CN116814435A - 一种嗜盐菌菌种冻干保护剂及保藏方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物工程技术领域，具体公开了一种嗜盐菌菌种冻干保护剂及保藏方法。本发明的嗜盐菌菌种冻干保护剂，其由脱脂奶粉、海藻糖、盐、L‑天冬氨酸或赖氨酸、缓冲组分和水组成，所述盐为氯化钠或氯化钠和氯化钾的组合，所述盐在嗜盐菌菌种冻干保护剂中的浓度为0.88％‑0.98％。本发明的冻干保护剂可使得真空冷冻干燥法应用于嗜盐菌时可以保证有更高的存活率，以达到更好的保藏效果。
Description
技术领域
本发明涉及微生物工程技术领域，具体地说，涉及一种嗜盐菌菌种冻干保护剂及保藏方法。
背景技术
在目前生产、科研日常使用中，针对需氧细菌菌种保藏方法主要有斜面/平板固体保藏、甘油管保藏、真空冷冻干燥法保藏、液氮超低温保藏等。
斜面/平板固体传代保藏：将菌种接种至斜面/平板固体培养基，培养完成后封口置于4℃冰箱中或室温下存放，定期进行传代培养，一般情况细菌在2-4周必须传代一次。此法优点是操作简单、使用方便，无需特殊设备，缺点是保藏时间短、易被污染及易发生变异。
甘油管保藏：将培养好的斜面菌种用一定浓度的甘油制成高浓度的菌悬液，甘油浓度约为10％-30％，于-80℃下冻存。特点是操作简单、使用方便，有效保藏时间在半年至数年。
真空冷冻干燥法：先使微生物在极低温度(-80℃左右)下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)，其中真空冷冻干燥法最常见。样品中的水分在冰冻状态下，抽真空减压，使冻结的冰直接升华为水蒸气，使样品达到干燥。干燥后的微生物在真空下封装，与空气隔绝，达到长期保藏的目的。其有效保藏期限可达5-10年，经冻干后存储条件较宽松，4℃即可。但制备过程较为复杂，对设备也有一定需求。
液氮超低温保藏：将经真空冷冻干燥法处理的安瓿管置于液氮中保藏，是目前效果最好的菌种保藏方法，但其操作门槛高，对设备要求极高，后续维护成本极高。
综合而言，真空冷冻干燥法保藏既可以做长时间保藏，又可以将保藏成本控制到较低水平。菌种经真空冷冻干燥法保藏后，有效使用期限可达5-10年，甚至更久，其所需设备仅有真空泵、火焰喷枪、电火花真空检测器等。故真空冷冻干燥法保藏是比较适合生产企业及科研机构使用的一种长期菌种保存方式。
保护剂是真空冷冻干燥法保藏中对保藏效果有决定性影响的因素之一。目前市面上细菌保藏应用的保护剂主要为脱脂牛奶及复合保护剂。脱脂牛奶一般选用10～20％脱脂奶粉加水配制而成，亦或是直接采用液体脱脂牛奶灭菌后使用，需要注意的是脱脂牛奶的灭菌温度为115℃。以纯脱脂牛奶作为保护剂已经可以满足超过8成细菌的菌种保藏需求。
复合保护剂作为纯脱脂牛奶的补充。部分细菌由于自身的细胞结构等与其他细菌存在较大差异，单纯的脱脂牛奶不能对其有较好的保藏效果，便需要复配其他配方以获得更好的保藏效果，如复合保护剂一：明胶：0.01％～1％或脱脂牛奶：10％～20％，右旋糖苷：3％～10％，海藻糖或蔗糖：3％～8％，山梨醇或甘露醇：3％～8％，其余为水。复合保护剂二：1.磷酸二氢钾0.1mol/L，2.葡萄糖5％(w/v)，3.甘油10％(v/v)，4.酪蛋白酸钠0.5％(w/v)，5.硫酸镁0.01mol/L，6.氯化钠0.9％(w/v)。
经验证，真空冷冻干燥法搭配传统脱脂牛奶保护剂用于保藏部分嗜盐菌，保藏一年后相比冻干后存活率仅不足25％，无法满足嗜盐菌保藏需要。故急需一种新型冻干保护剂，搭配真空冷冻干燥法，形成一种新的、针对嗜盐菌的菌种冻干保藏方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种针对嗜盐菌的、高存活率的菌种冻干保护剂及保藏方法。
为了实现该目的，本发明的技术方案如下：
一种嗜盐菌菌种冻干保护剂，其由脱脂奶粉、海藻糖、盐、氨基酸、缓冲组分和水组成，所述氨基酸为L-天冬氨酸或赖氨酸，所述盐为氯化钠或氯化钠和氯化钾的组合，所述盐在嗜盐菌菌种冻干保护剂中的浓度为0.88％-0.98％。
本发明中所指嗜盐菌为对生长环境盐浓度有要求的菌种,包括野生菌和重组菌。
由渗透势原理可知，高盐溶液中的细胞将失去更多的水分，成为脱水细胞，影响生理活性。而嗜盐菌可产生大量的内溶质或通过保留从外部取得溶质的方式来维持自身的生存，能在极端的盐环境下生长和繁殖，有着与多数细菌不同的生理特性。
本发明在研究时发现，常规的冻干保护剂，即便是含有一定浓度盐分的冻干保护剂，仍不能满足嗜盐菌长期存活率保留的需求，为此，发明人进行了大量实验摸索发现，当进行嗜盐菌的冻干保护时，在冻干保护剂中，既保证适宜盐浓度，实现盐度和析出的平衡，又以天冬氨酸或赖氨酸配合其他组分，可获得理想的保藏效果。冻干后的活菌数量与长期保藏后的活菌数量相差较小，说明在冻干保藏期内，嗜盐菌的存活率佳。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保护剂中，当所述盐为氯化钠和氯化钾的组合时，氯化钠和氯化钾的质量比为(7.5-8.5)：1。
