CN116804167A - 一株溜曲霉及其在防治截形叶螨和番茄潜叶蛾中的应用 - Google Patents

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Abstract

发明涉及微生物菌剂技术领域，特别涉及一种溜曲霉及其用途‑‑在防治截形叶螨和番茄潜叶蛾中的应用。本发明公开了一种溜曲霉(Aspergillus tamarii)XJ‑2，其保藏号为CCTCC NO:M 2023661；其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明还同时提供了上述溜曲霉XJ‑2的用途：用于防治截形叶螨、番茄潜叶蛾；还能用于防治马铃薯甲虫、食心虫。

Description

一株溜曲霉及其在防治截形叶螨和番茄潜叶蛾中的应用
技术领域
发明涉及微生物菌剂技术领域，特别涉及一种溜曲霉及其用途----在防治截形叶螨和番茄潜叶蛾中的应用。
背景技术
化学防治是目前截形叶螨和番茄潜叶蛾常见的防控措施之一，但由于频繁、不科学的使用化学药剂诱发了截形叶螨和番茄潜叶蛾抗药性的发生。抗药性水平的攀升促增了药剂的施用量和施用频率，这将进一步提高截形叶螨和番茄潜叶蛾的抗药性水平，增加防治成本和难度。此外，化学农药的大量施用也会增加农产品和土壤环境中的农药残留，对人类健康和生态环境造成恶劣影响。因此，探索生物防治为主体的综合控制方法成为防治朱砂叶螨的热点。
在新疆截形叶螨(以下简称“叶螨”)的发生十分普遍且严重。叶螨具有个体小、繁殖力高、世代重叠严重和适应性强、分布广等特点，以若螨和成螨聚集在寄主植物叶片、嫩茎、花蕾和果实等处刺吸汁液，导致叶片失绿，影响其进行光合作用，进而造成农作物的减产甚至是绝产，造成重大经济损失。叶螨类是农林作物重要的防治对象。目前叶螨为害常见的禾本科(玉米)、锦葵科(棉花)、豆科(大豆、绿豆、红豆、菜豆等)、茄科(马铃薯、茄子、番茄、辣椒等)和葫芦科(黄瓜、南瓜、西瓜、冬瓜等)等100多种经济作物作物。目前，叶螨主要依靠化学农药进行防治，在防治过程中，由于大量使用阿维菌素、哒螨灵、唑螨酯、噻螨特等杀螨剂，使叶螨产生了不同程度的抗药性，化学防治难以实现预期的效果，推荐剂量基本无效。另外，在化学防治过程中，滥用、过度使用农药，对非靶标生物也具有杀伤作用，破坏生态平衡，引起害螨的再猖獗。
番茄潜叶蛾Tuta absoluta(Meyrick)是一种新入侵我国的重大蔬菜害虫，化学防治是目前番茄潜叶蛾常见的防控措施之一，但由于番茄潜叶蛾为害隐蔽，主要潜入番茄叶片、果实危害，隐蔽性较强，常导致防治效果不佳，且频繁使用化学药剂也诱发了番茄潜叶蛾抗药性的发生。目前，番茄潜叶蛾已对拟除虫菊酯、阿维菌素、杀螟丹、苄氯菊酯、多杀菌素等产生了不同程度的抗药性(杨石有,张蕊,李宏琳,黄镜梅,孔琼,袁盛勇.农药助剂对茚虫威防治番茄潜叶蛾的减量增效作用[J/OL].环境昆虫学报:1-11[2023-03-26])。
综上，截形叶螨因其个体小、世代短、发育快、极易产生抗药性，番茄潜叶蛾幼虫具有隐蔽的“潜食”特性，提高了杀虫剂的施用量和施用频率，杀虫剂的频繁施用导致其抗药性水平快速提升。显而易见，截形叶螨和番茄潜叶蛾防治极为困难。目前，叶螨和番茄潜叶蛾主要依靠化学农药进行防治，在防治过程中，由于大量使用阿维菌素、哒螨灵、唑螨酯、噻螨特等杀螨剂以及拟除虫菊酯、茚虫威等杀虫剂，使叶螨和番茄潜叶蛾产生了不同程度的抗药性，化学防治难以实现预期的效果，推荐剂量基本无效。另外，在化学防治过程中，滥用、过度使用农药，对非靶标生物也具有杀伤作用，破坏生态平衡，引起害虫的再猖獗。因此，探寻高效、环保的生物防治资源是生产上的迫切需求。真菌杀虫剂具有体壁侵染、对环境友好、可以大批量生产等特点，适合于该类害虫的防治。
利用昆虫病原真菌是开展“以菌治虫”是农业害虫生物防治的主要措施之一，也是推动农药减量控害的关键手段。不仅限于它们的环境友好性、对经济上重要的害虫具有广泛的致病性以及对脊椎动物安全，而且还具有促进作物生长和增产。因此，探寻高效、环保的生物防治资源是生产上的迫切需求。
