CN116808112A

CN116808112A - 一种复方二硫卡钠药物组合物

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Publication number: CN116808112A
Application number: CN202310707680.XA
Authority: CN
Inventors: 张骏铭; 王世文; 姚圣康; 岳文瑞; 刘勤; 姚辉; 罗仉孙; 魏宝宏; 吴刚; 李嵊杰; 徐青儿
Original assignee: Shanghai Chuangbufan Industrial Co ltd; Liang Aixi Shanghai Medical Research Center LP
Current assignee: Shanghai Chuangbufan Industrial Co ltd; Liang Aixi Shanghai Medical Research Center LP
Priority date: 2023-06-15
Filing date: 2023-06-15
Publication date: 2023-09-29

Abstract

本发明提供了一种复方二硫卡钠药物组合物，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠50～59份，猴菇萃取物100～118份，枸杞萃取物50～60份。本发明提供的复方二硫卡钠药物组合物是在中西医理论基础上结合大量具体医学临床试验科学得到的，所用原料安全可靠，各组分间协同作用，促进药效的发挥，不仅可以减轻二硫卡钠对胃粘膜的刺激，明显降低二硫卡钠的副反应，而且能够加强对免疫系统的刺激作用，促进造血和吞噬细胞的吞噬功能，促进CD₄/CD₈比值增加，有助于身体免疫力的快速增强，可作为针对新冠病毒、艾滋病、流感、瘟病以及恶性肿瘤等病症表现的免疫低下治疗药物广泛应用。

Description

一种复方二硫卡钠药物组合物

技术领域

本发明涉及复方药物技术领域，特别涉及一种复方二硫卡钠药物组合物。

背景技术

近年来，各类冠状病毒，如艾滋病毒HIV、流感病毒、新冠病毒COVID-19等在全球广泛流行，严重威协着人类的健康。大量病患者因得不到有效的治疗，最终导致死亡，尤其是新冠COVID-19的爆发，造成了全球范围内的重大公共卫生事件，目前还在继续散发传播，存在各种不确定因素，而艾滋病的扩散也未得到有效控制，患艾滋病的人数仍在继续增加，目前针对多类型冠状病毒的治疗和预防并无共性的特效药物，但此类病症的发展有个共同点就是受体免疫功能持续低下或者功能缺陷，因此寻找一种具有较为理想的免疫增强类型的药物显得极为重要。

二硫卡钠简称DTC，化学名“二乙基二硫代氨基甲酸钠”，英文名“DitiocarbSodium”，分子式(C₂H₅)₂NCS₂Na·3H₂0)，为国际上广泛应用的免疫增强药剂，最早是法国研制的适用于免疫缺陷病人免疫功能修复，临床主要用于感染抗艾滋HIV等各类冠状病毒时造成免疫功能低下、肿瘤手术后免疫调节等。能够有效改善化疗或放疗引起的免疫抑制状况，还可用于某些慢性感染和自身免疫性疾病。通常使用二硫卡钠会出现上腹不适，寒战、血糖降低等不良反应。由于DTC是一种药理活性较强的化合物，它对胃粘膜的溃疡可产生一定的损伤作用，现有技术大多通过缓释包裹的方式来减轻这种不良反应，但是缓释的过程中药物浓度水平较低，会造成疗效减弱。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种能够减轻二硫卡钠副作用，同时与单独使用二硫卡钠相比，能快速增强免疫力的药物的复方二硫卡钠药物组合物。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种复方二硫卡钠药物组合物，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠50～59份，猴菇萃取物100～118份，枸杞萃取物50～60份；

所述猴菇萃取物或枸杞萃取物制备方法包括以下步骤：

将中药原材料猴头菇或枸杞依次进行低温真空干燥和研磨，得到中药粉末；

将所述中药粉末与夹带剂混合后进行二氧化碳超临界萃取，得到猴菇萃取物或枸杞萃取物；

当中药原材料为猴头菇时，所述二氧化碳超临界萃取的温度为40～60℃，压力为10～30MPa；所述中药萃取物为猴菇萃取物，

当中药原材料为枸杞时，所述所述二氧化碳超临界萃取的温度为50～70℃，压力为20～35MPa，所述中药萃取物为枸杞萃取物。

优选地，所述低温真空干燥的温度为-60℃～-40℃，真空度为1.3～13.3Pa。

优选地，所述夹带剂为乙醇，所述夹带剂的用量为中药粉末质量的5％～10％。

优选地，所述复方二硫卡钠药物组合物包括以下质量份数的原料：二硫卡钠52～57份，猴菇萃取物110～115份，枸杞萃取物52～57份。

优选地，所述二硫卡钠与猴菇萃取物的质量比为1：2。

优选地，所述二硫卡钠、猴菇萃取物和枸杞萃取物的质量比为1：2：1。

优选地，所述原料还包括辅料8～14份。

本发明还提供了所述药物组合物制备得到的药剂，所述药剂为胶囊剂、片剂、栓剂、冲剂、丸剂或糖浆剂。

本发明还提供了所述药物组合物或所述药剂在增强免疫力的药物中的应用。

优选地，所述增强免疫力的药物包括广谱抗病毒药物、治疗新冠的药物、治疗艾滋病的药物、治疗流感的药物、治疗瘟病的药物或治疗恶性肿瘤的药物。

有益技术效果：本发明提供了一种复方二硫卡钠药物组合物，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠50～59份，猴菇萃取物100～118份，枸杞萃取物50～60份。本发明提供的复方二硫卡钠药物组合物是在中西医理论基础上结合大量具体医学临床试验科学得到的，所用原料安全可靠，各组分间协同作用，促进药效的发挥，不仅可以减轻二硫卡钠对胃粘膜的刺激，明显降低二硫卡钠的副反应，而且能够加强对免疫系统的刺激作用，促进造血和吞噬细胞的吞噬功能，促进CD₄/CD₈比值增加，有助于身体免疫力的快速增强，可作为针对新冠病毒、艾滋病、流感、瘟病以及恶性肿瘤等病症表现的免疫低下治疗药物广泛应用。

