CN116836895A - 一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用，属于微生物菌剂技术领域。本发明的一种重金属污染土壤修复菌剂，包括恶臭假单胞菌AM21和伯克霍尔德氏菌AM20，两者的活菌数之比为1:（0.2~5），总活菌数为（1~5）×109cfu/g。本发明筛选的伯克霍尔德氏菌AM20能够活化土壤中的重金属，促进植物对土壤中重金属的吸收；筛选的恶臭假单胞菌AM21具有解磷作用，能够提高植物的生长量，促进植物对重金属镉的吸收。本发明制得的重金属污染土壤修复菌剂，结合了伯克霍尔德氏菌AM20活化土壤重金属和恶臭假单胞菌AM21促进重金属吸收的作用，对无外源重金属持续输入的镉污染土壤的修复效果突出。

Description

一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用，属于微生物菌剂技术领域。
背景技术
随着人类社会工农业现代化、城市化的发展，人为因素造成土壤重金属污染是当今世界越来越不容忽视的环境问题。重金属多为有色金属，在人类生产、生活各方面应用广泛，同时也伴随着重金属的严重环境污染。有色重金属矿床的开发冶炼是向环境中排放重金属最主要的污染源。通过“三废”向环境中排放重金属的工矿产业，包括如：采矿、选矿、冶金、电镀、电工、染料、纺织、炼油等。
由于这些重金属污染源大多是点性污染源，故对土壤环境来说是不均匀污染，在局部地区土壤重金属污染可能相当严重。随着城市化的发展和市内工业、交通排放各种废弃物的增多，城市土壤中重金属含量显著增加，其中以汞和铅最为突出。随着人为活动向大气中排放的重金属污染物的增多，通过沉降的重金属污染土壤也表现得越来越严重，特别是化石燃料的燃烧，如：燃烧释放的汞占人为释放量的57%～71%；燃煤、燃油向大气输入的镍占人为释放量的60%～78%；由于汽车使用的汽油中加入抗爆剂——四甲基铅和四乙基铅，故在汽车尾气中排放的铅含量为20～50μg/L。在农业中，农药、化肥、污泥的施用，污水的灌溉，也是加剧土壤重金属污染的主要途径之一。在化肥中，其原料矿石本身的杂质及生产工艺流程的污染使其重金属的含量颇高，如：有的过磷酸钙肥料中的镉和砷含量较高，据广州市磷肥和石灰测定结果，镉含量为2～3mg/kg，砷含量为60～80ng/kg，汞含量为l～2ng/kg。在农药中以含汞、砷和铅的较多，如：含有机汞制剂的有赛力散、西力升等，含有机砷制剂的有稻脚青、苏农6401，含砷铅的砷酸钳、亚砷酸铅等，含其他重金属的农药有代森铅等。故长期施用化肥、农药可使土壤遭受重金属污染。
中国专利文献CN110468080A（申请号201910808979.8）公开了促生水稻与降镉的微生物菌剂及其制备方法和使用方法，属于微生物治理重金属污染技术领域。该发明提供的微生物菌剂包括格氏利斯特氏菌、伯克氏菌、施氏假单胞菌、枯草芽孢杆菌和棘孢小单孢菌，经过菌种活化、扩大培养、发酵培养后混合制备而成，在水稻生长的返青期以体积比1 :400加入水稻水培盆栽营养液中培养至最高分蘖期。在格氏利斯特氏菌占50％、伯克氏菌占20％、施氏假单胞菌占10％、棘孢小单孢菌占10％、枯草芽孢杆菌占20％的数量百分比的情况下，水稻对重金属镉的吸收率最低且具有促进水稻生长的潜力。上述微生物菌剂在促进作物生长的同时可以降低植物吸收重金属的效率，从而确保植物中的重金属含量处于较低的水平，但该菌剂无法进行土壤改良，随着作物的收获，虽然可以确保农产品的品质，但重金属污染物依然留存于土壤中。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种重金属污染土壤修复菌剂及其制备方法与应用，该菌剂既有良好的作物促生作用，又可以将重金属富集于作物中，随着作物的收割，将相关土壤中的重金属从土壤中分离实现土壤改良的目的。
本发明的技术方案如下：
一株恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida) AM21，于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27033。
一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) AM20，于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27032。
一种重金属污染土壤修复菌剂，包括恶臭假单胞菌AM21和伯克霍尔德氏菌AM20。
根据本发明优选的，所述重金属污染土壤修复菌剂中伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1:（0.2~5），总活菌数为（1~5）×109cfu/g。
