(人)血液样品(血清样品、血浆样品)作为品质管理用标准溶液时，市售(人)血液样品中所含的成为测定对象的肽的含量不明，存在明显偏离实际试样(检体)中的测定对象肽的含量的可能性。
例如，在测定对象的生物标志物肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽时，市售的(人)血液样品(血清样品、血浆样品)中包含多少量的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽这一点不明，存在明显偏离实际试样(检体)中的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽的含量的可能性。因此，即使在市售的(人)血液样品中添加(spike)测定对象的生物标志物肽(添加)，也无法确定该生物标志物肽的合适的添加量。
当然，市售的(人)血液样品并非以特定生物标志物肽的测定为目的。
本发明人进行深入研究发现，通过向血液试样中添加经稳定同位素标记的肽作为品质管理用标准溶液，从而以经稳定同位素标记的肽的量(或者，在经稳定同位素标记的肽为多种时，以它们的量的比)为基准可以进行分析数据的品质管理。上述经稳定同位素标记的肽原本在生物体来源的血液试样中和模拟血液试样中均不存在，但只要与测定对象的肽的基本结构相同或类似，则可因为相同的物理化学行为而被分析出。
本发明包括以下方案。
一种对象肽测定用QC标准试样，其包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。
一种肽测定方法，其为测定多检体血液试样中的对象肽的方法，
上述肽测定方法包括下述工序：
开始QC工序，对包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽的QC标准试样进行测定；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；
中间QC工序，对上述QC标准试样进行测定；
将上述检体测定工序和上述中间QC工序重复进行规定次数的工序；
检体测定工序；对1个或多个血液试样进行测定；和
最终QC工序，对上述QC标准试样进行测定。
根据上述的肽测定方法，其中，在上述各检体测定工序中，对1个以上且9个以下血液试样进行连续测定。
根据上述的肽测定方法，其中，还包括下述工序：
判定工序，上述开始QC工序、上述中间QC工序及上述最终QC工序中测得的各QC标准试样中的上述经稳定同位素标记的肽的水平相对于规定的基准值在-20％以上且+20％以下的正常范围内时，该QC标准试样的测定为合格，另一方面，在上述正常范围外时，该QC标准试样的测定为不合格；和
确定是否采用的工序，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者为合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为采用该测定结果，另一方面，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者或其中一者为不合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为不采用该测定结果。
一种QC标准试样试剂盒，其为对象肽测定用的QC标准试样试剂盒，
所述QC标准试样试剂盒包含：
含有肽的血液试样、和
要添加于该血液试样的经稳定同位素标记的肽。
本发明中，肽中也包括蛋白质。肽的水平基本上是指浓度，也可以为本领域技术人员基于浓度而使用的其它单位、例如质谱分析中的检测离子强度。
成为测定对象的检体可以为来自人及人以外的哺乳动物(例如大鼠、狗、猫等)等的生物体来源试样(例如血液、脑脊液(CSF)、尿、身体分泌液、唾液、痰等体液；以及粪便)。生物体来源试样不返回到来源源头的被检对象(例如被检者)，而是被废弃。
发明的效果
根据本发明，对象肽测定用QC标准试样包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。上述经稳定同位素标记的肽原本在生物体来源的血液试样中和模拟血液试样中均不存在。因此，通过向血液试样中添加经稳定同位素标记的肽作为QC标准试样，从而能够不受各种变动因素影响，以经稳定同位素标记的肽的量为基准进行分析数据的品质管理。
根据本发明，对象肽测定用QC标准试样包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。上述经稳定同位素标记的肽原本在生物体来源的血液试样中和模拟血液试样中均不存在，但只要与测定对象的肽的化学结构相同或类似，则可因为相同的物理化学行为而被分析出。因此，通过向血液试样中添加与测定对象的肽的化学结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽并作为QC标准试样，从而能够不受各种变动因素影响，以经稳定同位素标记的肽的量为基准进行分析数据的品质管理。
上述经稳定同位素标记的肽为多种时，可以以它们的量的比为基准进行分析数据的更具可靠性的品质管理。
根据本发明，可以使用对象肽测定用QC标准试样在对多检体血液试样中的对象肽进行测定时进行分析数据的品质管理。
进而，根据本发明，可提供用于制作上述对象肽测定用的QC标准试样的试剂盒。
附图说明
图1为对多检体进行测定时的概略流程图。
图2为来自N＝27个数据的QC试样(标准血浆)的SIL-淀粉样蛋白肽比基准值确定流程图。
图3为示出对多检体(检体数：42)进行质谱分析时的、96孔板上的样品配置例的图。
具体实施方式
在本发明的一实施方式中，对象肽测定用QC标准试样包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。
[分析对象物质]
首先对分析对象物质进行详细说明。
分析对象物质没有特别限定，可包括例如肽、糖肽、糖链、蛋白质、脂质、糖脂等。肽、糖肽、糖链、蛋白质、脂质、糖脂可包括各种物质。更具体而言，可以为Aβ及Aβ相关肽。“Aβ及Aβ相关肽”有时也统称为“Aβ相关肽”。“Aβ及Aβ相关肽”也包括通过切断淀粉样蛋白前体蛋白(Amyloid precursor protein；APP)而生成的、在局部包含Aβ及Aβ的序列的肽。
例如，Aβ相关肽包括以下那样的肽。
APP677-709(Aβ6-38)(序列号1)：
HDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGG
APP672-704(Aβ1-33)(序列号2)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIG
APP677-711(Aβ6-40)(序列号3)：
HDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV
APP672-706(Aβ1-35)(序列号4)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLM
APP672-708(Aβ1-37)(序列号5)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVG
APP674-711(Aβ3-40)(序列号6)：
EFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV
APP672-711(Aβ1-40)(序列号7)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV
OxAPP672-711(OxAβ1-40)(序列号8)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV(Met 706被氧化)
APP672-713(Aβ1-42)(序列号9)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA
APP669-711(序列号10)：
VKMDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV
APP672-709(Aβ1-38)(序列号11)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGG
APP672-710(Aβ1-39)(序列号12)：
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGV
淀粉样蛋白前体蛋白(APP)是单次跨膜蛋白，由770个氨基酸残基构成。淀粉样蛋白前体蛋白(APP)接受β分泌酶和γ分泌酶引起的蛋白水解，通过蛋白水解而产生淀粉样蛋白β肽(Aβ)。APP672-713和Aβ1-42表示同一个肽(序列号9)。另外，APP672-711和Aβ1-40表示同一个肽(序列号7)。