具体实施方式

本发明提供了一种复方二硫卡钠药物组合物，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠50～59份，猴菇萃取物100～118份，枸杞萃取物50～60份。

在本发明中所述猴菇萃取物或枸杞萃取物制备方法包括以下步骤：

将所述中药粉末与夹带剂混合后进行二氧化碳超临界萃取，得到猴菇萃取物或枸杞萃取物。

在本发明中，当中药原材料为猴头菇时，所述低温真空干燥的温度优选为-60℃～-40℃，更优选为-55℃～-50℃，真空度优选为1.3～13.3Pa，更优选为3～5Pa；所述夹带剂优选为乙醇，所述夹带剂的用量优选为中药粉末质量的5～10％；所述二氧化碳超临界萃取的温度优选为40～60℃，更优选为45～55℃；所述二氧化碳超临界萃取的压力优选为10～30MPa，更优选为15～20MPa。

在本发明中，当中药原材料为枸杞时，所述低温真空干燥的温度优选为-60℃～-40℃，更优选为-55℃～-50℃，真空度优选为1.3～13.3Pa，更优选为3～5Pa；所述夹带剂优选为乙醇，所述夹带剂的用量优选为中药粉末质量的5～10％；所述所述二氧化碳超临界萃取的温度优选为50～70℃，更优选为55～60℃；所述二氧化碳超临界萃取的压力优选为20～35MPa，更优选为25～30MPa。

在本发明中，所述二硫卡钠药物组合物优选包括以下质量份数的原料：二硫卡钠52～57份，猴菇萃取物110～115份，枸杞萃取物52～57份，更优选为二硫卡钠与猴菇萃取物的质量比为1：2，最优选为二硫卡钠、猴菇萃取物和枸杞萃取物的质量比为1：2：1。

本发明所述二硫卡钠属于免疫增强剂，在体内诱导前T细胞成熟激素，使T细胞增殖，也能明显增加IgM及IsG产生，具有靶向治疗、双向调节、抑制炎性细胞因子等特征。对巨噬细胞功能无直接影响。能够改善化疗或放疗引起的免疫抑制状况，还可用于免疫功能低下及慢性感染伴有免疫功能低下者。目前在法国、美国、中国等国家治疗应用，主要涉及抗艾滋、流感等冠状病毒、癌症、羰化镍中毒等免疫功能低下症治疗领域。本药物组合物配方为自备技术或者可直接采用法国Institut Mericux公司或者美国igma公司开发的二硫卡钠药物原料。

本发明所述猴菇萃取物味甘、性平，入脾、胃、肾三经。利五脏，助消化，补益脾胃，补肾填髓。主治消化不良，神经衰弱、身体虚弱。本药物组合物配方原材料按照以下“实施例”采用自备方法制取。

本发明所述枸杞萃取物味甘、性平，入肝、肾经、滋补肝肾，益精明目。用于虚劳精亏，腰膝酸痛，眩晕耳鸣，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。本药物组合物配方原材料按照以下“实施例”采用自备方法制取。

本发明提供的复将猴菇萃取物与二硫卡钠混合后，能明显减轻二硫卡钠对胃粘膜的刺激作用，当猴菇萃取物用量增加，保护效果增强，但是相应成本也增加，综合考虑，优选二硫卡钠与猴菇萃取物重量份数比为1:2，猴菇除有增进食欲，增强胃粘膜屏障机能的功效外，还具有提高淋巴细胞转化率，提升白细胞等作用，可以使人体提高对疾病的免疫能力。而枸杞萃取物除有刺激免疫作用外，还能促进造血和吞噬细胞的吞噬功能，能够弥补二硫卡钠对巨噬细胞功能无直接影响的短板，其与猴菇配伍后，能够明显提升二硫卡钠的药效，大幅度减轻不良反应。

在本发明中，所述复方二硫卡钠药物组合物的原料还包括辅料8～14份，更优选为10～12份，最优选为11份。

在本发明中，所述增强免疫力的药物优选包括广谱抗病毒药物、治疗新冠的药物、治疗艾滋病的药物、治疗流感的药物、治疗瘟病的药物或治疗恶性肿瘤的药物。

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

原料1：二硫卡钠的制备

中文名：二硫卡钠

英文名：Ditiocarb Sodium

化学名：二乙基二硫代氨基甲酸钠

分子式：(C₂H₅)₂NCS₂Na·3H₂O

分子量：225.30

性状：白色结晶性粉末

熔点：94-96℃

1、化学原料的规格、标准

2、二硫卡钠合成操作步骤

(1)合成：称取NaOH240g，溶于1050mL去离子水中，加入438g二乙胺，把混合溶液转入3L三口烧瓶中，于冰盐水中冷却至4℃，慢慢滴加456g二硫化碳，搅拌，滴加过程约4h，反应完毕后，过滤，得粗产品。

