CN116783190A

CN116783190A - N-(苯基氨基羰基)四氢异喹啉及相关化合物作为gpr65的调节剂

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Publication number: CN116783190A
Application number: CN202180058201.5A
Authority: CN
Inventors: 汤姆·麦卡西; 加文·米尔恩; 托比亚斯·默歇尔; 艾伦·内勒
Original assignee: Patios Treatment Co ltd
Current assignee: Patios Treatment Co ltd
Priority date: 2020-06-05
Filing date: 2021-06-04
Publication date: 2023-09-19
Also published as: GB202103704D0

Abstract

本发明涉及式(Ia)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：环A为5元或6元单环芳环或杂芳环，或9元或10元双环芳环或杂芳环，其各自任选地被选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R_11′、OH、SO₂‑烷基、CO₂‑烷基、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R_11′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基中的一个或多个取代基取代；Y和Z各自独立地是CR₁₀R_10′，其中R₁₀和R_10′各自独立地选自H、F、烷基和卤代烷基；R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且R₁₁和R_11′各自独立地选自H、烷基、卤代烷基、COR₁₂和SO₂R₁₃，其中R₁₂和R₁₃均为烷基；其中，所述化合物不是：N‑(3,4‑二氯苯基)‑7,8‑二氢吡啶并[4,3‑d]嘧啶‑6(5H)‑甲酰胺；N‑(3,4‑二氯苯基)‑5,8‑二氢吡啶并[3,4‑d]嘧啶‑7(6H)‑甲酰胺；N‑(4‑氯‑3‑(三氟甲基)苯基)‑3,4‑二氢异喹啉‑2(1H)‑甲酰胺；N‑(3,4‑二氯苯基)‑3,4‑二氢异喹啉‑2(1H)‑甲酰胺；N‑(3,4‑二氯苯基)‑6,7‑二氢异噁唑并[4,5‑c]吡啶‑5(4H)‑甲酰胺；和N‑(3,4‑二氯苯基)‑4‑甲基‑6,7‑二氢噻吩并[3,2‑c]吡啶‑5(4H)‑甲酰胺。本发明的其它方面涉及此类化合物用于免疫肿瘤学、免疫学和相关应用领域。

Description

N-(苯基氨基羰基)四氢异喹啉及相关化合物作为GPR65的调节剂

技术领域

本发明涉及能够调节GPR65的化合物。所述化合物在治疗多种病症(包括增殖性病症和免疫性病症)方面具有潜在的治疗应用。

背景技术

GPR65是Gs偶联G蛋白偶联受体(GPCR)，主要在免疫细胞中表达，并通过酸性细胞外pH激活以引起细胞质环磷酸腺苷(cAMP)的增加(Wang，2004)。人们早就知道，肿瘤通常会经历细胞代谢从氧化磷酸化到有氧糖酵解的转变，这反过来又产生酸性细胞外微环境(Damaghi，2013)。近来，已经表明这种酸性微环境引发肿瘤相关巨噬细胞中的GPR65活化，使得细胞质cAMP增加，导致可诱导的cAMP早期阻遏因子(ICER)的转录。这反过来又抑制了肿瘤坏死因子α(TNFa)的分泌，使巨噬细胞偏向抗炎、肿瘤容许表型(Bohn，2018)。因此，这种GPR65依赖性途径似乎代表了肿瘤利用其酸性微环境逃避免疫系统检测的机制。

自身免疫性疾病(diseases)通常也与酸性局部微环境(例如，发炎的关节)有关。最近的研究还表明，GPR65通过CD4+T细胞中的ICER起作用，以抑制IL-2，从而使细胞偏向炎性Th17表型，这与自身免疫性疾病情况下的致病性增加有关(Korn，2009)。支持这一点的是，最近发现：ICER是Th17分化所必需的(Yoshida,2016)，以及GPR65的激动作用导致Th17分化的增加(Hernandez，2018)。事实上，GPR65位点的突变与若干种自身免疫性疾病有关，例如多发性硬化症、强直性脊柱炎、炎症性肠病和克罗恩病(Gaublomme，2015)。最近的一项研究发现，具有缺乏GPR65的CD4+T细胞的小鼠得到保护从而免于患上自身免疫性脑脊髓炎(EAE)这种疾病(Gaublomme，2015)。

因此，GPR65似乎通过ICER起作用，以促进肿瘤相关巨噬细胞中的抗炎和肿瘤容许表型以及与自身免疫性疾病相关的CD4+T细胞中的炎性Th17表型。因此，GPR65信号传导代表了用于治疗癌症和自身免疫性疾病的治疗干预的有吸引力的途径。因此，不断需要开发新的小分子GPR65调节剂。

本发明旨在提供能够调节GPR65的化合物。如从上述讨论中可以清楚看出的，这些化合物在治疗多种病症方面具有潜在的治疗应用，包括增殖性病症和免疫性病症以及哮喘和慢性阻塞性肺疾病。

发明内容

本发明的第一方面涉及式(Ia)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，

其中：

环A为5元或6元单环芳环或杂芳环，或9元或10元双环芳环或杂芳环，其各自任选地被选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、SO₂-烷基、CO₂-烷基、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基中的一个或多个取代基取代；

Y和Z各自独立地选自CH₂和CR₁₀R₁₀′，其中R₁₀和R₁₀′各自独立地选自H、F、烷基和卤代烷基；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H、烷基、卤代烷基、COR₁₂和SO₂R₁₃，其中R₁₂和R₁₃均为烷基；

其中，所述化合物不是：

N-(3,4-二氯苯基)-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酰胺；

N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢异噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺；或

N-(3,4-二氯苯基)-4-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺。

有利地，目前要求保护的化合物能够调节GPR65，从而使化合物在治疗各种病症中具有治疗意义，例如在肿瘤学、免疫肿瘤学和免疫学领域。

本发明的第二方面涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用作药物的用途，

其中：

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H、烷基、卤代烷基、COR₁₂和SO₂R₁₃，其中R₁₂和R₁₃均为烷基。

本发明的另一方面涉及如上所述式(I)的化合物在治疗或预防选自增殖性病症、免疫性病症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症中的用途。

本发明的另一方面涉及一种药物组合物，该药物组合物包括如上所述的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

本发明的另一方面涉及如上所述的化合物或药物组合物用作药物的用途。

本发明的另一方面涉及如上所述的化合物或药物组合物在治疗或预防选自增殖性病症、免疫性病症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症中的用途。

本发明的另一方面涉及治疗病症的方法，包括向受试者施用如上所述的化合物或药物组合物。

详细说明

本发明涉及能够调节GPR65的化合物。

“烷基”在本文中定义为直链或支链的烷基自由基，优选C_1-20烷基，更优选C_1-12烷基，甚至更优选C_1-10烷基或C_1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基。更优选地，烷基为C_1-3烷基。

本文所用的术语“芳基”是指C_6-12芳族基团，其可以是苯并稠合基团，例如苯基或萘基。优选地，芳基是苯基。

“卤代烷基”在本文中定义为如上所述定义的直链或支链的烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基，所述烷基基团被一个或多个卤素原子(可以是相同或不同的)取代，例如氟、氯、溴和碘。优选地，卤代烷基为C_1-20卤代烷基，更优选为C_1-12卤代烷基，甚至更优选为C_1-10卤代烷基或C_1-6卤代烷基，或C_1-3卤代烷基。优选的实例是CF₃和CHF₂，CF₃是特别优选的。

“烷氧基”在本文中定义为氧原子与上述定义的烷基键合的基团，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。优选地，烷氧基是C_1-20烷氧基，更优选为C_1-12烷氧基，甚至更优选为C_1-10烷氧基或C_1-6烷氧基，或C_1-3烷氧基。优选的实例是甲氧基(-OCH₃)。

“杂芳基”在本文中定义为包括一个或多个杂原子(可以是相同或不同的)的单环或双环C_2-12芳环，所述杂原子例如氧、氮或硫。合适的杂芳基的实例包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、哒嗪基、异噁唑基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基以及它们的苯并衍生物，如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基等；或吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基以及它们的苯并衍生物，如喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基等。

“芳烷基”在本文中定义为被一个或多个如上定义的芳基取代的如上定义的烷基。

式(Ia)化合物

本发明的一个方面涉及式(Ia)化合物：

其中：

Y和Z各自独立地选自CH₂和CR₁₀R₁₀′，其中R₁₀和R_10’各自独立地选自H、F、烷基和卤代烷基；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

优选地，所述化合物不是：

N-(3,4-二氯苯基)-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酰胺；

N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢异噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺；和

优选地，式(Ia)化合物不是本文定义的化合物1、8、11、80或81。

在式(Ia)中以及对于其它方面，优选烷基是C₁-C₆烷基，卤代烷基是C₁-C₆卤代烷基，并且烷氧基是C₁-C₆烷氧基。

在一个实施方案中，A环上的任选取代基选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、SO₂-烷基、CO₂-烷基、烷基和卤代烷基。

在一个实施方案中，本文描述的化合物含有任选取代的与含氮环稠合的5元或6元单环芳环或杂芳环A。任选的取代基选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、SO₂-烷基、CO₂-烷基、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基，其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基中的一个或多个取代基取代。

在一个优选的实施方案中，环A任选地被选自卤代基、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、噻吩基、卤代吡啶基和C₁-C₆卤代烷基的一个或多个取代基取代。更优选地，环A任选地被选自Me、Cl、F、CN、MeO、NH₂、OH、CO₂Me、SO₂Me、噻吩基和氟吡啶基的一个或多个取代基取代。

在某些情况下，环A可以以多种互变异构形式存在。举例来说，其中杂芳环被OH基团取代，环A可以作为两种可能的互变异构体存在，如下所示：

据认为，2-吡啶酮互变异构体主要是固态形式。在溶液中，据认为，两种互变异构体形式之间的能量差是非常小的，并且取决于溶剂的极性。本领域技术人员将理解，其它羟基取代的含N杂芳族基团(例如嘧啶、其它吡啶区域异构体)可以类似地以互变异构形式表示，如上所示。本文所用的术语“杂芳族”包括所述化合物的所有互变异构形式。

在一个优选的实施方案中，与含氮环稠合的单环芳环或杂芳环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、哒嗪、嘧啶、嘧啶酮、吡嗪、三嗪、吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、异噁唑、咪唑、噁唑、噁二唑和噻唑，其各自均可以任选地被取代。

在一个优选的实施方案中，其中所述单环芳环或杂芳环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，其各自均可以任选地被取代。

在一个优选的实施方案中，环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，其各自任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、噻吩基、卤代吡啶基和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，其各自任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A是苯基基团，其任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。在一个优选的实施方案中，环A是苯基基团，其被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A是吡啶基团，其任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A是吡啶酮基团，其任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A是含有1至4个氮原子的9元或10元双环杂芳环，更优选环A是含有1至3个氮原子的9元或10元双环杂芳环。优选地，含有1至4个氮原子的9元或10元双环杂芳环选自三唑并吡啶和咪唑并吡啶，其各自均可以任选地被取代。更优选地，含有1至4个氮原子的9元或10元双环杂芳环选自[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶和咪唑并[1,2-a]吡啶，其各自均任选地被取代。

优选地，9元或10元双环杂芳环任选地被选自卤代基、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、噻吩基、卤代吡啶基和C₁-C₆卤代烷基代的一个或多个取代基取代。更优选地，9元或10元双环杂芳环任选地被选自Me、Cl、F、CN、MeO、NH₂、OH、CO₂Me、SO₂Me、噻吩基和氟吡啶基的一个或多个取代基取代。

优选地，环A如下定义，其中波浪线表示与含N、Z和Y的环的连接：

在一个优选的实施方案中，环A选自：

其中R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、CO₂烷基、SO₂烷基、NR₁₁R₁₁′、任选取代的杂芳基、OH、C₁-C₆烷基、苯基和C₁-C₆卤代烷基，并且R₁₄是H或烷基。

在一个优选的实施方案中，R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、杂芳基、OH、C₁-C₆烷基、苯基和C₁-C₆卤代烷基，并且R₁₄是H或烷基。

在一个优选的实施方案中，R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基和C₁-C₆卤代烷基，并且R₁₄是H或烷基。

更优选地，R₁₄为H或Me，更优选为H。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)、(ii)和(iv)-(xxxiii)。

在一个优选的实施方案中，环A不是(xix)。

在一个优选的实施方案中，环A不是(iii)。

在一个优选的实施方案中，环A不是(vi)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(ii)、(iv)、(v)、(vii)-(xviii)和(xx)-(xxxiii)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)、(ii)、(iv)、(v)、(vii)-(xviii)和(xx)-(xxxiii)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)-(viii)、(ix)、(xi)、(xix)和(xxxii)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)-(viii)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)、(ii)、(vi)、(vii)和(x)。

在一个优选的实施方案中，化合物是式(Ia)-(i)：

其中R₁-R₉、R₁₄、Z和Y如上定义。优选地，对于该实施方案，R₆-R₉中的至少一个不是H。优选地，R₆-R₉中的至少一个选自Cl、F、Me、CN、OMe、OH、CF₃、CO₂Me、SO₂Me和任选取代的杂芳基(更优选地，其中任选取代的杂芳基是氟吡啶基、噁二唑基或噻吩基)。优选地，R₆-R₉中的一个或两个选自Cl、F、Me、CN、OMe、OH、CF₃、CO₂Me、SO₂Me和任选取代的杂芳基(更优选地，其中任选取代的杂芳基是氟吡啶基、噁二唑基或噻吩基)，而R₆-R₉的其余部分是氢。更优选地，R₆-R₉中的一个选自Cl、F、Me、CN、OMe、OH、CF₃、CO₂Me、SO₂Me和任选取代的杂芳基(更优选地，其中任选取代的杂芳基是氟吡啶基、噁二唑基或噻吩基)，而R₆-R₉的其余部分是氢。

