CN116784438B - 一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料及其制备方法 - Google Patents
一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料及其制备方法，属于饲料制备技术领域。本发明将豆粕进行酶解处理，采用复合酶酶解结合乙醇和表面活性剂提取姜黄素，过滤后滤液加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，低温喷雾干燥得到缓释料，用酶解豆粕、缓释料、玉米、鱼粉、虾壳、花生饼和酵母硒制备饲料。本发明采用酶解豆粕从源头上降低对罗非鱼内质网的损伤，复合酶酶解结合乙醇和表面活性剂提取姜黄素有效提高姜黄素的提取率，麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖对姜黄素、番茄红素和维生素E进行混合包埋，有效提高姜黄素、番茄红素和维生素E的稳定性和有效性，协同清除活性自由基，减少罗非鱼内质网损伤。
Description
技术领域
本发明属于饲料制备技术领域，涉及一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料及其制备方法。
背景技术
罗非鱼是一种热带鱼，原产于非洲，是世界性养殖品种之一，罗非鱼具有食性杂、生长快、适应性强、疾病少、雄性率高、群体产量高、肉质好等特点。罗非鱼对蛋白需求量较高，约35-40％。生产中，在保持鱼类蛋白需求量得到满足的情况下，饲料厂常通过增加豆粕的使用量来降低生产成本。但研究发现，在相同蛋白水平下，日粮中豆粕含量过高会导致罗非鱼鱼体细胞内质网的应激反应，即在某些情况下，钙稳态失衡，出现错误蛋白质或未折叠蛋白质过度堆积、固醇和脂质等水平失调而启动的应激机制，从而影响特定基因表达，如果内质网功能持续紊乱，那么细胞就会最终启动凋亡程序。
豆粕中含有抗营养因子，例如胰蛋白酶抑制因子、抗维生素因子等，影响营养物质的吸收利用，最终通过一系列机制导致罗非鱼内质网损伤，因此，需要开发一种适用于预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，降低豆粕引发的罗非鱼内质网的损伤。
公开号为CN110973409A的中国专利预防豆粕诱发的罗非鱼内质网损伤的饲料添加剂及其制备方法以及罗非鱼饲料，按重量份数计，上述饲料添加剂包括发酵中草药10-25份、尼克酰胺0.2-0.8份以及海泡石74.2-89.8份。用于制备发酵中草药的中草药包括薤白、石菖蒲和粉防己。该饲料添加剂通过组分间的协调互补以及复配作用，可共同清除罗非鱼体内的活性氧，维持细胞内钙离子稳态，降低高豆粕日粮对细胞的毒性作用，减少内质网损伤。其制备方法包括：按配比混合各原料成分。该方法简单，易操作。含有以上饲料添加剂的高含量豆粕罗非鱼饲料能够有效改善或避免罗非鱼在饲喂高豆粕饲料条件下的内质网损伤。但是该饲料添加剂中中草药的活性成分不稳定，导致最终的实用率不高，并且没有从豆粕的本身去预防罗非鱼内质网损伤的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料及其制备方法，属于饲料制备技术领域。本发明将豆粕采用木瓜蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶进行酶解处理，采用复合酶酶解结合乙醇和表面活性剂提取姜黄素，过滤后滤液加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，低温喷雾干燥得到缓释料，取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、喷包覆液，得到饲料。本发明采用木瓜蛋白酶和蛋白酶K酶解豆粕可降低豆粕中的抗营养因子，从源头上降低对罗非鱼内质网的损伤，复合酶酶解结合乙醇和表面活性剂提取姜黄素有效提高姜黄素的提取率，麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖对姜黄素、番茄红素和维生素E进行混合包埋，有效提高姜黄素、番茄红素和维生素E的稳定性和有效性，协同清除罗非鱼体内的活性自由基，减少罗非鱼内质网损伤。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，所述饲料由以下重量份的原料制备得到：
玉米25-40重量份、鱼粉17-26重量份、虾壳8-15重量份、花生饼18-25重量份、酶解豆粕57-65重量份、缓释料5-12重量份、酵母硒0.8-1.3重量份、包覆液4-5重量份。
作为本发明的一种优选技术方案，所述酶解豆粕的制备方法包括以下步骤：
将豆粕粉碎后加入去离子水，升温至50-55℃，加入木瓜蛋白酶和蛋白酶K，搅拌条件下恒温酶解1-2h，得到酶解豆粕。
作为本发明的一种优选技术方案，所述豆粕和去离子水的体积比为2-3∶1-2，所述木瓜蛋白酶的终浓度为0.1-0.2mg/mL，所述蛋白酶K的终浓度为0.3-0.4mg/mL。
作为本发明的一种优选技术方案，所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至38-43℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解50-80min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为20-50％，然后加入阴离子表面活性剂，超声条件下升温至40-50℃提取30-50min，得到混合料；
(4)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至40-45℃后搅拌5-8h，得到混悬液；
(5)将混悬液低温喷雾干燥得到缓释料。
作为本发明的一种优选技术方案，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶15-22∶0.1-0.2∶0.2-0.3∶0.08-0.12∶3-5∶12-16∶0.1-0.3∶0.08-0.15∶1-2∶1-2∶2-3。
作为本发明的一种优选技术方案，所述阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠按质量比1-2∶2-3组成的混合物。
作为本发明的一种优选技术方案，所述低温喷雾干燥的温度为40-50℃，进料速度为300-380mL/h。
上述的预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒，然后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、喷包覆液，得到饲料。
进一步地，所述包覆液为豆油和鱼油中的至少一种。
进一步地，所述喷包覆液过程中的工作压力为0.3-0.6MPa。
本发明的有益效果：