上述那样的Aβ相关肽中，Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-40(序列号7)、APP669-711(序列号10)、Aβ1-39(序列号12)是关于阿尔茨海默病的有效的生物标志物。另外
APP669-711水平相对于APP672-713(Aβ1-42)水平的比：
APP669-711/APP672-713(Aβ1-42)、
APP672-711(Aβ1-40)水平相对于APP672-713(Aβ1-42)水平的比：
APP672-711(Aβ1-40)/APP672-713(Aβ1-42)、
APP674-711(Aβ3-40)水平相对于APP672-713(Aβ1-42)水平的比：
APP674-711(Aβ3-40)/APP672-713(Aβ1-42)、及
APP672-710(Aβ1-39)水平相对于APP672-713(Aβ1-42)水平的比：
APP672-710(Aβ1-39)/APP672-713(Aβ1-42)等也是关于阿尔茨海默病的有效的生物标志物。
另外，肽可以是通过免疫沉淀法(IP)得到的肽。或者，可以是通过肽酶等酶消化蛋白质而生成的肽、通过色谱分出的肽。
分析对象物质可以包含内标物。内标物可以由本领域技术人员适当选择。例如，可以使用经稳定同位素标记的物质。可以使用对分析对象物质中的1种物质进行稳定同位素标记而得到的物质。实施例中示出了使用用稳定同位素进行了标记的Aβ1-38(SIL-Aβ1-38)作为内标物的例子。本说明书中，“SIL-”是指经稳定同位素标记(Stable isotopelabeled)。
将包含分析对象物质的试样供于质谱分析。被供于质谱分析的上述试样没有特别限定，例如可以是生物体来源试样。生物体来源试样包括血液、脑脊液(CSF)、尿、身体分泌液、唾液及痰等体液；以及粪便。血液试样包括全血、血浆及血清等。血液试样可以通过将从个体采集的全血进行适当处理而制备。作为由采集的全血制备血液试样时进行的处理，没有特别限定，可以进行临床学允许的所有处理。例如，可进行离心分离等。另外，要供于质谱分析的血液试样可以在其制备工序的过程中或制备工序后的阶段适当进行冷冻等低温下的保存。需要说明的是，本发明中，血液试样等生物体来源试样在被供于质谱分析的情况下，该生物体来源试样不返回到来源源头的被检者，而是被废弃。
要供于质谱分析的上述试样可以是进行各种前处理后的试样。例如，可以是进行了免疫沉淀法(IP)后。可以是用肽酶等酶进行蛋白质消化后。可以是进行色谱后。要供于质谱分析的上述试样可以使用添加了一定量的内标物而得的物质。
要供于质谱分析的上述试样可以是在预先进行免疫沉淀法后将通过免疫沉淀法得到的洗脱液供于质谱分析(免疫沉淀-质谱分析联用Immunoprecipitation-massspectrometry；IP-MS)。免疫沉淀法可以使用抗体固定化载体来进行，所述抗体固定化载体是使用具有能够识别分析对象物质的抗原结合部位的免疫球蛋白或包含能够识别分析对象物质的抗原结合部位的免疫球蛋白片段而制作的。
另外，要供于质谱分析的上述试样可以连续地进行免疫沉淀(ConsecutiveImmunoprecipitation；cIP)，之后用质谱分析装置进行试样中肽的检测(cIP-MS)。通过连续进行2次亲和纯化，可以利用第2次的亲和纯化来进一步减少通过仅1次亲和纯化无法排除的夹杂物。因此，能够防止夹杂物所引起的抑制多肽的电离的情况，即使是生物体试样中的微量的多肽，也能够通过质谱分析高灵敏度地测定。
[QC标准试样]
对象肽测定用QC标准试样包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。
上述QC标准试样的血液试样为生物体来源试样时，通常包含各种肽。血液试样中包含的肽可以包括测定对象的肽，也可以包括非测定对象的肽。上述血液试样可以选自由全血、血浆及血清组成的组。可以进行了通常的前处理。
作为上述QC标准试样的血液试样为生物体来源试样以外的血液试样的情况，可选自由模拟血液、模拟血浆及模拟血清组成的组。在这些模拟试样的情况下，可根据测定对象添加(加标)期望的肽。
上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽可以包括与测定对象的上述肽在化学上结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽。通过使上述QC标准试样包含与测定对象的肽对应的、在化学上结构相同或类似的经稳定同位素标记的肽，从而上述QC标准试样的组成与实际测定对象试样(检体)的组成条件变得接近而优选。
在此，关于与测定对象的上述肽在化学上具有“类似的”结构的肽，例如在测定对象肽为选自淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽中的肽时，淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽中包括的肽符合与测定对象的上述肽在化学上具有“类似的”结构的肽。这种情况下，通过使上述QC标准试样包含与测定对象的肽对应的在化学上结构“类似的”经稳定同位素标记的肽，从而上述QC标准试样的组成与实际测定对象试样(检体)的组成条件变得接近而优选。
与测定对象的上述肽在化学上结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽本来在生物体来源的血液试样中和模拟血液试样中不存在，但只要与测定对象的肽的化学结构相同或类似，则可因为相同的物理化学行为而进行质谱分析。因此，通过向血液试样中添加与测定对象的肽的化学结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽而作为上述QC标准试样，从而可以不受各种变动因素影响，以经稳定同位素标记的肽的量为基准进行分析数据的品质管理。
通过使上述QC标准试样包含与测定对象的肽对应的在化学上结构“相同”的经稳定同位素标记的肽，从而相较于包含结构“类似的”经稳定同位素标记的肽而言，上述QC标准试样的组成变得更接近实际测定对象试样(检体)的组成条件而优选。
另外，测定对象的上述肽可以是多种肽。该情况下，上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽可以包含与测定对象的上述多种肽分别在化学上结构相同或相似且经稳定同位素标记的多种肽。通过包含与测定对象的肽对应的经稳定同位素标记的肽，QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件而优选。
上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽可以考虑实际测定对象试样(检体)的组成条件的近似值以规定的基准范围内的量来包含。实际包含的量可成为“基准值”。
详细而言，在测定对象的上述肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽时，添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽优选为经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件，是优选的。
测定对象的上述肽为选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种时，添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽可以包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotopelabeled))。
例如，经稳定同位素标记的SIL-Aβ1-38可以是Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。
经稳定同位素标记的SIL-Aβ1-42可以是Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。
经稳定同位素标记的SIL-Aβ1-40可以是Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。
经稳定同位素标记的SIL-APP669-711可以是Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。
于是，上述经稳定同位素标记的肽可以是Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。这些可以通过化学合成而得到，或者也可以以市售品形式获得。
