CN116819081A - 一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 - Google Patents
一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116819081A CN116819081A CN202310961002.6A CN202310961002A CN116819081A CN 116819081 A CN116819081 A CN 116819081A CN 202310961002 A CN202310961002 A CN 202310961002A CN 116819081 A CN116819081 A CN 116819081A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- colloidal gold
- detection
- solution
- virus
- influenza
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 141
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 65
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 65
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 65
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 30
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 126
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 70
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 69
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 65
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 65
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 98
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 51
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 34
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 33
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 claims description 29
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 27
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 27
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 25
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 25
- 239000002057 nanoflower Substances 0.000 claims description 24
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 18
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 16
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 12
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 10
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 claims description 10
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 8
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 101001018064 Homo sapiens Lysosomal-trafficking regulator Proteins 0.000 description 14
- 102100033472 Lysosomal-trafficking regulator Human genes 0.000 description 14
- 235000010703 Modiola caroliniana Nutrition 0.000 description 14
- 244000038561 Modiola caroliniana Species 0.000 description 14
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 9
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 6
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 3
- 241000342334 Human metapneumovirus Species 0.000 description 3
- 241000202934 Mycoplasma pneumoniae Species 0.000 description 3
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 229910004042 HAuCl4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,涉及生物免疫技术领域,包括检测卡,检测卡包括上盖、下盖和两个检测试纸条,两个检测试纸条分别位于下盖的两端且平行设置,两个检测试纸条结构相同,两个检测试纸条均包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC板,本发明提供一种可同时检测新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原四联检测试剂盒,综合监测呼吸道病毒从而节省检测资源,检测方法简单快捷,检测结果准确度高,试剂盒稳定性好且特异性强。
Description
技术领域
本发明涉及生物免疫技术领域,具体地说,涉及一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒。
背景技术
目前,呼吸道病毒主要包括新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV),冠状病毒的主要传播方式是近距离呼吸道飞沫传播,其他途径如接触、粪口(消化道)等途径存在极大可能。
流感病毒分为甲(A)型、乙(B)型和丙(C)型,人类大部分感染的是甲、乙型病毒。其中甲型流感病毒最常见,在世界各地常会有周期性流行。甲型流感病毒较容易发生变异,流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现而引起的,另外甲型流感病毒的多种亚型也可感染动物。乙型流感病毒感染基本限于人类且很少引起流行病。
呼吸道合胞病毒(RSV)属于副粘病毒科,是婴幼儿、老年人及免疫缺陷病人下呼吸道感染(细支气管炎和肺炎)最常见的病毒,几乎所有儿童至2岁时均感染过RSV,但由于免疫力不完全,儿童和成人可被反复感染。
发明内容
本发明的目的在于提供一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,该制备方法可明显改善现有胶体金制备技术中的颗粒形貌及粒径不均一、胶体金不稳定等问题,提升胃幽门螺旋杆菌IgG抗体检测试纸条的灵敏度和特异性。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,包括检测卡,检测卡包括上盖、下盖和两个检测试纸条,两个检测试纸条分别位于下盖的两端且平行设置,两个检测试纸条结构相同,两个检测试纸条均包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC板,胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将5%~20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持5~25分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50~120倍后,加入13~44%V/V的氢醌溶液,在55℃~85℃条件下加热13~19分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.05~0.1wt% pH值8.2~11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金。
作为一种优化方案,其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,还包括如下步骤:
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体稀释至0.5~2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15~25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液。