(1)本发明将豆粕采用木瓜蛋白酶和蛋白酶K酶解，木瓜蛋白酶和蛋白酶K可协同降低豆粕中的抗营养因子，不仅促进饲料中的营养物质的吸收利用，同时，抗营养因子中的抗维生素因子减少有利于饲料中的维生素类物质的充分利用，补维生素的抗氧化活性可清除罗非鱼体内活性自由基，不仅从源头上降低对罗非鱼内质网的损伤，也预防后续罗非鱼内质网的损伤；
(2)本发明采用半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶可协同提高对姜黄的酶解效率，促进姜黄细胞壁的破裂和水解，提高姜黄素的脱出，利于后续姜黄素的提取；
(3)相比较于单纯的酶解提取姜黄素或者单纯的乙醇超声提取姜黄素，本发明采用酶解结合乙醇超声提取的方式提取姜黄中的姜黄素，其收率明显提高；
(4)本发明在乙醇超声提取姜黄素过程中加入两种阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，表面活性剂具有双亲结构，加入表面活性剂能明显降低表面张力，使原料易被润湿，有利于溶剂渗入细胞内部，从而提高有效成分的浸出，同时，姜黄素表面带有正电荷，阴离子表面活性剂表面带有负电荷，两者之间的相互作用力进一步促进姜黄素的脱出溶解，选用十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，两者表面具备不同的阴离子可以协同提高姜黄素的脱出溶解，协同提高姜黄素的收率；
(5)本发明选用番茄红素、维生素E和姜黄素作为饲料中的抗氧化成分，同时选用麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖混合对抗氧化成分进行包埋，采用低温喷雾干燥的方式进行干燥成型，麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖互相促进互相配合提高对抗氧化成分的包埋效率，提高抗氧化成分的稳定性和利用率，番茄红素、维生素E和姜黄素协同促进对罗非鱼体内的活性自由基的清除，减少内质网损伤。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为实现预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合实施例，对依据本发明的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如下。
实施例1
一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，所述饲料由以下重量份的原料制备得到：
玉米28重量份、鱼粉22重量份、虾壳10重量份、花生饼21重量份、酶解豆粕60重量份、缓释料8重量份、酵母硒1重量份、包覆液4重量份。
所述酶解豆粕的制备方法包括以下步骤：
将豆粕粉碎后按照体积比2：1加入去离子水，升温至52℃，加入木瓜蛋白酶和蛋白酶K，控制木瓜蛋白酶的终浓度为0.18mg/mL，控制蛋白酶K的终浓度为0.32mg/mL，搅拌条件下恒温酶解1.5h，得到酶解豆粕。
所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至39℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解60min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为30％，然后加入质量比为2∶3的十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，超声条件下升温至45℃提取35min，得到混合料；
(4)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至42℃后搅拌7h，得到混悬液；
(5)将混悬液在42℃温度下以350mL/h的进料速度喷雾干燥得到缓释料。
所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶16∶0.1∶0.2∶0.1∶4∶14∶0.2∶0.11∶2∶1∶3。
上述的预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒，然后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、在0.5MPa工作压力下喷包覆液豆油，得到饲料。
实施例2
一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，所述饲料由以下重量份的原料制备得到：
玉米32重量份、鱼粉18重量份、虾壳12重量份、花生饼18重量份、酶解豆粕58重量份、缓释料6重量份、酵母硒0.9重量份、包覆液5重量份。
所述酶解豆粕的制备方法包括以下步骤：
将豆粕粉碎后按照体积比1∶1加入去离子水，升温至55℃，加入木瓜蛋白酶和蛋白酶K，控制木瓜蛋白酶的终浓度为0.2mg/mL，控制蛋白酶K的终浓度为0.4mg/mL，搅拌条件下恒温酶解1h，得到酶解豆粕。
所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至42℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解60min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为50％，然后加入质量比为1∶3的十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，超声条件下升温至48℃提取40min，得到混合料；
(4)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至45℃后搅拌6h，得到混悬液；
(5)将混悬液在42℃温度下以350mL/h的进料速度喷雾干燥得到缓释料。
所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶17∶0.2∶0.3∶0.09∶4∶15∶0.3∶0.12∶1∶2∶2。
上述的预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒，然后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、在0.6MPa工作压力下喷包覆液鱼油，得到饲料。
实施例3
一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，所述饲料由以下重量份的原料制备得到：
玉米40重量份、鱼粉25重量份、虾壳8重量份、花生饼25重量份、酶解豆粕65重量份、缓释料12重量份、酵母硒1.3重量份、包覆液5重量份。
所述酶解豆粕的制备方法包括以下步骤：