(2)精制及收得率：①精制方法：将以上所得粗产品加250mL水加热溶解，冷却，过滤，滤物用125mL甲醇溶解，冷却，得结晶二乙基二硫代氨基甲酸钠，过滤，将结晶体置于真空干燥箱中，使箱中余压不大于0.01MPa，温度不超过50℃，烘干4h，粉碎装于玻璃瓶中；②收得率：二硫卡钠合成的平均收率为78％。

3、纯度检测

(1)仪器与试剂

PE高效液相色谱仪410泵；235C二极管阵列检测器；1020数据工作站；Okidata 320打印机；

二硫卡钠(原江门市精细化工厂提供)；二硫卡钠对照品(Sigma公司标准品)。

(2)实验方法及条件

系统适用性试验：用十八烷基硅烷硅胶为填充剂，取400mL甲醇，加水100mL，混匀，为流动相，检测波长254nm，为确保定量结果的准确度和精密度，按照中国药典要求，理论塔板数按二硫卡钠计算不低于2000，拖尾因子应符合药典要求。

(3)校正因子的计算

精密称取对照品2mg，溶解于1mL无水乙醇中，加1mL碘甲烷，振摇混合，室温放置40min，减压蒸去溶剂，得黄色油状物。测定时用甲醇溶解，配成浓度为10μg/mL溶液，取10μL注入液相色谱仪，计算校正因子。

(4)供试品溶液的制备与测定

精密称取对照品2mg，溶解于1mL无水乙醇中，加1mL碘甲烷，振摇混合，室温放置40min，减压蒸去溶剂，得黄色油状物。测定时用甲醇溶解，配成浓度为10μg/mL溶液，取10μL注入液相色谱仪，外标法计算含量。

(5)鉴别

①取本品约5mg，加水20mL使溶解，加硫酸铜试液1滴，立即出现灰棕色沉淀；

②本品的红外光谱图与对照品的图谱一致。

(6)检查

碱度：取本品0.2g，加水20mL使溶解，立即依照中国药典碱度测定法测定pH值应为9.0～10.0。

溶液的澄清度与颜色：取本品0.5g，加水25mL使溶解，溶液应澄清无色。

水分：取本品适量，按照中国药典水分测定法测定，含水应为23.0～26.0％。

重金属：取本品1.0g，依中国药典重金属检测第二法检查，重金属含量不得超过百万分之二十。

二硫化碳：取本品5.0mg，加异戊醇制成每mL含二硫卡钠5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取二硫化碳适量，加异戊酮稀释成每mL含0.5μg的溶液，作为对照溶液；按照中国药典气相色谱法，分别吸取两种溶液各1μL，注入气相色谱系统，苯基-甲基聚硅氧烷涂壁的毛细管柱，柱温50℃，检测器温度230℃，供试品二硫化碳峰不得高于对照品峰。

含量测定：精密称取本品0.5g置锥形瓶中，加无水乙醇70mL使溶解，用碘液(0.1mol/L)迅速滴定至溶液显微黄色，并在30秒内不褪色。每1mL的碘液(0.1mol/L)相当于17.13mg的C₅H₁₀NNaS₂。

类别：免疫调节剂；

剂量：10mg/kg；

贮存：避光，密封，在阴凉、干燥处保存。

原料2：枸杞萃取物的制备

制法：选择原产地宁夏中宁的新鲜、无霉变的枸杞，去除杂质和泥沙，用清水洗净，将处理好的枸杞在温度为-60℃，真空度为1.3Pa的条件下进行低温真空脱水干燥，水分低于10％。将干燥后的枸杞放入研磨机中研磨成超细粉末，加入为细粉质量5％的夹带剂乙醇制成提取液溶剂，将提取液溶剂加入萃取釜密封，釜内在保持一定温度(50～55℃)和压力(20～25MPa)的条件下，将超临界二氧化碳流体注入其中；经过4的萃取，将含有枸杞提取物的二氧化碳流体导入分离釜中进行分离，得到超临界萃取物，将超临界萃取物依次进行提纯、结晶和干燥，得到枸杞萃取物。

鉴别：取本品0.1g，加热水5mL溶解，滤过，取滤液1mL，加5％α-萘酚乙醇溶液2-3滴，摇匀，沿管壁缓慢加入硫酸0.5mL，在二液交界处即形成紫红色环状。

检查：干燥失重：取本品在105℃干燥2小时，减失重量不得超过8.0％，按照中国药典附录干燥失重测定法。灼烧残渣：不得超过15.0％(中国药典附录灼烧残渣检查法)。

平均分子量测定：

(1)系统配备

OHPAKSB-802.5HQ 8.0X300 mm色谱柱和RI检测器，流动相为水，流量1.0mL/min，柱温40℃。

(2)标准溶液制备

称取分子量分别为20000，4000，600，62的PEG标准样品各0.1g于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

