CN1379973A - 新几内亚凤仙的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种新几内亚凤仙的快速繁殖方法,包括外植体的选择与灭菌、愈伤组织的诱导、丛生芽的产生及增殖、成苗培养及移栽管理四个步骤。该方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齐一致、遗传稳定性好等特点,可以进行大规模的工厂化生产。
Description
本发明涉及新几内亚凤仙的快速繁殖方法,具体的讲,是指采用组织培养技术对新几内亚凤仙进行快速繁殖的方法。
广义来说,组织培养不仅包括无菌条件下利用人工培养基对植物组织的培养,而且包括对原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养。很早以来,专家们根据植物材料的不同,把组织培养分为五种类型,即:1.愈伤组织培养;2.悬浮细胞培养;3.器官培养(胚、花药、子房、根和茎的培养等);4.茎尖分生组织培养;5.原生质体培养。其中愈伤组织培养是一种最常见的培养形式。
新几内亚凤仙(英文名:Guinea Impriens)原产非洲南部,驯化品种株形紧密,矮生,花朵直径大。为多年生草本花卉,枝叶质地较硬,叶片对生,叶表有光泽,叶脉清晰,叶片有绿色、深绿色和古铜色,花朵左右对称,花瓣五片,不等大。花色鲜艳,花色品种多,包括橙红色、红色、猩红色、粉色、紫红色、白色等十八种花色。新几内亚凤仙性喜疏松及透气性良好的土壤,花期长(可达四个半月)。适合盆栽、地栽、家适摆设及园林布置。
新几内亚凤仙可以通过种子得到幼苗,其优点是根系比较发达,后期生长快,但育苗期较长(从播种到开花约15周),播种时易受土壤条件、气候条件、温湿度等的影响,往往发芽率较低,而且种子较贵,成本高。另外,目前人们还采用扦插方式来进行几内亚凤仙的繁殖,其优点是开花早,生长周期较短(从扦插到开花约12周)。但扦插时生根率较低,而且需材量大,成本高,花期难以整齐一致。因此,以上两种方法都不利于新几内亚凤仙的快速与大量繁殖。组织培养作为一种新的繁殖方式,目前已经成为许多植物快速繁殖的首选方案,但目前还没有关于新几内亚凤仙组织培养方面的报道。
本发明的目的在于针对目前新几内亚凤仙培养方法的不足,提供一种采用组织培养技术对新几内亚凤仙进行快速繁殖的方法,该方法具有取材少、繁殖率高、成本低、成苗整齐一致、遗传稳定性好等特点,可以进行大规模的工厂化生产。
本发明的方法依次包括如下步骤:(1)选择外植体进行灭菌处理;(2)经灭菌的外植体通过诱导产生愈伤组织;(3)愈伤组织经培养产生丛生芽并进行增殖;(4)将丛生芽培养为成苗并进行移栽管理。
本发明的较佳方案是步骤(1)到(4)中的某一个步骤采用下列方案,其它步骤采用本领域的通用方法:
(1)外植体的选择与灭菌:选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖用8%-10%新洁尔灭浸泡5-10分钟(用min表示,下同),清水洗净后,用70%酒精浸25-35min,之后用8%-10%的NaClO杀菌10-15min,然后用0.2%-0.3%升汞杀菌5-10min,最后用无菌水冲洗3次。
(2)愈伤组织的诱导:采用MS培养基,激素浓度为:BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L,温度为25-28℃,外植体遮光5~7天(用d表示,下同)后再进行光照,光照强度2000-2500勒克斯(用lx表示,下同),再培养8-15d后可产生愈伤组织。
(3)丛生芽的产生及增殖:采用1/2MS培养基,激素采用IAA 0-1mg/L,BA 1-2mg/L。培养温度为25-28℃,光照强度为2500-3000lx,培养时间为15-20d。
(4)成苗培养及移栽管理:将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培养基上,10-16d可生根并形成完整植株,接着让其适应环境后移栽于用塑料薄膜遮盖的环境中进行生长。
本发明的更优方案是步骤(1)到(4)均采用上述的方案。
本发明的最佳方案是步骤(2)中BA的浓度为2mg/L,NAA的浓度为0.3mg/L;步骤(3)中IAA的浓度为0.2mg/L,BA的浓度为1.0mg/L;步骤(4)中IBA浓度为0.2mg/L。
在步骤(4)中,所用培养基中加入2g/L的活性炭能提高成苗培养的效果,移栽时要用塑料薄膜遮盖6-7d,保持环境湿度80%以上,移栽后10~15d开始施肥,每周一次,用0.2%KH2PO4叶面喷施。
在上述配方中,MS培养基是最常用的培养基,一般从有关植物组织培养的书都可找到其配方。BA代表6-苄基氨基嘌呤,NAA为萘乙酸,IAA为吲哚乙酸,IBA为吲哚丁酸,它们都是组织培养方面常用的药物,可以通过购买得到。
本发明方法具有如下优点及效果:
1.取材少,繁殖率高,成苗整齐,花期易达到一致。
2.可以避开夏天高温对幼苗生长的不适应,新几内亚凤仙只要不遇严寒或因气温较高引起生长不良,可以持续盛花。
3.采用0.5-0.7mm茎尖建外植体,既能防止病毒的传播,又保证了遗传的稳定性。
4.繁殖速度快,可以进行大规模的工厂化生产。
下面结合具体的实施例对本发明进行进一步说明:
实施例1
(1)外植体的选择与灭菌:选用新几内亚凤仙嫩叶,用清水冲洗干净,用8%新洁尔灭浸泡5min,清水洗净后,用70%酒精浸25min,之后用8%的NaClO杀菌10min,然后用0.2%升汞杀菌5min,最后用无菌水冲洗3次。
(2)愈伤组织的诱导:采用MS培养基,激素浓度为:BA 1.5mg/L、NAA 1.0mg/L,温度为25-28℃,外植体遮光5d后再进行光照,光照强度2500lx,再培养8d后产生愈伤组织。
(3)丛生芽的产生及增殖:采用1/2MS培养基,激素浓度为IAA0.3mg/L,BA 1.0mg/l。培养温度为25-28℃,光照强度为2500lx,培养时间为15天。