添加氯化钾可更好地平衡冻干环境中的钾离子浓度，其与钠离子配合，可提供更好的电解质环境，有利于嗜盐菌的存活。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保护剂中，所述缓冲组分为柠檬酸钠和谷氨酸钠；盐、谷氨酸钠和氨基酸的质量比为(8-10)：(1.5-3)：(1.5-3)，所述氨基酸优选为L-天冬氨酸。
本发明中氯化钠、谷氨酸钠和氨基酸的相应配合，可利于嗜盐菌的保藏。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保护剂由如下重量份的组分组成：脱脂奶粉195-205份、盐8-10份、氨基酸1.5-3份、海藻糖4.8-5.2份、柠檬酸钠3-5份、谷氨酸钠1.5-3份、去离子水790-810份；pH值8.0-8.5；
优选，由如下重量份的组分组成：脱脂奶粉200份、氯化钠10份、氨基酸3份、海藻糖5份、柠檬酸钠5份、谷氨酸钠3份、去离子水800份；pH值8.0。
本发明冻干保护剂组分，各成分配合合理，兼顾了成本和效果。
本发明还提供一种嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其包括将上述嗜盐菌菌种冻干保护剂与嗜盐菌混合制为菌悬液后，进行预冻、真空冷冻干燥的步骤。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保藏方法中，所述嗜盐菌在所述菌悬液中的浓度为5×108～1×1010CFU/mL。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保藏方法中，在制备所述菌悬液前还包括嗜盐菌菌体培养的步骤；用于所述嗜盐菌菌体培养的培养基包括：胰蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖、盐、柠檬酸钠和水，所述盐为氯化钠或氯化钠和氯化钾的组合；当所述盐为氯化钠和氯化钾的组合时，氯化钠和氯化钾的质量比为(5.5-6.5)：1。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保藏方法中，用于所述嗜盐菌菌体培养的培养基，由如下重量份的组分组成：盐30-60份、胰蛋白胨4-6份、酵母浸粉4.5-5.5份、葡萄糖2.5-4份、柠檬酸钠0.18-0.22份和水990-1010份，pH值8.0-8.5；
优选，由如下重量份的组分组成：氯化钠60份、胰蛋白胨4份、酵母浸粉5份、葡萄糖2.5份、柠檬酸钠0.2份和水1000份，pH值8.0。
通过本发明的种子培养基进行嗜盐菌菌体培养，利于嗜盐菌的活化和扩繁。
具体培养时，先在平面固体培养基中进行传代培养，培养温度35-37℃，培养时间24-30h，之后再进行斜面培养基培养，培养温度35-37℃，培养时间32-40h。相比平面培养阶段，适当延长斜面培养阶段的时间，有利于保证菌种活性以及活菌数量。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保藏方法中，所述真空冷冻干燥的条件为：-60℃～-80℃，27pa以下，处理20～24h。
本发明的嗜盐菌菌种冻干保藏方法中，所述嗜盐菌为盐单胞菌(Halomonas)属微生物。
本发明的有益效果至少在于：
现有冻干保护剂无法满足嗜盐菌保藏需求，根本原因在于嗜盐菌的细胞结构与营养需求与其他细菌存在一定差异，导致嗜盐菌在冻干时细胞受损更严重，存活率更低。本发明针对嗜盐菌的特性，对其冻干保护剂进行了研究，以各组分进行特定相互配合，使得真空冷冻干燥法应用于嗜盐菌时可以保证有更高的存活率，以达到更好的保藏效果。具体地，本发明：
A)提高了多种嗜盐菌的长期保藏效果；
B)优化了多种嗜盐菌的长期保藏流程，节约了保藏流程需要的时间、人力物力；
C)维护了多种含嗜盐菌产品生产的稳定性。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到或按本领域常规方法制备。
实施例1
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体如下：
冻干用容器：安瓿管准备，安瓿管材质以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2％盐酸浸泡过夜，冲洗干净后，用去离子水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
配制盐单胞菌固体保藏培养基1，盐单胞菌固体保藏培养基1组成和重量配比为：氯化钠60g、胰蛋白胨4g、酵母浸粉5g、葡萄糖2.5g、柠檬酸钠0.2g和水1000g，pH值8.0,121℃高温高压蒸汽灭菌20分钟，备用。