具体而言可以是，测定对象的上述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种；
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42和/或
APP669-711/Aβ1-42
作为生物标志物使用时；
添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种；
上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件，是优选的。
更具体而言，可以是作为上述经稳定同位素标记的肽的存在量的质谱分析峰强度的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件，是优选的。
为了使峰强度的比成为上述范围内的值，可以调整上述经稳定同位素标记的肽的添加量。
峰强度的比例如可以将各峰强度以内标肽(SIL-Aβ1-38)来标准化，并计算它们的比。进而，可以得到用所使用的各质谱分析装置进行了校正的值，并计算它们的比。
于是，上述经稳定同位素标记的肽为Phe和Ile的碳原子被13C置换而成者，或者，可以是全部氮原子14N被15N置换而成者。这些可以通过化学合成而得到，或者也可以以市售品形式获得。
关于作为上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽的存在量的质谱分析峰强度的比，实际包含于QC标准试样中的量可成为“基准值”。
关于这些上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽的存在量，例如如果考虑使其接近实际测定对象试样(检体)的组成条件，以上述QC标准试样中的浓度来表示，分别可以设为：
SIL-Aβ1-40的浓度：45～121pM
SIL-Aβ1-42的浓度：4～13pM
SIL-APP669-711的浓度：4～11pM。
但是，不限于这样的范围。另外，由于实际存在量(pM)的比与质谱分析的峰强度的比未必一致，因此使用作为上述质谱分析峰强度比的基准的方式是有用的。免疫沉淀(IP)收率、MS的电离效率根据肽而不同，因此实际的肽浓度比与质谱分析峰强度的比可能不同。
[肽测定方法]
在本发明的一实施方式中，参照图1，测定多检体血液试样中的对象肽的方法包括下述步骤：
开始QC工序，对包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽的QC标准试样进行测定；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；
中间QC工序。对上述QC标准试样进行测定；
将上述检体测定工序和上述中间QC工序重复规定次数的工序；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；和
最终QC工序，对上述QC标准试样进行测定。
在上述各检体测定工序中，进行血液试样的连续测定。例如，可以进行1个以上且9个以下的血液试样的连续测定。
在本发明的一实施方式中，测定多检体血液试样中的对象肽的方法还包括下述工序：
判定工序，上述开始QC工序、上述中间QC工序及上述最终QC工序中测得的各QC标准试样中的上述经稳定同位素标记的肽的水平相对于规定的基准值在-20％以上且+20％以下的正常范围内时，该QC标准试样的测定为合格，另一方面，在上述正常范围外时，该QC标准试样的测定为不合格；和
确定是否采用的工序，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者为合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为采用该测定结果，另一方面，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者或其中一者为不合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为不采用该测定结果。
测定对象的上述肽可以是淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽可以是经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
测定对象的上述肽为选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种时，上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽可以包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotopelabeled))。
具体而言可以是，测定对象的上述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种；
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42和/或
APP669-711/Aβ1-42作为生物标志物使用；
上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种；
上述QC标准试样中，上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件而优选。
更具体而言，可以是在上述QC标准试样中作为上述经稳定同位素标记的肽的存在量的质谱分析峰强度的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。QC标准试样的组成变得接近实际测定对象试样(检体)的组成条件而优选。
上述经稳定同位素标记的SIL-肽的质谱分析峰强度的各比不限于上述的范围。关于这些各比的值，由于免疫沉淀(IP)收率、MS的电离效率根据肽而不同，因此实际的肽浓度比与质谱分析峰强度的比可能不同，因此最适范围值可能会因为质谱分析装置的方法(MALDI、或ESI等)、质谱分析装置的种类(厂商、型号、激光的种类等)而不同。上述的各比的范围为用Shimadzu制造的AXIMA-PerformanceTM测定时的例子。
关于作为上述QC标准试样的添加于血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽的存在量的质谱分析峰强度的比，实际对QC标准血浆进行质谱分析测定而得到的肽峰强度的比可成为“基准值”。
肽测定可以通过免疫沉淀法(Immunoprecipitation；IP)-质谱分析联用(IP-MS)、液相色谱-质谱分析联用(LC-MS)、或气相色谱-质谱分析联用(GC-MS)来进行测定。
[质谱分析]
质谱分析法没有特别限定，包括基于基质辅助激光解吸电离(MALDI)质谱分析法、电喷雾电离(ESI)质谱分析法等的质谱分析法。例如，可以使用MALDI-TOF(基质辅助激光解吸电离-飞行时间)型质谱分析装置、MALDI-IT(基质辅助激光解吸电离-离子阱)型质谱分析装置、MALDI-IT-TOF(基质辅助激光解吸电离-离子阱-飞行时间)型质谱分析装置、MALDI-FTICR(基质辅助激光解吸电离-傅里叶变换离子回旋共振)型质谱分析装置、ESI-QqQ(电喷雾电离-三重四级杆)型质谱分析装置、ESI-Qq-TOF(电喷雾电离-串联四级杆-飞行时间)型质谱分析装置、ESI-FTICR(电喷雾电离-傅里叶变换离子回旋共振)型质谱分析装置等。
基质以及基质溶剂可以由本领域技术人员根据分析对象物质适当地决定。
作为基质，可以使用例如α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)、2,5-二羟基苯甲酸(2,5-DHB)、芥子酸、3-氨基喹啉(3-AQ)等。
作为基质溶剂，例如可以从由乙腈(ACN)、三氟乙酸(TFA)、甲醇、乙醇以及水组成的组中选择并使用。更具体地说，能够使用ACN-TFA水溶液、ACN水溶液、甲醇-TFA水溶液、甲醇水溶液、乙醇-TFA水溶液、乙醇溶液等。ACN-TFA水溶液中的ACN的浓度例如为10～90体积％，TFA的浓度例如可以为0.05～1体积％、优选为0.05～0.1体积％。
基质浓度例如可以为0.1～50mg/mL、优选为0.1～20mg/mL，或者可以为0.3～20mg/mL、进一步优选为0.5～10mg/mL。