(4)成苗培养及移栽管理:将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.2mg/L的培养基上,培养14d可生根并形成完整植株,适应环境后进行移栽,移栽时用塑料薄膜遮盖7d,保持环境湿度80%以上。移栽后10d开始施肥,每周一次,用0.2%KH2PO4叶面喷施,成活率可达95%以上。
实施例2
操作同实施例1,在步骤(1)中,外植体选用新几内亚凤仙的茎尖,用10%新洁尔灭浸泡,时间为10min,70%酒精浸泡时间为35min,用10%的NaClO杀菌15min,用0.3%升汞杀菌10min。步骤(2)中,采用的激素为BA 3mg/L、NAA 0.5mg/L,外植体遮光7后再进行光照,光照强度2000lx,再培养15d后产生愈伤组织。步骤(3)中采用1mg/L的IAA和2mg/L的BA,光照强度为3000lx。步骤(4)中采用0.4mg/L的IBA,培养10d形成完整植株,移栽时用塑料薄膜遮盖6d。移栽后15d开始施肥,结果得到发育良好的幼苗。
实施例3
其它同实施例1,步骤(2)中,采用2mg/L的BA和0.3mg/L NAA,光照后培养的时间为12d;步骤(3)中采用0.2mg/L的IAA和1.0mg/L的BA,培养时间增加到20d;步骤(4)中采用0.1mg/L的IBA,培养10d形成完整植株,经发育成的幼苗长势良好。
实施例4
其它操作同实施例1,步骤(2)中只加入1.0mg/L的BA,不加入NAA,愈伤组织的诱导不受影响;步骤(3)中,采用BA1.5mg/L+IAA0.3mg/L的激素,在转入的89个材料中,丛生芽诱导率为33%。
实施例5
其它同实施例1,步骤(3)中,采用1/2MS+BA1.0mg/L的培养基,20d后,丛生芽数量可增加19倍,明显提高繁殖率。
实施例6
其它同实施例1,步骤(4)中,培养基中加入活性炭2g/L,激素浓度为IBA0.4mg/L,培养16d形成完整植株,幼苗生长健壮,根粗而长。
实施例7
其它同实施例1,步骤(3)中不加入IAA,丛生芽诱导率没有受到明显的影响。
根据对实施例1到7的统计,发现从外植体的建立到炼苗完成,具体比率(平均数)如下:接种外植体数量100个,灭菌后未污染数为77.8个,经培养丛生芽产生数为25.67个,增殖一代为487.73个,二代为9266.87个,三代为76070.53个。
Claims (8)
1、一种新几内亚凤仙的快速繁殖方法,其特征在于包括如下步骤:(1)选择外植体进行灭菌处理;(2)经灭菌的外植体经诱导产生愈伤组织;(3)愈伤组织经培养产生丛生芽并进行增殖;(4)将丛生芽培养为成苗并进行移栽管理。
2、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(1)中,选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖用8%-10%新洁尔灭浸泡5-10min,清水洗净后,用70%酒精浸25-35min,之后用8%-10%的NaClO杀菌10-15min,然后用0.2%-0.3%升汞杀菌5-10min,最后用无菌水冲洗3次。
3、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(2)中,采用MS培养基,激素浓度为:BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L,温度为25-28℃,外植体遮光5~7d后再进行光照,光照强度2000-2500lx,再培养8-15d后可产生愈伤组织。
4、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(3)中采用1/2MS培养基,激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L,培养温度为25-28℃,光照强度为2500-3000lx,培养时间为15-20d。
5、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(4)中,将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培养基上,10-16d可生根并形成完整植株,接着让其适应环境后移栽于用塑料薄膜遮盖的环境中进行生长。
6、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(1)中,选用新几内亚凤仙嫩叶或茎尖用8%-10%新洁尔灭浸泡5-10min,清水洗净后,用70%酒精浸25-35min,之后用8%-10%的NaClO杀菌10-15min,然后用0.2%-0.3%升汞杀菌5-10min,最后用无菌水冲洗3次;在步骤(2)中,采用MS培养基,激素浓度为:BA 1-3mg/L、NAA 0-1mg/L,温度为25-28℃,外植体遮光5~7d后再进行光照,光照强度2000-2500lx,再培养8-15d后可产生愈伤组织;在步骤(3)中,采用1/2MS培养基,激素采用IAA 0-1mg/L、BA 1-2mg/L,培养温度为25-28℃,光照强度为2500-3000lx,培养时间为15-20d;在步骤(4)中,将丛生芽接种到1/2MS+IBA 0.1-0.4mg/L的培养基上,10-16d可生根并形成完整植株,接着让其适应环境后移栽于用塑料薄膜遮盖的环境中进行生长。
7、如权利要求6所述的繁殖方法,其特征在于:步骤(2)中BA的浓度为2mg/L,NAA的浓度为0.3mg/L;步骤(3)中IAA的浓度为0.2mg/L,BA的浓度为1.0mg/L;步骤(4)中IBA的浓度为0.2mg/L。
8、如权利要求1所述的繁殖方法,其特征在于:在步骤(4)培养基中加入2g/L的活性炭;移栽时用塑料薄膜遮盖6-7d,保持环境湿度80%以上,移栽后10~15d开始施肥,每周一次,用0.2%KH2PO4叶面喷施。
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