生物防治害虫对环境友好，对人类和牲畜不会造成毒害，以及环境友好型的特点，可以避免化学防治带来的一系列问题，目前已有苏云金芽孢杆菌、白僵菌属、绿僵菌属等微生物对截形叶螨和番茄潜叶蛾具有致病性的相关报道(张晓娜，李斌，邓娇，等.二斑叶螨的生物防治研究进展[J].南方农业，2018，12(02)：5-6；梁永轩，郭建洋，王绮静，等.番茄潜叶蛾生物防治研究进展.热带生物学报，2023，14(1)：17-29.)。
溜曲霉菌(Aspergillus tamarii)目前已知的用途是：
1、CN115093983A的发明《一种促生抗病生物菌剂》告知：对滇重楼幼苗生长均有不同程度的促进作用，对烟草疫霉起拮抗作用。
2、据报道，溜曲霉对双翅目瓜食蝇具有高毒力(杨叶,王萌,马晓燕,路斌冰,许展华.感染瓜实蝇的曲霉菌及其生物学特性[J].菌物学报,2016,35(01):20-28)。
需要说明的是：不同菌株对特定的害虫具有不同的毒力(Lorenz S C,Humbert P,Wassermann M,Mackenstedt U,Patel A V.A broad approach to screening ofMetarhizium spp.blastospores for the control of Ixodes ricinus nymphs[J].Biological Control,2020,146(8):104270.)
生物菌剂或制剂可以减少或替代化学农药的使用，从而即达到预防和防治叶螨的目的，又可以避免化学药剂使用而带来的对人类和环境的威胁。经检索，目前尚无利用溜曲霉防控截形叶螨和番茄潜叶蛾的相关报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2及其用途。
为解决上述技术问题，本发明提供一种溜曲霉(Aspergillus tamarii)XJ-2，其保藏号为CCTCC NO:M 2023661；其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述。
本发明还同时提供了上述溜曲霉XJ-2的用途：用于防治截形叶螨、番茄潜叶蛾；还能用于防治马铃薯甲虫、食心虫。
说明：截形叶螨和番茄潜叶蛾分别属于蜱螨目和鳞翅目害虫。
本发明在新疆伊犁哈萨克自治州察布查尔锡伯自治县扎库齐牛录乡扎库齐牛录村玉米秸秆中采集到罹病玉米螟幼虫，在实验室分离纯化得到纯菌种，经形态学和分子生物学鉴定，确定为溜曲霉Aspergillus tamarii，菌株命名为XJ-2。将菌株XJ-2对4种昆虫进行毒力活性测试，表明其对截形叶螨、番茄潜叶蛾具有较高毒力，对马铃薯甲虫、食心虫也有一定活性，结果见表1。体壁接种后，通过解剖检测发现，在健康的对照试虫体内未发现任何菌丝，致病体态的试体内中观察发现到大量营养菌丝，同时在溜曲霉致死的虫体上也同样发现了褐色霉层，由此可见，溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2主要通过产生附着胞、芽管等特殊结构侵入害虫体壁。之后在昆虫体内快速生长、繁殖，破坏害虫生理机能最终导致害虫死亡。
由此可见，溜曲霉对截形叶螨和番茄潜叶蛾均具有高杀虫活性，其在害虫生物防治种具有很好的生防潜力。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为基于ITS基因序列构建目的菌株的系统发育树(NJ法)。
图2为目的菌株(溜曲霉XJ-2菌株)的形态学观察；
图2中：左上为在PDA上溜曲霉XJ-2的正面形态图，右上为在PDA上溜曲霉XJ-2的反面形态图，左下为溜曲霉XJ-2的分生孢子，右下为溜曲霉XJ-2的分生孢子梗。
图3为被溜曲霉XJ-2感染的截形叶螨罹病僵虫图。
图4为溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾卵孵化率的影响。
图5为溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾不同龄期幼虫死亡率的影响。
图6为被溜曲霉XJ-2感染的3龄番茄潜叶蛾幼虫罹病僵虫图。