使用基于MALDI质谱分析的检测系统的情况下，优选结合使用基质添加剂(co-matrix)。基质添加剂可以由本领域技术人员根据分析对象(多肽)和/或基质适当地进行选择。例如，作为基质添加剂，可以使用含膦酸基的化合物。具体地说，作为含有1个膦酸基的化合物，可列举膦酸(Phosphonic acid)、甲基膦酸(Methylphosphonic acid)、苯基膦酸(Phenylphosphonic acid)以及1-萘基甲基膦酸(1-Naphthylmethylphosphonic acid)等。另外，作为含有2个以上膦酸基的化合物，可列举亚甲基二膦酸(Methylenediphosphonicacid；MDPNA)、亚乙基二膦酸(Ethylenediphosphonic acid)、乙烷-1-羟基-1,1-二膦酸(Ethane-1-hydroxy-1,1-diphosphonic acid)、次氮基三膦酸(Nitrilotriphosphonicacid)以及亚乙基二氨基四膦酸(Ethylenediaminetetraphosphonic acid)等。在上述含膦酸基的化合物中，优选1个分子中具有2个以上、优选2个～4个膦酸基的化合物。
含膦酸基的化合物的使用例如在抗体固定化载体表面残留的清洗溶液的金属离子混入到解离工序后的洗脱液中的情况下是有用的。该金属离子在质谱分析中对背景产生不良影响。含膦酸基的化合物的使用具有抑制这种不良影响的效果。
需要说明的是，除了上述基质添加剂以外，也可以使用更一般的添加剂、例如选自由铵盐和有机碱组成的组中的物质。
基质添加剂可以制备成在水中或基质溶剂中为0.1～10w/v％、优选为0.2～4w/v％的溶液。基质添加剂溶液及基质溶液例如可以1：100～100：1、优选1：10～10：1的体积比混合。
[QC标准试样试剂盒]
在本发明的一实施方式中，对象肽测定用的QC标准试样试剂盒包含：
含有肽的血液试样、和
要添加于该血液试样的经稳定同位素标记的肽。
在上述QC标准试样试剂盒中，上述经稳定同位素标记的肽可以包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”是指经稳定同位素标记(Stable isotope labeled))。
上述QC标准试样试剂盒可以包含其它必要的成分。作为其它必要的成分，可列举例如作为内标使用的SIL-Aβ1-38、各种缓冲溶液等。
实施例
以下示出实施例来具体说明本发明，但是本发明不受这些实施例限制。以下用％表示的物质的量在没有特别声明时、在为液体时，以体积基准来表示。
[实验例1：标准血浆的制备]
示出QC试样(标准血浆)的准备方法的方案例。
SIL-Aβ1-38使用AnaSpec(San Jose,CA,USA)。SIL-Aβ1-38是Aβ1-38的Phe和Ile的碳原子被13C置换而得的。
SIL-Aβ1-40使用rPeptide(Watkinsville,GA,USA)。SIL-Aβ1-40是Aβ1-40的全部氮原子被15N置换而得的。
SIL-Aβ1-42使用rPeptide(Watkinsville,GA,USA)。SIL-Aβ1-42是Aβ1-42的全部氮原子被15N置换而得的。
SIL-APP669-711使用rPeptide(Watkinsville,GA,USA)。SIL-APP669-711是APP669-711的全部氮原子被15N置换而得的。
[实验例1-1：向血浆中添加SIL-肽]
[1]将各100μL的用1mg/mL BSA、0.1％(w/v)DDM、50mM Tris-HCl缓冲液(pH9.0)稀释的50nM的SIL-Aβ1-40、5nM的SIL-Aβ1-42及5nM的SIL-APP669-711添加到100mL的人血浆中。将其称为“SIL添加血浆-1”。
[2]通过颠倒混合将SIL添加血浆-1充分混合。
[3]将SIL添加血浆-1中的900μL分到2个1.5mL容积的微型管中，将分出的2管和剩余的SIL添加血浆-1分别在-60℃以下冷冻。
[4]将900μL分出·冷冻中的1管融解，实施连续免疫沉淀法(ConsecutiveImmunoprecipitation；cIP)-质谱分析(cIP-MS)(IP重复次数为3次)。IP-MS操作的详细情况如下。
[连续免疫沉淀法(Consecutive Immunoprecipitation；cIP)]
(抗体固定化珠的准备)
准备以淀粉样蛋白β蛋白(Aβ)的3-8个残基为表位的抗Aβ抗体(IgG)的克隆6E10(Covance公司)。
对抗Aβ抗体(IgG)100μg，使约3.3×108个磁珠(Dynabeads(注册商标)M-270Epoxy)在固定化缓冲液(含有1.3M硫酸铵的0.1M磷酸缓冲液(pH7.4))中在37℃下反应16～24小时，由此制作抗AβIgG固定化珠。
(第1反应工序)
向250μL上述SIL添加血浆-1中混合包含11pM经稳定同位素标记的Aβ1-38(SIL-Aβ1-38)的第一IP反应缓冲液(0.2％(w/v)DDM,0.2％(w/v)NTM,800mM GlcNAc,100mM Tris-HCl(pH7.4),300mM NaCl)250μL后，在冰上静置5～60分钟。SIL-Aβ1-38是Phe和Ile的碳原子被13C置换而得的，作为用于使质谱的峰强度标准化的内标而使用。将该血浆与抗AβIgG固定化珠混合，在4℃的可制冷摇床上振荡1小时及进行移液搅拌。
(第1清洗工序、第1洗脱工序)
之后，将上述抗体珠用第一IP清洗缓冲液(0.1％ DDM,0.1％ NTM、50mM Tris-HCl(pH7.4)、150mM NaCl)100μL清洗1次，用50mM乙酸铵缓冲液50μL清洗1次后，利用第一IP洗脱液(含有0.1％ DDM的50mM甘氨酸缓冲液(pH2.8))将抗体珠上结合的Aβ及Aβ样肽(即，APP派生型肽)洗脱。
(中性化工序)
将得到的洗脱液与第二IP反应缓冲液(0.2％(w/v)DDM,800mM GlcNAc,300mMTris-HCl(pH7.4),300mM NaCl)混合，得到第一纯化溶液。
(第2反应工序)
将得到的第一纯化溶液与另外的抗Aβ抗体固定化珠混合，用4℃的可制冷摇床振荡1小时及进行移液搅拌。
(第2清洗工序、第2洗脱工序)
之后，将抗Aβ抗体固定化珠用第二清洗缓冲液(0.1％ DDM,150mM Tris-HCl(pH7.4)、150mM NaCl)50μL清洗2次，用50mM乙酸铵缓冲液50μL清洗1次，进而用H2O 30μL清洗1次，然后利用第二IP洗脱液(含有5mM盐酸的70％(v/v)乙腈)8μL(或根据实验室的湿度而用9μL)洗脱抗体珠上结合的Aβ及Aβ样肽(APP派生型肽)。由此得到第二纯化溶液。将第二纯化溶液供于质谱分析。
正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)[临界胶束浓度cmc：0.009％]
正壬基-β-D-硫代麦芽糖苷(NTM)[cmc：0.116％]
[利用MALDI-TOF MS的检测]
作为线性TOF用的基质，使用α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)。基质溶液通过将CHCA1mg用70％(v/v)乙腈1mL溶解而制备。作为基质添加剂，使用0.4％(w/v)亚甲基二膦酸(MDPNA)。将1mg/mL的CHCA溶液和0.4％(w/v)MDPNA等量混合后，将其中的0.5μL滴加到μFocus MALDI plateTM 900μm(Hudson Surface Technology,Inc.,Fort Lee,NJ)上，干固。
取通过上述免疫沉淀得到的第二纯化溶液1μL，滴加到μFocus MALDI plateTM 900μm上的基质上。
质谱数据使用AXIMAPerformance(Shimadzu/KRATOS,Manchester,UK)通过正离子模式的线性TOF获得。对于1个孔，各累积400个点、16000次。峰的检测限的基准设为S/N比为3以上。线性TOF的m/z值用峰的平均质量来表示。m/z值使用作为外标的人血管紧张素II和人ACTH片段18-39、氧化牛胰岛素β链、牛胰岛素进行校正。
[5]计算SIL淀粉样蛋白肽比(SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42及SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42、N＝3的平均值)。在此，在由于装置性能不良、预想外的故障等而无法取得数据时，可以使用900μL分出·冷冻中的另1管再次实施cIP-MS。
[6]计算出的值在基准范围内：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比为25.0～32.5、及
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比为0.7～1.3时，进入[实验例2：SIL淀粉样蛋白肽比基准值确定]。在基准范围外时，进入下一项[实验例1-2：SIL淀粉样蛋白肽比调整]。
[实验例1-2：SIL-淀粉样蛋白肽比调整]
