CN116850187A - Hapalindole在制备抑制肝癌或乳腺癌的药物中的应用 - Google Patents

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CN116850187A CN202310904561.3A CN202310904561A CN116850187A CN 116850187 A CN116850187 A CN 116850187A CN 202310904561 A CN202310904561 A CN 202310904561A CN 116850187 A CN116850187 A CN 116850187A
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何薇薇
李昂
王少男
郭志聪
孙敏
汪逢灿
吴亚丽
徐懿
聂朝阳
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

本发明提供了一种Hapalindole化合物在制备抑制肝癌或乳腺癌的药物中的应用，用于：制备特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤的药物或制剂、组合物或药物组合物；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。

Description

Hapalindole在制备抑制肝癌或乳腺癌的药物中的应用
技术领域
本发明属于肿瘤学领域，更具体地，本发明涉及Hapalindole在制备抑制肝癌或乳腺癌的药物中的应用。
背景技术
肿瘤的发生是机体在各种因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上，失去对其生长的正常调控，导致细胞的异常增生而形成的新生物。肿瘤是基因疾病，其生物学基础是基因的异常，致病因素是体细胞基因突变导致正常基因缺失，基因表达紊乱，从而影响细胞的生物学活性与遗传活性，形成与正常细胞在形态，代谢与功能上均有所不同的肿瘤细胞。肿瘤的发生是多基因、多步骤、突变的结果，不同基因的突变与不同强度的突变，形成不同的肿瘤，肿瘤的形态异常，是肿瘤病理诊断的依据。
对于不同类型、不同器官发生的肿瘤，其机理不尽相同，需要不同的治疗方案和治疗手段。对不同的肿瘤，需要给予不同的治疗方法，要对症下药。
肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。肝癌的治疗包括手术、放化疗、介入、靶向药物、免疫治疗等多种手段。肝癌属于消化系统的一种恶性肿瘤，与其它的消化系统恶性肿瘤，比如说胃癌，肠癌相比可能治疗更加困难，肝癌和胰腺癌一样，都是属于非常难治疗的，号称癌中之王。
乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下，发生增殖失控的现象。疾病早期常表现为乳房肿块、乳头溢液、腋窝淋巴结肿大等症状，晚期可因癌细胞发生远处转移，出现多器官病变，直接威胁患者的生命。
尽管本领域对于上述常发于人群的癌种已经有了一定的治疗手段，然后还需要进一步探索新的治疗药物，以期发挥更为优异的效果，或者在现有药物基础上给予补充。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：制备特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤的药物或制剂、组合物或药物组合物；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
在本发明的第一方面，提供Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：制备特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡或抑制肿瘤的药物或制剂；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
在本发明的另一方面，提供Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：制备抑制肿瘤的组合物；或制备特异性靶向清除肿瘤细胞的组合物；或制备诱导肿瘤细胞凋亡的组合物；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
在本发明的另一方面，提供Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：制备抑制肿瘤的药物组合物；或制备特异性靶向清除肿瘤细胞的药物组合物；或制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物组合物；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
在一种或多种实施方式中，所述的Hapalindole化合物为式I所示的化合物：
其中R1、R2、R3为任意基团；
优选地，R1、R2其中之一为乙烯基，另一为甲基，并且R3为NCS或NC；
更优选地，R1是乙烯基，R2是甲基，R3是NCS；或R1是甲基，R2是乙烯基，R3是NC。
在一种或多种实施方式中，所述的Hapalindole化合物为Hapalindole Q。
在一种或多种实施方式中，所述的肿瘤细胞包括：肝癌细胞，乳腺癌细胞。
在一种或多种实施方式中，所述的乳腺癌包括三阴性乳腺癌。
在一种或多种实施方式中，所述肿瘤细胞为人来源的细胞株。
在一种或多种实施方式中，所述的肝癌细胞包括Hep G2、HCC-LM3、SMMC-7721、HuH-7，所述的乳腺癌细胞包括MDA-MB-231。