在一个优选的实施方案中，化合物是式(Ia)-(ii)：

其中R₁-R₇、R₉、R₁₄、Z和Y如上定义。

在一个优选的实施方案中，化合物是式(Ia)-(iv)：

其中R₁-R₈、R₁₄、Z和Y如上定义。

在一个优选的实施方案中，化合物是式(Ia)-(vii)：

其中R₁-R₆、R₈、R₉、R₁₄、Z和Y如上定义。

在一个优选的实施方案中，化合物是式(Ia)-(x)：

其中R₁-R₆、R₉、R₁₄、Z和Y如上定义。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)、(ii)、(vi)和(vii)。

在一个优选的实施方案中，环A选自基团(i)、(ii)、(vii)和(x)。

在一个优选的实施方案中，环A是(i)。优选地，对于该实施方案，R₆-R₉中的至少一个不是H。

在一个优选的实施方案中，环A是(ii)。

在一个优选的实施方案中，环A是(iii)。

在一个优选的实施方案中，环A是(iv)。

在一个优选的实施方案中，环A是(v)。

在一个优选的实施方案中，环A是(vi)。

在一个优选的实施方案中，环A是(vii)。在一个优选的实施方案中，环A是(viii)。

在一个优选的实施方案中，环A是(x)。

在一个优选的实施方案中，环A是选自基团(xxi)-(xxviii)的含有1至4个氮原子的9元或10元双环杂芳环。

在一个优选的实施方案中，环A是(i)且：

R₇是Cl或F，并且R₆、R₈和R₉均为H；或

R₈为Cl、F、CN、CO₂Me或杂芳基，并且R₆、R₇和R₉均为H；或

R₉是F，并且R₆、R₇和R₈均为H。

在一个优选的实施方案中，环A是(ii)并且：

R₆、R₇和R₉均为H；或

R₇是F或NH₂，并且R₆和R₉是H；或

R₉是F，并且R₆和R₇是H。

在一个优选的实施方案中，R₁₁和R₁₁′选自H和烷基，并且更优选选自H和Me，甚至更优选R₁₁和R₁₁′均为H。

在一个优选的实施方案中，环A是(x)，R₆、R₉和R₁₄均为H。

在一个优选的实施方案中，环A是(vii)，并且R₈是F，R₆和R₉是H。

在一个优选的实施方案中，Y和Z各自独立地选自CH₂、CHMe、CHF、CF₂、C(CH₃)₂、C(CF₃)₂，并且更优选均为CH₂。在一个优选的实施方案中，Z和Y中的一个是CHMe，另一个是CH₂。在一个优选的实施方案中，Y是CHMe，并且Z是CH₂。在一个优选的实施方案中，Z是CHMe，并且Y是CH₂。在更优选的实施方案中，Z和Y均为CH₂。

在一个优选的实施方案中，R₁选自H、卤代烷基和F，更优选H。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN和CF_nH_3-n，其中n为1、2或3。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自Cl、Br和CF_nH_3-n，其中n为1、2或3。在一个优选的实施方案中，n是3。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自Cl和CF₃。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃中的一个是Cl，并且另一个是CF₃。

更优选地，R₂是Cl，并且R₃是CF₃，或R₂是Cl，并且R₃是Cl。

在一个优选的实施方案中，R₄选自H和Cl，并且优选为H。

在一个优选的实施方案中，R₅是H或CF₃，更优选H。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃中的一个是Cl，另一个是CF₃，并且R₁、R₄和R₅均为H。

在一个优选的实施方案中，R₂是Cl，R₃是CF₃，并且R₁、R₄和R₅均为H。

在一个优选的实施方案中，R₃是Cl，R₂是CF₃，并且R₁、R₄和R₅均为H。

在另一优选的实施方案中，R₂和R₃均为Cl，并且R₁、R₄和R₅均为H。

R₆-R₉的以下优选定义适用于本文定义的所有A基团(i)-(xxxiii)。

在一个优选的实施方案中，R₆选自H、Me、F、Cl、OMe和CN。

在一个优选的实施方案中，R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基。更优选R₁₁和R₁₁′均为H。

在一个优选的实施方案中，R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基和CH₃，并且优选为H。

在一个优选的实施方案中，R₇选自H、Cl、F、Me、CN、OMe、CF₃、NH₂、OH和CO₂Me。

在一个优选的实施方案中，R₇选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基。更优选地，R₁₁和R₁₁′均为H。

在一个优选的实施方案中，R₇选自H、NH₂、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃。更优选R₇选自H、NH₂、F和Cl。甚至更优选地，R₇是H。

在一个优选的实施方案中，R₈选自H、CN、F、Cl、OMe、CF₃、NH₂、OH、CO₂Me、SO₂Me、Me和任选取代的杂芳基(更优选氟吡啶基、噻吩基或噁二唑基)。

在一个优选的实施方案中，R₈选自H、F、OH、CN、甲氧基、NR₁₁R₁₁′、苯基、CF₃、CF₂H、NHSO₂CH₃、NHCOCH₃和NHCHF₂，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基。更优选R₁₁和R₁₁′均为H。

在一个优选的实施方案中，R₈选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选选自H、H、Cl和CN。更优选R₈选自F和Cl。

在一个优选的实施方案中，R₈是F。

在一个优选的实施方案中，R₉选自H、F、Cl、Me、CF₃、NH₂、OMe和CN。

在一个优选的实施方案中，R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基。更优选地，R₁₁和R₁₁′均为H。

在一个优选的实施方案中，R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、F和CN。更优选R₉为H。

在一个优选的实施方案中，所述化合物选自以下物质及其药学上可接受的盐和溶剂化物：

/>

式(Ia')和(Ib')的化合物

本发明的一个方面涉及式(Ia')化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，

/>

其中：

环A是5元或6元芳环或杂芳环，其中所述芳环或杂芳环任选被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基的取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被一个或多个各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基的取代基取代；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br和I；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；和

其中所述化合物不是：

N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3-氯苯基)-3,4-二氢-2(1H)-异喹啉甲酰胺；

N-(4-氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(2,4-二氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(2-氯苯基)-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-甲酰胺；或

N-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢-4H-[1,2]噁唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酰胺。

本发明的另一方面涉及式(Ib')化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，

其中：

环A是5元或6元芳环或杂芳环，其中所述芳环或杂芳环任选被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R_11’、OH、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基的取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被一个或多个各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基的取代基取代；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br和I；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；和

R₁₁和R_11′各自独立地选自H、烷基、卤代烷基、COR₁₂和SO₂R₁₃，其中R₁₂和R₁₃均为烷基；

其中当环A是如下结构时：

其中R₆、R₇、R₈和R₉均为H，Z和Y为CH₂，

并且R₂和R₃各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基，R₂和R₃不都是Cl；和

其中当环A是如下结构时：

其中R₁、R₄和R₅均为H，Z和Y为CH₂，R₂和R₃不都是Cl。

在式(Ia')和(Ib')中，优选烷基是C₁-C₆烷基，卤代烷基是C₁-C₆卤代烷基，并且烷氧基是C₁-C₆烷氧基。

在一个优选的实施方案中，任选取代的芳环或杂芳环是苯、吡啶、N-氧化吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、异噁唑、咪唑、噁唑或噻唑环。本文中使用的术语“杂芳族”还包括以互变异构形式存在的部分，例如但不限于吡啶酮、嘧啶酮等。芳环或杂芳环A与相邻的含氮杂环基团稠合以形成稠合双环体系。

优选地，任选取代的芳环或杂芳环是苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪或异噁唑环。

在一个优选的实施方案中，环A是苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪或异噁唑环，其任选被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基和C₁-C₆卤代烷基的取代基取代。

在一个优选的实施方案中，环A选自：

其中R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基和C₁-C₆卤代烷基。

在一个优选的实施方案中，环A选自：

在一个优选的实施方案中，Y和Z各自独立地选自CH₂、CF₂、C(CH₃)₂、C(CF₃)₂，并且优选均为CH₂。

在一个优选的实施方案中，Y是CH₂。

在一个优选的实施方案中，Z是CH₂。

在一个优选的实施方案中，R₁选自H和F，并且优选为H。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN和CF_nH_3-n，其中n为1、2或3，并且优选为3。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自Cl、Br和CF_nH_3-n，其中n为1、2或3，并且优选为3。

在一个优选的实施方案中，R₂和R₃各自独立地选自Cl和CF₃，优选其中R₂和R₃不都是CF₃，并且更优选其中R₂是Cl且R₃是CF₃或者R₂是Cl且R₃是Cl。

在一个优选的实施方案中，R₄选自H和Cl，并且优选为H。

在一个优选的实施方案中，R₅是H。

在一个优选的实施方案中，R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

在一个优选的实施方案中，R₇选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

在一个优选的实施方案中，R₇选自H、NH₂、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、NH₃、F或Cl，并且更优选H。

在一个优选的实施方案中，R₈选自：H、F、OH、CN、甲氧基、NR₁₁R₁₁′、苯基、CF₃、CF₂H、NHSO₂CH₃、NHCOCH₃和NHCHF₂，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

在一个优选的实施方案中，R₈选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选选自H、F、Cl和CN，并且更优选选自F和Cl。

在一个优选的实施方案中，R₈是F。

在一个优选的实施方案中，R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

在一个优选的实施方案中，R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、F和CN，并且R₉更优选H。

在一个特别优选的实施方案中，对于式(Ia')或(Ib')化合物：

环A选自：

Y和Z均为CH₂；

R₁、R₄和R₅均为H；

R₂和R₃各自独立地选自Cl和CF₃，优选其中R₂和R₃不都是CF₃，更优选其中R₂是Cl且R₃是CF₃、或者R₂是Cl且R₃是Cl；

R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基和CH₃，并且优选H；

R₇选自H、NH₂、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、NH₂、F或Cl，并且更优选H；

R₈选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选选自H、F、Cl和CN，并且更优选选自F和Cl；和

R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、F和CN，并且R₉更优选H。

在更优选的实施方案中，对于式(Ia')或(Ib')化合物：

环A选自：

Y和Z均为CH₂；

R₁、R₄和R₅均为H；

R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基和CH₃，并且优选H；

R₇选自H、NH₂、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、NH₂、F和Cl，并且R₇更优选H；

式(Ic')化合物

本发明的另一方面涉及式(Ic′)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，

其中：

环A是5元或6元芳环或杂芳环，

其中所述芳环被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基的取代基取代，并且其中所述芳基或杂芳基取代基又任选地被一个或多个各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基的取代基取代；

其中所述杂芳环不是异噁唑基，并且任选被一个或多个选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基的取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被一个或多个各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基的取代基取代；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br和I；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；和

在一个优选的实施方案中，环A是取代的苯基或任选取代的6元杂芳基。

上面针对式(Ia')和(Ib')定义的优选方面同样适用于式(Ic')化合物。

式(Ic')的示例性化合物包括本文所述的以下化合物：1-9、12-24、27-39、42-47、49-67、70-79和82-87及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

方法

本发明的另一方面涉及制备本文所定义的式(I)、(Ia)、(Ia')、(Ib')或(Ic')化合物的方法，所述方法包括使式(II)化合物与式(III)化合物反应，其中R_1-5、Z、Y和A如上述定义，以形成式(Ia)、(Ia')、(Ib')或(Ic')化合物：

在一个优选的实施方案中，反应在碱的存在下进行，所述碱优选N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)或三乙胺。优选地，反应在有机溶剂中进行。合适的有机溶剂包括但不限于二氯甲烷、四氢呋喃和二甲基甲酰胺，或其两种或更多种的混合物。本领域技术人员将理解，其他碱和溶剂也将是合适的。

治疗应用

本发明的另一方面涉及本文所述的化合物在药物中的用途。如下文更详细描述的，所述化合物在肿瘤学、免疫肿瘤学和免疫学领域具有特殊用途。在优选的实施方案中，本发明的化合物调节GPR65，更优选抑制GPR65信号传导。

本发明的另一方面涉及本文所述的化合物作为药物的用途。

本发明的一个方面涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物作为药物的用途，

其中：

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

环A和基团Y、Z和R_1-13的优选定义如上文针对式(Ia)、(Ia')、(Ib')和(Ic')的化合物所述。

在式(I)中，优选烷基是C₁-C₆烷基，卤代烷基是C₁-C₆卤代烷基，并且烷氧基是C₁-C₆烷氧基。

优选地，式(I)化合物用于治疗或预防选自增殖性病症、自身免疫性病症、哮喘和慢性阻塞性肺疾病的疾病或病症。

本发明的一个优选的实施方案涉及本文所述的化合物用于治疗或预防选自增殖性病症和免疫性病症的病症的用途。

本发明的另一优选的实施方案涉及本文所述的用于治疗或预防哮喘和/或慢性阻塞性肺疾病(COPD)的化合物。GPR65变体/SNP(rs6574978)已被证明与具有几乎GWAS显著p值(1.18x10e-7)的哮喘/COPD综合征相关(Hardin 2014)。此外，由pH值产生的GPR65活化(哮喘肺中的pH值低/酸性)以cAMP依赖的方式促进嗜酸性粒细胞的生存能力，从而导致疾病进展/加重。还已知GPR65KO小鼠具有减轻的哮喘症状(Kottyan 2009)。