(3)供试品溶液的制备

取0.1g供试品于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，过滤，滤液备用。

(4)测定方法及结果

标准溶液各取10μL，分别注入高效液相色谱系统，由色谱工作站自动计算出平均分子量，应在5000～8000范围内。

含量测定：

试剂的制备：(1)DNS试剂：称6.3g DNS(3,5-二硝基水杨酸)和262mL2mol/L氢氧化钠加入500mL38.4％的酒石酸钾热溶液中，再加入5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌使溶解，冷却后加水定容至1000mL，贮于棕色瓶中；(2)500μg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖0.5g，加少量水溶解后再加8mL 12N浓盐酸，用蒸馏水定容至10000mL；

葡萄糖标准曲线的绘制：取6支试管，分别按下表1顺序和操作加入各种试剂。

表1测定葡萄糖标准曲线加入试剂的操作顺序

将表中各溶液在分光光度计540nm测定光密度，用试剂空白调零，以葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。

测定方法：准确称取0.5g样品于50mL容量瓶中，加10mL蒸馏水溶解后定容至50mL，吸取溶液10mL，加5mL 6mol/L盐酸后置水浴上加热水解30min，冷却后用6N NaOH调pH值呈中性，定容至50mL，为供试品溶液，吸取0.5mL供试品溶液，加入0.5mL DNS试剂后加热5min，冷却后加4mL蒸馏水混匀，以试剂空白调零，在540nm处测定光密度值，从标准曲线上查出含糖量。本品按干燥品计算，总糖含量不应少于35％。

原料3：猴菇萃取物的制备

制法：选择农业种植培育的猴头菇，去除杂质和泥沙，用清水洗净，将处理好的猴头菇在温度为-40℃，真空度为13.3Pa的条件下进行低温真空脱水干燥，水分低于10％。将干燥后的猴头菇放入研磨机中研磨成超细粉末，加入为细粉质量10％的夹带剂乙醇制成提取液溶剂，将提取液溶剂加入萃取釜密封，釜内在保持一定温度(40～45℃)和压力(10～15MPa)的条件下，将超临界二氧化碳流体注入其中；经过3.5的萃取，将含有猴菇提取物的二氧化碳流体导入分离釜中进行分离，得到超临界萃取物，将超临界萃取物依次进行提纯、结晶和干燥，得到枸杞萃取物。

鉴别：取本品0.1g，加热水5mL溶解，滤过，取滤液1mL，加5％α-萘酚乙醇溶液2～3滴，摇匀，沿管壁缓慢加入硫酸0.5mL，在二液交界处即形成紫红色环状。

检查：干燥失重：取本品在105℃干燥2小时，减失重量不得超过8.0％，按照中国药典附录干燥失重测定法。灼烧残渣：不得超过15.0％(《中华药典》附录灼烧残渣检查法)。

(1)系统配备

OHPAKSB-802.5HQ 8.0X300mm色谱柱和RI检测器，流动相为水，流量1.0mL/min，柱温40℃。

(2)标准溶液制备

称取分子量分别为20000,4000,600,62的PEG标准品各0.1g于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

(3)供试品溶液的制备

(4)测定方法及结果

标准溶液各取10μL，分别注入高效液相色谱系统，由色谱工作站自动计算出平均分子量，应在13000～16000范围内。

含量测定：

试剂的制备：(1)DNS试剂：称6.3gDNS(3,5-二硝基水杨酸)和262mL2mol/L氢氧化钠加入500mL38.4％的酒石酸钾热溶液中，再加入5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌使溶解，冷却后加水定容至1000mL，贮于棕色瓶中；(2)500μg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖0.5g，加少量水溶解后再加8mL12N浓盐酸，用蒸馏水定容至10000mL；

葡萄糖标准曲线的绘制：取6支试管，分别按下表2顺序和操作加入各种试剂。

表2测定葡萄糖标准曲线加入试剂的操作顺序

实施例1

取上述制备得到的二硫卡钠59份，猴菇萃取物118份，枸杞萃取物59份，加辅料淀粉14份，制成均匀的颗粒，充填于空胶囊中即得胶囊剂。

实施例2

取述制备得到的二硫卡钠50份，猴菇萃取物108份，枸杞萃取物50份，加甲基纤维素2份，混合均匀置于包衣机中，喷加0.1份水，制成湿颗粒，过筛，干燥，压片机压制成型即得片剂。

实施例3

取述制备得到的二硫卡钠55份，猴菇萃取物113份，枸杞萃取物57份，加辅料淀粉8份、乙醇0.5份、大豆油0.02份制软材，再将软材送入微丸剂制丸，挤压过筛，干燥成型，选丸即得微丸剂。

实施例1～实施例3制备得到的复方二硫卡钠简称AAC，以下试验中提到的AAC均为实施例1制备得到的复方二硫卡钠胶囊剂。

动物实验

1、猴菇萃取物对DTC损伤大鼠胃肠粘膜的保护作用

材料与方法

(1)动物：由原中国人民解放军军事医学科学院(委托试验)动物中心生产的Wister大鼠，雌雄各半，月龄2.5个月，饲以该中心生产的块料。

(2)药物：DTC由原江门市精细化工厂提供。猴菇萃取物由原中国人民解放军军事医学科学院(委托试验)放射医学研究所药物研究室提供。服用前用水稀释成所需浓度灌胃，给药容积为2.0mL/鼠，对照动物灌服相应容积蒸馏水。