在一种或多种实施方式中，所述Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的浓度为1～100μM，优选5～50μM，更优选5～40μM。
在本发明的另一方面，提供一种用于特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤的组合物或药物组合物，包括：Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
在本发明的另一方面，提供一种用于特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤的药盒或试剂盒，包括：Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
图1、CCK8法检测0μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM、40μM的Hapalindole Q对不同类型癌症细胞株(Hep G2、HCC-LM3、SMMC-7721、HuH-7、MDA-MB-231、A549、HeLa、SK-OV-3、U-87MG)的毒性结果。
图2、流式细胞仪检测0μM(Control组)、10μM、15μM、20μM、25μMHapalindole Q诱导肝癌细胞发生细胞凋亡的情况。横坐标表示FITC通道(Annexin V)下细胞的荧光强度，纵坐标表示PE通道(PI)下细胞的荧光强度。左下Q3区域表示Annexin V-FITC和PI都不能染色的细胞，即健康细胞；右下Q4区域表示只能被Annexin V-FITC单染的细胞，代表发生早期凋亡的细胞；右上Q1为能被Annexin V-FITC和PI双染的细胞，即发生晚期凋亡的细胞；左上Q2区域为一些细胞碎片。
图3、CCK8法检测0μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM、40μM的Hapalindole Q类似物LA-NZY-394对不同类型癌症细胞株(MCF-7、Hep G2、SMMC-7721、MDA-MB-231、HeLa、U-87MG)的毒性结果。
图4、CCK8法检测0μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM、40μM的Hapalindole Q类似物LA-NZY-472对不同类型癌症细胞株(MCF-7、Hep G2、SMMC-7721、MDA-MB-231、HeLa、U-87MG)的毒性结果。
具体实施方式
本发明人经过深入的研究，发现Hapalindole Q可以促进肝癌细胞凋亡，从而抑制肝癌细胞株的增殖，可用于制备抗肿瘤药物。
Hapalindole于1984年从蓝绿藻Hapalosiphon中首次分离鉴定。其并不是蓝绿藻所特有的，随着更进一步的研究，科学家们从其他生物中也分离提取到Hapalindole。目前关于Hapalindole合成的策略可以分为两种：一种是通过商品化的环状萜类化合物为起始原料，经衍生后与吲哚环的对接；另一种则是在后期构建单萜六元环。从药物发现制备衍生物角度来看，后者更利于对吲哚和六元环进行结构改造，从而更易于多样化制备衍生物。
然而，目前对于Hapalindole Q的研究主要集中在其合成策略方面，且认为其具有抗细菌、抗真菌、抗结核杆菌、杀虫等作用。但是，仍缺乏对于Hapalindole其它方面应用、特别是疾病应用的研究。
Hapalindole和Hapalindole Q
本文所述“Hapalindole”是一类半吲哚型化合物，包括四环Hapalindoles、三环Hapalindoles，以及其他一些衍生物或同源物，例如fischerindoles、ambiguines、welwitindolinones。
术语“衍生物”是指在合成Hapalindole化合物的过程中衍生而来的中间体、衍生产物等。术语“同源物”是指在从包含Hapalindole的来源(可以是天然来源，也可以是非天然来源，例如植物)中分离时，衍生的同源产物、副产物等。
本文所述“式I化合物”是具有式I所示通式的一类化合物，其中R1、R2、R3为任意基团。
在一种或多种实施方案中，所述式I中，R1、R2其中之一为乙烯基，另一为甲基，并且R3为NCS或NC。
在一种或多种实施方案中，所述式I中，R1是乙烯基，R2是甲基，R3是NCS。
在一种或多种实施方案中，所述式I中，R1是甲基，R2是乙烯基，R3是NC。
本文所述“Hapalindole Q”是一种单体化合物，分子式为C21H24N2S，CAS号为106928-29-4。
本文所述“Hapalindole Q类似物”是一种与Hapalindole化合物具有类似的化学结构的一类化合物。
在一种或多种实施方案中，所述Hapalindole Q类似物包括但不限于：LA-NZY-394、LA-NZY-472。
本文所述“LA-NZY-394”是如式II所示的一种化合物。
本文所述“LA-NZY-472”是如式III所示的一种化合物。
在本发明中，“化合物”(包括Hapalindole、式I化合物、Hapalindole Q、其盐或前药等)可以是纯净形式存在的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如95％，98％，99％)的化合物。
本领域人员应理解，在得知了本发明化合物的结构以后，可通过多种本领域熟知的方法、利用公知的原料，来获得本发明的化合物，比如化学合成或从生物(如微生物)中提取的方法，这些方法均包含在本发明中。此外，Hapalindole(如Hapalindole Q)还是商品化的药物，因此其成品是本领域技术人员易于获得的。