进一步优选的，所述重金属污染土壤修复菌剂中伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1:（1~3），总活菌数为（3~5）×109cfu/g。
根据本发明优选的，所述重金属污染土壤修复菌剂的形式为海藻酸钠包埋胶球。
上述重金属污染土壤修复菌剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）分别将恶臭假单胞菌AM21和伯克霍尔德氏菌AM20在LB固体培养基上进行活化培养，制得活化恶臭假单胞菌AM21和活化伯克霍尔德氏菌AM20；
（2）将步骤（1）制得的活化恶臭假单胞菌AM21和活化伯克霍尔德氏菌AM20分别接种于种子培养基中进行种子培养，制得恶臭假单胞菌AM21种子液和伯克霍尔德氏菌AM20种子液；
（3）将步骤（2）制得的恶臭假单胞菌AM21种子液和伯克霍尔德氏菌AM20种子液分别接种于发酵培养基中进行发酵培养，制得恶臭假单胞菌AM21菌液和伯克霍尔德氏菌AM20菌液；
（4）取步骤（3）制得的伯克霍尔德氏菌AM20菌液和恶臭假单胞菌AM21菌液，充分混匀，得混合菌液，经海藻酸钠包埋后，制得重金属污染土壤修复菌剂。
根据本发明优选的，步骤（1）中所述活化培养的条件为：33～37℃活化培养1.5～2.5天；所述LB固体培养基的组份如下：
蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.0。
根据本发明优选的，步骤（2）中所述种子培养的条件为：33～37℃、120～180转/分钟摇床培养20～28h；所述种子培养基的组分如下：
蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0。
根据本发明优选的，步骤（3）中所述发酵培养基的接种量为发酵培养基体积的2%～10%。
根据本发明优选的，步骤（3）中所述发酵培养的条件为：33～37℃、溶氧20%～70%的条件下，发酵培养24～36h；所述发酵培养基的组分如下：
蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0。
根据本发明优选的，步骤（4）中所述海藻酸钠包埋是将混合菌液与质量分数为3~5%海藻酸钠溶液按体积比1:（1～5）混合，搅拌均匀；然后滴入质量分数为2~4%的CaCl2溶液中，制备海藻酸钠包埋胶球。
上述重金属污染土壤修复菌剂在修复重金属污染土壤中的应用。
根据本发明优选的，所述重金属污染为镉污染。
有益效果：
1、本发明中从自然界筛选出的伯克霍尔德氏菌AM20能够活化土壤中的重金属，促进植物对土壤中重金属的吸收。
2、本发明中筛选的恶臭假单胞菌AM21具有解磷作用，能够提高植物的生长量，且能够促进植物对重金属镉的吸收。
3、本发明制得的重金属污染土壤修复菌剂，结合了伯克霍尔德氏菌AM20活化土壤重金属和恶臭假单胞菌AM21促进重金属吸收的作用，对无外源重金属持续输入的镉污染土壤的修复效果突出。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例中涉及的微生物：
一株恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida) AM21，于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27033。
一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) AM20，于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27032。
实施例1
一种重金属污染土壤修复菌剂的制备方法，步骤如下：
（1）分别将伯克霍尔德氏菌AM20和恶臭假单胞菌AM21在LB固体培养基中于35℃条件下活化培养2天，制得活化伯克霍尔德氏菌AM20和活化恶臭假单胞菌AM21；
其中，LB固体培养基的组分如下：
蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，琼脂20 g，蒸馏水1L，pH 7.0；121℃灭菌20min；
（2）将步骤（1）制得的活化伯克霍尔德氏菌AM20和活化恶臭假单胞菌AM21分别接种至种子培养基中于35℃、150转/分钟条件下摇床培养24h，制得伯克霍尔德氏菌AM20种子液和恶臭假单胞菌AM21种子液；