(3)溃疡指数测定：大鼠灌服DTC后7小时，断头处死大鼠，剖腹、结扎喷门及幽门部，取出胃，注入1％福尔马林0.8mL，并置于福尔马林固定液中固定10min。沿固定后的胃大弯剪开，洗净胃内容物并展平。药物对胃有损伤，主要表现在胃粘膜部的条索或点状出血。按损伤程度用溃疡指数表示，即按Kitagawa等的粘膜损伤长度积分方法计算：大鼠胃粘膜损伤1mm长度积1分，如果损伤宽度大于1mm则积分加倍。

(4)药物对溃疡抑制率计算方法：

溃疡抑制率(％)＝(对照组溃疡指数-用药组溃疡指数)/对照组溃疡指数×100％

试验结果一：

结果1：DTC对胃粘膜的损伤

大鼠灌服DTC后可引起胃粘膜的溃疡，并与给剂量有明显的依赖关系(表3)。

表3大鼠口服DTC后胃粘膜溃疡指数

大鼠灌服DTC后对胃的损伤，主要发生在胃的粘膜部位，严重者或成片状或条索状出血和溃疡，当灌服DTC3000mg/kg时，胃粘膜出血达100％，在粘膜处见有成片及条索状溃疡面。给药剂量降至2000mg/kg时，出血率降至80～90％，粘膜溃疡有所减轻，剂量为1000mg/kg时，仅见轻微的出血点。

肠道粘膜的出血，以发生在空肠下段及回肠上段为多见。药后6小时，肠腔内充满血性渗出液。肠粘膜出血发生率及出血程度均比胃粘膜为轻。

结果2：猴菇萃取物对DTC所致胃粘膜溃疡的保护作用

为减轻DTC对胃粘膜的损伤，将DTC与猴菇萃取物按不同比例组成复方(见表4)，以观察猴菇萃取物对DTC所致胃溃疡的保护作用。

表4猴菇萃取物对DTC所致胃粘膜损伤的保护作用

由表4可见，猴菇萃取物能减轻DTC对胃粘膜的损伤，猴菇萃取物的用量越大，对胃粘膜的保护效果越好，当DTC与猴菇萃取物的用量为1:2时，溃疡发生率可减少80.6％，当DTC与猴菇萃取物的比例为1:4时，溃疡发生率可减少84.2％。虽然DTC与猴菇萃取物的比例为1:4时保护效果最好，然而猴菇萃取物用量太多，大大增加了成本，1:2的比例保护效果也很好，可猴菇萃取物的用量却减少了一半。

结果3：猴菇萃取物减轻DTC对胃肠粘膜的刺激作用

试验目的：了解猴菇萃取物减轻DTC对胃粘膜刺激的具体剂量比例。

受试药物：名称二硫卡钠(DTC)，猴菇萃取物，由江门市精细化工厂提供；含量DTC99.8％，猴菇萃取物95％；制剂：制作成胶囊，用牛肉包裹让动物自然吞下，或将动物嘴掰开喂入。

动物：原中国人民解放军军事医学科学院(委托试验)实验动物中心生产的比格狗，月龄为8-10个月；体重：雄性为7.6±0.4kg，雌性为6.5±0.3kg；性别：雌雄各半；每组动物数：4只。

剂量：各剂量分组见表5与表6。

途径：经口服用。

观察指标与时间：主要观察动物呕吐时间，次数及内容物，每天一次，连服三天，每次给药后观察12小时。

试验结果二：

结果1：DTC对胃粘膜的刺激作用

DTC给狗服用后，能明显地引起狗的呕吐反应，其反应程度与所用药物的剂量有关，呕吐次数与程度随服药物剂量的增加而加重，见表5。

表5不同剂量DTC对狗呕吐的情况

*呕吐反应程度；***平均呕吐≥4次/狗；**呕吐2-3次/狗；*呕吐1次/狗。

结果2：猴菇萃取物能减轻DTC对胃粘膜的刺激作用

用猴菇萃取物与DTC混合后，制成胶囊给狗服用，能明显地减轻DTC对胃粘膜的刺激作用，其对胃粘膜的保护作用与所用剂量有关，见表6。

表6猴菇对DTC引起狗呕吐的减轻作用

结论：DTC对胃粘膜有明显的刺激作用，这种作用随用药剂量的增加而加强。猴菇萃取物能减轻这种刺激作用，猴菇萃取物与DTC量的混合达到2:1时，就能完全预防这种刺激反应。

免疫试验及毒性研究

1、免疫增强作用的研究:

实验选用LACA或Balb/c小鼠，雌雄兼用，一次或多次皮下注射DTC25mg/kg或AAC44mg/kg，用药一次后1、2、4天活杀检查，或用药三次，停药4天，再用药三次，停药后第5天活杀检查各项指标。

AAC及DTC对正常小鼠免疫功能的影响:

给正常LACA小鼠分别一次皮下注射AAC 44mg/kg与DTC 25mg/kg后1、2、4天观察对脾脏淋巴细胞转化的影响，其结果见表7。

表7AAC及DTC一次用药后对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响

由表7可见，不论是AAC还是DTC一次给药后，对正常小鼠免疫功能未见有增强作用。

若AAC及DTC多次用药则对正常小鼠T淋巴细胞有调节作用，可以促进脾脏T淋巴细胞的转化功能，并对ConA和PHA的刺激有增强作用(见表2)，而对LPS的刺激未见有明显有增强作用，表示对B淋巴细胞无明显的增强作用。