本发明的另一方面涉及本文所述的化合物用于治疗或预防急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的用途。已经证明GPR65在LPS诱导的急性肺损伤模型中具有保护作用(Tsurumaki2015)。

本发明的一个方面涉及本文所述的化合物用于治疗增殖性病症的用途。优选地，增殖性病症是癌症或白血病。

在一个优选的实施方案中，癌症是实体瘤和/或其转移瘤。

在另一优选的实施方案中，癌症选自如下：黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、胃癌、急性髓细胞性白血病(AML)、胰腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、结直肠癌、头颈癌、结直肠腺癌、肺癌、肉瘤、卵巢癌和神经胶质瘤，优选胶质母细胞瘤(GBM)。

不希望受到理论的束缚，认为GPR65调节剂能够防止肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、自然杀伤(NK)细胞和T细胞亚群中细胞质cAMP的增加，这通常是由于它们暴露于酸性肿瘤微环境和伴随的GPR65活化而导致的。细胞质cAMP水平的这种降低进而又降低了ICER促炎介质(如CXCL10和TNFα)的水平，防止TAM的极化以及与非炎症和肿瘤容许环境相关的其他免疫细胞的改变。因此，GPR65调节剂有望使得肿瘤对免疫系统的可见性增加，从而提高免疫介导的肿瘤清除。这提示了作为单独疗法、或与癌症免疫疗法(疫苗、促进T细胞介导免疫应答的试剂)的联用、或在对免疫调节方法(如PD1/PDL-1阻断)无反应的患者中，调节GPR65活性可能会是癌症治疗的有效方法。

本发明的另一方面涉及本文所述的化合物用于治疗免疫性病症、优选自身免疫性疾病的用途。

在一个实施方案中，自身免疫性疾病选自：银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)、葛瑞夫兹氏病、葡萄膜炎(包括中间葡萄膜炎)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、自身免疫性葡萄膜视网膜炎、系统性血管炎、多发性肌炎皮肌炎、系统性硬化症(硬皮病)、干燥综合征、强直性脊柱炎和相关的脊柱关节病、结节病、自身免疫性溶血性贫血、免疫性血小板病症和自身免疫性多内分泌腺病和自身免疫性心肌炎、I型糖尿病和特应性皮炎。

在特别优选的实施方案中，自身免疫性疾病选自银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病和多发性硬化症(MS)。

不希望被理论束缚，认为GPR65调节剂将阻止CD4+T细胞中ICER的上调。反过来，这有望阻止ICER相关的IL-2抑制，该抑制使CD4+T细胞偏向在自身免疫性疾病情况下与致病性增加相关的炎性Th17表型。GPR65基因座的突变与多种自身免疫性疾病相关，如多发性硬化症、强直性脊柱炎、炎症性肠病和克罗恩病，这一事实支持了这一点(Gaublomme，2015)。这表明调节GPR65活性可能是治疗自身免疫性疾病的有效方法。

另一方面涉及本文所述的化合物用于治疗或预防由针对GPR65的异常活性引起的、与针对GPR65的异常活性相关或伴随针对GPR65的异常活性的病症

另一方面涉及本文所述的化合物用于治疗或预防GPR65相关疾病或病症的用途。

本发明的另一方面涉及治疗如上所述疾病的方法，包括向受试者施用本文所述的化合物。

本发明的另一方面涉及治疗受试者的GPR65相关疾病或病症的方法。根据本发明这一方面的方法通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明化合物来实现，如上所述，或者是本发明化合物本身、或者更优选如下文所述作为药物组合物的一部分与例如药学上可接受的载体混合。

本发明的另一方面涉及具有通过调节GPR65而缓解受试者病情的治疗方法，其中该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明化合物。

另一方面涉及通过调节GPR65而缓解病情的治疗方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明化合物。

优选地，受试者是哺乳动物，更优选地是人。

术语“方法”是指用于完成给定的任务的方式、手段、技术和过程，其包括(但不限于)那些已知的方式、手段、技术和过程，或者易于被化学、药学、生物学、生物化学和医学领域的技术人员由已知的方式、手段、技术和过程开发出的方式、手段、技术和过程。

在本文中，术语“治疗”包括消除、基本抑制、减缓、或者逆转疾病或病症的发展，基本上改善疾病或病症的临床症状，或者基本上预防疾病或病症的临床症状的出现。

在本文中，术语“预防”是指起初防止生物体产生病症或疾病的方法。

术语“治疗有效量”是指所施用的化合物的量将在一定程度上减轻所治疗的疾病或病症的一种或以上症状。

对在本发明中所使用的任何化合物而言，治疗有效量在本文中还指有效治疗剂量，其可以通过细胞培养试验来初步估计。例如，可以对动物模型制定一定剂量以达到循环浓度范围，其包括通过细胞培养而确定的IC₅₀或IC₁₀₀。这些信息可以用来更加准确地确定用于人类的有用剂量。初始剂量还可以通过体内数据来估计。利用这些初步的指导，本领域的普通技术人员就能够确定用于人类的有效剂量。

此外，通过在细胞培养物或者实验动物中所进行的标准制药程序(例如通过确定LD₅₀和ED₅₀)可以确定本文所描述的化合物的毒性和疗效。毒性和疗效之间的剂量比为治疗指数，并且可以表示为LD₅₀与ED₅₀之间的比值。表现出高治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养试验和动物研究中所获得的数据可以用于制定对于人类使用中不产生毒性的剂量范围。所述化合物的剂量优选在只有少量毒性或者没有毒性的循环浓度(包括ED₅₀)的范围之内。剂量可以根据所使用的剂型和所使用的施用途经而在该范围内变化。准确的剂型、施用途经和剂量可以由私人医生根据患者的情况来选择(见(例如)Fingl et al,1975,The Pharmacological Basis of Therapeutics,chapter1,page 1(治疗学的药理基础(1975)，第一章，第一页))。

剂量和间隔可单独调节，以提供足以维持具有疗效的活性化合物的血浆水平。口服施用的通常患者剂量范围为约50-2000mg/日，通常约100-1000mg/日，优选约150-700mg/日，最优选约250-500mg/日或50-100mg/日。优选地，将通过每日施用多个剂量来实现具有疗效的血清水平。在局部施用或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。本领域技术人员将能够在没有过度实验的情况下优化具有疗效的局部剂量。

如本文所用，“GPR65相关疾病或病症”是指表征为不适当GPR65活性的疾病或病症。例如，与健康受试者的活性相比，不适当的GPR65活性是指通过酶或细胞试验测定的GPR65活性的增加或减少。与健康相邻组织相比，GPR65在患病组织中的过度表达也可能导致不适当的活性。

本文所述化合物可用于治疗或预防的优选疾病或病症包括上文所述的增殖性病症和免疫性病症，以及哮喘和慢性阻塞性肺疾病。

本发明进一步提供了本文所定义的化合物在制备用于治疗需要调节GPR65的疾病的药物中的用途。此类疾病包括上文所述的增殖性病症和免疫性病症，以及哮喘和慢性阻塞性肺疾病。

如本文所用，短语“药物的制备”包括本发明的组分直接作为药物的用途，以及它们在制备这种药物的任何阶段中的用途。

在一个优选的实施方案中，该化合物防止了在酸性pH下GPR65活化后预期的细胞质cAMP水平的增加。预期防止这种cAMP累积反过来防止了不希望的通过ICER的下游信号传导，如所附实施例部分所述。如下所述的“人GPR65环磷酸腺苷(cAMP)均相时间分辨荧光(HTRF)拮抗剂检测”或简称“cAMP检测”可用于测定GPR65调节剂的效力，其表示为将GPR65活化时cAMP浓度的增加减少50％所需的化合物浓度(即IC₅₀)。

在一个优选的实施方案中，化合物在cAMP检测中表现出的IC₅₀值小于约25μM。更优选地，该化合物在cAMP检测中表现出的IC₅₀值小于约10μM，更优选地小于约5μM，甚至更优选地小于约1μM，进一步更优选地小于约0.1μM。

在另一个优选的实施方案中，在上述检测中，化合物表现出的hGPR65 IC₅₀值小于<5μM，更优选小于<500nM。

在一个优选的实施方案中，根据本发明的化合物、或根据本发明用途的化合物选自以下物质及其药学上可接受的盐和溶剂化物：

/>

可选地，根据本发明或根据本发明用途的优选化合物为如下所述物质及其药学上可接受的盐和溶剂化物：

/>

在一个优选的实施方案中，根据本发明的化合物或根据本发明用途的化合物选自：1、5-7、10-17、19、25-27、29-33、35-45、47-55、57-61、63、64、66、67、71、74、76、79-83、85-91、93、96、98、101-104、106、108、109、112-114、117-118、120、123、126、129和131-140。

在更优选的实施方案中，根据本发明的化合物或根据本发明用途的化合物选自：14、30、31、33、36、37、39-44、52-54、74、76、79、82、83、85、93、104、106、108、109、112-114、117、120、123和140。

本发明的另一方面涉及式(I')化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用作药物的用途：

/>

其中：

环A为5元或6元芳环或杂芳环，其中所述芳环或杂芳环任选地被选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基、芳烷基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代，并且其中所述芳基和杂芳基取代基又任选地被各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN、烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、烷基、卤代烷基和芳烷基中的一个或多个取代基取代；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、和I；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；且

A、Z、Y、R₁-R₅的优选定义如上文针对式(I)、(Ia)、(Ia')和(Ib')所述。

药物组合物

对于根据本发明的用途，可将本文所述的化合物、或其生理学上可接受的盐、酯或其他生理学功能衍生物制备成药物制剂，该药物制剂包含所述化合物或其生理学上可接受的盐、酯或其他生理学功能衍生物、以及一种或以上药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂和任选的其他治疗性和/或预防性成分。从与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上而言，一种或多种载体必须是可接受的。药物组合物可用于人类医学和兽医学中的人类或动物用途。

用于本文所述的各种不同形式的药物组合物的此类合适的赋形剂的实例可见于由A Wade和PJ Weller编辑的“Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手册)，第2版，(1994)”。从与制剂的其他成分相容并且对接受者无害的意义上而言，载体、或者如果存在多于一种载体的话则每种载体必须是可接受的。

用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域中是公知的，并且描述于(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，马克(Mack)出版公司(A.R.Gennaro编辑，1985)。

合适的载体的实例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨醇等。合适的稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。

药物载体、赋形剂或稀释剂的选择可以根据预期的施用途径和标准药学实践来选择。药物组合物可包含一种或多种任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂、缓冲剂、增香剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等、以及为了使制剂与预期接受者的血液等渗而包含的物质作为载体、赋形剂或稀释剂，或者药物组合物除载体、赋形剂或稀释剂之外还包含一种或多种任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂、缓冲剂、增香剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等、以及为了使制剂与预期接受者的血液等渗而包含的物质。

合适的黏合剂的实例包括淀粉、明胶、天然糖类(例如葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖、玉米增味剂)、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素和聚乙二醇。

合适的润滑剂的实例包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。

药物组合物中可以加入防腐剂、稳定剂、染料、甚至增香剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。还可以使用抗氧化剂和悬浮剂。

药物制剂包括适合经口施用、局部施用(包括经皮肤、口腔和舌下施用)、经直肠或胃肠外施用(包括经皮下、皮内、肌内和静脉施用)、经鼻腔和肺部施用(例如通过吸入施用)的药物制剂。在适当的情况下，制剂可方便地以离散剂量单位的形式提供，并且可通过药学领域公知的任意方法进行制备。所有的方法包括将活性化合物与液体载体和/或细碎的固体载体结合的步骤，然后如有必要，将产品成形成为所需制剂。

适合于经口施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量制剂的形式(如各自含预定量活性化合物的丸药、胶囊或片剂)提供。片剂可通过任选地与一种或以上附加成分一起压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性化合物可任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过将活性化合物与惰性液体稀释剂模压得到。可以任选地将片剂包衣，并且如果没有包衣的话，可任选地将其刻痕。胶囊可通过下列方法制备：将活性化合物单独或与一种或以上附加成分的混合物填入胶囊壳中，然后以通常方式将其密封。扁囊剂类似于胶囊，其中活性化合物以及任意一种或多种附加成分密封在米纸套中。活性化合物也可配制为分散性颗粒，其(例如)可在施用前悬浮在水中，或洒在食物上。胶囊可被封装在(例如)小袋中。其中载体为液体的适合于经口施用的制剂可作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液的形式、或作为水包油型液体乳剂的形式提供。

用于经口施用的制剂包括控释剂型(例如片剂)，其中活性化合物被配制在适当的控释基质中、或用合适的控释膜进行包衣。此类制剂会特别便于预防性用途。

适合经直肠施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量栓剂的形式提供。合适的载体包括本领域常用的可可脂和其他材料。可以方便地通过将活性化合物与一种或多种软化或熔化的载体混合，然后冷却并且在模具中成形来形成栓剂。适合经胃肠外施用的药物制剂包括活性化合物在水性或油质载体中的无菌溶液或悬浮液。

可注射制剂可适合于团注或连续输注。此类制剂方便地提供于单位剂量或多剂量容器中，在引入制剂后密封该容器直至需要使用。可供选择地，活性化合物可为粉末形式，其在使用前用合适的载体如无菌、无热原水重构。