其中，种子培养基组分如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（3）将步骤（2）制得的伯克霍尔德氏菌AM20种子液和恶臭假单胞菌AM21种子液分别按发酵培养基5%的体积百分比接种至发酵培养基中，35℃、溶氧50%的条件下，发酵培养32h，制得菌体浓度为6.2×109cfu·mL-1的伯克霍尔德氏菌AM20菌液和菌体浓度为5.6×109cfu·mL-1的恶臭假单胞菌AM21菌液；
其中，发酵培养基组份如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（4）按质量比例取步骤（3）制得的伯克霍尔德氏菌AM20菌液1份、恶臭假单胞菌AM21菌液1份，充分混匀，得混合菌液；
（5）制备质量分数为4%的海藻酸钠溶液，与步骤（4）制得的混合菌液按1:1的质量比例充分混匀，然后滴入质量分数为2%的CaCl2溶液中，制备直径为2 mm的重金属污染土壤修复菌剂的海藻酸钠包埋胶球。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1.1:1，总活菌数为3.8×109cfu/g。
实施例2
如实施例1所述的制备方法，不同之处在于，步骤（4）中按质量比例取伯克霍尔德氏菌AM20菌液1份、恶臭假单胞菌AM21菌液3份，充分混匀，得混合菌液。
伯克霍尔德氏菌AM20的活化及培养方法同实施例1。
恶臭假单胞菌AM21的活化及培养方法同实施例1。
如实施例1，取伯克霍尔德氏菌AM20菌液1份，恶臭假单胞菌AM21菌液3份，充分混匀后，经实施例1步骤（5）相同操作后制备得重金属污染土壤修复菌剂的海藻酸钠包埋胶球。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1:2.9，总活菌数为3.7×109cfu/g。
对比例1
如实施例1所述的重金属污染土壤修复菌剂，不同之处在于，恶臭假单胞菌AM21替换为恶臭假单胞菌12，保藏编号为CGMCC 1.1820。
伯克霍尔德氏菌AM20的活化及培养方法同实施例1中一致。
恶臭假单胞菌12的活化及培养方法同实施例1中恶臭假单胞菌AM21的一致。
本对比例中将制得的伯克霍尔德氏菌AM20菌液与恶臭假单胞菌12菌液进行混合，两者质量比例为1:1。然后制备海藻酸钠包埋胶球，方法与实施例1中一致。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌12的活菌数之比为1.1:1，总活菌数为3.5×109cfu/g。
对比例2
如实施例1所述的重金属污染土壤修复菌剂，不同之处在于，伯克霍尔德氏菌AM20替换为洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）9659，保藏编号为CGMCC 1.3082。
洋葱伯克霍尔德氏菌9659的活化及培养方法同实施例1中伯克霍尔德氏菌AM20的一致。
恶臭假单胞菌AM21的活化及培养方法同实施例1中一致。
本对比例中将制得的洋葱伯克霍尔德氏菌9659菌液与恶臭假单胞菌AM21菌液进行混合，两者质量比例为1:1。然后制备海藻酸钠包埋胶球，方法与实施例1中一致。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，洋葱伯克霍尔德氏菌9659与恶臭假单胞菌AM21活菌数之比为1.1:1，总活菌数为3.6×109cfu/g。
对比例3
如实施例1所述的重金属污染土壤修复菌剂，不同之处在于，重金属污染土壤修复菌剂中只含有伯克霍尔德氏菌AM20，不含有恶臭假单胞菌AM21，制备步骤如下：
（1）将伯克霍尔德氏菌AM20在LB固体培养基中于35℃条件下活化培养2天，制得活化伯克霍尔德氏菌AM20；
其中，LB固体培养基的组分如下：
蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，氯化钠10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；121℃灭菌20min；
（2）对步骤（1）制得的活化伯克霍尔德氏菌AM20接种至种子培养基中于35℃、150转/分钟条件下摇床培养24h，制得活化伯克霍尔德氏菌AM20种子液；
其中，种子培养基组分如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（3）将步骤（2）制得的伯克霍尔德氏菌AM20种子液按发酵培养基5%的体积百分比接种至发酵培养基中，35℃、溶氧50%的条件下，发酵培养33h，制得菌体浓度为6.5×109cfu·mL-1的伯克霍尔德氏菌AM20菌液；
其中，发酵培养基组份如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（4）制备质量分数为4%的海藻酸钠溶液，与步骤（3）制得的伯克霍尔德氏菌AM20菌液按1:1的质量比例充分混匀，然后滴入质量分数为2%的CaCl2溶液中，制备直径为2 mm的海藻酸钠包埋胶球。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，伯克霍尔德氏菌AM20的活菌数为3.8×109cfu/g。