表8AAC及DDC多次用药后对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响

*P<0.05

一次或多次用药后对小鼠胸腺T淋巴细胞辅助细胞及NK细胞活力的影响，其结果见表9和10。

表9AAC及DTC对正常小鼠胸腺T淋巴辅助细胞的影响

/>

*一次用药**多次用药

表10 AAC及DTC多次用药后对正常小鼠脾NK细胞活性的影响

组别	NK细胞活性	T值
			生理盐水	32.2+8.5	/
AAC	54.3+1.5	2.557
			DTC	44.2+5.8	1.165

由表9和10可见，小鼠多次服用AAC后可提高胸腺T淋巴辅助细胞L₃T₄(相当人的CD₄细胞)的萤光标记率，提高L₃T₄与LYT₂(相当人的CD₈细胞)的比值，并能增强NK细胞活性。

Aza(硫唑嘌呤)是免疫功能抑制剂，主要是抑制T淋巴细胞的增殖反应。小鼠连续口服Aza(200mg/kg)5天，能造成典型的免疫功能低下的实验动物模型。我们进一步比较了单药DTC和复方AAC对免疫功能低下小鼠脏淋巴细胞转化率的影响，结果见表11。

表11 AAC及DTC对免疫功能低下小鼠脾脏淋巴细胞转化率的影响

实验用BALB/C小鼠；每组6只

与正常组比P<0.001；*与Aza组比P<0.05

**与Aza组比P<0.01

由表11可见，大鼠连续灌服Aza后脾脏淋巴细胞转化率明显降低，对ConA、PHA及LPS的刺激反应强度降低，与正常组比P<0.001，表明小鼠的免疫功能极度低下，对ConA、PHA及LPS的刺激反应能力不及正常的10％。若小鼠在服用Aza的同时，皮下注射DTC(25mg/kg)除了稍能增强PHA和刺激反应的强度外，未见其他明显的作用。若小鼠在服用Aza的同时，皮下注射复方AAC，则可明显提高ConA、PHA及LPS刺激反应能力，与Aza组比P<0.05-0.001，表明复方AAC对免疫功能低下动物的免疫增强作用明显大于单药DTC。

DTC是一种有酶抑制性质的整合物，有的学者认为它可能抑制了HIV镁依赖的反向转录酶，所以具有较好的抗HIV特性。DTC又能诱导T细胞前体分化在抗原刺激后发生免疫应答作用的细胞，增加CD₄(鼠类称为L₃T₄)细胞数，增强总的T细胞功能。

故临床上常用于人体免疫缺陷病毒感染和CD₄细胞数低于200/mm³的患者。为此，我们初步观察了复方AAC和单药DTC对免疫功能低下小鼠的胸腺及外周血中T细胞亚群的影响，其结果见表12与13。

表12 AAC及DTC对免疫功能低下鼠胸腺T淋巴细胞亚群的影响

组别	L₃T₄细胞萤光标记率(％)	LYT₂细胞萤光标记率(％)
			正常	81.0	81.0
Aza	71.7	61.5
			Aza+DTC	81.0	78.8
Aza+AAC	78.5	71.2

表13 AAC及DTC对免疫功能低下鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

由表6、7可见，动物服用免疫抑制剂Aza后，T淋田辅助细胞L₃T₄(相当于人的CD₄细胞)、LYT2(相当于人的CD₈细胞)的萤光标记率明显降低，若在服用Aza的同时，皮下注射DTC或AAC，在一定程度上能够提高L₃T₄和LYT₂的细胞量，增大L₃T₄/LYT₂的比值。

2、毒性研究:

急性毒性研究:

DTC在鼠类中的中毒剂量为1000-2000mg/kg体重，小鼠口服半数致死剂量LD₅₀为1870mg/kg体重，静脉注射的LD₅₀大为1000mg/kg体重，大鼠口服半数致死剂量LD₅₀为2830mg/kg体重。而DTC促进免疫功能有效量为0.5-25mg/kg体重。因此，认为该药的安全度大，其治疗指数约为1000。

为了对DTC安全性做出评价，并对复方中中药提取物对DTC毒性影响，除了测定AAC的LD₅₀外，同时分别测定了DTC及中药提取物的LD₅₀。

实验选用本院动物中心生产的KN系小鼠，雌雄各半，体重为20+1g，按医学动物实验室常规条件饲养。给动物用AAC前，用2％的淀粉糊将药物配成适当浓度的混悬液，给药剂量以gm或mg/kg体重计算，给药途径为灌冒，容积为0.5ml/鼠，一次结入。因在预试验中，中药提取物以最大的药物浓度和容积未能使小鼠死亡，故改为认为测定该药的最大耐受量，即以最大药物浓度和最大给药容积一次灌胃，观察给药后动物反应及药后7天的活存率，实验结果经Bliss法统计处理，测得AAC及DTC的LD₅₀及95％的可信限见表14。

表14小鼠灌服AAC及DTC后的LD₅₀及其95％可信限(mg/kg)