也可将活性化合物配制成长效储存型制剂(long-acting depot preparation)，该制剂可通过肌内注射或通过植入(例如经皮下或肌内植入)来施用。储存型制剂可包括(例如)合适的聚合材料或疏水材料、或离子交换树脂。此类长效制剂特别便于预防性用途。

提供了适合于经颊间隙进行肺部施用的制剂，使得含有活性化合物并且理想地直径范围为0.5微米至7微米的颗粒在接受者的支气管树中递送。

作为一种可能性，此类制剂为细碎粉末形式，其可便于提供在用于吸入装置的可穿透胶囊(例如，合适的明胶的胶囊)中，或者以自推进制剂的形式提供，该制剂包含活性化合物、合适的液体或气体推进剂和任选的其他成分，如表面活性剂和/或固体稀释剂。合适的液体推进剂包括丙烷和含氯氟烃，并且合适的气体推进剂包括二氧化碳。也可使用其中活性化合物以溶液或悬浮液的液滴形式分配的自推进制剂。

此类自推进制剂类似于本领域已知的自推进制剂，并且可通过已确立的程序进行制备。适当地，自推进制剂提供于容器中，该容器设置有具有所需喷雾特性的可手动操作的阀或自动运行的阀；有利地，阀是计量型的，从而在阀的每次运行时递送固定的体积，例如25微升至100微升。

作为另一种可能性，活性化合物可为用于喷雾器或雾化器的溶液或悬浮液的形式，由此采用加速气流或超声搅拌以产生用于吸入的细液滴雾。

适合经鼻腔施用的制剂包括大致与上述肺部施用制剂相似的制剂。当分配此类制剂时，该制剂应当理想地具有10微米至200微米的范围内的粒径以能够在鼻腔中停留；这可通过适当地采用合适粒径的粉末或选择合适的阀来实现。其他合适的制剂包括：粒径在20微米至500微米的范围内的粗粒粉末，以用于从靠近鼻子的容器通过鼻孔快速吸入施用；以及滴鼻剂，其包含0.2％w/v至5％w/v的活性化合物的水性或油性溶液或悬浮液。

药学上可接受的载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于0.1M、并且优选0.05M的磷酸盐缓冲液或0.8％生理盐水。此外，此类药学上可接受的载体可为水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。胃肠外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸钠林格氏注射液或固定油。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。

适合局部施用的制剂可以(例如)凝胶、乳膏或软膏的形式提供。此类制剂可施加于(例如)伤口或溃疡，将该制剂直接涂抹在伤口或溃疡的表面或承载在合适的支持物(如绷带、纱布、网等)上然后施加覆盖在待治疗的区域。

也可提供液体或粉末制剂，该制剂可以直接喷雾或喷洒到待治疗的部位，例如伤口或溃疡。可供选择地，可以将制剂喷雾或喷洒在诸如绷带、纱布、网等载体上，然后施加到待治疗的部位。

根据本发明的另一方面，提供了一种制备如上所述的药物组合物或兽药组合物的方法，该方法包括将一种或多种活性化合物与载体结合，例如通过混合来结合。

通常，通过下列方法制备上述制剂：将活性剂与液体载体和/或细碎的固体载体均匀且密切地结合，然后如有必要则将产物成形。本发明扩展到制备药物组合物的方法，其包括将本文所述的化合物与药学或兽医学可接受的载体或赋形剂联合或结合。

盐/酯

本发明的化合物可以以盐或酯的形式存在，特别是以药学上和兽医学上可接受的盐或酯的形式存在。

本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其合适的酸加成盐或碱式盐。合适的药用盐的综述可见于Berge et al,J Pharm Sci,66,1-19(1977)。盐是用(例如)下列酸形成的：强无机酸，如矿物酸，例如氢卤酸(例如氢氯酸、氢溴酸和氢碘酸)、硫酸、磷酸、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐和磺酸；强有机羧酸，例如具有1至4个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃羧酸，例如乙酸；饱和或不饱和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未取代或取代(例如被卤素取代)的(C₁-C₄)烷基磺酸、或芳基磺酸，例如甲磺酸或对甲苯磺酸。药学上和兽医学上不可接受的盐作为中间体仍然可以是有价值的。

优选的盐包括(例如)乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、二葡糖酸盐、环戊酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、草酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、烟酸盐、扑酸盐(palmoate)、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、乳糖醛酸盐、特戊酸盐(pivolate)、樟脑酸盐、十一酸盐和琥珀酸盐；有机磺酸盐，例如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟乙磺酸盐、樟脑磺酸盐、2-萘磺酸盐、苯磺酸盐、对氯苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐；以及无机酸盐，例如氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸盐和磺酸盐。

基于酯化的官能团，通过使用有机酸或者醇/氢氧化物形成酯。有机酸包括羧酸，例如具有1至12个碳原子的未取代或取代的(例如被卤素取代)烷烃羧酸(例如乙酸)；饱和或不饱和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、或柠檬酸；氨基酸、例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未取代或取代的(例如被卤素取代)(C₁-C₄)烷基磺酸或芳基磺酸，例如甲磺酸或对甲苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括具有1至12个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃醇。

对映体/互变体

在本发明前面所讨论的所有方面中，本发明(适当地)包括本发明的化合物的所有对映异构体、非对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员将会识别具有旋光性(一个或多个手性碳原子)或互变性的化合物。相应的对映体和/互变异构体可以通过本领域已知的方法加以分离/制备。

对映体的特征在于其手性中心的绝对构型，并且按照Cahn、lngold和Prelog的R-和S-排序规则来表示。该惯例在本领域中是公知的(例如，见‘Advanced OrganicChemistry’,3^rd edition,ed.March,J.,John Wiley and Sons,New York,1985)。

本发明的包含手性中心的化合物可以用作外消旋混合物、富含对映异构体的混合物而使用，或者可以利用公知的技术将外消旋混合物分离，从而可以单独使用单独的对映异构体。

立体异构体和几何异构体

本发明的一些化合物可以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例如，它们可能具有一个或以上不对称中心和/或几何中心，因此可以两个或以上立体异构和/或几何异构的形式存在。本发明涵盖那些化合物的所有单独的立体异构体和几何异构体、以及它们的混合物的用途。权利要求中所使用的术语包括这些形式，条件是所述形式保持了合适的功能活性(虽然不必具有相同程度)。

本发明还包括化合物或其药学上可接受的盐的所有合适的同位素变型。本发明化合物或其药学上可接受的盐的同位素变型被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子量不同于通常在自然界中发现的原子量的原子替代的化合物或其药学上可接受的盐。能够引入药物及其药学上可接受的盐的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如它们分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。药物及其药学上可接受的盐的某些同位素变型在药物和/或基底组织分布研究中是有用的，例如那些引入放射性同位素(例如³H或¹⁴C)的同位素变型。对于容易制备和检测而言，氚(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素是特别优选的。此外，利用同位素(例如氘，即²H)进行置换可以提供一定程度的治疗优势，这归因于其具有更大的代谢稳定性，例如体内半衰期的延长或剂量需求的减少，因此其在一些情况下可能是优选的。例如，本发明包括任意氢原子均被氘原子取代的通式(I)的化合物。通常，可以通过常规方法采用合适药物的适当同位素变型来制备本发明药物及其药学上可接受的盐的同位素变型。

阻转异构体

本发明的一些化合物可以阻转异构体的形式存在。阻转异构体是由于围绕单键的受阻旋转而产生的立体异构体，其中由于空间应变或其他贡献因素引起的能量差异而产生足够高的旋转障碍，从而分离出单独的构象异构体。本发明包括所有此类阻转异构体。本发明还包括化合物的旋转异构体。

前体药物

本发明还包括前体药物形式的本发明化合物，即，在体内释放的活性母体药物的共价键结合的化合物。这种前体药物通常是其中一个或以上合适的基团被修饰，使得该修饰在施用给人或哺乳动物受试者之后能够被逆转的本发明的化合物。逆转通常是通过天然存在于这类受试者体内的酶进行的，但也有这样的可能：与这种前体药物一起施用第二药物，以在体内进行逆转。此类修饰的实例包括酯(例如任何上文所描述的那些酯)，其中，可通过酯酶等进行逆转。其他的此类系统对本领域技术人员来说是公知的。

溶剂化物

本发明还包括溶剂化物形式的本发明的化合物。权利要求中所使用的术语包括这些形式。优选地，溶剂化物是水化物。

联合

本发明的另一方面涉及包括本文所述化合物和一种或多种另外的活性剂的联合。在特别优选的实施方案中，本发明的一种或多种化合物与一种或多种另外的活性剂(例如已经市售可得的药物)联合施用。在这种情况下，本发明的化合物可以与一种或多种另外的活性剂连续、同时或依次施用。

当联合施用时，药物通常更有效。特别是，为了避免主要毒性、作用机制和耐药机制的重叠，联合治疗是有利的。此外，还期望以此类剂量之间的最短的时间间隔，在药物的最大耐受剂量下施用最多的药物。与化疗药物联合的主要优点是，通过生物化学相互作用，可以促进加合效应或者可能的协同效应，并且还可以减少抗药性的出现。

通过研究测试用化合物与已知或怀疑对治疗特定病症起重要作用的药物的活性，可以指示有益的联合。该方法还可以用于确定药物的施用顺序，即之前、同时或者之后施用。该时序安排可以是本文所鉴定的所有活性剂的特征。

在癌症的情况下，本发明的化合物可与免疫疗法(如癌症疫苗)和/或其他免疫调节剂(如阻断PD1/PDL-1相互作用的药物)联合使用。因此，在一个优选的实施方案中，另外的活性剂是免疫治疗剂，更优选癌症免疫治疗剂。“免疫治疗剂”是指利用受试者自身的免疫系统来对抗癌症等疾病的治疗。对于其他病症，本发明的化合物可被用于阻断或减少炎症的联合剂(如靶向促炎细胞因子的抗体)中。

多晶型体

本发明还涉及多种结晶形式、多晶型形式和(无水)水合形式的本发明的化合物。制药领域中已经很好地确立这样的方法：通过稍微改变用于合成制备此类化合物的纯化方法和/或溶剂的分离形式，可以分离处于任何此类形式的化合物。

施用方式

本发明的药物组合物可适合于经直肠施用、经鼻施用、经支气管施用、经局部施用(包括经口腔和舌下施用)、经阴道或胃肠外施用(包括经皮下、肌内、静脉内、动脉内和皮内施用)、经腹腔或鞘内施用。优选的制剂为经口服施用的制剂。制剂可方便地以单位剂型(即包含单位剂量的离散部分的形式)提供，或者以多单位或亚单位的单位剂量提供。作为例子，制剂可为片剂和缓释胶囊的形式，并且可通过药学领域中公知的任意方法制备。

本发明的经口施用的制剂可以下列形式提供：含预定量活性剂的离散单位，如胶囊、药丸(gellule)、滴剂、扁囊剂、丸剂或片剂；粉末或颗粒；活性剂在水性液体或非水性液体中的溶液、乳液或悬浮液；或水包油型乳液或油包水型乳液；或丸药等。优选地，这些组合物每剂量包含1mg至250mg活性成分，并且更优选为10mg至100mg活性成分。

对于经口施用的组合物(例如，片剂和胶囊)，术语“可接受的载体”包括赋形剂，如常见赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填料和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和海藻酸；以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他金属硬脂酸盐、甘油硬脂酸酯硬脂酸、硅油，滑石蜡、油和胶体二氧化硅。也可使用调味剂，如薄荷、冬青油、樱桃调味剂等。可能有利的是，添加着色剂使所述剂型易于识别。也可采用本领域已知方法对片剂包衣。

片剂可通过任选地与一种或以上附加成分压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性剂，可选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物模压制得。片剂可任选地被包衣或刻痕，并且其可被配制为缓释或控释活性剂。

其他适合经口施用的制剂包括：锭剂，其包含在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的活性剂；软锭剂，其包含在惰性基质(如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性剂；以及漱口剂，其包含在合适的液体载体中的活性剂。

其他的施用形式包括可经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹腔或肌内注射的溶液或乳剂，其由无菌或可消毒溶液制备。注射形式通常每剂量含10-1000mg、优选10-250mg的活性成分。

本发明的药物组合物也可为栓剂、阴道栓剂、混悬剂、乳剂、洗剂、软膏、乳膏、凝胶剂、喷雾剂、溶液或粉剂的形式。

透皮施用的替代方法是通过使用皮肤贴剂。例如，可将活性成分掺入到由聚乙二醇或液体石蜡的水性乳液组成的乳膏中。活性成分也可以1重量％和10重量％之间的浓度掺入由白蜡或白色软石蜡基质组成的软膏中，可根据需要添加此类稳定剂和防腐剂。

剂量

本领域普通技术人员可以很容易地确定本发明的组合物之一对受试者施用的合适的剂量，而无需过度的试验。通常情况下，医生可确定最适合个别患者的实际用量，而这取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物联合、特定病情的严重程度以及接受治疗的个体。本文所披露的剂量是平均情况的示例。当然可以有个别例子，其中应该使用更高或更低的剂量范围，这些剂量范围在本发明的范围中。