将豆粕粉碎后按照体积比3：2加入去离子水，升温至50℃，加入木瓜蛋白酶和蛋白酶K，控制木瓜蛋白酶的终浓度为0.15mg/mL，控制蛋白酶K的终浓度为0.35mg/mL，搅拌条件下恒温酶解2h，得到酶解豆粕。
所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至40℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解80min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为20％，然后加入质量比为1∶2的十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，超声条件下升温至40℃提取50min，得到混合料；
(4)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至40℃后搅拌5h，得到混悬液；
(5)将混悬液在40℃温度下以380mL/h的进料速度喷雾干燥得到缓释料。
所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3。
上述的预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒，然后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、在0.3MPa工作压力下喷包覆液鱼油，得到饲料。
对比例1
在实施例3基础上，酶解豆粕过程中，只加入蛋白酶K，控制蛋白酶K的终浓度为0.5mg/mL，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例2
在实施例3基础上，酶解豆粕过程中，只加入木瓜蛋白酶，控制木瓜蛋白酶的终浓度为0.5mg/mL，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例3
在实施例3基础上，不对豆粕进行酶解，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例4
在实施例3基础上，酶解姜黄过程中，只加入纤维二糖酶和果胶酯酶，所述姜黄碎料、去离子水、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.4∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例5
在实施例3基础上，酶解姜黄过程中，只加入半乳糖醛酸酶和果胶酯酶，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.4∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例6
在实施例3基础上，酶解姜黄过程中，只加入半乳糖醛酸酶和纤维二糖酶，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.42∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例7
在实施例3基础上，所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至40℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解130min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为20％，搅拌后过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至40℃后搅拌5h，得到混悬液；
(4)将混悬液在40℃温度下以380mL/h的进料速度喷雾干燥得到缓释料。
所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3。
其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例8
在实施例3基础上，所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土等杂质，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入质量浓度为20％的乙醇溶液，然后加入质量比为1∶2的十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，超声条件下升温至40℃提取130min，得到混合料；
(3)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至40℃后搅拌5h，得到混悬液；
(4)将混悬液在40℃温度下以380mL/h的进料速度喷雾干燥得到缓释料。
所述姜黄碎料、乙醇溶液、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3。
其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例9
在实施例3基础上，乙醇超声提取姜黄素过程中，只加入十二烷基硫酸钠，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例10
在实施例3基础上，乙醇超声提取姜黄素过程中，只加入十二烷基苯磺酸钠，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例11
在实施例3基础上，缓释料制备过程中，不加入番茄红素，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.25∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例12
在实施例3基础上，缓释料制备过程中，不加入维生素E，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.25∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例13
在实施例3基础上，不包含姜黄素提取的工艺，缓释料制备过程中，不加入姜黄素，所述大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为13∶0.1∶0.15∶2∶2∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例14
在实施例3基础上，缓释料制备过程中，不加入麦芽糊精，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶4∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例15