本发明还包括Hapalindole(如Hapalindole Q)的药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药，只要它们也具有与Hapalindole Q的化合物相同或基本相同的功能。本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。所述的“药学上可接受的盐”可以是Hapalindole(如Hapalindole Q)的酸式盐和碱式盐。
“药学上可接受的酸式盐”是指可保持游离碱的生物活性和性质的盐，该类盐不会出现不理想的生物活性或其它方面的变化。该类盐可由无机酸构成，例如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及类似的酸。该类盐还可由有机酸构成，例如但不限于乙酸、二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟脑酸、樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基磺酸、1,2-乙二磺酸、乙烷磺酸、羟乙基磺酸、蚁酸、延胡索酸(fumaric acid)、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代戊二酸、甘油磷酸、羟基乙酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、顺丁烯二酸、苹果酸、丙二酸、苦杏仁酸、甲烷磺酸、粘酸、萘-1,5-二磺酸、2-萘磺酸、1-萘酚-2-甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、十一烯酸及类似酸。
“药学上可接受的碱式盐”是指可保持游离酸的生物活性和性质的盐，该类盐不会出现不理想的生物活性或其它方面的变化。这些盐通过向游离酸中加入无机碱或有机碱制成。通过无机碱得到的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐及类似盐。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐以及镁盐。通过有机碱得到的盐包括但不限于一级、二级、三级铵盐，取代的胺包括天然取代的胺、环胺以及碱性离子交换树脂，例如氨气、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺、胆碱、甜菜碱、苯乙苄胺、N,N‘-双苄基乙撑二胺、乙二胺、葡萄糖胺、甲葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、缓血酸胺、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚酰胺树脂以及类似结构。优选的有机碱为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。
本发明公开的化合物可以作为溶剂合物(如水合物)的形式存在，包括单水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物及类似结构。在本发明中，还包括Hapalindole Q的前药，所述的“前药”指当用适当的方法服用后，该前药在对象体内进行代谢或化学反应而转变成所需Hapalindole Q的一种化合物。
在本发明中，还包括Hapalindole(如Hapalindole Q)的异构体。这是由于，化合物具有一个或多个不对称中心，所以这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。
本领域人员应理解，在得知了本发明化合物的结构以后，可通过多种本领域熟知的方法、利用公知的原料，来获得本发明的化合物，比如化学合成或从生物(如动物或植物)中提取或在提取基础上进行改造的方法，这些方法均包含在本发明中。可以利用公知的方法来合成本发明的化合物；合成的化合物可以进一步通过柱层析法、高效液相色谱法等方式进一步纯化。此外，也可以通过商购的方式获得本发明的化合物。
本发明提供Hapalindole(如Hapalindole Q)在制备药物或制剂中的用途，所述药物或制剂用于：特异性靶向清除(杀伤)肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤消退、减小肿瘤体积、预防或治疗癌症、或延长癌症存活期。本文中，“个体”、“对象”或“患者”指哺乳动物，尤其指人。
在本发明的另一方面提供一种实现上述用途的方法，所述方法包括用本文所述Hapalindole(如Hapalindole Q)，及其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药处理肿瘤细胞(包括原代细胞、细胞系)或将其给予有需要的对象。本文所用术语“给予”或“给药”是指向患有待治疗或预防的疾病或病症或具有其风险的对象提供本发明的化合物、组合物或药物组合物。
Hapalindole(如Hapalindole Q)的组合物、药物组合物
本发明的组合物(如，药物组合物)以Hapalindole(如Hapalindole Q)、或其盐、酯、异构体、溶剂合物、前药等物质作为活性组分。如上所述，含有Hapalindole(如Hapalindole Q)可以特异性靶向清除(杀伤)肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤消退、减小肿瘤体积、预防或治疗癌症、或延长癌症存活期。