[1]将前项实验例1-1的[3]中冷冻保存的剩下的SIL添加血浆-1在室温下静置、解冻。
[2]如果前项实验例1-1的[3]中900μL分出·冷冻中的另1管还在，则将其解冻并与上述[1]的解冻液混合。
[3]作为SIL淀粉样蛋白肽比的目标值，将SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比规定为28.0、及
将SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比规定为1.0，以前项实验例1-1的[5]中的测定值和上述目标值的中点(中点目标值)为基准，将50nM的SIL-Aβ1-40、5nM的SIL-Aβ1-42及5nM的SIL-APP669-711的必要量添加到上述[1]的解冻液中。(由于以最终目标值为基准来添加时，通常会过量添加，因此以中间目标值为基准来添加。)
[4]通过颠倒混合将上述[3]的液体充分混合。将其称为“SIL添加血浆-2”。
[5]将SIL添加血浆-2中的900μL分到2个1.5mL容量的微型管中，将分出的2管和剩余的SIL添加血浆-2分别在-60℃以下冷冻。
[6]将900μL分出·冷冻中的1管融解，实施连续免疫沉淀法(ConsecutiveImmunoprecipitation；cIP)-质谱分析(cIP-MS)(IP重复次数为3次)。IP-MS操作的详细如前项实验例1-1。
[7]计算SIL-淀粉样蛋白肽比(SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42及SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42、N＝3的平均值)。在此，在由于装置性能不良、预想外的故障等而无法取得数据时，可以使用900μL分出·冷冻中的另1管再次实施cIP-MS。
[8]计算出的值在基准范围内：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比为25.0～32.5、及
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比为0.7～1.3时，进入[实验例2：SIL淀粉样蛋白肽比基准值确定]。在基准范围外时，进入下一项[9]及以后，进行第3次添加。
[9]将上述[5]中冷冻保存的剩余的SIL添加血浆-2在室温下静置而解冻。
[10]如果上述[5]中900μL分出·冷冻中的另1管还在，则将其解冻并与上述[9]的解冻液混合。
[11]作为第3次添加，作为SIL-淀粉样蛋白肽比的目标值，将SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比规定为28.0、及
将SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比规定为1.0，将其作为基准，将50nM的SIL-Aβ1-40、5nM的SIL-Aβ1-42及5nM的SIL-APP669-711的必要量添加到上述[9]的解冻液中。
[12]通过颠倒混合将上述[11]的液体充分混合。将其称为“SIL添加血浆-3”。
[13]将SIL添加血浆-3中的900μL分到2个1.5mL容量的微型管中，将分出的2管和剩余的SIL添加血浆-3分别在-60℃以下冷冻。
[14]将900μL分出·冷冻中的1管融解，实施连续免疫沉淀法(ConsecutiveImmunoprecipitation；cIP)-质谱分析(cIP-MS)(IP重复次数为3次)。IP-MS操作的详细如前项实验例1-1。
[15]计算SIL-淀粉样蛋白肽比(SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42及SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42、N＝3的平均值)。在此，在由于装置性能不良、预想外的故障等而无法取得数据时，可以使用900μL分出·冷冻中的另1管再次实施cIP-MS。
[16]计算出的值在基准范围内：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比为25.0～32.5、及
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比为0.7～1.3时，进入[实验例2：SIL淀粉样蛋白肽比基准值确定]。在基准范围外时，回到上述[9]，按照上述[9]～[16]的步骤重复进行进一步的添加和IP-MS操作，直至计算出的值达到上述基准范围内为止。
[实验例2：标准血浆的SIL-淀粉样蛋白肽比基准值确定]
[1]将上述SIL-淀粉样蛋白肽比进入上述基准范围内：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比为25.0～32.5、及
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比为0.7～1.3的SIL添加血浆作为标准血浆。
[2]将冷冻保存的SIL添加血浆在室温下静置、解冻。
[3]如果900μL分出·冷冻中的另1管还在，则将其解冻并与上述[2]的解冻液混合。
[4]将解冻液的总量以900μL分注到1.5mL容量的微型管中。
[5]将全部分注品在-60℃以下暂时冷冻。
[6]将上述[5]的冷冻品中的3管融解，使用3个批次的抗体珠各以N＝3实施IP-MS(合计N＝9)。IP-MS操作的详细如前项实验例1-1。
[7]将IP-MS操作重复3个批次(合计N＝27)。
[8]由N＝27的IP-MS结果计算淀粉样蛋白肽比。计算出的淀粉样蛋白肽比两者如果进入基准范围内：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比为25.0～32.5、及
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比为0.7～1.3，则将其值确定为基准值。计算出的淀粉样蛋白肽比中的一者或两者在上述基准范围外时，从标准血浆的制备起再次实施。
通过上述方案例而准备QC试样(标准血浆)。
将来自N＝27个数据的QC试样(标准血浆)的SIL-淀粉样蛋白肽比基准值确定的流程示于图2。
图2中、
<1>关于S/N阈值、
SIL-Aβ1-38的S/N阈值：15
SIL-Aβ1-40的S/N阈值：3
SIL-Aβ1-42的S/N阈值：3
SIL-APP669-711的S/N阈值：3。
<2>关于基准值、
基准值1：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比、及
基准值2：
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比。
<3>关于去除者、
·对于与基准值的相对误差超过20％的数据，从大的数据起去除后再次进行计算。
·每个基准值设为独立。即，即使因为在基准值1下超过20％而去除，在基准值2下如果为20％以下则也予以采用。
更详细而言，如以下所述。
在确定基准值的阶段，考虑测定误差而去除异常值，如果最终在N＝27的数据中其80％以上即22个以上数据残留，则用该残留数据求出平均值，确定为基准值。例如，在某个谱图中，在SIL-Aβ1-40的峰位置重叠有夹杂物峰而SIL-Aβ1-40的峰强度异常时，基准值1(SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比)的数据被排除在外，另一方面，SIL-APP669-711和SIL-Aβ1-42的峰可准确检测，因此采用基准值2(SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比)。
由N＝27的测定数据确定基准值1及2可通过软件的自动计算来进行。
<4>关于视为合格的基准值范围、
基准值1：25.0～32.5
基准值2：0.7～1.3。
[实验例3：使用QC试样(标准血浆)的淀粉样蛋白肽检体测定]
这里使用通过上述方案例而准备的QC试样(标准血浆)，对测定对象的血中淀粉样蛋白肽检体(检体数：42)进行IP-MS测定。
(IP-MS测定的基本操作)
测定对象的各检体添加有作为内标的SIL-Aβ1-38(AnaSpec，San Jose,CA,USA)，且基于如前项实验例1-1的连续免疫沉淀法进行了IP操作。
MS测定通过MALDI-TOF MS分析来进行。
更具体而言，质谱数据使用AXIMAPerformance(Shimadzu/KRATOS,Manchester,UK)，通过正离子模式的线性TOF而获得。