小鼠口服AAC和DTC后的中毒表现基本一致，都是由活动减少变成懒动或贴笼不动，死亡动物最早出现在给药后3小时，死亡动物分布在给药后当天至药后3天，药后5天活存动物基本恢复正常。死亡动物及时进行解剖，仅见最大剂量组14只动物有4只见有小肠充血，未见有其他脏器有肉眼可见的变化。

中药提取物小鼠最大耐受量试验，中药提取物为实施例1中所述比例的猴菇萃取物和枸杞萃取物，选用雌雄小鼠各10只，药物浓度为65.2％，灌服容积为0.8ml/只，小鼠一次灌服后，活动减少，药后一天即恢复正常，7天内无一只动物死亡，其最大耐受量见表15。

表15小鼠灌服中药提取物最大耐受量

动物性别	动物数(只)	最大耐受量(g/kg体重)
			雌	10	26.6
雄	10	24.8

上述结果表明，小鼠对AAC中中药提取物的最大耐受量，无论是雌性小鼠，均在20g/kg体重以上，属于基本无毒物质。若AAC急性毒性主要来源于DTC(AAC中DTC与中药提取物的比例为1:3)，则AAC的LD₅₀中，DDC的含量雄性小鼠为3043.6mg/kg，雌性小鼠为2783.6mg/kg，这两个数值均大于DTC单药试验时的LD₅₀。上述结果表示，AAC中的中药提取物降低了DTC的毒性。

临床应用

为了在HIV感染病人中验证本发明复方二硫卡钠制剂的免疫力增强作用，在HIV感染高发区云南瑞丽和陇川地区，采用配对(如表7所示)、双盲法观察了本发明实施例1制得的复方二硫卡钠胶囊剂(以下简写为实施例1制剂)与DTC对病人的疗效。

表16各组HIV阳性感染者均衡指标比较

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病人集中住宿管理，第一天剂量后口服1克，以后每天饭后分别每次分别口服实施例1制剂500mg、DTC113mg和安慰剂胶囊，连续服用4个月为一疗程，在第一疗程基础上又选择部分病人又连续服用一个疗程。在服药前，服药中和服药后分别进行详细问诊、临床、肝肾功能、心电图、血、便、尿常规和免疫学检查，特别测定了CD₄、CD₈和CD₃细胞，停止服药后约两年进行了复查。结果表明：

1、本发明复方二硫卡钠制剂对DTC副反应的降低作用：

服用实施例1制剂是安全的，对肝、肾、心肺等主要脏器与功能没有异常影响。实施例1制剂能明显地降低DTC副反应(如表8和9所示)。从表8可知，实施例1组的头晕、恶心和上腹部不适症状的发生率，分别为22.4、17.6和8.2％；比DTC组45.9、37.8和21.6％的发生率低得多。这表明应用实施例1制剂与DTC相比来看，病人对DTC的副反应明显，对实施例1组的反应轻微，可以说复方二硫卡钠制剂对艾滋病病人应用是安全的。

表17病人第一个疗程服药后的临床副反应

*与DTC组相比P＜0.05，与安慰剂组相比##P＜0.01，###P＜0.001.

表18病人第二疗程服药后的临床副反应

*与DTC组相比P＜0.05，与安慰剂组相比#P＜0.05，##P＜0.01.

2、本发明复方二硫卡钠制剂对免疫功能的增强作用

病人服用实施例1制剂后，从总体上看能使CD₄/CD₈比值增加的病例数，明显地高于DTC与对照组(见表10)。以自身服药前后，比较CD₄细胞百分比及其CD₄/CD₈的比值，如表11显示出，实施例1组病人在服药2月和4月后的CD₄细胞百分比均比药前高，服用4个月后的CD₄细胞也显著地高于服药2月后所测的CD₄数值(P＜0.05)，服用实施例1制剂4个月后的CD₄/CD₈比值与药前相比，差别是显著的(P＜0.01)。在服用DTC和安慰剂胶囊的对照组，均没有观察到像实施例1组所观察到的结果。

表19口服实施例1药物后对CD₄/CD₈比值的影响

*＝P＜0.05，**＝P＜0.01.

注：凡是二次实验CD₄/CD₈均高于给药前结果，两次高出的总和要大于0.180才算为药物对CD₄/CD₈比值有促进作用。

表20口服实施例1制剂与DTC药物后对CD₄、CD₈及其比值的作用

与服药前相比较**＝P＜0.01，***＝P＜0.001；服药2月与4月间相比较#＝P＜0.05.

如果将服药前CD₄细胞绝对数在650/mm³以下的病人，分别进行统计结果如表20所示。实施例1制剂、DTC和对照组的病人经过服药2月和4月后，CD₄和CD₈细胞的绝对数2药前高。特别是实施例1组与DTC组的CD₄数都显著地高于药前(P＜0.001)。DTC组病人的CD₈比药前增加更为显著，同实施例1组与对照组相比较有统计差异。在此地值得注意的是对照组的病人，经2个月和4个月集中住宿后CD₄和CD₈细胞数也相应地比集中前高，这可能是由于这些病人在戒毒所戒毒后出现的变化。从表21可见DTC能促进CD₃的增加。

表21实施例1制剂和DTC对人体CD₄(＜650)与CD₈绝对数的影响

与药前相比较，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001；与实施例1组相比较\＝P＜0.05，\\＝P＜0.01；与对照组相比较##＝P＜0.01.