剂量可进一步根据化合物的施用模式进行调整。例如，为了达到急性治疗的“有效量”，胃肠外施用化合物通常是优选的。虽然肌内静推注射也是有用的，但静脉输注化合物的5％葡萄糖水或生理盐水溶液、或具有合适的赋形剂的类似制剂是最有效的。通常情况下，胃肠外剂量为约0.01mg至约100mg；优选在0.1mg和20mg之间，其方式为维持血浆中的药物浓度在能有效地调节GPR65的浓度。化合物以达到每日总剂量为约0.4mg至约400mg的水平每日施用1次至4次。本领域普通技术人员可通过比较药物的血液水平与具有治疗效果所需的浓度，容易地确定本发明化合物的治疗有效的精确剂量，以及该化合物的最佳施用途径。

本发明的化合物也可以按照如下方式经口施用给患者，所述方式使药物的浓度足以达到本文公开的一个或以上治疗指标。通常情况下，包含化合物的药物组合物的施用的口服剂量在约0.1mg至500mg或约0.1mg至约50mg之间，施用方式需与患者的病情一致。优选地，口服剂量可为在约0.5mg至50mg或约0.5mg至约20mg之间。

当根据本发明施用本发明的化合物时，预期不会产生不可接受的毒性作用。可以利用若干生物检测技术之一检测可能具有良好生物利用度的本发明的化合物，从而确定达到给定药物效果所需的化合物的浓度。

通过以下非限制性实施例进一步描述本发明。

具体实施方式

实施例

当未对原材料的制备进行说明时，则这些原材料是市售可得的、在文献中已知的、或者是本领域的技术人员通过标准方法容易获得的。当指出采用与前面的实施例或中间体类似的方法制备化合物时，本领域的技术人员将会理解，对各个特定的反应，可以调整反应时间、试剂的当量数、溶剂、浓度和温度，并且可能需要或者有利的是采用不同的操作(work-up)或者纯化技术。

总体方案

缩写

下面列出了一些常用缩写列表—如果使用了未列出的其他缩写，本领域技术人员将可以理解这些缩写。

AcOH：乙酸；d：双峰；DCM：二氯甲烷；DIPEA:N,N-二异丙基乙胺；DMF:N,N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；(ES⁺)：

电喷雾电离正模式；h：小时；HPLC：高效液相色谱法；Hz：赫兹；

J：耦合常数；M：摩尔；m：多重峰；[M+H]+：质子化分子离子；

mCPBA：间氯过氧苯甲酸；MeCN：乙腈；MHz：兆赫；min：分钟；ml：毫升；MS：质谱法；m/z：质荷比；NMR：核磁共振；Pd-177：烯丙基[4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽]氯化钯(II)；Pd(dppf)Cl₂：

[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)；PDA：光电二极管阵列；RT：室温；Rt：保留时间；s：单峰；t：三重峰；UPLC：超高效液相色谱法；UV：紫外线。

其他缩略语旨在表达其普遍接受的含义。

总体实验条件

所有原料和溶剂均从商业来源获得或根据文献方法制备。合适的异氰酸酯原材料从Sigma-Aldrich或Enamine store获得。适当的环胺原材料从Sigma Aldrich、Enaminestore、Fluorochem或Asta Tech Inc.获得。除非另有说明，否则反应混合物进行磁力搅拌并在室温(约20℃)下进行反应。

在自动快速色谱系统上进行硅胶柱色谱法，如CombiFlash Companion,CombiFlash Rf系统、或使用Rf或/>或GraceResolv^TM预装二氧化硅(230-400目，40-63μm)色谱柱的Reveleris X2快速系统。

使用装配有ACQUITY PDA检测器和ACQUITY QDa质谱仪或Waters SQD质谱仪的WatersH-Class系统进行分析UPLC-MS实验，以确定保留时间和相关质量离子，运行以下所述的分析方法。

使用Waters X-Bridge BEH C18，5μm，19x50 mm柱，使用MeCN梯度和10mM碳酸氢铵水溶液进行制备型HPLC纯化。收集馏分，接着用PDA以及SQD2或ACQUITY QDa质谱仪对所有波长进行UV检测。

使用Bruker Avance III HD 500MHz仪器或Bruker Avace Neo 400MHz仪器记录NMR光谱，使用残余非氘代溶剂或四甲基硅烷作为参考。

分析方法

方法1–基本3分钟法

柱：Waters ACQUITYBEH C18，1.7μm，2.1x30mm，40℃

检测：除非另有说明，否则在210-400nm处进行紫外检测，通过电喷雾电离进行质谱检测

溶剂：A：10mM碳酸氢铵水溶液，B：MeCN

梯度：

时间	％A	％B	流量(ml/min)
				0.00	95	5	0.77
0.11	95	5	0.77
				2.15	5	95	0.77
2.56	5	95	0.77
				2.83	95	5	0.77
3.00	95	5	0.77

方法2–基本4分钟法

柱：Waters X-Bridge BEH C18，2.5μm，4.6x30mm，40℃

检测：除非另有说明，否则在254nm处进行紫外检测，通过电喷雾电离进行质谱检测

溶剂：A：0.1％v/v氢氧化铵水溶液，B：MeCN

梯度：

时间	％A	％B	流量(ml/min)
				0.0	95.0	5.0	2.5
3.0	5.0	95.0	2.5
				3.01	5.0	95.0	4.5
3.6	5.0	95.0	4.5
				3.7	95.0	5.0	2.5
4.0	95.0	5.0	2.5

方法3–基本3分钟法

柱：Waters ACQUITYBEH C18，1.7μm，2.1x30mm，40℃

溶剂：A：0.1％v/v氢氧化铵水溶液，B：MeCN

实验方案1

化合物1 N-(3,4-二氯苯基)-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酰胺

将5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶1a(20mg，0.15mmol)的DMF(1ml)溶液加入到1,2-二氯-4-苯异氰酸酯(34mg，0.180mmol)中。加入DIPEA(0.079ml，0.450mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时。过滤反应混合物，通过质谱引导的HPLC(10-40％ MeCN/10mM碳酸氢铵水溶液，C18)纯化产物，得到呈无色固体的N-(3,4-二氯苯基)-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酰胺1。UPLC-MS(方法1)，1.14分钟时，m/z 323.3、325.3、327.2[M+H]⁺(ES⁺)。¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.97(s,1H),8.64(s,1H),7.85(d,J＝2.3Hz,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H),7.47(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),4.70(s,2H),3.83(t,J＝5.9Hz,2H),2.95(t,J＝5.9Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案1中所述类似的方法制备以下化合物。在文献中未描述原材料的情况下，其合成方法如下所述。

关键点：(a)在THF中进行反应(b)在DCM中进行反应(c)在DMF/THF混合物中进行反应(d)在DMF/DCM混合物中进行反应(e)用Et₃N代替DIPEA进行反应(f)在不添加DIPEA的情况下进行反应(g)通过硅胶色谱(EtOAc/异己烷)纯化产物(h)通过硅胶色谱(DCM/庚烷)纯化产物(i)通过RP Flash C18(MeCN/10mM碳酸氢铵水溶液)纯化产物(j)通过硅胶色谱(DCM/异己烷)纯化产物(k)通过硅胶色谱(0.7M NH₃的MeOH/DCM溶液)纯化产物(l)没有观察[M+H]⁺而是记录了[M-H]^-。

/>

中间体1(I-1)

步骤1：向尿素(1.03g，17.2mmol)的EtOH(10ml)溶液中加入乙醇钠(21％w/w，在EtOH中)溶液(5.58g，6.4mL，17.2mol)。将混合物搅拌5分钟，然后加入(Z)-3-((二甲氨基)亚甲基)-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(I-1a)(3.65g，14.4mmol)的EtOH(50ml)溶液。将所得混合物加热回流16小时。将反应冷却至室温。加入饱和氯化铵溶液(20ml)，真空除去挥发物。用EtOAc(3x150ml)萃取水溶液。合并的有机物用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过硅胶色谱(0-10％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)纯化产物，得到呈浅黄色固体的2-羟基-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-1b)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),8.16(s,1H),4.28(s,2H),3.55(t,J＝6.0Hz,2H),2.62(t,J＝6.0Hz,2H),1.42(s,9H)。

步骤2：向2-羟基-7,8-二氢吡啶并[4,3d]嘧啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-1b)(0.246g，979μmol)的DCM(10ml)溶液中加入HCl(4M，在1,4-二氧六环中)(2.45ml，9.79mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。过滤反应混合物并在真空中干燥沉淀。将固体悬浮在MeOH(50ml)中，并加入SCX(4.9g，3.77mmol)，并且将混合物搅拌3小时。用MeOH洗涤SCX，用0.7M NH₃/MeOH溶液洗脱产物，真空浓缩，得到呈黄色固体的5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3d]嘧啶-2-醇(I-1)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,1H),5.40(s,1H)3.57(s,2H),2.89(t,J＝5.9Hz,2H),2.48(t,J＝5.9Hz,2H)。(1个可交换的H不可见)。

中间体2(I-2)

将7-甲氧基-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶(I-2a)(200mg，1.22mmol)在HBr(2.07ml，48％w/w，18.3mmol)中的溶液加热到100℃，持续10小时。将反应混合物冷却至室温，真空浓缩反应混合物。将残余物溶解在MeOH(20ml)中，并装入SCX柱筒(40g，30mmol)中。SCX用MeOH洗涤，产物用0.7M NH₃的MeOH溶液洗脱，真空浓缩，得到呈浅棕色固体的5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-酚(I-2)。¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.28(s,1H),7.13(d,J＝3.4Hz,1H),6.02(d,J＝3.5Hz,1H),3.75–3.69(m,2H),2.92–2.86(m,2H),2.47(t,J＝5.9Hz,2H)。(未见1个可交换的H)。

中间体3(I-3)

步骤1：将6-氯-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3a)(150mg，558μmol)、K₄Fe(CN)₆(212mg，502μmol)和乙酸钾(46.6mg，474μmol)在1,4-二氧六环(4ml)和水(0.8ml)的混合物中的溶液脱气5分钟，并加入Pd-174(20.1mg，27.9μmol)。将混合物再脱气5分钟，然后加热至90℃，持续16小时。反应冷却至室温，通过疏水玻璃料过滤，滤液真空浓缩。通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/异己烷)纯化产物，得到呈粘稠无色油状物的6-氰基-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3b)。LCMS(方法3)，在1.25分钟时，m/z 260.1(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：在0℃，向6-氰基-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3b)(15mg，58μmol)的1,4-二氧六环(2ml)溶液中加入4MHCl的二氧六环溶液(0.29ml，1.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物真空浓缩，得到呈棕色固体的5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3-腈盐酸盐(I-3)。LCMS(方法3)，在0.54分钟时，m/z 160.0(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,2H),8.64(s,1H),8.00(s,1H),4.42(s,2H),3.44–3.40(m,2H),3.07(t,J＝6.3Hz,2H)。

中间体4(I-4)

步骤1：使用与I-3b基本相同的步骤，由7-氯-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-4a)合成7-氰基-3,4-二氢-2,6-萘啶-2-(1H)-甲酸叔丁酯(I-4b)。LCMS(方法2)，在1.93分钟时，m/z 260.0(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：使用与I-3基本相同的步骤，由7-氰基-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-4b)合成5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-腈盐酸盐(I-4)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,2H),8.64(s,1H),8.00(s,1H),4.42(s,2H),3.40(s,2H),3.07(t,J＝6.3Hz,2H)。

中间体5(I-5)

步骤1：加入6-氯-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3a)(101mg，376μmol)在ⁿBuOH(2ml)水合肼(35％w/w水溶液)(266μl，1.88mmol)中的溶液，将反应加热至130℃，持续60小时。将反应冷却至室温，并用水(5ml)和DCM(10ml)稀释。分离各层，并用DCM(3x10ml)进一步提取水层。合并的有机层通过疏水玻璃料过滤，并将滤液真空浓缩，得到呈无色油状物的6-肼基-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-5a)。LCMS(方法3)，在1.58分钟时，m/z 265.1(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：将6-肼基-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-5a)在原甲酸三乙酯(2mL，0.01mol)中的溶液加热至130℃，持续22小时。将反应混合物真空浓缩，通过硅胶色谱(0-5％(0.7MNH₃/MeOH)/DCM)纯化产物，得到呈浅黄色固体的8,9-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-b][2,7]萘啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(I-5b)。LCMS(方法2)，在1.50分钟时，m/z 275.1(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.79(s,1H),8.03(s,1H),7.62(s,1H),4.60(br s,2H),3.67(t,J＝6.5Hz,2H),3.01(t,J＝6.3Hz,2H),1.51(s,9H)。

步骤3：向8,9-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-b][2,7]萘啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(I-5b)(37mg，0.13mmol)的DCM(2ml)溶液中缓慢加入TFA(0.1ml，1.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩。将产物在SCX(0.6g，0.42mmol)上进行离子交换纯化，用0.7M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到呈无色固体的6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-b][2,7]萘啶(I-5)。LCMS(方法3)，在0.53分钟时，m/z 175.1(M+H)⁺(ES⁺)。

中间体6(I-6)

步骤1：向6-氰基-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3b)(100mg，386μmol)在EtOH(5ml)和乙酸(662μl，11.6mmol)中的溶液中加入10％(50％糊剂)的Pd/C(50mg，23μmol)。将反应混合物在氢气氛(5巴)下、在室温下搅拌16小时。滤出催化剂并真空浓缩滤液。在硅胶(0-10％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)上纯化产物，得到呈无色透明焦油状物的6-(氨基甲基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-6a)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),7.22(s,1H),4.51(s,2H),3.73(s,2H),3.56(t,J＝5.9Hz,2H),2.77(t,J＝6.0Hz,2H),2.03(br s,2H),1.43(s,9H)。

