CN1168379C - 新几内亚凤仙的繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种新几内亚凤仙的繁殖方法，包括如下步骤：(1)灭菌处理：选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖为外植体，经新洁尔灭浸泡→清水洗净→酒精浸泡→NaClO杀菌→升汞杀菌→无菌水冲洗程序灭菌；(2)灭菌后的外植体经诱导产生愈伤组织；(3)丛生芽的产生及增殖：采用1/2MS培养基，培养温度为25-28℃，光照强度为2500-3000lx，培养时间为15-20d；(4)将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4 mg/L的培养基上，10-16d可生根并形成完整植株，让其适应环境后移栽。该方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齐一致、遗传稳定性好等特点，可以进行大规模的工厂化生产。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种新几内亚凤仙(Impatiens New Guinea)的繁殖方法，具体的讲，是指采用组织培养技术对新几内亚凤仙进行繁殖的方法。
(二)背景技术
广义来说，组织培养不仅包括无菌条件下利用人工培养基对植物组织的培养，而且包括对原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养。很早以来，专家们根据植物材料的不同，把组织培养分为五种类型，即：1.愈伤组织培养；2.悬浮细胞培养；3.器官培养(胚、花药、子房、根和茎的培养等)；4.茎尖分生组织培养；5.原生质体培养。其中愈伤组织培养是一种最常见的培养形式。
新几内亚凤仙原产非洲南部，驯化品种株形紧密，矮生，花朵直径大。为多年生草本花卉，枝叶质地较硬，叶片对生，叶表有光泽，叶脉清晰，叶片有绿色、深绿色和古铜色，花朵左右对称，花瓣五片，不等大。花色鲜艳，花色品种多，包括橙红色、红色、猩红色、粉色、紫红色、白色等十八种花色。新几内亚凤仙性喜疏松及透气性良好的土壤，花期长(可达四个半月)。适合盆栽、地栽、家适摆设及园林布置。
新几内亚凤仙可以通过种子得到幼苗，其优点是根系比较发达，后期生长快，但育苗期较长(从播种到开花约15周)，播种时易受土壤条件、气候条件、温湿度等的影响，往往发芽率较低，而且种子较贵，成本高。另外，目前人们还采用扦插方式来进行几内亚凤仙的繁殖，其优点是开花早，生长周期较短(从扦插到开花约12周)。但扦插时生根率较低，而且需材量大，成本高，花期难以整齐一致。因此，以上两种方法都不利于新几内亚凤仙的快速与大量繁殖。组织培养作为一种新的繁殖方式，目前已经成为许多植物快速繁殖的首选方案，但目前还没有关于新几内亚凤仙组织培养方面的报道。
(三)发明的内容
本发明的目的在于针对目前新几内亚凤仙培养方法的不足，提供一种采用组织培养技术对新几内亚凤仙进行繁殖的方法，该方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齐一致、遗传稳定性好等特点，可以进行大规模的工厂化生产。
本发明的方法依次包括如下步骤：
(1)选择外植体进行灭菌处理：选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖为外植体，用8％-10％(v/v，下同)新洁尔灭浸泡5-10min，清水洗净后，用70％(v/v，下同)酒精浸25-35min，之后用8％-10％(v/v，下同)的NaClO杀菌10-15min，然后用0.2％-0.3％(w/v，下同)升汞杀菌5-10min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)经灭菌的外植体经诱导产生愈伤组织：采用MS培养基，激素浓度为：BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L，温度为25-28℃，外植体遮光5～7d后再进行光照，光照强度2000-2500lx，再培养8-15d后可产生愈伤组织；
(3)愈伤组织经培养产生丛生芽并进行增殖：采用1/2MS培养基，激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L，培养温度为25-28℃，光照强度为2500-3000lx，培养时间为15-20d；
(4)将丛生芽培养为成苗并进行移栽管理：将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培养基上，10-16d可生根并形成完整植株，接着让其适应环境后移栽于用塑料薄膜遮盖的环境中进行生长。
本发明的优选方案是步骤(2)中BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.3mg/L；步骤(3)中IAA的浓度为0.2mg/L，BA的浓度为1.0mg/L；步骤(4)中IBA浓度为0.2mg/L。
在步骤(4)中，所用培养基中加入2g/L的活性炭能提高成苗培养的效果，移栽时要用塑料薄膜遮盖6-7d，保持环境湿度80％(采用市面通用的湿度计测量读取，下同)以上，移栽后10～15d开始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4叶面喷施(w/v，下同)。
在上述配方中，MS培养基是最常用的培养基，一般从有关植物组织培养的书都可找到其配方。BA代表6-苄基氨基嘌呤，NAA为萘乙酸，IAA为吲哚乙酸，IBA为吲哚丁酸，它们都是组织培养方面常用的药物，可以通过购买得到。上述方法中，各种百分比浓度的单位表达方式中，v表示体积、w表示质量、v/v表示“体积/体积”比，其它依次类推。
本发明方法具有如下优点及效果：
1.取材少，繁殖率高，成苗整齐，花期易达到一致。