本发明中，所述的“含有”，“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”；“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。
本文所述组合物作为药物使用时，也可以称为药物组合物，其还包含药学上可接受的辅料。“药学上可接受的辅料”是用于将本发明组合物中的活性组分(Hapalindole，例如Hapalindole Q)传送给动物或人的药学上或食品上可接受的载体、溶剂、悬浮剂或赋形剂。示例性的辅料可以是液体或固体，包括但不限于：pH调节剂，表面活性剂，碳水化合物，佐剂，抗氧化剂，螯合剂，离子强度增强剂、防腐剂、载剂、助流剂、甜味剂、染料/着色剂、增味剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂、乳化剂、喷雾剂、压缩空气或其它适宜的气体，或其它适宜的与药效化合物合用的非活性成分。更具体而言，合适的辅料可以是本领域常用于小分子化合物给药的辅料。辅料的示例包括各种乳糖、甘露醇，油类如玉米油，缓冲剂如PBS、盐水、聚乙二醇、甘油、聚丙二醇、二甲亚砜，酰胺如二甲基乙酰胺，蛋白质如白蛋白，和去污剂如吐温80，单糖和低聚多糖如葡萄糖、乳糖、环糊精和淀粉。
通常，组合物中含有治疗有效量的本文所述活性组分。治疗有效量是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解疾病或病症的剂量。本发明所述的Hapalindole(如Hapalindole Q)的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的Hapalindole(如Hapalindole Q)的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。可根据患者年龄、性别、所患病症及其严重程度、患者的其它身体状况等因素确定治疗有效量。治疗有效量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案在多个剂量中给药。本文中，受试者或患者通常指哺乳动物，尤其指人。示例性地，当使用所述组合物处理肿瘤细胞(例如肿瘤细胞系)时，所述组合物含有0～100μM，优选5～50μM，更优选5～40μM，例如10～30μM、10～20μM、10～15μM、15～40μM、15～30μM、15～20μM、20～40μM、20～30μM的活性组分(Hapalindole，例如Hapalindole Q)。
本发明的药物组合物或混合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。比如可选自：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂。其中活性组分(Hapalindole，例如Hapalindole Q)可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。本发明的活性组分的混合物或药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。组合物中活性组分(例如Hapalindole Q)的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化，这可以根据临床医师的经验和建议。
本发明的具体实施例中，提出了Hapalindole，例如Hapalindole Q按照不同摩尔比或质量比的一系列给药方案。本发明中，也运用了小鼠作为实验动物，从小鼠的给药剂量换算为适用于人类的给药剂量是本领域技术人员易于作出的，例如可根据Meeh-Rubner公式来进行计算：
A＝k×(W2/3)/10000。
式中A为体表面积，以m2计算；W为体重，以g计算；k为常数，随动物种类而不同，小鼠和大鼠9.1，豚鼠9.8，兔10.1，猫9.9，狗11.2，猴11.8，人10.6。应理解的是，根据药物以及临床情形的不同，根据有经验的药师的评估，给药剂量的换算是可以变化的。
Hapalindole，例如Hapalindole Q或药物组合物可通过口服以及静脉、肌肉或皮下等途径给药。优选地可以是口服给药。适应于口服的药物形式包括但不限于片剂、粉剂、胶囊剂、缓释剂等。适应于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。必要的时候，Hapalindole，例如Hapalindole Q还可与其它活性成分或药物联合给药。
本发明还提供了一种用于特异性靶向清除肿瘤细胞，或诱导肿瘤细胞凋亡的药盒或试剂盒，所述药盒或试剂盒含有本文任一实施方案所述的药物组合物，或者，所述的药盒或试剂盒含有本文所述的Hapalindole，例如Hapalindole Q的混合物，或者，所述药盒或试剂盒中含有：容器，以及置于容器中的本文所述Hapalindole，例如Hapalindole Q或其药学上可接受的盐、水合物或前药。
所述药盒或试剂盒中还可以含有一些辅助用药的材料，例如使用或施用各种剂型的组合物所需的量具、容器例如注射器等。所述药盒或试剂盒中还可含有使用说明书，说明治疗下调或清除肿瘤细胞的方法。
Hapalindole(如Hapalindole Q)、或其组合物、药物组合物的应用
如前所述，本发明人发现，Hapalindole(如Hapalindole Q)，在制备药物或制剂中的用途，所述药物或制剂用于：特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤消退、减小肿瘤体积、预防或治疗癌症、或延长癌症存活期。