步骤2：将6-(氨基甲基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-6a)(25mg，95μmol)在甲酸(1ml)中的溶液在80℃加热2小时。冷却反应混合物并真空浓缩。将残余物与甲苯(3ml)和POCl₃(1ml，0.01mol)合并，并加热至100℃，持续2小时。将反应混合物冷却并真空浓缩，将固体残余物与饱和NaHCO₃溶液(5ml)合并，产物用20％MeOH的DCM溶液(3x5ml)萃取。真空浓缩合并的有机层。将残余物溶于1M NaOH(1ml)和EtOH(2ml)中并加热至100℃，持续16小时。将反应混合物冷却并真空浓缩，用AcOH酸化残余物并将其上样到SCX(20g，14mmol)上，并用0.7M NH₃的MeOH溶液洗脱，得到呈橙色固体的6,7,8,9-四氢咪唑并[1,5-b][2,7]萘啶(I-6)。LCMS(方法3)，在0.61分钟时，m/z 173.8(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),8.12(s,1H),8.06(s,1H),7.24(d,J＝5.5Hz,1H),7.16(d,J＝3.0Hz,1H),3.46(t,J＝6.0Hz,2H),2.91(t,J＝6.2Hz,2H),2.72–2.66(m,2H)。

中间体7(I-7)

步骤1：向7-氯-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3a)(200mg，744μmol)的EtOH(1ml)溶液中加入一水合肼(1.12ml，14.9mmol)，将反应加热至150℃，持续94小时。冷却反应混合物，用DCM(5ml)稀释并真空浓缩。用DCM研磨(triturated)该材料，得到呈棕色固体的7-肼基-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶(I-7a)。LCMS(方法3)，在0.26分钟时，m/z 165.5(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：将7-肼基-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶(I-7a)在原甲酸三乙酯(2ml，0.01mol)中的溶液加热至130℃，持续2小时。冷却反应混合物并真空浓缩，得到呈红色固体的6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-b][2,6]萘啶(I-7)。LCMS(方法3)，在0.22分钟时，m/z175.3(M+H)⁺(ES⁺)。

中间体8(I-8)

步骤1：使用与(I-6a)基本相同的步骤，由7-氰基-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-4b)合成7-(氨基甲基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2-(1H)-羧酸叔丁酯(I-8a)。LCMS(方法3)，在0.99分钟时，m/z 264.3(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.23(s,1H),4.51(s,2H),3.74(s,2H),3.58(t,J＝5.8Hz,2H),2.75(t,J＝5.9Hz,2H),2.16(s,2H),1.43(s,9H)。

步骤2：将7-(氨基甲基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-8a)(20mg，76μmol)在甲酸乙酯(2ml，0.02mol)中的溶液加热至65℃，持续3小时。冷却反应混合物并真空浓缩。将残余物溶解在DCM(2ml)中，加入POCl₃(11μl，0.11mmol)，然后加入Et₃N(64μl，0.46mmol)并在室温下搅拌2小时。将材料倒入冰水(20ml)中并加入饱和碳酸氢钠溶液(2ml)。用10％ MeOH的DCM溶液(2x20ml)萃取产物，真空浓缩合并的有机层。将产物在硅胶(0-5％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)上纯化，得到呈澄清棕褐色油状物的6,7-二氢咪唑并[1,5-b][2,6]萘啶-8(9H)-羧酸叔丁酯(I-8b)。LCMS(方法3)，在1.18分钟时，m/z 274.3(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.28(d,J＝0.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.42(s,1H),7.26(d,J＝1.0Hz,1H),4.45(s,2H),3.50(t,J＝6.2Hz,2H),2.81–2.75(m,2H),1.43(s,9H)。

步骤3：将6,7-二氢咪唑并[1,5-b][2,6]萘啶-8(9H)-羧酸叔丁酯(10mg，37μmol)溶于4M HCl的1,4-二氧六环(0.46mL，1.8mmol)溶液中，并在室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。使用SCX用MeOH(10ml)洗涤，通过离子交换纯化产物，用0.7M NH₃的MeOH(20ml)溶液洗脱产物，真空浓缩，得到呈棕色油状物的6,7,8,9-四氢咪唑并[1,5-b][2,6]萘啶(I-8)。LCMS(方法3)，在0.59分钟时，m/z 173.6(M-H)^-(ES^-)。

中间体9(I-9)

步骤1：向2-氯-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶盐酸盐(I-9a)(2.00g，9.75mmol)的DCM(10ml)溶液中加入(Boc)₂O(2.46ml，10.7mmol)和Et₃N(1.63ml，11.7mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。加入水(20ml)，用EtOAc(3x50ml)萃取产物。合并的有机物用硫酸镁干燥并真空浓缩。将产物在硅胶(0-50％ EtOAc/异己烷)上纯化，得到呈粘稠的无色油状物的2-氯-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-9b)，其在静置后固化。¹H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.40(d,J＝8.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.1Hz,1H),4.58(s,2H),3.75(t,J＝5.9Hz,2H),2.99(t,J＝6.0Hz,2H),1.52(s,9H)。

步骤2：向2-氯-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-9b)(1.00g，3.72mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(727μl，4.84mmol)，然后加入Cs₂CO₃(2.44g，7.44mmol。用氮气吹扫反应混合物5分钟。加入Xantphos(215mg，372μmol)和Pd₂(dba)₃(170mg，186μmol)，再用氮气吹扫反应混合物5分钟。将反应混合物加热至95℃，持续20小时。通过硅藻土塞过滤反应混合物，真空浓缩滤液。在硅胶上纯化产物(0-20％EtOAc/异己烷，然后是0-5％0.7M NH₃/MeOH在DCM中的溶液)，得到呈橙色油状物的2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-9c)。LCMS(方法3)，在1.06分钟时，m/z 400.3(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤3：向2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-羧酸叔丁酯(I-9c)(270mg，676μmol)的DCM(8ml)溶液中加入TFA(1.04ml，13.5mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物真空浓缩，用SCX(20g，14mmol)用MeOH(5ml)洗涤，通过离子交换纯化产物，并用0.7M NH₃的MeOH溶液洗脱产物，得到呈棕色油状物的5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶-2-胺(I-9)。LCMS(方法3)，在0.23分钟时，m/z 150.1(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.01(d,J＝8.2Hz,1H),6.22(d,J＝8.2Hz,1H),5.59(s,2H),3.65(s,2H),2.94(dd,J＝6.7,5.4Hz,2H),2.52(d,J＝5.3Hz,2H)。(未观察到NH质子)。

中间体10(I-10)

步骤1：将6-溴代异喹啉(I-10a)(2.5g，12mmol)、甲磺酸钠(1.8g，18mmol)、NaOH(96mg，2.4mmol)，碘化铜(I)(0.23g，1.2mmol)和脯氨酸(0.28g，2.4mmol)加入到三颈圆底烧瓶中，并置于稳定的氮气流下。加入DMSO(25ml)，用氮气吹扫反应5分钟。将反应混合物加热至95℃20小时。将反应冷却至室温，并用水(100ml)和EtOAc(200ml)稀释。分离各层，并用EtOAc(2x200ml)进一步萃取水层。合并的有机层用硫酸镁干燥并真空浓缩。将产物在硅胶(0-10％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)上纯化，得到呈棕色粉末的6-(甲基磺酰基)异喹啉(I-10b)。LCMS(方法2)，在1.16分钟时，m/z 208.0(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),8.73(s,1H),8.66(d,J＝1.8Hz,1H),8.42(d,J＝8.6Hz,1H),8.17–8.11(m,2H),3.35(s,3H)。

步骤2：向6-(甲基磺酰基)异喹啉(I-10b)(0.50g，2.42mmol)的AcOH(8ml)溶液中加入5％ Pt-C型128(0.5g，0.1mmol)。将所得混合物在25℃的氢气氛(5巴)下搅拌72小时。将反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土垫过滤，用EtOAc洗涤。真空浓缩滤液，得到呈粘性棕色油状物的6-(甲基磺酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉，AcOH(I-10)。LCMS(方法2)，在1.00分钟时，m/z 212.0(M+H)⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.94–7.51(m,2H),7.28(d,J＝8.7Hz,1H),3.92(s,2H),3.16(s,3H),2.96(t,J＝5.9Hz,2H),2.78(t,J＝6.0Hz,2H)。(可交换的-NH质子不可见)

中间体11(I-11)

步骤1：向6-氯-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3a)(200mg，744μmol)在MeOH(10ml)和NEt₃(1.56ml，11.2mmol)中的溶液中加入Pd-dppf(54.5mg，74.4μmol)。向反应混合物中加入CO(4.5巴)并加热至110℃，持续5小时。冷却反应物，通过硅藻土过滤并真空浓缩。将产物在硅胶(0-5％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)上纯化，得到呈透明橙色油状物的2-(叔丁基)6-甲基3,4-二氢-2,7-萘啶-2,6(1H)-二羧酸酯(I-11a)。LCMS(方法3)，在1.19分钟时，m/z 293.3(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：向2-(叔丁基)6-甲基3,4-二氢-2,7-萘啶-2,6(1H)-二羧酸酯(I-11a)(225mg，770μmol)的DCM(20ml)溶液中加入4MHCl的1,4-二氧六环(1.92ml，7.70mmol)溶液。将所得混合物在室温下搅拌18小时。真空除去溶剂，得到呈棕色固体的5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3-羧酸甲酯盐酸盐(I-11)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,2H),8.58(s,1H),7.96(s,1H),4.39(t,J＝4.8Hz,2H),3.90(s,3H),3.43–3.35(m,2H),3.11(t,J＝6.3Hz,2H)。

中间体12(I-12)

步骤1：向2-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸(100mg，361μmol)、EDCI盐酸盐(104mg，541μmol)和HOBt一水合物(104mg、80％w/w，541μmol)在DMF(2ml)中的溶液中加入N'-羟基乙脒(35mg，469μmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。再加入另一部分N'-羟基乙脒(35mg，469μmol)和EDCI盐酸盐(104mg，541μmol)，然后加入Et₃N(151μL，1.08mmol)，将反应混合物搅拌18小时。用EtOAc(20ml)稀释反应物，并用碳酸氢钠溶液洗涤。真空浓缩有机物。通过硅胶色谱(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)纯化产物，得到呈无色透明油状物的(Z)-6-((((1-氨基亚乙基)氨基)氧基)羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯I-12b。LCMS(方法2)，在1.87分钟时，m/z 334.2(M+H)⁺(ES⁺)。

步骤2：向6-((((1-氨基亚乙基)氨基)氧基)羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯I-12b(100mg，300μmol)的THF(2ml)溶液中加入TBAF(300μL，1M，300μmol)的THF溶液。将反应混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物真空浓缩。通过硅胶色谱(0-20％EtOAc/异己烷)纯化产物，得到呈无色油状物的6-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯I-12c。¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.93–7.84(m,2H),7.43(d,J＝7.9Hz,1H),4.60(s,2H),3.59(t,J＝5.9Hz,2H),2.89(t,J＝6.0Hz,2H),2.41(s,3H),1.43(s,9H)。

步骤3：将6-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯I-12c(40mg，126μmol)溶解在HCl的1,4-二氧六环(4M，1.5ml，6mmol)溶液中。将混合物在室温下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物，得到呈无色固体的3-甲基-5-(1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)-1,2,4-噁二唑盐酸盐I-12。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.95(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),4.36(s,2H),3.40(t,J＝6.3Hz,2H),3.10(t,J＝6.3Hz,2H),2.42(s,3H)。未观察到来自N-H₂的2个质子。

实验方案2

化合物79 6-((3-氯-4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-2-氧化物

将N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺(10mg，28μmol)溶解在DCM(2ml)中，并加入mCPBA(7.6mg，77％w/w，34μmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。加入偏亚硫酸钠溶液(2ml)并分离各层。真空浓缩溶剂。通过硅胶色谱法(0-10％(0.7M NH₃/MeOH)的DCM溶液)纯化产物，得到呈无色固体的6-((3-氯-4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-2-氧化物79。LC-MS(方法1)，在1.15分钟时，m/z372.3、374.3[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.16(s,1H),8.06(dd,J＝6.6,1.9Hz,1H),7.91(d,J＝2.1Hz,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.27(d,J＝6.7Hz,1H),4.63(s,2H),3.72(t,J＝5.9Hz,2H),2.82(t,J＝5.9Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案2中所述类似的方法制备以下化合物。

实验方案3

化合物82 7-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺

步骤1：向7-氯-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯82a(700mg，2.60mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入(2,4-二甲氧基苯基)甲胺82b(1.57ml，10.4mmol)，然后加入Cs₂CO₃(1.28g，3.91mmol)。用氮气吹扫反应混合物5分钟。加入Pd-177(79.3mg，104μmol)和Xantphos(60.3mg，0.04Eq，104μmol)，再用氮气吹扫反应混合物5分钟。将反应混合物加热至85℃，持续20小时。真空浓缩反应混合物。通过硅胶色谱法(0-25％ EtOAc的异己烷溶液，然后0-5％(0.7M NH₃/MeOH)的DCM溶液)纯化产物，得到呈黄色油状物的7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯82c。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.76(s,1H),7.09(d,J＝8.3Hz,1H),6.54(d,J＝2.4Hz,1H),6.47(s,1H),6.43(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),6.28(s,1H),4.35(s,2H),4.30(d,J＝6.0Hz,2H),3.80(s,3H),3.73(s,3H),3.50(t,J＝6.0Hz,2H),2.58(t,J＝5.9Hz,2H),1.42(s,9H)。