作为线性TOF用的基质，使用α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)。基质溶液通过将CHCA1mg用70％(v/v)乙腈1mL溶解而制备。作为基质添加剂，使用0.4％(w/v)亚甲基二膦酸(MDPNA)。将1mg/mL的CHCA溶液和0.4％(w/v)MDPNA等量混合后，将其中的0.5μL滴加于μFocus MALDI plateTM 900μm(Hudson Surface Technology,Inc.,Fort Lee,NJ)上，干固。
取上述经IP操作的检体的纯化溶液1μL，滴加于μFocus MALDI plateTM 900μm上的基质上。
对于1个孔，累积400个点、16000次。峰的检测限的基准设为S/N比为3以上。线性TOF的m/z值用峰的平均质量来表示。m/z值使用作为外标的人血管紧张素II和人ACTH片段18-39、氧化牛胰岛素β链、牛胰岛素进行校正。
参照图1，作为处理最大检体数为42个检体时的处理例，首先，对上述QC标准试样进行MS测定(开始QC工序)。
然后，对IP后的测定对象的各检体(检体数：9)进行MS测定(检体测定工序)。
接着，对上述QC标准试样进行MS测定(中间QC工序)。
然后，将上述检体测定工序和上述中间QC工序重复进行规定次数(3次)(重复工序)。
然后，对IP后的测定对象的各检体(检体数：6)进行MS测定(检体测定工序)。
接着，对上述QC标准试样进行MS测定(最终QC工序)。
图3示出对多检体(检体数：42)进行质谱分析时的、96孔板上的样品配置例。测定顺序用箭头(→)来表示。
根据图3，首先将QC标准试样1载置于板孔1A上(开始QC工序)；然后
将检体1～9载置于孔1B～2G上(检体测定工序)，将QC标准试样2载置于孔2F上(中间QC工序)；
将检体11～19载置于孔2E～3F上(检体测定工序)，将QC标准试样3载置于孔3E上(中间QC工序)；
将检体18～27载置于孔3D～4C上(检体测定工序)，将QC标准试样4载置于孔4B上(中间QC工序)；
将检体28～29载置于孔4A～5A上(检体测定工序)，将QC标准试样5载置于孔6H上(中间QC工序)；
将检体37～42载置于孔6G～6B上(检体测定工序)；最后
将QC标准试样6载置于板孔6A上(最终QC工序)。
(使用QC试样的淀粉样蛋白肽检体测定的品质管理)
上述开始QC工序、上述中间QC工序及上述最终QC工序中使用的各QC标准试样中的上述经稳定同位素标记的肽的水平的比满足：
基准值1：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42的比在25.0～32.5的范围内、及
基准值2：
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42的比在0.7～1.3的范围内。
对于上述开始QC工序、上述中间QC工序及上述最终QC工序中实际测得的各QC标准试样中的上述经稳定同位素标记的肽的水平的比，相对于上述实际的基准值1及基准值2在-20％以上且+20％以下的正常范围内时，将该QC标准试样判定为合格，另一方面，在上述正常范围外时，将该QC标准试样设为不合格(判定工序)。
对于各检体测定工序的紧前QC工序中所使用的QC标准试样及紧后QC工序中所使用的QC标准试样这两者为合格的、该检体测定工序中的通过上述检体测定工序而得到的测定结果，予以采用。另一方面，对于各检体测定工序的紧前QC工序中所使用的QC标准试样及紧后QC工序中所使用的QC标准试样这两者或其中一者为不合格的、该检体测定工序中的通过上述检体测定工序而得到的测定结果，不予采用(确定是否采用的工序)。
对于品质管理，用软件进行自动判定，示出适当地进行了全部检体的测定。
该例子示出了1个批次的最大测定样品数为48、对检体数42的测定及品质管理的例子。本发明通常应用于多个检体数的情况，但是对于检体数为1个的情况，也可以通过进行开始QC工序→检体测定工序→最终QC工序来实施。可根据全部检体数调整每次的检体测定工序中的检体测定数，使用本发明的QC标准试样实施测定及品质管理。
如上所述，本发明中，制备了向市售人血浆或模拟血浆中添加它们中不存在的经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β肽(SIL-淀粉样蛋白β肽)而成的QC试样。SIL-淀粉样蛋白β肽的添加量设为与实际试样(检体)中所含的对应的淀粉样蛋白β肽的量接近的量，以SIL-淀粉样蛋白β肽的上述比达到一定范围内的方式来调整比例。
通过将制备的QC试样用多个批次的抗体珠进行多批次测定并计算平均值，来设定该批次的QC试样中的SIL-淀粉样蛋白β肽比的“基准值”。
在实际试样测定时，对于在同一批次内进行测定的QC试样的每一个QC试样，进行2种SIL-淀粉样蛋白β肽的比是否分别在“基准值”±20％以内的判定。
仅采用夹在满足合格基准的QC试样间的实际试样的测定值。
通过对比QC试样中的SIL-淀粉样蛋白β肽量，可以准备接近实际试样的QC试样。通过预先设定QC试样的SIL-淀粉样蛋白β肽比的基准值，在逐渐出现分析系统不良(装置状态不良)时可降低该不良被遗漏的风险。另外，对于以一定间隔进行测定的QC试样，通过仅采用夹在符合基准的QC试样间的实际试样的测定值，能够在不遗漏批次内的局部性灵敏度下降等的情况下来判断数据可否采用。
作为本发明中包括的方式，例如，可列举以下方式。
(1)
一种对象肽测定用QC标准试样，其包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。
(2)
根据上述(1)所述的QC标准试样，其中，上述血液试样选自由全血、血浆及血清组成的组。
(3)
根据上述(1)所述的QC标准试样，其中，上述血液试样选自由添加了肽的模拟血液、模拟血浆及模拟血清组成的组。
(4)
根据上述(1)～(3)中任一项所述的QC标准试样，其中，添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽包含与测定对象的上述肽在化学上结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽。
(5)
根据上述(1)～(4)中任一项所述的QC标准试样，其中，测定对象的上述肽包含多种肽，
添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽包含与测定对象的上述多种肽分别在化学上结构相同或相似且经稳定同位素标记的多种肽。
(6)
根据上述(1)～(5)中任一项所述的QC标准试样，其中，以规定的基准范围内的量包含添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽。
(7)
根据上述(1)～(6)中任一项所述的QC标准试样，其中，测定对象的上述肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
(8)
根据上述(1)～(7)中任一项所述的QC标准试样，其中，添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽为经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
(9)
根据上述(1)～(8)中任一项所述的QC标准试样，其中，测定对象的上述肽包含选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种。
(10)
根据上述(1)～(9)中任一项所述的QC标准试样，其中，添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotopelabeled))。
(11)
根据上述(1)～(10)中任一项所述的QC标准试样，其中，
测定对象的上述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种，
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42、和/或
APP669-711/Aβ1-42作为生物标志物使用，
添加于上述血液试样中的上述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，
上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。
(12)根据上述(11)所述的QC标准试样，其中，
上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。
(13)
一种肽测定方法，其为测定多检体血液试样中的对象肽的方法，
所述肽测定方法包括下述工序：