配制盐单胞菌冻干保护剂1，盐单胞菌冻干保护剂1的组成和重量配比为：脱脂奶粉200g、氯化钠10g、L-天冬氨酸3g、海藻糖5g、柠檬酸钠5g、谷氨酸钠3g、去离子水800mL，pH值8.0，115℃高温高压蒸汽灭菌20分钟。
盐单胞菌1培养物的制备，将盐单胞菌1(盐单胞菌(Halomonassp.)TD01，公开于中国专利CN102120973A中)划线于盐单胞菌固体保藏培养基1进行传代培养，在37℃培养24H后，取单菌落均匀涂布至盐单胞菌固体保藏斜面培养基1(与固体保藏培养基1组分相同)，37℃培养32H后取出。
盐单胞菌菌体收集及混悬，将制备好的培养物从盐单胞菌固体斜面培养基1洗脱至盐单胞菌冻干保护剂1中，充分混匀。经菌落计数，冻干前菌悬液中活菌数量为4.0×109CFU/mL。
菌悬液分装、预冻、冷冻干燥、真空封口及长期保存，使用1mL大肚移液管，直接滴入球形安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.2毫升；分装安瓿管时间要短，在1小时内分装完毕并开始预冻。以上培养及分装操作均需严格无菌操作。
预冻时，将分装好的样品置于-80℃超低温冰箱，预冻2小时后快速取出并置于冻干机内开始真空冷冻干燥流程，真空冷冻干燥的条件为：-70℃，26.7pa，冻干流程总共20小时。将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管采用高频电火花真空测定仪测定真空度。经真空度检查合格的安瓿管置于4℃低温冰箱中避光保藏。
安瓿管菌种质量检查，定期(冻干前、冻干后，1周，1月，3月，6月，1年，之后每年一次直至安瓿管用完)对安瓿管菌种进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。经检查，冻干后菌悬液中活菌数量为3.1×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为2.7×109CFU/mL，生理生化试验及菌落形态无明显变化，生产能力良好无下降。
实施例2
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体如下：
冻干用容器：安瓿管准备，安瓿管材质以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2％盐酸浸泡过夜，冲洗干净后，用去离子水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
配制盐单胞菌固体保藏培养基2，盐单胞菌固体保藏培养基2组成和重量配比为：氯化钠30g、胰蛋白胨6g、酵母浸粉5g、葡萄糖4g、柠檬酸钠0.2g、氯化钾5g和水1000g，pH值8.5,121℃高温高压蒸汽灭菌20分钟，备用。
配制盐单胞菌冻干保护剂2，盐单胞菌冻干保护剂2的组成和重量配比为：脱脂奶粉200g、氯化钠8g、L-天冬氨酸1.5g、海藻糖5g、柠檬酸钠3g、谷氨酸钠1.5g、氯化钾1g、去离子水800mL，pH值8.5，115℃高温高压蒸汽灭菌20分钟。
盐单胞菌2培养物的制备，将盐单胞菌2(Halomonas bluephagenesis TD01，公开于中国专利CN115960800A中)划线于盐单胞菌固体保藏培养基2进行传代培养，在37℃培养30H后，取单菌落均匀涂布至盐单胞菌固体保藏斜面培养基2(与固体保藏培养基2组分相同)，37℃培养40H后取出。
盐单胞菌菌体收集及混悬，将制备好的培养物从盐单胞菌固体斜面培养基2洗脱至盐单胞菌冻干保护剂2中，充分混匀。经菌落计数，冻干前菌悬液中活菌数量为在2.4×109CFU/mL。
菌悬液分装、预冻、冷冻干燥、真空封口及长期保存，使用1mL大肚移液管，直接滴入球形安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.2毫升；分装安瓿管时间要短，在1小时内分装完毕并开始预冻。以上培养及分装操作均需严格无菌操作。
预冻时，将分装好的样品置于-80℃超低温冰箱，预冻2小时后快速取出并置于冻干机内开始真空冷冻干燥流程，真空冷冻干燥的条件为：-70℃，26.7pa，冻干流程总共20小时。将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管采用高频电火花真空测定仪测定真空度。经真空度检查合格的安瓿管置于4℃低温冰箱中避光保藏。
安瓿管菌种质量检查，定期(冻干前、冻干后，1周，1月，3月，6月，1年，之后每年一次直至安瓿管用完)对安瓿管菌种进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。经检查，冻干后菌悬液中活菌数量为1.8×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为1.3×109CFU/mL，生理生化试验及菌落形态无明显变化，生产能力良好无下降。