步骤2：将7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯82c(360mg，901μmol)加入到HCl的1,4-二氧六环(4.5ml，4M，18.0mmol)溶液中，将所得混合物在室温下搅拌72小时。真空除去溶剂。将残余物溶解在MeOH中并加入SCX。用MeOH(50ml)洗涤SCX，用0.7M NH₃/MeOH(100ml)洗脱产物。真空浓缩洗脱液，得到呈黄色玻璃状的5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-胺82d。LCMS(方法2)，在0.45分钟时，m/z 150.1[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),6.09(s,1H),5.49(s,2H),3.69(s,2H),2.89(t,J＝5.9Hz,2H),2.49(d,J＝5.7Hz,2H)。

步骤3：向5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-3-胺82d(60mg，0.4mmol)的DCM(2ml)溶液中加入DIPEA(0.21ml，1.2mmol)和1,2-二氯-4-苯异氰酸酯82e(91mg，0.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(2ml)，用10％MeOH的DCM溶液(3x3ml)萃取产物，真空浓缩合并的有机物。通过硅胶色谱(0-5％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)纯化产物，得到呈淡黄色固体的7-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺。LCMS(方法3)，在1.19分钟时，m/z 337.3、379.3[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),7.86(t,J＝1.4Hz,1H),7.76(s,1H),7.49(d,J＝1.4Hz,2H),6.24(d,J＝0.9Hz,1H),5.68(s,2H),4.50(s,2H),3.66(t,J＝5.9Hz,2H),2.66(t,J＝5.9Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案3中所述类似的方法制备以下化合物。

实验方案4

化合物85 N-(3,4-二氯苯基)-6-氟-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺

在0℃，将6-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(65mg，0.19mmol)的AcOH(2ml)溶液加入到四氟硼酸的水溶液(3.0ml，48％w/w，19mmol)中。在20分钟内滴加亚硝酸钠(27mg，0.39mmol)的水(1ml)溶液，并将反应混合物在0℃下再搅拌1小时。将反应混合物加入冰冷的NaHCO₃(10ml)溶液中，使用20％MeOH的DCM溶液(3x25ml)萃取产物。用硫酸钠干燥溶剂，减压除去溶剂。通过硅胶色谱(0-0.75％(0.7MNH₃/MeOH)/DCM)纯化产物，得到呈无色固体的N-(3,4-二氯苯基)-6-氟-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺85。LCMS(方法3)，1.32分钟时，m/z 338.1、340.1[M-H]^-(ES^-)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.94(s,1H),8.10(s,1H),7.87–7.83(m,1H),7.53–7.45(m,2H),7.06(d,J＝1.9Hz,1H),4.67(s,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),2.94(t,J＝5.9Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案4中所述类似的方法制备以下化合物。

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实验方案5

化合物92 N-(3,4-二氯苯基)-7-甲基-6-氧代-3,4,6,7-四氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺

向N-(3,4-二氯苯基)-6-氧代-3,4,6,7-四氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(76)(25mg，74μmol)的DMF(2ml)溶液中加入MeI(4.6μl，74μmol)和碳酸钾(31mg，0.22mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌36小时。将反应混合物在饱和碳酸氢钠溶液(10ml)和20％(0.7M NH₃的MeOH溶液)的DCM(20ml)中分配，并真空浓缩有机层。通过质谱引导的RP-制备型-HPLC(20-50％碳酸氢铵的MeCN溶液)纯化产物，得到呈白色固体的N-(3,4-二氯苯基)-7-甲基-6-氧代-3,4,6,7-四氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺92。LCMS(方法1)，在1.32分钟时，m/z 352.4、354.3[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.63(s,1H),7.52–7.44(m,2H),6.26(s,1H),4.38(s,2H),3.60(t,J＝6.1Hz,2H),3.39(s,3H),2.77(t,J＝6.0Hz,2H)。

实验方案6

化合物95 N-(3,4-二氯苯基)-6-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺

将N-(3,4-二氯苯基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺(15)(25mg，71μmol)溶于DCM(0.5ml)中，并将溶液冷却至-78℃。滴加三溴化硼溶液(1M在DCM中的溶液)(93μl，93μmol)，将混合物在-78℃下搅拌5分钟，然后加热至0℃，持续1小时。将反应混合物冷却至-78℃并加入无水MeOH(1ml)。将反应混合物加热至室温30分钟。真空浓缩反应混合物，通过RP Flash C18(5-65％MeCN/10mM碳酸氢铵)色谱纯化残余物，得到呈白色固体的N-(3,4-二氯苯基)-6-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺(95)。LCMS(方法3)，在1.32分钟时，m/z 337.2、339.2、341.2[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.81(s,1H),7.87(d,J＝2.1Hz,1H),7.53–7.43(m,2H),6.96(d,J＝8.2Hz,1H),6.61(dd,J＝8.2,2.5Hz,1H),6.58(d,J＝2.5Hz,1H),4.51(s,2H),3.64(t,J＝5.9,5.9Hz,2H),2.76(t,J＝5.9,5.9Hz,2H)。

实验方案7

化合物97 8-氯-N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺

将7-((3-氯-4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-2-氧化物(94)(20mg，54μmol)溶解在POCl₃(15μl，0.16mmol)中，将反应混合物加热回流16小时。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。将残余物在冰水中搅拌并加入饱和碳酸氢钠溶液(10ml)。水性混合物用10％ MeOH的DCM(30ml)溶液萃取，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将产物在二氧化硅(0-5％ MeOH的DCM)上纯化，得到呈白色固体的8-氯-N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺。LCMS(方法1)，在1.50分钟时，m/z 390.0、392.0[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),8.22(d,J＝5.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.73-7.75(m,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(d,J＝5.0Hz,1H),4.64(s,2H),3.76(t,J＝5.8Hz,2H),2.93(t,J＝5.8Hz,2H)。

实验方案8

化合物104 N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-6-氟-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺

步骤1：使用与82c基本相同的步骤，由6-氯-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(I-3a)合成6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2-(1H)-甲酸叔丁酯(104a)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.77(s,1H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.56–6.50(m,2H),6.43(dt,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.29(s,1H),4.35–4.28(m,4H),3.80(s,3H),3.72(s,3H),3.46(t,J＝6.0Hz,2H),2.62(t,J＝6.0Hz,2H),1.42(d,J＝1.3Hz,9H)。

步骤2：使用与82d基本相同的步骤，由6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(104a)合成5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3-胺(104b)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.60(d,J＝0.9Hz,1H),6.15(d,J＝1.2Hz,1H),5.50(s,2H),3.69(s,2H),2.88(t,J＝6.0Hz,2H),2.55(d,J＝6.0Hz,2H)。(未见1个可交换的H)。

步骤3：使用与82基本相同的步骤，由5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3-胺(104b)合成6-氨基-N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(104c)。LCMS(方法3)，在1.98分钟时，m/z 371.1、373.1[M+H]⁺(ES⁺)。

步骤4：使用与85基本相同的步骤，由6-氨基-N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(104c)合成N-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-6-氟-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(104)。LCMS(方法3)，在1.28分钟时，m/z 374.1、376.1[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.21(s,1H),8.11(s,1H),7.91(d,J＝2.1Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(dd,J＝8.6,2.1Hz,1H),7.09–7.05(m,1H),4.70(s,2H),3.74(t,J＝5.9Hz,2H),2.96(t,J＝5.9Hz,2H)。

实验方案9

化合物110 N-(3,4-二氯苯基)-8,9-二氢咪唑并[1,2-b][2,7]萘啶-7(6H)-甲酰胺

向6-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(84)(45mg，0.13mmol)的EtOH(4ml)溶液中加入碳酸氢钠(22mg，0.27mmol)和2-氯乙醛(25μl，50％w/w，0.20mmol)，将反应混合物加热至85℃，持续16小时。真空浓缩反应混合物，在硅胶(0-4.5％(0.7M NH₃/MeOH)/DCM)上纯化产物，得到呈无色透明玻璃状的N-(3,4-二氯苯基)-8,9-二氢咪唑并[1,2-b][2,7]萘啶-7(6H)-甲酰胺(110)。LCMS(方法3)，在1.25分钟时，m/z361.5、363.3[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,1H),8.50(s,1H),7.89–7.85(m,2H),7.53–7.46(m,3H),7.44(s,1H),4.64(d,J＝1.1Hz,2H),3.69(t,J＝6.2Hz,2H),3.04–2.98(m,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案9中所述类似的方法制备以下化合物。

实验方案10

化合物111 N-(3,4-二氯苯基)-8,9-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-b][2,7]萘啶-7(6H)-甲酰胺

步骤1：向6-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(84)(45mg，0.13mmol)的2-丙醇(2ml)溶液中加入1,1-二甲氧基-N,N-二二甲基甲胺(23μl，0.17mmol)，并将反应混合物加热至90℃，持续3小时。将温度降至50℃，加入盐酸羟胺(12mg，0.17mmol)。反应混合物在50℃下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，将产物在硅胶(40g滤筒，0-5％ MeOH/DCM)上纯化，得到呈淡白色固体的(Z)-N-(3,4-二氯苯基)-6-(((羟基氨基)亚甲基)氨基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(111a)。

步骤2：在0℃，向(Z)-N-(3,4-二氯苯基)-6-(((羟基氨基)亚甲基)氨基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(111a)的THF(5ml)溶液中加入TFAA(10μl，71μmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(5ml)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(5ml)洗涤，真空浓缩有机层。将产物在硅胶(0-4.5％(0.7MNH₃/MeOH)/DCM)上纯化，得到呈淡白色固体的N-(3,4-二氯苯基)-8,9-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-b][2,7]萘啶-7(6H)-甲酰胺(111)。LCMS(方法3)，在1.19分钟时，m/z 362.5、364.3[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.87(s,1H),8.43(s,1H),7.86(t,J＝1.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.50(d,J＝1.4Hz,2H),4.73(s,2H),3.73(t,J＝6.2Hz,2H),3.10(t,J＝6.0Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案10中所述类似的方法制备以下化合物。

实验方案11

化合物112 N-(4,5-二氯-2-氟苯基)-6-氧代-3,4,6,7-四氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺

向三光气(28.8mg，97.2μmol)的THF(2ml)溶液中滴加4,5-二氯-2-氟苯胺(112a)(50mg，278μmol)和三乙胺(116μl，833μmol)在THF(1ml)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌30分钟。加入5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3(2H)-酮(112b)(42mg，278μmol)在THF(1ml)和DMF(2ml)中的溶液，并将混合物在室温搅拌16小时。过滤反应混合物并真空浓缩。通过RPFlash C18(15-75％MeCN/10mM碳酸氢铵)纯化产物，得到呈无色固体的N-(4,5-二氯-2-氟苯基)-6-氧代-3,4,6,7-四氢-2,7-萘啶-2(1H)-甲酰胺(112)。LCMS(方法3)，在1.03分钟时，m/z 356.2、358.2[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.38(s,1H),8.48(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(d,J＝10.3Hz,1H),7.32(s,1H),6.20(s,1H),4.38(s,2H),3.59(t,J＝6.1Hz,2H),2.77(t,J＝6.1Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案11中所述类似的方法制备以下化合物。

关键：(a)在DCM中进行反应

实验方案12

化合物119 5-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺

步骤1：向5-氯-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(119a)(750mg，2.79mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(545μl，3.63mmol)和Cs₂CO₃(1.83g，5.58mmol)，并用氮气吹扫反应混合物5分钟。加入Xantphos(161mg，279μmol)和Pd₂(dba)₃(128mg，140μmol)，然后用氮气吹扫反应混合物5分钟。将反应混合物加热至95℃，持续20小时，冷却并通过硅藻土塞过滤，真空浓缩。残余物在二氧化硅(0-20％ EtOAc/异己烷)上纯化，得到呈棕色油状物的5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(119b)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.73(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(d,J＝8.3Hz,1H),6.53(d,J＝2.4Hz,1H),6.40(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),6.33(d,J＝5.3Hz,1H),6.18(s,1H),4.45(d,J＝5.8Hz,2H),4.37(s,2H),3.80(s,3H),3.71(s,3H),3.61(d,J＝6.0Hz,2H),2.46(t,J＝6.0Hz,2H),1.42(s,9H)。

步骤2：将5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-羧酸叔丁酯(119b)(580mg，1.45mmol)溶解在HCl的1,4-二氧六环(7.26ml，4M，29.0mmol)溶液中，并在室温下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，将残余物上样到MeOH(50ml)中的SCX柱筒中，用0.7M NH₃的MeOH(100ml)溶液洗脱产物，并真空浓缩，得到呈棕色油状物的N-(2,4-二甲氧基苄基)-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-1-胺(119c)。LCMS(方法3)，在1.06分钟时，m/z 303.3[M+H]⁺(ES⁺)。