对比例4
如实施例1所述的重金属污染土壤修复菌剂，不同之处在于，重金属污染土壤修复菌剂中只含有恶臭假单胞菌AM21，不含有伯克霍尔德氏菌AM20，制备步骤如下：
（1）将恶臭假单胞菌AM21在LB固体培养基中于35℃条件下活化培养2天，制得活化恶臭假单胞菌AM21；
其中，LB固体培养基的组分如下：
蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，氯化钠10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；121℃灭菌20min；
（2）将步骤（1）制得的活化恶臭假单胞菌AM21接种至种子培养基中于35℃、150转/分钟条件下摇床培养24h，制得恶臭假单胞菌AM21种子液；
其中，种子培养基组份如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（3）将步骤（2）制得的恶臭假单胞菌AM21种子液按发酵培养基5%的体积百分比接种至发酵培养基中，35℃、溶氧50%的条件下，发酵培养36h，制得菌体浓度为6.5×109cfu·mL-1的恶臭假单胞菌AM21菌液；
其中，发酵培养基组份如下：蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
（4）制备质量分数为4%的海藻酸钠溶液，与步骤（3）制得的恶臭假单胞菌AM21菌液按1:1的质量比例充分混匀，然后滴入质量分数为2%的CaCl2溶液中，制备直径为2 mm的海藻酸钠包埋胶球。
经检测，海藻酸钠包埋胶球中，恶臭假单胞菌AM21的活菌数为3.9×109cfu/g。
实验例
实施例1~2和对比例1~4制备的菌剂在重金属污染土壤修复过程中的应用，具体步骤如下：
实验用土壤为湖南衡阳矿区污染土壤，实验于塑料盆中进行(直径44cm×高度20cm)，每盆装实验用土壤20kg。实验用菌剂为实施例1~2以及对比例1~4制备的菌剂，共6个处理组，每个处理组添加对应的菌剂20g，另设1个不添加任何菌剂的CK对照组。
实验用土壤理化指标为：Cd，3.32mg/kg；碱解氮108mg/kg；有效磷22mg/kg；pH6.08。
称取20kg实验用土壤于塑料盆(直径44cm×高度20cm)中，每盆添加对应的实施例以及对比例中制备的菌剂20g，并调节土壤水分为60%；每盆均匀撒播100粒用5% H2O2进行表面消毒10 min、再用蒸馏水冲洗多次后晾干后的紫花苜蓿种子，表面覆盖薄土层，定期浇水以保持土壤含水量在最大田间持水量的60％，出苗后保留80棵幼苗。紫花苜蓿生长90天后，收获植物，分为地上和地下部分，分别测定植物干重及植物与土壤的重金属含量。
重金属转移系数＝植物地上部分重金属含量/植物地下部分重金属含量
重金属富集系数＝植物地上部分重金属含量/处理后土壤中重金属含量
总镉去除率＝(植物地上部分重金属含量×地上部分生物量+地下部分重金属含量×地下部分生物量)/(处理前土壤中重金属含量×土壤质量)*100％
表1.不同处理的紫花苜蓿生物量和镉去除情况
注：各处理中添加的菌剂对应各实施例以及对比例中制备的菌剂。
实验用土壤在不同菌剂处理下紫花苜蓿生物量和镉去除情况见表1。结果显示，各实施例以及对比例与CK相比，植物干重、植物镉含量、镉转移系数和镉富集系数以及总镉去除率均显著提高，说明实施例和对比例制备的菌剂均有植物促生及促进植物吸收重金属的作用。
只添加伯克霍尔德氏菌AM20的对比例3菌剂对镉的富集系数较高，而只添加恶臭假单胞菌AM21的对比例4菌剂对镉的富集系数偏低，但植物的生长量增加更为明显，说明本发明中的两株菌在单独使用时具有促进植物对镉的富集及促进植物生长的作用，伯克霍尔德氏菌AM20能活化土壤中的重金属，促进植物对重金属的吸收富集，而恶臭假单胞菌AM21的植物促生作用更为显著，可以缓解镉胁迫，促进植物生长，最终提高镉的去除率。
与对比例1-4相比，实施例1的植物干重明显增加，且最终的总镉去除率比对比例提高了3.49%~5.98%。说明本发明中伯克霍尔德氏菌AM20和恶臭假单胞菌AM21在植物促生以及镉的富集去除过程中具有协同作用，协同促进了镉的有效去除，具有良好的应用前景。
对比例1中将恶臭假单胞菌AM21替换为恶臭假单胞菌12，对比例2中伯克霍尔德氏菌AM20替换为洋葱伯克霍尔德氏菌9659，结果显示总镉的去除率明显降低，也说明了本发明中伯克霍尔德氏菌AM20与恶臭假单胞菌AM21在总镉去除过程中的协同作用。

Claims (9)