图7为溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾羽化率的影响。
图8为被溜曲霉XJ-2感染的番茄潜叶蛾蛹的罹病僵虫图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、菌株的分离与鉴定
将采集自新疆伊犁哈萨克自治州察布查尔锡伯自治县扎库齐牛录乡扎库齐牛录村(经度：81.248489，维度：43.803871)玉米植株上的罹病玉米螟幼虫，带回实验室，将玉米螟幼虫尸体按顺序依次经过70％酒精浸泡30s、再经过0.1％升汞溶液浸泡3分钟(彻底消毒)、最后用无菌水冲洗三次。再用接种针取处理好的玉米螟幼虫组织接种于PDA培养基上。在28℃条件下经多次分离培养纯化，得到纯化的分离菌株，编号为XJ-2，并将其转移到PDA斜面上生长3-4天，在4℃冰箱储存，上述操作均在超净工作台内进行。
1.1科赫法则的验证：
通过喷雾塔将XJ-2菌株接种玉米螟幼虫，接种XJ-2菌株后死亡的玉米螟幼虫在湿润的无菌培养皿内培养数天后(培养条件为：温度28℃，培养时间约为1～2天)，从头部、胸部、腹部的节间膜处长出了XJ-2菌物。菌物从最初的亮白色变为暗黄色，经分离纯培养在PDA培养基上形成淡黄色至咖啡色的菌落。用纯培养在PDA培养基上的菌接种健康的玉米螟幼虫后，又有大量试虫死亡，死虫经保湿培养数天后又长出相似的菌物。将这些菌物再分离纯化培养在PDA琼脂培养基上后又形成了淡黄色至咖啡色的菌落。上述结果表明，XJ-2对玉米螟的致病性符合科赫氏法则。
1.2分离菌株的形态学鉴定：
编号为XJ-2的分离菌株在PDA平板上菌落初期呈白色绒毛状，呈扩环状生长；在PDA培养基上培养至15d时，菌落直径50.53mm，培养7至10天左右可产生分生孢子，由于产生孢子而变成黄绿色或橄榄色，菌落中间略凸起，后期变为深棕褐色或板栗色，背面无色。显微镜下可见分生孢子梗和分生孢子，分生孢子无色、光滑，圆球形少数卵圆形，分生孢子梗在菌丝端部侧面分支向前延生，顶端形成新的分生孢子。基于以上形态学观察，初步鉴定为曲霉属(Aspergillus)。
XJ-2菌株的形态学观察如图2所示。
1.3分离菌株的分子鉴定：
采用引物CMD5(5’-CCGAGTACAAGGAGGCCTTC-3’)和CMD 6(5’-CCGATAGAGGTCATAACGTGG-3’)菌株XJ-2DNA进行PCR扩增，将扩增的PCR产物送至上海生工生物工程有限公司测序，所测序列的结果如SEQ ID No.1。将测序结果与GanBank数据库中保存的基因序列进行同源性BLASTE比对，比对结果显示菌株XJ-2的PCR扩增序列与溜曲霉的序列同源性达98％以上。用MEGA 10.0软件建立系统发育树，见图1。根据图1的系统发育树可知，菌株XJ-2与溜曲霉聚合在一起。
菌株XJ-2的保藏信息如下：
保藏名称为：溜曲霉XJ-2Aspergillus tamarii XJ-2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2023年4月28日，保藏号：CCTCC NO：M2023661。
1.4溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2的杀虫范围：
1.4.1供试虫源
马铃薯甲虫(幼虫混合虫态)、桃小食心虫(幼虫混合虫态)、截形叶螨(幼虫混合虫态)、番茄潜叶蛾(幼虫混合虫态)，饲养条件：温度(28±1)℃，湿度(80±5)％，光周期12L﹕12D光照培养箱。
1.4.2孢子悬浮液的制备
利用PDA培养基对纯化的分离菌株---溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2进行扩繁，即在PDA培养基上在26℃下培养7～10天，刮取分生孢子粉，然后用0.1％Tween-80无菌水配制成1.2×108孢子/ml的孢子悬浮液，用于杀虫范围测定。
1.4.3接种处理
选用马铃薯甲虫(幼虫混合虫态)、桃小食心虫(幼虫混合虫态)、截形叶螨(幼虫混合虫态)、番茄潜叶蛾(幼虫混合虫态)开展XJ-2菌株的杀虫范围实验。