在本发明的另一方面提供一种实现上述用途的方法，所述方法包括用本文所述Hapalindole(如Hapalindole Q)，及其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药处理肿瘤细胞(包括原代细胞、细胞系)或将其给予有需要的对象。本文所用术语“给予”或“给药”是指向患有待治疗或预防的疾病或病症或具有其风险的对象提供本发明的化合物、组合物或药物组合物。
在本发明人的研究中还发现，Hapalindole(如Hapalindole Q)在适当的浓度下对肿瘤细胞的特异性靶向清除(杀伤)效果非常理想。例如，在一些实施例中，本发明人发现，当Hapalindole(如Hapalindole Q)在10～30μM、10～20μM、10～15μM、15～40μM、15～30μM、15～20μM、20～40μM、20～30μM时，对肿瘤细胞的特异性靶向清除(杀伤)效果非常理想，肿瘤细胞此时剩余70％、60％、50％、30％或更低。
本发明人的研究中还发现，Hapalindole(如Hapalindole Q)在适当的浓度下可以诱导肿瘤细胞发生凋亡，并且该诱导效应具有浓度依赖性。例如，在一些实施例中，本发明人发现，当Hapalindole(如Hapalindole Q)在10～30μM、10～25μM、10～20μM、10～15μM、15～40μM、15～30μM、15～20μM、20～40μM、20～25μM时，对诱导肿瘤细胞发生凋亡的效果非常理想。
基于本发明人的上述新发现，本发明提供了一种Hapalindole(如Hapalindole Q)的用途，用于制备特异性靶向清除肿瘤细胞的组合物或药物组合物；或制备诱导肿瘤细胞凋亡的组合物或药物组合物；或制备抑制肿瘤的组合物或药物组合物。
如本发明所用，除非另外说明，所述的“肿瘤”包括但不限于：肝癌，乳腺癌(优选地为三阴性乳腺癌)，肺癌，宫颈癌，卵巢癌，恶性胶质瘤(例如脑恶性胶质瘤)，前列腺癌，结直肠癌，胃癌，胰腺癌，膀胱癌，皮肤癌，肾癌，食管癌、胆管癌、脑癌。
如本发明所用，除非另外说明，所述的“肿瘤细胞”包括但不限于：肝癌细胞，乳腺癌细胞，肺癌细胞，宫颈癌细胞，卵巢癌细胞，脑恶性胶质瘤细胞。
如本领域技术人员所知晓的，肿瘤细胞可以来源于人、鼠(大鼠、小鼠)、兔、羊、猪、牛、马、猴等各种来源。肿瘤细胞可以是原代细胞(即从肿瘤组织或动物身上分离的细胞)，也可以是传代细胞(细胞株)。优选地，所述肿瘤细胞为人来源的细胞株。例如，在一些实施例中，所述的肝癌细胞株包括Hep G2、HCC-LM3、SMMC-7721、HuH-7，所述的乳腺癌细胞株包括MDA-MB-231，所述的肺癌细胞株包括A549，所述的宫颈癌细胞株包括HeLa，所述的卵巢癌细胞株包括SK-OV-3，所述的脑恶性胶质瘤细胞株包括U-87MG。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实验材料：
Hapalindole Q：CAS号为106928-29-4。
LA-NZY-394：获自上海昕达生物科技有限公司。
LA-NZY-472：获自上海昕达生物科技有限公司。
CCK8试剂盒。
Annexin V/PI凋亡试剂盒。
实施例1、Hapalindole Q对多种癌细胞的毒性
使用CCK8法检测Hapalindole Q对不同类型癌症细胞株的毒性，包括人肝癌细胞株Hep G2、HCC-LM3(高转移肝癌细胞株)、SMMC-7721(人肝癌细胞)、HuH-7(人肝癌细胞)，人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231，人肺癌细胞株A549，人宫颈癌细胞株HeLa，人卵巢癌细胞株SK-OV-3，以及人脑恶性胶质瘤细胞株U-87MG。
在96孔板中接种上述细胞并在37℃的二氧化碳培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。分别使用0μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM、40μM的Hapalindole Q处理各类细胞24小时。在每孔加入10微升CCK8(Cell Counting Kit 8)检测液，孵育2小时。利用酶标仪检测每孔在450nm下的吸光度。计算化合物对细胞增殖的抑制率，计算方法为：抑制率(％)＝(1-实验组吸光度/对照组吸光度)×100％。每组实验设置3个副孔。
如图1所示，实验结果表明，Hapalindole Q对肝癌细胞系Hep G2、HCC-LM3、SMMC-7721、HuH-7、MDA-MB-231有非常显著的毒性。对人肺癌细胞株A549也有一定毒性。
但是，对人宫颈癌细胞株HeLa、人卵巢癌细胞株SK-OV-3和人脑恶性胶质瘤细胞株U-87MG的毒性很弱。此外，尽管未一一列举，对于其它一些类型的癌症，也缺乏显著作用。
实施例2、Hapalindole Q诱导肝癌细胞发生细胞凋亡
将肝癌细胞Hep G2接种在6孔板中，在37℃的二氧化碳培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。分别用0μM、10μM、15μM、20μM、25μM的化合物Hapalindole Q处理Hep G2细胞24小时。使用不含EDTA的胰蛋白酶消化细胞后收集细胞。利用PBS将细胞清洗2次。在每个样品中加入2.5微升Annexin V(可通过FITC通道检测荧光)和2.5微升PI荧光染料(可通过PE通道检测荧光)并混匀。在37℃的条件下孵育上述样品15分钟，期间每5分钟上下轻轻翻转一下离心管，以使染色均匀。孵育结束后，再在每个离心管中加入400微升binding buffer并混匀。使用流式细胞仪进行上机检测，分别在FITC通道和PE通道下检测细胞的荧光强度。