在实施例3基础上，缓释料制备过程中，不加入阿拉伯胶，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精和壳聚糖的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶4∶3，其他配方和工艺与实施例3相同。
对比例16
在实施例3基础上，缓释料制备过程中，不加入壳聚糖，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精和阿拉伯胶的质量比为10∶20∶0.1∶0.3∶0.12∶5∶13∶0.1∶0.15∶2∶5，其他配方和工艺与实施例3相同。
性能测试
将罗非鱼驯化一周后，挑选体格健壮、规格整齐(均重为5±0.03g)的罗非鱼幼鱼760尾，随机分成19组，分别投喂实施例1-3和对比例1-16中的饲料，每组2个重复，每个重复20尾。试验鱼于38个水族箱中(圆柱形，装水量80L)养殖，每日投喂3次(时间分别在7:30、12:30、17:30)，饱食投喂，养殖期为8周。每天定时(7:30和17:30)测定水族箱内水体的水温、溶氧和pH，并定期测定水质。养殖期间，采取自然光照条件(昼夜比为10h∶14h)，水温控制在(27±3)℃，每天换水约1/3，保持水体pH值为7.5-8.0，溶解氧含量大于5mg/L，氨氮含量小于0.4mg/L，亚硝酸盐含量小于0.06mg/L。养殖试验结束，禁食24h，将鱼用浓度为100mg/L的MS-222(Sigma，美国)麻醉，置于冰盘上解剖取其肝脏样品于液氮中保存、待测。测得每组罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线如下表1所示，其中同行上标没有相同字母表示差异显著(P＜0.05)：
表1
由以上测试结果可知，对比例1-2分别在实施例3基础上只添加蛋白酶K和木瓜蛋白酶对豆粕进行酶解，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线有所升高；对比例3在实施例3基础上不对豆粕进行酶解，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线明显升高；对比例4-6在实施例3基础上分别不添加半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酶对姜黄进行酶解，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线有所升高；对比例7-8在实施例3基础上分别只对姜黄进行酶解和乙醇超声提取，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线有所升高；对比例9-10在实施例3基础上分别在乙醇超声提取姜黄素过程中只加入十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线有所升高；对比例11-13在实施例3基础上在缓释料制备过程中分别不加入番茄红素、维生素E和姜黄素，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线明显升高；对比例14-16在实施例3基础上在缓释料制备过程中分别不加入麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，其罗非鱼肝脏内质网应激蛋白表达的影响线明显升高。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简介修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，其特征在于，所述饲料由以下重量份的原料制备得到：
玉米25-40重量份、鱼粉17-26重量份、虾壳8-15重量份、花生饼18-25重量份、酶解豆粕57-65重量份、缓释料5-12重量份、酵母硒0.8-1.3重量份、包覆液4-5重量份；
所述酶解豆粕的制备方法包括以下步骤：
将豆粕粉碎后加入去离子水，升温至50-55℃，加入木瓜蛋白酶和蛋白酶K，搅拌条件下恒温酶解1-2h，得到酶解豆粕；
所述缓释料的制备方法包括以下步骤：
(1)取姜黄筛分除去石块杂土，粉碎后得到姜黄碎料；
(2)在避光条件下，往姜黄碎料中加入去离子水，升温至38-43℃，加入半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶和果胶酯酶，搅拌条件下恒温酶解50-80min；
(3)酶解结束后，加入无水乙醇至乙醇的质量浓度为20-50％，然后加入阴离子表面活性剂，超声条件下升温至40-50℃提取30-50min，得到混合料；
(4)混合料过滤后取滤液，在滤液中加入大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖，升温至40-45℃后搅拌5-8h，得到混悬液；
(5)将混悬液低温喷雾干燥得到缓释料；
所述阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠按质量比1-2:2-3组成的混合物。
2.根据权利要求1所述的一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，其特征在于，所述豆粕和去离子水的体积比为2-3:1-2，所述木瓜蛋白酶的终浓度为0.1-0.2mg/mL，所述蛋白酶K的终浓度为0.3-0.4mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，其特征在于，所述姜黄碎料、去离子水、半乳糖醛酸酶、纤维二糖酶、果胶酯酶、阴离子表面活性剂、大豆油、番茄红素、维生素E、麦芽糊精、阿拉伯胶和壳聚糖的质量比为10:15-22:0.1-0.2:0.2-0.3:0.08-0.12:3-5:12-16:0.1-0.3:0.08-0.15:1-2:1-2:2-3。
4.根据权利要求1所述的一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料，其特征在于，所述低温喷雾干燥的温度为40-50℃，进料速度为300-380mL/h。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
取玉米、鱼粉、虾壳和花生饼粉碎后，加入酶解豆粕、缓释料和酵母硒，然后水蒸气调质得到调质混合料，制粒、干燥、喷包覆液，得到饲料。
6.根据权利要求5所述的一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，其特征在于，所述包覆液为豆油和鱼油中的至少一种。
7.根据权利要求5所述的一种预防豆粕诱发罗非鱼内质网损伤的饲料的制备方法，其特征在于，所述喷包覆液过程中的工作压力为0.3-0.6MPa。
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