每1种上述昆虫20头作为1个重复，重复3次，即1.2×108孢子/ml的孢子悬浮液处理60头1种昆虫(幼虫混合虫态)。处理组采用喷雾塔，将1.2×108孢子/ml的孢子悬浮液均匀喷在供试虫体表面，孢子悬浮液的用量为10mL/20头(下文剂量同该剂量一致)，依次处理马铃薯甲虫(幼虫混合虫态)、桃小食心虫(幼虫混合虫态)、截形叶螨(幼虫混合虫态)、番茄潜叶蛾(幼虫混合虫态)，确保每头昆虫身上沾上孢子悬浮液，等药液蒸发殆尽后，将试虫一一放入养虫盒并置于室内自然室温下。对照组采用0.1％吐温-80的无菌水溶液，0.1％吐温-80的用量为10mL/20头(下文剂量同该剂量一致)。7d后统计平均累计死亡率。如表1所示，7d平均累计死亡率分别为56.33％、78.45％、87.33％、90.23％。
表1溜曲霉XJ-2的杀虫范围
通过喷雾塔体壁接种后的第4天，通过解剖检测发现，在健康的对照试虫体内未发现任何菌丝，致病体态的试体内中观察发现到大量XJ-2菌株菌丝。保湿培养后(培养条件为：温度28℃，培养时间约为1～2天)死亡的虫体上也出现了同一物(XJ-2菌株菌丝)由此可见，溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2通过体壁侵染杀死马铃薯甲虫、桃小食心虫、截形叶螨和番茄潜叶蛾
综上，室内杀虫范围实验发现，溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2对截形叶螨、番茄潜叶蛾室内死亡率均在85％以上。
由此可见，溜曲霉对截形叶螨和番茄潜叶蛾均具有高杀虫活性，其在害虫生物防治种具有很好的生防潜力。
1.5溜曲霉XJ-2对截形叶螨的室内毒力测定
1.5.1供试虫源
截形叶螨，温度(28±1)℃，湿度(80±5)％，光周期12L﹕12D光照培养箱中，以菜豆Phaseolus vulgaris为寄主植物进行繁育。为获得螨龄一致的截形叶螨的幼螨、若螨及雌成螨，本发明大量的把处于产卵盛期的雌成螨转至制好的菜豆叶碟上，任其产卵12h后挑出所有雌成螨(得到卵龄一致的螨卵)，将所得的卵龄一致的螨卵在光照培养箱中培养4天，待大部分卵孵化为幼螨(＜12h)(挑出所有未孵化的卵，得到虫龄一致的幼螨)，所得幼螨即可用于生物测定；用同样类似的步骤即可获得待试的若螨和雌成螨。
1.5.2孢子悬浮液的制备
利用PDA培养基对纯化的分离菌株---溜曲霉Aspergillus tamarii XJ-2进行扩繁，即在PDA培养基上在26℃下培养7～10天，刮取分生孢子粉，然后用0.1％Tween-80无菌水配制成1.2×108、2.1×107、3.4×106、1.42×105和1.31×104孢子/ml的孢子悬浮液，用于毒力测定。
1.5.3接种处理
采用叶片喷雾法，选取直径为9.5cm，高为1.0cm的培养皿，将海绵剪成直径为9.0cm的圆，放入培养皿，一直加水至饱和，再放上滤纸，剪取新鲜的菜豆叶片，叶背朝上放入培养皿内，叶片与滤纸紧贴，用吸水的脱脂棉包裹叶片边缘和叶柄，每个叶片接20头螨(在体视显微镜下观察并剔除死亡或不活泼的个体，确保每个叶片接20头螨)，置于养虫室中30min～60min，供试菌悬液为5个浓度梯度(1.2×108、2.1×107、3.4×106、1.42×105和1.31×104孢子/ml)，以0.1％Tween-80无菌水作为阴性对照。用喷雾塔(10mL)将上述不同浓度的孢子悬浮液分别喷洒到叶螨体上，每个处理设置4个重复(4个叶片)，共80头叶螨。对照组用含0.1％吐温-80溶液喷雾。喷菌后，将培养皿放到湿度为70％±5％，温度(25±2)℃，光周期16L:8D的培养箱中。每日观察并记录叶螨的死亡虫数，并挑出死螨。将死螨挑出放在培养皿中进行保湿培养，观察虫体上是否有溜曲霉菌长出，并作为判断是否由溜曲霉侵染致死的依据，同时对已被溜曲霉菌感染致死的罹病截形叶螨虫体通过光学显微镜(Nikon Eclipse80i)进行拍照。试验连续观察7d。利用所获数据，通过Microsoft Excel2010计算叶螨的校正死亡率，GraphPad Prism 8计算致死中浓度LC50和致死中时LT50并计算截形叶螨发育历期及雌成螨寿命。