作为一种优化方案,其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,还包括如下步骤:
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液浓度调整到10~20%,采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫。
作为一种优化方案,另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,还包括如下步骤:
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)稀释至0.5~2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15~25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原标记的抗体溶液;
作为一种优化方案,另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,还包括如下步骤:
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)浓度调整到10~20%,采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫。
作为一种优化方案, 其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、呼吸道合胞病毒(RSV)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1~3mg/mL、0.1~2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线、检测T2线和质控C线处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜。
作为一种优化方案,另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1~3mg/mL、0.1~2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线、检测T2线和质控C线处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜。
作为一种优化方案,所述硝酸纤维素膜粘贴在PVC板上,硝酸纤维素膜的两端分别搭接胶体金垫和吸水纸,胶体金垫远离硝酸纤维素膜的一端搭接样品垫。
作为一种优化方案,所述上盖和下盖相互卡扣连接,上盖上设有一个加样孔和两个观察窗,加样孔设置在上盖的中心位置,两个检测试纸条的样品垫设置在加样孔的下方。
作为一种优化方案,一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,还包括样本裂解液。
本发明采取以上技术方案,具有以下优点:本发明提供一种可同时检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原四联检测试剂盒,综合监测呼吸道病毒从而节省检测资源,检测方法简单快捷,检测结果准确度高,试剂盒稳定性好且特异性强。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步说明。
附图说明
图1为本发明一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测卡内部的结构示意图;
图2为本发明一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测卡的结构示意图;
图3为本发明一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测试纸条的结构示意图。
图中,
1-上盖,2-下盖,3-检测试纸条,4-样品垫,5-胶体金垫,6-硝酸纤维素膜,7-吸水垫,8-PVC板,9-加样孔,10-观察窗,11-检测T1线,12-检测T2线,13-质控C线。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,实施例中未注明具体条件,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市场购买获得的常规产品。
所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
如图1-3所示,一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,包括检测卡和样本裂解液,检测卡包括上盖1、下盖2和两个检测试纸条3,上盖1和下盖2相互卡扣连接,两个检测试纸条3分别位于下盖2的两端且平行设置,两个检测试纸条3结构相同,两个检测试纸条3均包括样品垫4、胶体金垫5、硝酸纤维素膜6、吸水垫7和PVC板8,硝酸纤维素膜6粘贴在PVC板8上,硝酸纤维素膜6的两端分别搭接胶体金垫5和吸水纸,胶体金垫5远离硝酸纤维素膜6的一端搭接样品垫4。
上盖1上设有一个加样孔9和两个观察窗10,加样孔9设置在上盖1的中心位置,两个检测试纸条3的样品垫4设置在加样孔9的下方,待测样品通过加样孔9滴加到样品垫4上,两个检测试纸条3的硝酸纤维素膜6分别设置在两个观察窗10的下方。
其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将5%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持5分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50倍后,加入13%V/V的氢醌溶液,在55℃条件下加热13分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.05wt%pH值8.2的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体稀释至0.5mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液浓度调整到10%,采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、呼吸道合胞病毒(RSV)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1mg/mL、0.1mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将5%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持5分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50倍后,加入13%V/V的氢醌溶液,在55℃条件下加热13分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.05wt%pH值8.2的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)稀释至0.5mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)浓度调整到10%,采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1mg/mL、0.1mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
实施例2
如图1-3所示,一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,包括检测卡和样本裂解液,检测卡包括上盖1、下盖2和两个检测试纸条3,上盖1和下盖2相互卡扣连接,两个检测试纸条3分别位于下盖2的两端且平行设置,两个检测试纸条3结构相同,两个检测试纸条3均包括样品垫4、胶体金垫5、硝酸纤维素膜6、吸水垫7和PVC板8,硝酸纤维素膜6粘贴在PVC板8上,硝酸纤维素膜6的两端分别搭接胶体金垫5和吸水纸,胶体金垫5远离硝酸纤维素膜6的一端搭接样品垫4。
上盖1上设有一个加样孔9和两个观察窗10,加样孔9设置在上盖1的中心位置,两个检测试纸条3的样品垫4设置在加样孔9的下方,待测样品通过加样孔9滴加到样品垫4上,两个检测试纸条3的硝酸纤维素膜6分别设置在两个观察窗10的下方。