2.可以避开夏天高温对幼苗生长的不适应，新几内亚凤仙只要不遇严寒或因气温较高引起生长不良，可以持续盛花。
3.采用0.5-0.7mm茎尖建外植体，既能防止病毒的传播，又保证了遗传的稳定性。
4.繁殖速度快，可以进行大规模的工厂化生产。
(四)具体的实施方式
下面结合具体的实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
(1)外植体的选择与灭菌：选用新几内亚凤仙嫩叶，用清水冲洗干净，用8％新洁尔灭浸泡5min，清水洗净后，用70％酒精浸25min，之后用8％的NaClO杀菌10min，然后用0.2％升汞杀菌5min，最后用无菌水冲洗3次。
(2)愈伤组织的诱导：采用MS培养基，激素浓度为：BA 1.5mg/L、NAA 1.0mg/L，温度为25-28℃，外植体遮光5d后再进行光照，光照强度2500lx，再培养8d后产生愈伤组织。
(3)丛生芽的产生及增殖：采用1/2MS培养基，激素浓度为IAA0.3mg/L，BA 1.0mg/l。培养温度为25-28℃，光照强度为2500lx，培养时间为15天。
(4)成苗培养及移栽管理：将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.2mg/L的培养基上，培养14d可生根并形成完整植株，适应环境后进行移栽，移栽时用塑料薄膜遮盖7d，保持环境湿度80％以上。移栽后10d开始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4叶面喷施，成活率可达95％以上。
实施例2
操作同实施例1，在步骤(1)中，外植体选用新几内亚凤仙的茎尖，用10％新洁尔灭浸泡，时间为10min，70％酒精浸泡时间为35min，用10％的NaClO杀菌15min，用0.3％升汞杀菌10min。步骤(2)中，采用的激素为BA 3mg/L、NAA 0.5mg/L，外植体遮光7后再进行光照，光照强度2000lx，再培养15d后产生愈伤组织。步骤(3)中采用1mg/L的IAA和2mg/L的BA，光照强度为3000lx。步骤(4)中采用0.4mg/L的IBA，培养10d形成完整植株，移栽时用塑料薄膜遮盖6d。移栽后15d开始施肥，结果得到发育良好的幼苗。
实施例3
其它同实施例1，步骤(2)中，采用2mg/L的BA和0.3mg/L NAA，光照后培养的时间为12d；步骤(3)中采用0.2mg/L的IAA和1.0mg/L的BA，培养时间增加到20d；步骤(4)中采用0.1mg/L的IBA，培养10d形成完整植株，经发育成的幼苗长势良好。
实施例4
其它操作同实施例1，步骤(2)中只加入1.0mg/L的BA，不加入NAA，愈伤组织的诱导不受影响；步骤(3)中，采用BA1.5mg/L+IAA0.3mg/L的激素，在转入的89个材料中，丛生芽诱导率为33％。
实施例5
其它同实施例1，步骤(3)中，采用1/2MS+BA1.0mg/L的培养基，20d后，丛生芽数量可增加19倍，明显提高繁殖率。
实施例6
其它同实施例1，步骤(4)中，培养基中加入活性炭2g/L，激素浓度为IBA0.4mg/L，培养16d形成完整植株，幼苗生长健壮，根粗而长。
实施例7
其它同实施例1，步骤(3)中不加入IAA，丛生芽诱导率没有受到明显的影响。
根据对实施例1到7的统计，发现从外植体的建立到炼苗完成，具体比率(平均数)如下：接种外植体数量100个，灭菌后未污染数为77.8个，经培养丛生芽产生数为25.67个，增殖一代为487.73个，二代为9266.87个，三代为76070.53个。
Claims (3)
1、一种新几内亚凤仙的繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)选择外植体进行灭菌处理：选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖为外植体，用8％-10％(v/v)新洁尔灭浸泡5-10min，清水洗净后，用70％(v/v)酒精浸25-35min，之后用8％-10％(v/v)的NaClO杀菌10-15min，然后用0.2％-0.3％(w/v)升汞杀菌5-10min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)经灭菌的外植体经诱导产生愈伤组织：采用MS培养基，激素浓度为：BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L，温度为25-28℃，外植体遮光5～7d后再进行光照，光照强度2000-2500lx，再培养8-15d后可产生愈伤组织；
(3)愈伤组织经培养产生丛生芽并进行增殖；采用1/2MS培养基，激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L，培养温度为25-28℃，光照强度为2500-3000lx，培养时间为15-20d；
(4)将丛生芽培养为成苗并进行移栽管理：将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培养基上，10-16d可生根并形成完整植株，接着让其适应环境后移栽于用塑料薄膜遮盖的环境中进行生长。
2、如权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于：步骤(2)中BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.3mg/L；步骤(3)中IAA的浓度为0.2mg/L，BA的浓度为1.0mg/L；步骤(4)中IBA的浓度为0.2mg/L。
3、如权利要求1或2所述的繁殖方法，其特征在于：在步骤(4)培养基中加入2g/L的活性炭；移栽时用塑料薄膜遮盖6-7d，保持环境湿度80％以上，移栽后10～15d开始施肥，每周一次，用0.2％KH2PO4(w/v)叶面喷施。
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