幼螨、若螨和雌成螨接种处理同上述步骤1.5.3。
矫正死亡率(％)＝((处理死亡率-对照死亡率))/((1-对照死亡率)×100％)；
1.5.4溜曲霉XJ-2对幼螨的室内毒力及其对截形叶螨发育历期及雌成螨寿命的影响：
采用的试虫为幼螨，其他同上述步骤1.5.3，结果见表2～表4。
1.5.5溜曲霉XJ-2对若螨的室内毒力及其对截形叶螨发育历期及雌成螨寿命的影响：
采用的试虫为若螨，其他同上述步骤1.5.3，结果见表2～表4。
1.5.6溜曲霉XJ-2对雌成螨的室内毒力及其对截形叶螨发育历期及雌成螨寿命的影响：
采用的试虫为雌成螨，其他同实施1.5.3中一致，结果见表2～表4。
表2溜曲霉XJ-2不同接种浓度下截形叶螨各螨态的死亡率
表3溜曲霉XJ-2不同浓度处理截形叶螨各螨态LT50变化
表2中给出溜曲霉XJ-2不同浓度下的幼螨、若螨和雌成螨死亡率的方差分析和Turkey’s均值检验结果。各螨态的对照组死亡率均保持自然死亡率(＜10％)，不同浓度菌悬液处理7天后，不同螨态之间在不同浓度下截形叶螨的死亡率都存在显著的差异。一般来说，在同一螨态下，随着处理浓度的提高，截形叶螨的致死率也逐步提高，其中在孢子悬浮液浓度为1.2×108孢子/mL时接种7天后，幼螨、若螨和雌成螨的死亡率分别为89.33±1.72％、93.22±2.31％和94.23±1.26％。在同一浓度下，死亡率随着螨龄增大而增大，均表现为幼螨＜若螨＜雌成螨，雌成螨是最易受到溜曲霉XJ-2感染的螨态，死亡率最高。由此可见，溜曲霉XJ-2对截形叶螨具有高致死效应。
表3可知，截形叶螨的LT50随施用溜曲霉XJ-2菌悬浮液浓度的增加而降低且差异显著。表明溜曲霉XJ-2对截形叶螨致死效果显著。
表4溜曲霉XJ-2处理对截形叶螨发育历期及雌成螨寿命的影响
菌株 卵 幼螨 若螨 时代时间 雌成螨寿命
溜曲霉XJ-2 4.53±0.04a 1.83±0.21a 3.63±0.61a 9.79±0.44a 27.87±2.33a
CK 3.91±0.06b 1.71±0.33b 3.01±0.56b 8.63±0.63b 30.23±3.01b
表4可知，溜曲霉XJ-2处理后的截形叶螨的发育历期与对照相比，卵期，幼螨和若螨期均显著延长，处理组雌成螨的寿命显著低于对照组。表明溜曲霉XJ-2处理后对截形叶螨的子代生长发育影响显著。
1.6溜曲霉XJ-2对截形叶螨的温室防效评价
按照田间药效试验方法(中华人民共和国农业部.农药田间药效试验准则(一)杀螨剂防治豆类、蔬菜叶螨：GB/T 17980.17-2000)于2023年4月3日上午进行田间试验，当截形叶螨幼螨、若螨刚开始活动，平均每片叶片有2头以上活螨时施药，采用工农－16型喷雾器将菌悬液均匀喷洒温室豇豆叶片正反面，喷液量50L/亩，以菌悬液不滴为准，整个试验过程只施菌悬液一次。手持放大镜共调查25片叶片上的活动螨数量。施药前调查虫口基数，施药后3、5、7、14d各调查1次，计算各处理区防治效果。采用以下公式计算防效。
防效＝(1-处理前对照螨数×药剂处理药后螨数/处理后对照螨数×药剂处理药前螨数)×100％
表5溜曲霉XJ-2温室试验防效
表5可知，药后3d-14d，溜曲霉XJ-2菌悬液1×108孢子/mL防效为34.53％～84.55％，显著高于中(1×107孢子/mL和1×106孢子/mL)、低(1×105孢子/mL)菌悬液浓度处理。随着时间推移，防效持续增加，药后14d，防效达到最高，为44.04％～84.55％。
1.7溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾的室内毒力测定
1.7.1室内生物活性测定
孢子悬浮液的制备同1.5.2
采用喷雾法进行溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾的卵、各龄幼虫和蛹的致病性测定。将番茄完全展开的叶片(最长和最宽处约8cm和5cm)用锋利裁纸刀斜向快速切削叶柄后以吸水脱脂棉和保鲜膜进行保鲜后，放入圆形塑料养虫盒(直径9cm，高3cm)中，备用。