开始QC工序，对包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽的QC标准试样进行测定；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；
中间QC工序，对上述QC标准试样进行测定；
将上述检体测定工序和上述中间QC工序重复规定次数的工序；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；和，
最终QC工序，对上述QC标准试样进行测定。
(14)
根据上述(13)所述的肽测定方法，其中，在上述各检体测定工序中，进行1个以上且9个以下的血液试样的连续测定。
(15)
根据上述(13)或(14)所述的肽测定方法，其还包括下述工序：
判定工序，上述开始QC工序、上述中间QC工序及上述最终QC工序中测得的各QC标准试样中的上述经稳定同位素标记的肽的水平相对于规定的基准值在-20％以上且+20％以下的正常范围内时，该QC标准试样的测定为合格，另一方面，在上述正常范围外时，该QC标准试样的测定为不合格；和
确定是否采用的工序，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者为合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为采用该测定结果，另一方面，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者或其中一者为不合格的、该检体测定工序中的上述1个或多个血液试样的测定结果，确定为不采用该测定结果。
(16)
根据上述(13)～(15)中任一项所述的肽测定方法，其中，测定对象的上述肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
(17)
根据上述(13)～(16)中任一项所述的肽测定方法，其中，上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽为经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
(18)
根据上述(13)～(17)中任一项所述的肽测定方法，其中，测定对象的上述肽包含选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种。
(19)
根据上述(13)～(18)中任一项所述的肽测定方法，其中，上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotopelabeled))。
(20)
根据上述(13)～(19)中任一项所述的肽测定方法，其中，测定对象的上述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种，
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42、和/或
APP669-711/Aβ1-42作为生物标志物使用，
上述QC标准试样中所含的上述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，
在上述QC标准试样中，上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。
(21)
根据上述(20)所述的肽测定方法，其中，在上述QC标准试样中，上述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。
(22)
根据上述(13)～(21)中任一项所述的肽测定方法，其中，利用免疫沉淀法(Immunoprecipitation；IP)-质谱分析联用(IP-MS)、液相色谱-质谱分析联用(LC-MS)、或气相色谱-质谱分析联用(GC-MS)来进行测定。
(23)
一种QC标准试样试剂盒，其为对象肽测定用的QC标准试样试剂盒，
所述QC标准试样试剂盒包含：
含有肽的血液试样、和
要添加于该血液试样的经稳定同位素标记的肽。
(24)
根据上述(23)所述的QC标准试样试剂盒，其中，上述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种(在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotope labeled))。
序列表
<110> 株式会社岛津制作所（SHIMADZU CORPORATION）
<120> 肽测定中的品质管理用标准溶液及肽测定的品质管理
<130> SP20200602
<150> JP 2021-028347
<151> 2021-02-25
<160> 12
<210> 1
<211> 33
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 1
His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala
1 5 10 15
Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly
20 25 30
Gly
<210> 2
<211> 33
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 2
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly
<210> 3
<211> 35
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 3
His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala
1 5 10 15
Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly
20 25 30
Gly Val Val
35
<210> 4
<211> 35
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 4
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met
35
<210> 5
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 5
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly
35
<210> 6
<211> 38
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 6
Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu Val
1 5 10 15
Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu
20 25 30
Met Val Gly Gly Val Val
35
<210> 7
<211> 40
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 7
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
35 40
<210> 8
<211> 40
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 8
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
35 40
<210> 9
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 9
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
35 40
<210> 10
<211> 43
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 10
Val Lys Met Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His
1 5 10 15
His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly
20 25 30
Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
35 40
<210> 11
<211> 38