1. 一株伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20，其特征在于，于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27032。
2. 一种重金属污染土壤修复菌剂，其特征在于，包括恶臭假单胞菌AM21和权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20；
所述恶臭假单胞菌AM21于2023年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号：CGMCC NO. 27033。
3. 如权利要求2所述的一种重金属污染土壤修复菌剂，其特征在于，所述重金属污染土壤修复菌剂中伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1:（0.2~5），总活菌数为（1~5）×109cfu/g。
4. 如权利要求2所述的一种重金属污染土壤修复菌剂，其特征在于，所述重金属污染土壤修复菌剂中伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20与恶臭假单胞菌AM21的活菌数之比为1:（1~3），总活菌数为（3~5）×109cfu/g。
5.如权利要求2所述的一种重金属污染土壤修复菌剂，其特征在于，所述重金属污染土壤修复菌剂的形式为海藻酸钠包埋胶球。
6.权利要求2所述的一种重金属污染土壤修复菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）分别将恶臭假单胞菌AM21和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20在LB固体培养基上进行活化培养，制得活化恶臭假单胞菌AM21和活化伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20；
（2）将步骤（1）制得的活化恶臭假单胞菌AM21和活化伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20分别接种于种子培养基中进行种子培养，制得恶臭假单胞菌AM21种子液和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20种子液；
（3）将步骤（2）制得的恶臭假单胞菌AM21种子液和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20种子液分别接种于发酵培养基中进行发酵培养，制得恶臭假单胞菌AM21菌液和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20菌液；
（4）取步骤（3）制得的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)AM20菌液和恶臭假单胞菌AM21菌液，充分混匀，得混合菌液，经海藻酸钠包埋后，制得重金属污染土壤修复菌剂。
7.如权利要求6所述的一种重金属污染土壤修复菌剂的制备方法，其特征在于，满足以下条件之一项或多项：
i. 步骤（1）中所述活化培养的条件为：33～37℃活化培养1.5～2.5天；所述LB固体培养基的组份如下：
蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
ii. 步骤（2）中所述种子培养的条件为：33～37℃、120～180转/分钟摇床培养20～28h；所述种子培养基的组分如下：
蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
iii. 步骤（3）中所述发酵培养基的接种量为发酵培养基体积的2%～10%；
iv. 步骤（3）中所述发酵培养的条件为：33～37℃、溶氧20%～70%的条件下，发酵培养24～36h；所述发酵培养基的组分如下：
蛋白胨 10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0；
v. 步骤（4）中所述海藻酸钠包埋是将混合菌液与质量分数为3~ 5%海藻酸钠溶液按体积比1:（1～5）混合，搅拌均匀；然后滴入质量分数为2~4%的CaCl2溶液中，制备海藻酸钠包埋胶球。
8.权利要求2所述的一种重金属污染土壤修复菌剂的应用，其特征在于，应用于修复重金属污染土壤。
9.如权利要求8所述的一种重金属污染土壤修复菌剂的应用，其特征在于，所述重金属污染为镉污染。
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