如图2所示，横坐标表示FITC通道下细胞的荧光强度，纵坐标表示PE通道下细胞的荧光强度。左下Q3区域表示Annexin V-FITC和PI都不能染色的细胞，即健康细胞；右下Q4区域表示只能被Annexin V-FITC单染的细胞，代表发生早期凋亡的细胞；右上Q1为能被Annexin V-FITC和PI双染的细胞，即发生晚期凋亡的细胞；左上Q2区域为一些细胞碎片。
实验结果表明，与对照组相比，在化合物Hapalindole Q的诱导下，大多数细胞发生了从Q3区域向Q4区域的转移，表明化合物Hapalindole Q能够促进细胞凋亡的效果优异。
也观测到，化合物浓度越高，Q4区域中的细胞越多，表明化合物Hapalindole Q可以浓度依赖性地诱导细胞发生凋亡。
实施例3、Hapalindole Q类似物对癌症不具有杀伤作用
使用CCK8法检测Hapalindole Q类似物LA-NZY-394和LA-NZY-472对不同类型癌症细胞株的毒性，包括人Luminal A乳腺癌细胞株MCF-7，人肝癌细胞株Hep G2、SMMC-7721，人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231，人宫颈癌细胞株HeLa，以及人脑恶性胶质瘤细胞株U-87MG。
在96孔板中接种上述细胞并在37℃的二氧化碳培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。分别使用0μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM、40μM的Hapalindole Q类似物处理各类细胞24小时。在每孔加入10微升CCK8(Cell Counting Kit 8)检测液，孵育2小时。利用酶标仪检测每孔在450nm下的吸光度。计算化合物对细胞增殖的抑制率，计算方法为：抑制率(％)＝(1-实验组吸光度/对照组吸光度)×100％。每组实验设置3个副孔。
如图3和图4所示，实验结果表明，Hapalindole Q类似物LA-NZY-394和LA-NZY-472对检测的所有细胞株的毒性均较弱、不显著。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。同时，在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。

Claims (10)

1.Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：制备特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡或抑制肿瘤的药物或制剂；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
2.Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：
制备抑制肿瘤的组合物；或
制备特异性靶向清除肿瘤细胞的组合物；或
制备诱导肿瘤细胞凋亡的组合物；
其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
3.Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的应用，用于：
制备抑制肿瘤的药物组合物；或
制备特异性靶向清除肿瘤细胞的药物组合物；或
制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物组合物；
其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
4.如权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的Hapalindole化合物为式I所示的化合物：
其中R1、R2、R3为任意基团；
优选地，R1、R2其中之一为乙烯基，另一为甲基，并且R3为NCS或NC；
更优选地，R1是乙烯基，R2是甲基，R3是NCS；或R1是甲基，R2是乙烯基，R3是NC。
5.如权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的Hapalindole化合物为Hapalindole Q。
6.如权利要求1～5任一项所述的应用，其特征在于，所述的乳腺癌包括三阴性乳腺癌。
7.如权利要求1～5任一项所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤细胞包括：肝癌细胞，乳腺癌细胞；或
所述肿瘤细胞为人肿瘤细胞。
8.如权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药的浓度为1～100μM，优选5～50μM，更优选5～40μM。
9.一种用于特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤的组合物或药物组合物，包括：Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
10.一种用于特异性靶向清除肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤的药盒或试剂盒，包括：Hapalindole化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂合物或前药；其中所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。
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