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 11
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly
35
<210> 12
<211> 39
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 12
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val
35

Claims (24)

1.一种对象肽测定用QC标准试样，其包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽。
2.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，所述血液试样选自由全血、血浆及血清组成的组。
3.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，所述血液试样选自由添加了肽的模拟血液、模拟血浆及模拟血清组成的组。
4.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽包含与测定对象的所述肽在化学上结构相同或类似且经稳定同位素标记的肽。
5.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，测定对象的所述肽包含多种肽，
添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽包含与测定对象的所述多种肽分别在化学上结构相同或相似且经稳定同位素标记的多种肽。
6.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，以规定的基准范围内的量包含添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽。
7.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，测定对象的所述肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
8.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽为经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
9.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，测定对象的所述肽包含选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种。
10.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotope labeled)。
11.根据权利要求1所述的QC标准试样，其中，
测定对象的所述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种，
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42、和/或
APP669-711/Aβ1-42作为生物标志物使用，
添加于所述血液试样中的所述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，
所述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。
12.根据权利要求11所述的QC标准试样，其中，
所述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。
13.一种肽测定方法，其为测定多检体血液试样中的对象肽的方法，
所述肽测定方法包括下述工序：
开始QC工序，对包含含有肽的血液试样和添加于该血液试样中的经稳定同位素标记的肽的QC标准试样进行测定；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；
中间QC工序，对所述QC标准试样进行测定；
将所述检体测定工序和所述中间QC工序重复规定次数的工序；
检体测定工序，对1个或多个血液试样进行测定；和，
最终QC工序，对所述QC标准试样进行测定。
14.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，在所述各检体测定工序中，进行1个以上且9个以下的血液试样的连续测定。
15.根据权利要求13所述的肽测定方法，其还包括下述工序：
判定工序，所述开始QC工序、所述中间QC工序及所述最终QC工序中测得的各QC标准试样中的所述经稳定同位素标记的肽的水平相对于规定的基准值在-20％以上且+20％以下的正常范围内时，该QC标准试样的测定为合格，另一方面，在所述正常范围外时，该QC标准试样的测定为不合格；和
确定是否采用的工序，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者为合格的、该检体测定工序中的所述1个或多个血液试样的测定结果，确定为采用该测定结果，另一方面，对于各检体测定工序的紧前QC工序中进行的QC标准试样的测定及紧后QC工序中进行的QC标准试样的测定这两者或其中一者为不合格的、该检体测定工序中的所述1个或多个血液试样的测定结果，确定为不采用该测定结果。
16.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，测定对象的所述肽为淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
17.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，所述QC标准试样中所含的所述经稳定同位素标记的肽为经稳定同位素标记的淀粉样蛋白β(Aβ)相关肽。
18.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，测定对象的所述肽包含选自由Aβ1-42(序列号9)、Aβ1-38(序列号11)、Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种。
19.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，所述QC标准试样中所含的所述经稳定同位素标记的肽包含选自由SIL-Aβ1-42、SIL-Aβ1-38、SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotope labeled)。
20.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，测定对象的所述肽包含：
Aβ1-42(序列号9)、和
选自由Aβ1-40(序列号7)及APP669-711(序列号10)组成的组中的至少1种，
所测定的肽水平的比：
Aβ1-40/Aβ1-42、和/或
APP669-711/Aβ1-42作为生物标志物使用，
所述QC标准试样中所含的所述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，
在所述QC标准试样中，所述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在规定的基准范围内。
21.根据权利要求20所述的肽测定方法，其中，在所述QC标准试样中，所述经稳定同位素标记的肽的存在量的比：
SIL-Aβ1-40/SIL-Aβ1-42在25.0～32.5的基准范围内、和/或
SIL-APP669-711/SIL-Aβ1-42在0.7～1.3的基准范围内。
22.根据权利要求13所述的肽测定方法，其中，利用免疫沉淀法(Immunoprecipitation；IP)-质谱分析联用(IP-MS)、液相色谱-质谱分析联用(LC-MS)、或气相色谱-质谱分析联用(GC-MS)来进行测定。
23.一种QC标准试样试剂盒，其为对象肽测定用的QC标准试样试剂盒，
所述QC标准试样试剂盒包含：
含有肽的血液试样、和
要添加于该血液试样的经稳定同位素标记的肽。
24.根据权利要求23所述的QC标准试样试剂盒，其中，所述经稳定同位素标记的肽包含：
SIL-Aβ1-42、和
选自由SIL-Aβ1-40及SIL-APP669-711组成的组中的至少1种，在此，“SIL-”表示经稳定同位素标记(Stable isotope labeled)。
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