表22实施例1制剂与DTC对CD₃数量的影响

与药前相比较*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001，与对照组相比较##＝P＜0.01.

3、本发明复方二硫卡钠制剂延缓艾滋病的发展作用

对服用实施例1制剂、DTC和安慰剂HIV感染者进行了复查，统计显示：三组病人经过约两年后，疾病发展情况差别很大，33名服用安慰剂组有5名发生艾滋病，其中已有2名死亡；服用DTC的34名感染者有3名发展成艾滋病，其中有1名死亡；服用实施例1制剂的69名，只有1名怀疑为艾滋病，没有1名死亡，这充分说明本发明复方二硫卡钠制剂确实对感染者有延缓艾滋病的发展。服用2个疗程的感染病人，他们的CD4细胞比较低，也就是疾病发展比较重，也表现出本发明复方二硫卡钠制剂的作用比DTC强，因此尚无1例感染者发生艾滋病，更没有发生死亡。

4、本发明复方二硫卡钠制剂对艾滋病患者机会性感染有改善

对布基纳法索的艾滋病人应用了本发明实施例1制剂，结果显著地改善了病人的全身状态，急性感染很快地得到了好转，如下表23所示。

表23应用复方二硫卡钠制剂治疗布基纳法索艾滋病患者病例资料

HIV感染人体后主要侵害辅助性T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞，这些细胞破坏、死亡使机体免疫功能低下，患者发生机会性感染(细菌、病毒、原虫和霉菌)及肿瘤时，本发明提供的复合二硫卡钠制剂能够控制各种机会性感染、抑制肿瘤蔓延，使患者症状好转、血沉减慢，淋巴细胞比例上升，免疫功能增强，但是HIV感染合并了恶性肿瘤或机遇性感染已经至衰竭状态时，在治上是难于奏效的。

经动物急性、亚急性与慢性毒理性研究，以及4个多月的人体试用，少数病人连续用了8个月，表明本发明复合二硫卡钠制剂毒副作用是极低的，也不会引起长期特殊毒性反应，因此人体应用本发明复合二硫卡钠所用剂量是安全的，与DTC相比较，副反应发生率低，程度更轻。本发明复合二硫卡钠制剂药物来源广泛，制剂稳定。基于上述研究成果，本发明提供的复方二硫卡钠药物组合物制剂完全可以代替DTC在广谱抗病毒、艾滋、流感、瘟病和恶性肿瘤治疗药物中推广应用。

在本发明的试验当中，肠粘膜的出血多发生在空肠下段及回肠上段，有的服药动物在肠腔内充满血性渗出液。肠粘膜的出血率及出血程度均比胃粘膜轻，但DTC及AAC两组之间未见明显差异。

DTC服用后很快在体内消除，临床上曾连续服用数日，剂量为30～50mg/kg体重，治疗金属中毒(如镍中毒)，未见明显的毒性和副作用，在用量500～700mg/kg体重时，产生轻微的副作用。但也有报导，若用量过大时可以出现神经症状和胰腺炎。因DTC可与酒精发生相互作用，故在饮酒后12小时内，患者禁用DTC或AAC。

综上所述，AAC及单药DTC均能提高免疫功能，可以促进脾细胞T淋巴细胞转化率，对Cona和PHA的刺激有增强作用，可以提高胸腺T淋巴辅助细胞L3L4/LYT2的比值，并能增强NK细胞活性。AAC对免疫调节的增强作用，在某些方面更优于单药DTC，如AAC对免疫功能下小鼠脾细胞的Cona和PHA的增强反应明显高于DTC。AAC的L3L4/LYT2的比值明显大于DTC。AAC的毒性非常低，其中的中药提取物还可以降低DTC对胃肠道的刺激作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种复方二硫卡钠药物组合物，其特征在于，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠50～59份，猴菇萃取物100～118份，枸杞萃取物50～60份；

所述猴菇萃取物或枸杞萃取物制备方法包括以下步骤：

当中药原材料为猴头菇时，所述二氧化碳超临界萃取的温度为40～60℃，压力为10～30MPa；

当中药原材料为枸杞时，所述所述二氧化碳超临界萃取的温度为50～70℃，压力为20～35MPa。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述低温真空干燥的温度为-60℃～-40℃，真空度为1.3～13.3Pa。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述夹带剂为乙醇，所述夹带剂的用量为中药粉末质量的5％～10％。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，包括以下质量份数的原料：二硫卡钠52～57份，猴菇萃取物110～115份，枸杞萃取物52～57份。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述二硫卡钠与猴菇萃取物的质量比为1：2。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述二硫卡钠、猴菇萃取物和枸杞萃取物的质量比为1：2：1。

7.根据权利要求1～6任意一项所述的药物组合物，其特征在于，所述原料还包括辅料8～14份。

8.权利要求1～7任意一项所述的药物组合物制备得到的药剂，所述药剂为胶囊剂、片剂、栓剂、冲剂、丸剂或糖浆剂。

9.权利权利要求1～7任意一项所述的药物组合物或权利要求8所述的药剂在增强免疫力的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述增强免疫力的药物包括广谱抗病毒药物、治疗新冠的药物、治疗艾滋病的药物、治疗流感的药物、治疗瘟病的药物或治疗恶性肿瘤的药物。