其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将12%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持15分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释85倍后,加入30%V/V的氢醌溶液,在70℃条件下加热16分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.08wt%pH值10的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体稀释至1.2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌20min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液浓度调整到15%,采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、呼吸道合胞病毒(RSV)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到2mg/mL、1.1mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将13%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持15分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释85倍后,加入30%V/V的氢醌溶液,在70℃条件下加热16分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.08wt%pH值10的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)稀释至0.5~2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌20min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(Flu B)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)浓度调整到15%,采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到2mg/mL、1.1mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
实施例3
如图1-3所示,一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,包括检测卡和样本裂解液,检测卡包括上盖1、下盖2和两个检测试纸条3,上盖1和下盖2相互卡扣连接,两个检测试纸条3分别位于下盖2的两端且平行设置,两个检测试纸条3结构相同,两个检测试纸条3均包括样品垫4、胶体金垫5、硝酸纤维素膜6、吸水垫7和PVC板8,硝酸纤维素膜6粘贴在PVC板8上,硝酸纤维素膜6的两端分别搭接胶体金垫5和吸水纸,胶体金垫5远离硝酸纤维素膜6的一端搭接样品垫4。
上盖1上设有一个加样孔9和两个观察窗10,加样孔9设置在上盖1的中心位置,两个检测试纸条3的样品垫4设置在加样孔9的下方,待测样品通过加样孔9滴加到样品垫4上,两个检测试纸条3的硝酸纤维素膜6分别设置在两个观察窗10的下方。
其中一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持25分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释120倍后,加入44%V/V的氢醌溶液,在85℃条件下加热19分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.1wt%pH值11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体稀释至2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液浓度调整到20%,采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、呼吸道合胞病毒(RSV)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到3mg/mL、2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
另一个检测试纸条的胶体金垫的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持25分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释120倍后,加入44%V/V的氢醌溶液,在85℃条件下加热19分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.1wt%pH值11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金;
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)稀释至2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原标记的抗体溶液;
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)浓度调整到20%,采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫5。
另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到3mg/mL、2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线11、检测T2线12和质控C线13处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜6。
实施例4
一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒的检测方法包括以下步骤:
检测:
采集咽拭子样本时,使用无菌棉拭子于人咽后壁及扁桃体隐窝侧壁处反复擦拭3-5次,收集粘膜细胞,避免触及舌、口腔粘膜和唾液;采集鼻拭子样本时需沿下鼻道的底部向后缓缓深入1-1.5cm后贴鼻腔旋转至少5圈(停留时间不少于15s),随后使用同一拭子对另一鼻腔重复相同操作;
采集样本后,将咽/鼻拭子插入装有样本裂解液的保存管中,紧贴保存管旋转30s,并挤压保存管下端来挤压拭子的签头5次,静置1分钟。盖好保存管盖子,滴加待测样本5滴到加样孔9中,开始观察结果。
结果判断:
a、阴性:仅质控C线出现一条红色条带,在检测T线内无红色条带出现。
b、阳性:两条红色条带出现。一条红色条带位于检测T线内,另一条红色条带位于质控C线。
c、无效:质控C线未出现红色条带,表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
实验
1、本发明试剂盒的准确性验证:
采用4种阳性质控品,分别含有103TCID50/mL的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV),将上述阳性质控品分别加入含有样本裂解液的保存管中,滴加待测样本到加样孔9中观察结果,结果如下表1所示。
表1 准确性验证实验结果
结果:4种阳性质控品结果判定分别对应为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV)阳性,检测结果准确度高。
2、本发明试剂盒的特异性验证:
分别用104TCID50/mL的人副流感病毒、腺病毒、人偏肺病毒、肺炎衣原体和肺炎支原体测试试剂盒,观察是否出现交叉反应,结果如下表2所示。
表2 特异性验证实验结果
结果:与104TCID50/mL的人副流感病毒、腺病毒、人偏肺病毒、肺炎衣原体和肺炎支原体均无交叉反应。
3、本发明试剂盒的稳定性验证:
将试纸条于37℃放置20天,或室温密封避光干燥处放置12个月后,测试试剂盒特异性和准确性是否符合要求。
表格3 37℃放置20天后准确性验证实验结果
表格4 37℃放置20天后特异性验证实验结果
表格5 室温密封避光干燥处放置12个月后准确性验证实验结果
表格6 室温密封避光干燥处放置12个月后特异性验证实验结果
结果:将试纸条于37℃放置20天,或室温密封避光干燥处放置12个月后,分别还能检测出4种阳性质控品,分别含有103TCID50/mL的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)和呼吸道合胞病毒(RSV);且其与104TCID50/mL的人副流感病毒、腺病毒、人偏肺病毒、肺炎衣原体和肺炎支原体均无交叉反应。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,实施方式的举例,其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:包括检测卡,检测卡包括上盖(1)、下盖(2)和两个检测试纸条(3),两个检测试纸条(3)分别位于下盖(2)的两端且平行设置,两个检测试纸条(3)结构相同,两个检测试纸条(3)均包括样品垫(4)、胶体金垫(5)、硝酸纤维素膜(6)、吸水垫(7)和PVC板(8),胶体金垫(5)的制备方法,包括如下步骤:
1)、胶体金溶液制备:将5%~20%V/V的柠檬酸钠与HAuCl4加热到130℃,并维持5~25分钟,直至溶液颜色变为完全透明的紫红色后,维持沸腾15分钟,后冷却到室温,此时胶体金溶液呈现为紫红色;
2)、纳米花胶体金制备:使用纯化水将步骤1的胶体金溶液稀释50~120倍后,加入13~44%V/V的氢醌溶液,在55℃~85℃条件下加热13~19分钟,静置30分钟后吸取沉淀物,得到纳米花胶体金溶液;
3)、链霉亲和素标记:在浓度为0.05~0.1wt%pH值8.2~11.5的步骤2的胶体金纳米花溶液中加入链霉亲和素和BSA,涡旋混匀后在6000rpm离心5分钟,吸取底部沉淀物得到链霉亲和素标记后的胶体金。
2.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:其中一个检测试纸条的胶体金垫(5)的制备方法,还包括如下步骤:
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体稀释至0.5~2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15~25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液。
3.根据权利要求2所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:其中一个检测试纸条的胶体金垫(5)的制备方法,还包括如下步骤:
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和呼吸道合胞病毒(RSV)抗原标记的抗体溶液浓度调整到10~20%,采用喷金仪均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫(5)。
4.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:另一个检测试纸条的胶体金垫(5)的制备方法,还包括如下步骤:
4)、抗原标记抗体:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)稀释至0.5~2mg/mL,加入到8mL步骤3的链霉亲和素标记的胶体金溶液中,再加入碳酸氢钾溶液0.2mol/L,搅拌15~25min,6000rpm离心10分钟,吸取沉淀物为甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原标记的抗体溶液。
5.根据权利要求4所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:另一个检测试纸条的胶体金垫(5)的制备方法,还包括如下步骤:
5)、胶体金垫的制备:使用磷酸盐缓冲液将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(FluB)浓度调整到10~20%,采用喷金仪将工作液均匀喷至玻璃纤维膜,在烘箱内干燥1小时,得到胶体金垫(5)。
6.根据权利要求3所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:其中一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、呼吸道合胞病毒(RSV)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1~3mg/mL、0.1~2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线(11)、检测T2线(12)和质控C线(13)处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜(6)。
7.根据权利要求5所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:另一个检测试纸条的硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
将甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液稀释到1~3mg/mL、0.1~2mg/mL后依次划线于硝酸纤维素膜的检测T1线(11)、检测T2线(12)和质控C线(13)处,将划好线的硝酸纤维素膜放入恒温箱干燥,干燥温度37℃,干燥时长60min,得处理好的硝酸纤维素膜(6)。
8.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:所述硝酸纤维素膜(6)粘贴在PVC板(8)上,硝酸纤维素膜(6)的两端分别搭接胶体金垫(5)和吸水纸,胶体金垫(5)远离硝酸纤维素膜(6)的一端搭接样品垫(4)。
9.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:所述上盖(1)和下盖(2)相互卡扣连接,上盖(1)上设有一个加样孔(9)和两个观察窗(10),加样孔(9)设置在上盖(1)的中心位置,两个检测试纸条(3)的样品垫(4)设置在加样孔(9)的下方。
10.根据权利要求1所述的呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒,其特征在于:还包括样本裂解液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310961002.6A CN116819081A (zh) | 2023-08-02 | 2023-08-02 | 一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310961002.6A CN116819081A (zh) | 2023-08-02 | 2023-08-02 | 一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116819081A true CN116819081A (zh) | 2023-09-29 |
Family
ID=88127643
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310961002.6A Pending CN116819081A (zh) | 2023-08-02 | 2023-08-02 | 一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116819081A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117571988A (zh) * | 2024-01-09 | 2024-02-20 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种血筛多线试纸条、试剂盒及其制备方法和应用 |
-
2023
- 2023-08-02 CN CN202310961002.6A patent/CN116819081A/zh active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117571988A (zh) * | 2024-01-09 | 2024-02-20 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种血筛多线试纸条、试剂盒及其制备方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104251908B (zh) | 样品垫处理液、h7亚型禽流感病毒胶体金试纸条及其制备方法 | |
CN112362869B (zh) | 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒 | |
WO2022037010A1 (zh) | 一种新型冠状病毒s蛋白和n蛋白联合检测胶体金试纸条及其制备方法和用途 | |
Ward et al. | Minimum infective dose of animal viruses | |
US5252458A (en) | Method for visually detecting the presence of a virus in a clinical specimen | |
CN116819081A (zh) | 一种呼吸道病毒抗原四联检快速检测试剂盒 | |
CN113533721B (zh) | 甲型/乙型流感病毒抗原胶体金法检测试纸条及其制备方法 | |
Bell et al. | Rapid detection of respiratory syncytial virus with a monoclonal antibody | |
CN107942061A (zh) | 一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法 | |
CN106841604A (zh) | 一种呼吸道病毒快速检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102928589A (zh) | 呼吸道疾病IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
CN110456038A (zh) | 一种非洲猪瘟病毒抗原双联检测试剂及其制备方法 | |
WO2023202271A1 (zh) | 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法 | |
CN108845128A (zh) | 用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法 | |
CN112557655A (zh) | 新型冠状病毒和甲型、乙型流感病毒抗原三合一检测试剂盒及其制备和使用方法 | |
CN208672650U (zh) | 用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡 | |
CN112904001B (zh) | 新冠及甲乙型流感病毒抗原联检试剂盒及其制备方法与应用 | |
CN111562367A (zh) | 尿液新型冠状病毒快速检测试剂盒、制备方法及使用方法 | |
CN108226492A (zh) | A群猪轮状病毒快速elisa检测试剂盒 | |
CN115453116A (zh) | 一种同时检测六项呼吸道病原体的免疫层析联检试剂盒及制备方法 | |
CN106290863A (zh) | 一种人类丙肝病毒(hcv)唾液/尿液抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法 | |
CN115078737B (zh) | 一种检测狂犬免疫血浆效价的试剂盒及其制备方法、应用 | |
CN115754277A (zh) | 一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及制备方法 | |
CN106932592A (zh) | 检测人表面活性蛋白a的胶体金试纸条及其制备方法和应用 | |
CN204731247U (zh) | H7亚型禽流感病毒胶体金试纸条 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |