CN116731880A - 一种内生真菌多量毛霉及其应用 - Google Patents
一种内生真菌多量毛霉及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116731880A CN116731880A CN202310722269.XA CN202310722269A CN116731880A CN 116731880 A CN116731880 A CN 116731880A CN 202310722269 A CN202310722269 A CN 202310722269A CN 116731880 A CN116731880 A CN 116731880A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- mucor
- culture
- total saponins
- ginsenoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000235395 Mucor Species 0.000 title claims abstract description 40
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 139
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims abstract description 139
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 138
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 claims abstract description 65
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 34
- 241000305491 Gastrodia elata Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 111
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 claims description 102
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 claims description 101
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 56
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 51
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 51
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 35
- 241001214923 Mucor abundans Species 0.000 claims description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 24
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 16
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 claims description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 11
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 11
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 11
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N ginsenoside Rb1 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 10
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- LLPWNQMSUYAGQI-OOSPGMBYSA-N notoginsenoside R1 Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LLPWNQMSUYAGQI-OOSPGMBYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 5
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 5
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 4
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 abstract description 30
- 235000003181 Panax pseudoginseng Nutrition 0.000 abstract description 30
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 19
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- 239000012084 conversion product Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 10
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 229940107131 ginseng root Drugs 0.000 description 5
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 5
- 229930189092 Notoginsenoside Natural products 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- QFJUYMMIBFBOJY-UXZRXANASA-N Panaxatriol Chemical compound C[C@]1([C@H]2CC[C@@]3([C@@H]2[C@H](O)C[C@H]2[C@]3(C[C@@H](O)[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@@]32C)C)C)CCCC(C)(C)O1 QFJUYMMIBFBOJY-UXZRXANASA-N 0.000 description 2
- VIXIMKLMEZTTTC-UHFFFAOYSA-N Panaxatriol Natural products CC1(C)CCCC(O1)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5C(O)CC34C VIXIMKLMEZTTTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 2
- -1 glycoside compound Chemical class 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N (20S)-ginsenoside Rg3 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N 0.000 description 1
- RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N (20S)-ginsenoside Rh1 Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]2C[C@@H](O)[C@H]3[C@@]([C@@]2(C1)C)(C)CC[C@@H]3[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N 0.000 description 1
- AVXFIVJSCUOFNT-QXPABTKOSA-N (2R,3R,4S,5S,6R)-2-[[(3S,5R,6S,8R,9R,10R,12R,13R,14R,17S)-3,12-dihydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-(6-methylhepta-1,5-dien-2-yl)-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-6-yl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H]1[C@H]2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@](C)([C@@]3(C)[C@H]([C@H](O)C2)[C@@H](C(=C)CC/C=C(\C)/C)CC3)C1 AVXFIVJSCUOFNT-QXPABTKOSA-N 0.000 description 1
- ZTQSADJAYQOCDD-FDDSVCGKSA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[[(3s,5r,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-[(2s)-6-methyl-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2s,3r,4s,5s)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxyhept-5-en-2-yl]-2,3,5,6,7 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZTQSADJAYQOCDD-FDDSVCGKSA-N 0.000 description 1
- KWDWBAISZWOAHD-MHOSXIPRSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6r)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-[[(3s,5r,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-(6-methylhepta-1,5-dien-2-yl)-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]o Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4C(=C)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KWDWBAISZWOAHD-MHOSXIPRSA-N 0.000 description 1