实施例3
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体如下：
冻干用容器：安瓿管准备，安瓿管材质以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2％盐酸浸泡过夜，冲洗干净后，用去离子水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌20分钟，备用。
配制盐单胞菌固体保藏培养基3，盐单胞菌固体保藏培养基3组成和重量配比为：氯化钠50g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉5g、葡萄糖3g、柠檬酸钠0.2g和去离子水1000mL，pH值8.5,121℃高温高压蒸汽灭菌20分钟，制平板时加入100mg壮观霉素，备用。
配制盐单胞菌冻干保护剂3，盐单胞菌冻干保护剂3的组成和重量配比为：脱脂奶粉200g、氯化钠10g、L-天冬氨酸3g、海藻糖5g、柠檬酸钠5g、谷氨酸钠3g、去离子水800mL，pH值8.5，115℃高温高压蒸汽灭菌20分钟。
盐单胞菌3培养物的制备，将盐单胞菌3(Halomonas campaniensis LS21，公开于中国专利CN115927137A中)划线于盐单胞菌固体保藏培养基3进行传代培养，在37℃培养28H后，取单菌落均匀涂布至盐单胞菌固体保藏斜面培养基3(与固体保藏培养基3组分相同)，37℃培养36H后取出。
盐单胞菌菌体收集及混悬，将制备好的培养物从盐单胞菌固体斜面培养基3洗脱至盐单胞菌冻干保护剂3中，充分混匀。经菌落计数，冻干前菌悬液中活菌数量为8.5×108CFU/mL。
菌悬液分装、预冻、冷冻干燥、真空封口及长期保存，使用1mL大肚移液管，直接滴入球形安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.2毫升；分装安瓿管时间要短，在1小时内分装完毕并开始预冻。以上培养及分装操作均需严格无菌操作。
预冻时，将分装好的样品置于-80℃超低温冰箱，预冻2小时后快速取出并置于冻干机内开始真空冷冻干燥流程，真空冷冻干燥的条件为：-70℃，26.7pa，冻干流程总共20小时。将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管采用高频电火花真空测定仪测定真空度。经真空度检查合格的安瓿管置于4℃低温冰箱中避光保藏。
安瓿管菌种质量检查，定期(冻干前、冻干后，1周，1月，3月，6月，1年，之后每年一次直至安瓿管用完)对安瓿管菌种进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。经检查，冻干后菌悬液中活菌数量为5.7×108CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为4.8×108CFU/mL，生理生化试验及菌落形态无明显变化，生产能力良好无下降。
实施例4
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例2的方法大体相同，区别仅在于，冻干保护剂中，添加的氯化钠为7.8g、氯化钾为1.2g。其余方法步骤与实施例2相同，冻干后菌悬液中活菌数量为1.7×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为1.1×109CFU/mL。
实施例5
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例1的方法大体相同，区别仅在于，冻干保护剂中，添加的氯化钠为11g、谷氨酸钠为4g、L-天冬氨酸为1g。其余方法步骤与实施例1相同，冻干后菌悬液中活菌数量为3.0×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为2.2×109CFU/mL。
实施例6
本实施例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例3的方法大体相同，区别仅在于，以等量的赖氨酸替代冻干保护剂中的L-天冬氨酸。其余方法步骤与实施例3相同，冻干后菌悬液中活菌数量为5.2×108CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为3.3×108CFU/mL。
对比例1
本对比例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例1的方法大体相同，区别仅在于，以等量的精氨酸替代冻干保护剂中的L-天冬氨酸。其余方法步骤与实施例1相同，冻干后菌悬液中活菌数量为2.5×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为1.2×109CFU/mL。
对比例2
本对比例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例1的方法大体相同，区别仅在于，提升盐单胞菌冻干保护剂中氯化钠的添加量为3％。其余方法步骤与实施例1相同，冻干后菌悬液中活菌数量为2.6×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为1.5×109CFU/mL。
对比例3
本对比例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例1的方法大体相同，区别仅在于，所用冻干保护剂改为使用含3％氯化钠的脱脂牛奶。其余方法步骤与实施例1相同，冻干后菌悬液中活菌数量为1.9×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为5.3×108CFU/mL。
对比例4
本对比例提供一种盐单胞菌保藏方法，具体与实施例2的方法大体相同，区别仅在于，以等量的丙氨酸替代冻干保护剂中的L-天冬氨酸。其余方法步骤与实施例2相同，冻干后菌悬液中活菌数量为1.6×109CFU/mL，保藏1年后菌悬液中活菌数量为9.0×108CFU/mL。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种嗜盐菌菌种冻干保护剂，其特征在于，由脱脂奶粉、海藻糖、盐、氨基酸、缓冲组分和水组成，所述氨基酸为L-天冬氨酸或赖氨酸，所述盐为氯化钠或氯化钠和氯化钾的组合，所述盐在嗜盐菌菌种冻干保护剂中的浓度为0.88％-0.98％。
2.根据权利要求1所述的嗜盐菌菌种冻干保护剂，其特征在于，当所述盐为氯化钠和氯化钾的组合时，氯化钠和氯化钾的质量比为(7.5-8.5)：1。
3.根据权利要求1或2所述的嗜盐菌菌种冻干保护剂，其特征在于，所述缓冲组分为柠檬酸钠和谷氨酸钠；盐、谷氨酸钠和氨基酸的质量比为(8-10)：(1.5-3)：(1.5-3)，所述氨基酸优选为L-天冬氨酸。
4.根据权利要求3所述的嗜盐菌菌种冻干保护剂，其特征在于，由如下重量份的组分组成：脱脂奶粉195-205份、盐8-10份、氨基酸1.5-3份、海藻糖4.8-5.2份、柠檬酸钠3-5份、谷氨酸钠1.5-3份、去离子水790-810份；pH值8.0-8.5；
优选，由如下重量份的组分组成：脱脂奶粉200份、氯化钠10份、氨基酸3份、海藻糖5份、柠檬酸钠5份、谷氨酸钠3份、去离子水800份；pH值8.0。
5.一种嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，包括将权利要求1-4任一项所述的嗜盐菌菌种冻干保护剂与嗜盐菌混合制为菌悬液后，进行预冻、真空冷冻干燥的步骤。
6.根据权利要求5所述的嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，所述嗜盐菌在所述菌悬液中的浓度为5×108～1×1010CFU/mL。
7.根据权利要求5或6所述的嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，在制备所述菌悬液前还包括嗜盐菌菌体培养的步骤；用于所述嗜盐菌菌体培养的培养基包括：胰蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖、盐、柠檬酸钠和水，所述盐为氯化钠或氯化钠和氯化钾的组合；当所述盐为氯化钠和氯化钾的组合时，氯化钠和氯化钾的质量比为(5.5-6.5)：1。
8.根据权利要求7所述的嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，用于所述嗜盐菌菌体培养的培养基，由如下重量份的组分组成：盐30-60份、胰蛋白胨4-6份、酵母浸粉4.5-5.5份、葡萄糖2.5-4份、柠檬酸钠0.18-0.22份和水990-1010份，pH值8.0-8.5；
优选，由如下重量份的组分组成：氯化钠60份、胰蛋白胨4份、酵母浸粉5份、葡萄糖2.5份、柠檬酸钠0.2份和水1000份，pH值8.0。
9.根据权利要求5-8任一项所述的嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的条件为：-60℃～-80℃，27pa以下，处理20～24h。
10.根据权利要求5-9任一项所述的嗜盐菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，所述嗜盐菌为盐单胞菌(Halomonas)属微生物。
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