①卵的生物测定：选取带有番茄潜叶蛾初产的淡黄绿色卵的番茄叶片，依上进行保鲜处理后，采用喷雾塔将溜曲霉XJ-2孢子悬浮液接种卵，每种浓度处理30粒卵，重复5批次。每天观察1次卵孵化为幼虫的数量，定时连续观察7d(即，直至不再孵化或全部孵化为止)。记录孵化情况，并计算卵粒孵化率。
②幼虫生物测定：采用喷雾塔将溜曲霉XJ-2孢子悬浮液接种1～2龄、3龄和4龄幼虫，然后将其接入保鲜番茄叶片上，每种浓度、每个龄期处理12头，重复4批次。每24h观察1次幼虫的存活状态，定时连续观察7d，以软毛毛笔轻触虫体无反应且无光泽，判定为死亡，并将死亡的幼虫在培养皿(D＝12cm)中保湿培养20d，根据虫体是否长出菌丝及菌丝形态确定虫体的死亡原因，同时对已被溜曲霉菌感染致死的罹病番茄潜叶蛾幼虫虫体通过光学显微镜(Nikon Eclipse80i)进行拍照。记录死亡幼虫数量和存活的幼虫数量，并据此计算幼虫死亡率和校正死亡率。依据各浓度、幼虫龄期、处理后的时间及校正死亡率，计算溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾不同龄期幼虫的室内毒力。
③蛹生物测定：采用喷雾塔将溜曲霉XJ-2孢子悬浮液接种番茄潜叶蛾的蛹，然后将其置入培养皿(D＝12cm)中，每种浓度、每个龄期处理12头，重复4批次。每24h观察1次蛹的羽化情况，定时连续观察7d，(即，直至不再羽化或全部羽化为止)同时对已被溜曲霉菌感染致死的罹病番茄潜叶蛾蛹通过光学显微镜(Nikon Eclipse80i)进行拍照。记录蛹羽化情况，并计算蛹羽化率。
1.7.2溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾卵孵化率的影响
如图4所述，溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾卵有致病力。较对照，卵接种溜曲霉XJ-2后，第3d孵化率为80.55％，显著低于对照处理组的孵化率(100％)，说明溜曲霉XJ-2对卵孵化有不利影响。
1.7.3溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾幼虫矫正死亡率的影响
溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾幼虫具有杀虫活性，但随着虫龄的增加，杀虫活性逐渐下降。接种10d后，溜曲霉XJ-2处理组1～4龄番茄潜叶蛾幼虫校正死亡率分别为100％、82.7％、81.9％、70.1％，如图5所述；说明溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾幼虫具有较好的杀虫活性。
1.7.4溜曲霉XJ-2对番茄潜叶蛾蛹羽化率的影响
溜曲霉XJ-2能显著降低番茄潜叶蛾蛹的羽化，处理后8d统计发现，溜曲霉XJ-2处理组蛹的羽化率为45.55％，较对照组(93.22％)分别降低了47.67％，如图7所述。试验发现，溜曲霉XJ-2处理4d后发现部分蛹体发黑；在保湿培养3～5d后，部分蛹腹节处有少量黄绿色菌丝出现如图8所示。这些结果表明，菌株XJ-2能有效侵染番茄潜叶蛾的蛹，导致羽化率降低。
还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (4)

1.溜曲霉(Aspergillus tamarii)XJ-2，其特征在于：保藏号为CCTCC NO:M 2023661。
2.根据权利要求1所述的溜曲霉XJ-2，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述。
3.如权利要求1、2所述的溜曲霉XJ-2的用途，其特征在于：用于防治截形叶螨、番茄潜叶蛾。
4.根据权利要求3所述的溜曲霉XJ-2的用途，其特征在于：还能用于防治马铃薯甲虫、食心虫。
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