步骤3：向N-(2,4-二甲氧基苄基)-5,6,7,8-四氢-2,6-萘啶-1-胺HCl(119c)(370mg，1.10mmol)的DCM(5ml)溶液中加入DIPEA(0.58ml，3.31mmol)，然后滴加1,2-二氯-4-苯异氰酸酯(207mg，1.10mol)的DCM(2ml)溶液。将反应混合物在室温下搅拌0.5小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(5ml)稀释，用10％ MeOH的DCM(3ml)溶液萃取，并用10％MeOH的DCM溶液萃取水层(2x3ml)。真空浓缩合并的有机层，在硅胶(0-5％(0.7MNH₃/MeOH)/DCM)上纯化产物，得到呈透明白色固体的N-(3,4-二氯苯基)-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺(119d)。LCMS(方法3)，在1.64分钟时，m/z 487.0、489.2[M+H]⁺(ES⁺)。

步骤4：将N-(3,4-二氯苯基)-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺(119d)(295mg，605μmol)与DCM(8ml)合并，并加入TFA(1.9ml，24.2mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物真空浓缩，产物在硅胶(0-5％(0.7MNH₃/MeOH)/DCM)上纯化，得到呈无色透明玻璃状的5-氨基-N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-甲酰胺(119)。LCMS(方法3)，在1.21分钟时，m/z 337.2、339.2[M+H]⁺(ES⁺)。¹HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),7.85(t,J＝1.4Hz,1H),7.73(d,J＝5.2Hz,1H),7.48(d,J＝1.3Hz,2H),6.36(d,J＝5.2Hz,1H),5.76(s,2H),4.50(s,2H),3.73(t,J＝5.9Hz,2H),2.46(t,J＝5.9Hz,2H)。

实验方案13

化合物126 N-(3,4-二氯苯基)-6-(2-氟吡啶-3-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺

步骤1：向容器中装入6-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(126a)(50mg，0.16mmol)、Pd(dppf)Cl₂(12mg，16μmol)和(2-氟吡啶-3-基)硼酸(126b)(45mg，0.32mmol)，排空并回填氮气(3次)。加入1,4-二氧六环(0.5ml)并用氮气吹扫和回填(3次)。加入磷酸氢二钾水溶液(0.64ml，0.5M，0.32mmol)，将反应加热至80℃，持续72小时。将反应冷却至室温，并通过硅藻土垫过滤，用EtOAc(20ml)洗涤。在硅胶(0-50％EtOAc/异己烷)上纯化产物，得到呈粘性白色油状物的6-(2-氟吡啶-3-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(126c)。LCMS(方法2)，在2.56分钟时，m/z329.1[M+H]⁺(ES⁺)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.27–8.11(m,1H),7.85(ddd,J＝9.6,7.4,1.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(s,1H),7.28(dd,J＝5.1,1.9Hz,1H),7.21(d,J＝8.1Hz,1H),4.63(s,2H),3.69(s,2H),2.90(t,J＝5.8Hz,2H),1.50(s,9H)。

步骤2：向6-(2-氟吡啶-3-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(126c)(39.2mg，119μmol)的DCM(1ml)溶液中加入HCl的1,4-二氧六环(298μl，4M，1.19mmol)溶液。将反应在室温下搅拌17小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物在DCM(1ml)中复溶。加入1,2-二氯-4-苯异氰酸酯(25mg，131μmol)，然后加入DIPEA(62μl，358μmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物，用硅胶(0-40％ EtOAc/异己烷)纯化产物，得到呈浅白色粉末的N-(3,4-二氯苯基)-6-(2-氟吡啶-3-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺(126)。LCMS(方法3)，在1.64分钟时，m/z 414.2(M-H)^-(ES^-)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),8.23(dd,J＝4.0,2.4Hz,1H),8.10(ddd,J＝10.0,7.5,2.0Hz,1H),7.88(d,J＝2.1Hz,1H),7.54–7.43(m,5H),7.32(d,J＝8.5Hz,1H),4.70(s,2H),3.74(t,J＝5.9Hz,2H),2.93(t,J＝5.8Hz,2H)。

使用合适的原材料以与实验方案13中所述类似的方法制备以下化合物。

关键：(a)使用频哪醇硼酸酯进行反应

人GPR65环磷酸腺苷(cAMP)均相时间分辨荧光(HTRF)拮抗剂检测程序

通过以下步骤获得IC₅₀数据：

根据供应商的说明培养稳定表达人重组GPR65的1321N1人星形细胞瘤细胞(1321N1-hrGPR65细胞，EuroscreenFast)。

通过在pH为7.2的条件下处理细胞以活化GPR65信号传导和加入待测化合物后，测定细胞质的cAMP浓度，测试化合物拮抗GPR65的能力。GPR65活化后cAMP浓度的预期升高被所加入的化合物抑制的程度表明其效力。根据如下EuroscreenFast的检测方法进行检测。

在检测当天，通过声分散将测试用化合物加入到384孔、低体积、白色微量滴定板中。通过加入NaOH，将KRH缓冲液(5mM KCl、1.25mM MgSO₄、124mM NaCl、25mM HEPES、13.3mM葡萄糖、1.25mM KH₂PO₄和1.45mM CaCl₂)调节至pH 6.5、pH 7.6和pH 8.4。将1321N1-hGPR65细胞快速解冻并在KRH(pH 7.6)中稀释，然后以300xg离心5分钟，然后再悬浮在分析缓冲液(KRH，pH 7.6，补充有1mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)和200μM乙二胺四乙酸(EDTA))中。将细胞以每孔2000个细胞的密度以5μl的体积加入检测板。在100xg条件下短暂离心检测板，然后在室温下孵育30分钟。通过添加5μL KRH(pH 6.5)刺激细胞，以达到7.2的检测pH值，而对照孔接受5μL KRH(pH8.4)，以达到7.9的检测pH。将检测板以100xg进行短暂离心，然后在室温下孵育30分钟。

通过cAMP HTRF试剂盒(Cisbio)检测cAMP的累积。将裂解和检测缓冲液(Cisbio)中d2标记的cAMP和穴状化合物(cryptate)标记的抗cAMP抗体加入检测板，并在室温下孵育板1小时。使用Pherastar FSX仪器进行HTRF测定。分别在665nm和620nm处测定受体和供体发射信号，HTRF比计算为信号_665nm/信号_620nm x 10⁴。将数据标准化为高和低对照值，并用4参数逻辑回归拟合，以确定测试用化合物的hGPR65的IC₅₀值，如表1所示。

在不脱离本发明的范围和精神的情况下，对本领域技术人员来说，本发明的所述方面的各种修改和变化将是显而易见的。虽然已经结合具体的优选实施方案描述了本发明，但是应当理解，所要求保护的本发明不应过度地局限于这样的具体实施方案。事实上，对相关领域的技术人员来说，所描述的实施本发明方式的显而易见的各种修改均旨在以下权利要求的范围内。

表1：本发明所选化合物的活性

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高＝IC₅₀<500nM；中＝IC₅₀>500nM且<5μM；低＝IC₅₀>5μM。

参考文献

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Tsurumaki,H.et al(2015).Int J Mol Sci.Protective Role of Proton-Sensing TDAG8 in Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury.Dec 4；16(12):28931-42

Claims

1.式(Ia)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，

其中：

Y和Z各自独立地是CR₁₀R₁₀′，其中R₁₀和R₁₀′各自独立地选自H、F、烷基和卤代烷基；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

其中，所述化合物不是：

N-(3,4-二氯苯基)-7,8-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酰胺；

N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺；

N-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢异噁唑并[4,5-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺；和

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述单环芳环或杂芳环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、哒嗪、嘧啶、嘧啶酮、吡嗪、三嗪、吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、异噁唑、咪唑、噁唑、噁二唑和噻唑，这些基团各自均可以任选地被取代。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述单环芳环或杂芳环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，这些基团各自均可以任选地被取代。

4.根据前述权利要求所述的化合物，其中环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，这些基团各自任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、苯基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、噻吩基、卤代吡啶基和C₁-C₆卤代烷基。

5.根据前述权利要求所述的化合物，其中环A是选自如下的基团：苯、吡啶、吡啶酮、N-氧化吡啶、嘧啶、嘧啶酮、哒嗪、吡嗪和异噁唑，这些基团各自任选地被选自如下的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、SO₂-烷基、CO₂-烷基、I和C₁-C₆卤代烷基。

6.根据权利要求1所述的化合物，其中环A是含有1至4个氮原子的9元或10元双环杂芳环，更优选环A是含有1至3个氮原子的9元或10元双环杂芳环。

7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中环A选自：

其中R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₆烷氧基、CO₂烷基、SO₂烷基、NR₁₁R₁₁′、OH、C₁-C₆烷基、任选取代的杂芳基、苯基和C₁-C₆卤代烷基，并且R₁₄是H或烷基。

8.根据权利要求7所述的化合物，其中环A选自基团(i)-(viii)、(ix)、(xi)、(xix)和(xxxii)。

9.根据权利要求7所述的化合物，其中环A选自基团(i)-(x)。

10.根据权利要求8所述的化合物，其中环A选自(i)、(ii)、(vii)和(x)。

11.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Y和Z各自独立地选自CH₂、CHMe、CF₂、C(CH₃)₂、C(CF₃)₂，并且优选均为CH₂。

12.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₁选自H、卤代烷基和F，并且优选为H。

13.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₂和R₃各自独立地选自F、Cl、Br、I、CN和C₁-C₆卤代烷基。

14.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₂和R₃各自独立地选自Cl、Br和CF_nH_3-n，其中n为1、2或3。

15.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₂和R₃各自独立地选自Cl和CF₃。

16.根据权利要求15所述的化合物，其中R₂和R₃中的一个是Cl，另一个是CF₃。

17.根据权利要求15所述的化合物，其中R₂和R₃均为Cl。

18.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₄选自H和Cl，并且优选为H。

19.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R₅是H或CF₃，更优选是H。

20.根据权利要求7至19中任一项所述的化合物，其中R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

21.根据权利要求20所述的化合物，其中R₆选自H、F、Cl、CN、甲氧基和CH₃，并且优选为H。

22.根据权利要求7至21中任一项所述的化合物，其中R₇选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

23.根据权利要求22所述的化合物，其中R₇选自H、NH₂、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、NH₂、F和Cl，并且更优选H。

24.根据权利要求7至23中任一项所述的化合物，其中R₈选自H、F、OH、CN、甲氧基、NR₁₁R₁₁′、苯基、CF₃、CF₂H、NHSO₂CH₃、NHCOCH₃和NHCHF₂，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

25.根据权利要求24所述的化合物，其中R₈选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选选自H、H、Cl和CN，并且更优选选自F和Cl。

26.根据权利要求7至25中任一项所述的化合物，其中R₈是F。

27.根据权利要求7至26中任一项所述的化合物，其中R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃、NR₁₁R₁₁′和CF₃，其中R₁₁和R₁₁′各自独立地选自H和C₁-C₆烷基，并且优选均为H。

28.根据权利要求27所述的化合物，其中R₉选自H、F、Cl、CN、甲氧基、CH₃和CF₃，优选H、F和CN，并且R₉更优选为H。

29.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其选自以下物质及其药学上可接受的盐和溶剂化物：

/>

30.式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用作药物的用途，

其中：

Y和Z各自独立地是CR₁₀R₁₀′，其中R₁₀和R_10’各自独立地选自H、F、烷基和卤代烷基；

R₁、R₄和R₅各自独立地选自H、F、Cl、Br、I和卤代烷基；

R₂和R₃各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN和卤代烷基；

其中R₂、R₃和R₄中的至少两个不是H；且

31.用于根据权利要求30所述用途的化合物，其进一步根据权利要求2至29中任一项定义。

32.一种选自以下的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物用作药物的用途：

/>

33.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至32中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

34.根据权利要求1至32中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据权利要求33所述的药物组合物在治疗或预防选自增殖性病症、免疫性病症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症中的用途。

35.根据权利要求34所述的化合物或药物组合物的用途，其中，所述化合物调节GPR65，优选其中所述化合物抑制GPR65信号传导。

36.根据权利要求34或35所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述病症是增殖性病症。

37.根据权利要求36所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述增殖性病症是癌症，并且优选是实体瘤和/或其转移瘤。

38.根据权利要求37所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述增殖性病症是选自如下的癌症：黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、胃癌、急性髓细胞性白血病(AML)、胰腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、结直肠癌、头颈癌、结直肠腺癌、肺癌、肉瘤、卵巢癌和神经胶质瘤，优选胶质母细胞瘤(GBM)。

39.根据权利要求34或35所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述病症为免疫性病症。

40.根据权利要求39所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述免疫性病症是自身免疫性病症。

41.根据权利要求40所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述自身免疫性病症选自：银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎)、葛瑞夫兹氏病、葡萄膜炎(包括中间葡萄膜炎)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、自身免疫性葡萄膜视网膜炎、系统性血管炎、多发性肌炎皮肌炎、系统性硬化症(硬皮病)、干燥综合征、强直性脊柱炎和相关的脊柱关节病、结节病、自身免疫性溶血性贫血、免疫性血小板病症和自身免疫性多内分泌腺病。

42.根据权利要求41所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述自身免疫性病症选自银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病和多发性硬化症。

43.根据权利要求34或35所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述用途包括治疗或预防选自哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症。

44.一种治疗根据权利要求34至43中任一项中所定义的病症的方法，包括向受试者施用根据权利要求1至32中任一项定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或根据权利要求33所定义的药物组合物。

45.根据权利要求1至32中任一项中所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于治疗或预防GPR65相关的疾病或病症的用途。

46.根据权利要求1至32中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗或预防受试者中的GPR65相关疾病或病症的药物中的用途。

47.根据权利要求1至32中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗或预防选自增殖性病症、免疫性病症、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症的药物中的用途。