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000682226 Cladophialophora abundans Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- OZTXYFOXQFKYRP-TXRYYSRHSA-N Ginsenoside Rh4 Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]2C[C@@H](O)[C@H]3[C@@]([C@@]2(C1)C)(C)CC[C@@H]3C(/C)=C/CC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O OZTXYFOXQFKYRP-TXRYYSRHSA-N 0.000 description 1
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001480490 Mucoraceae Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 235000002791 Panax Nutrition 0.000 description 1
- 241000208343 Panax Species 0.000 description 1
- SYFJYASKXNAXKC-UHFFFAOYSA-N Panaxadiol Natural products CC1(C)CCCC(O1)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C SYFJYASKXNAXKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Substances CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N chikusetsusaponin LM5 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- OORMXZNMRWBSTK-LGFJJATJSA-N dammarane Chemical compound C1CCC(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C OORMXZNMRWBSTK-LGFJJATJSA-N 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N ginsenoside Rb2 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N 0.000 description 1
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NODILNFGTFIURN-USYOXQFSSA-N ginsenoside Rb3 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NODILNFGTFIURN-USYOXQFSSA-N 0.000 description 1
- JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N ginsenoside Rc Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N 0.000 description 1
- PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N ginsenoside Re Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]3(C)[C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@H]([C@H]4[C@H](O)C3)[C@](C)(CCC=C(C)C)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C)(C)C2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N 0.000 description 1
- YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N ginsenoside Rg1 Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N 0.000 description 1
- SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rc Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC2OC(CO)C(O)C2O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Re Natural products CC1OC(OCC2OC(OC3CC4(C)C(CC(O)C5C(CCC45C)C(C)(CCC=C(C)C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C7(C)CCC(O)C(C)(C)C37)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/785—Mucor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开一种内生真菌多量毛霉及其应用,属于生物转化技术领域,多量毛霉分离自新鲜天麻,具有高效将总皂苷转化为小极性人参皂苷皂苷成分的作用,多量毛霉菌发酵工艺简单,室温、无菌培养即可,具有广阔的工业化前景,转化得到的小极性人参皂苷含有的糖基少,膜通透性好,药理活性也相对较高;本发明首次发现多量毛霉菌具有从三七中生产小极性人参皂苷的能力,具有高效、简便、环保等优点,这一发现将有助于提高三七的药用功能和经济价值。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术应用领域,具体涉及一种天麻内生菌多量毛霉(Mucorabundans)及其应用于高效转化三七总皂苷(人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rb2、Rc、Rb3、三七皂苷R1)为小极性人参皂苷。
背景技术
三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)为五加科人参属植物。主要产于云南、广西、四川等地。三七主要的活性成分是皂苷类成分,皂苷是由苷元和各种糖基组成的糖苷类化合物,三七中的皂苷类成分大多数为达玛烷型皂苷。三七根中总皂苷含量高达8~12%,以人参三醇型皂苷为主,其中人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Re和三七皂苷R1含量最高,约占三七根中总皂苷含量的80%。三七花的总皂苷是三七植株中皂苷含量最高的部位,以人参二醇型皂苷为主,其中三七花中主要人参皂苷包括人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rb3、Rd。三七主根及花中天然皂苷都因其母核侧链上连接有不同种类和数量的糖基,而表现出较大的极性。研究表明,较大极性皂苷(天然皂苷)在肠内吸收较差,而小极性人参皂苷(稀有人参皂苷)很容易从胃肠道吸收到血液中,作为活性化合物发挥作用。因此通过体外转化促进天然人参皂苷转化为小极性人参皂苷的方法备受人们关注。
大量研究表明,稀有人参皂苷具有更高的药理活性。例如,研究证实人参皂苷Rk1通过协调端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导之间的机制,从而对肝癌HepG2细胞具有抗癌作用。Rg6是一种次要人参皂苷,通过诱导白介素-10和microRNA-146a抑制全身炎症。人参皂苷Rd2通过调节P2Y12下游的信号通路,有效地减弱血小板功能从而可以预防血栓性疾病;三七皂苷Fe可以治疗心脑血管疾病和抑制食源性肥胖。人参皂苷Rk3通过调节PI3K/Akt/mTOR通路介导细胞凋亡和自噬,在体内发挥抗食管癌活性。人参皂苷Rh4可以通过抑制JAK2/STAT3信号抑制肺腺癌转移,也可以抑制癌症细胞增殖。人参皂苷Rg3对肺癌细胞A549、黑色素瘤细胞、直肠癌细胞SW480、胆囊癌细胞等具有抑制作用。人参皂苷Rh1具有重要的抗炎、抗氧化作用等。
目前获得少量人参皂苷的方法主要有物理转化法、化学转化法、生物转化法和人参皂苷克隆酶转化。然而微生物转化法特异性强、条件温和、产物稳定、易分离、环境污染小、转化效率高等多重优势,是目前制备稀有人参皂苷的优选方法之一。
发明内容
本发明提供一种内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)及其应用,将内生真菌多量毛霉应用于促进三七总皂苷(人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rb2、Rc、Rb3、三七皂苷R1)高效转化为小极性人参皂苷,具有转化工艺简单,作用底物多样,转化产物丰富,制备成本低,无环境污染等优势。
本发明多量毛霉(Mucor abundans)属于真菌界(Fungi),毛霉门(Mucoromycota),藻状菌纲(Mucoromycetes),毛霉目(Mucorales),毛霉科(Mucoraceae),毛霉属(Mucor),分离自新鲜天麻。
本发明多量毛霉(Mucor abundans)T63,基因序列已提交至NCBI数据库,并通过其中的Bankit工具申请到GenBank登录号为OQ781160,利用软件MEGA6构建系统发育树,并结合菌落形态观察及菌丝显微形态观察确定T63为多量毛霉(Mucor abundans)。
本发明多量毛霉(Mucor abundans)已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.40620,保藏日期为2023年5月9日。
本发明内生真菌多量毛霉高效转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的方法,具体步骤为:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖20g/L,自然pH,在101kPa、121℃灭菌30min备用;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2~7d内生菌多量毛霉菌;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种的菌悬液体积是培养液体积的0.1~10.0%,室温,摇床无菌培养7~14d;
(4)底物添加:按三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:2~1:10的比例,乙醇溶液的体积百分比浓度为70~80%,将三七总皂苷与乙醇溶液混合得到三七总皂苷溶液,在无菌条件下将三七总皂苷溶液添加至步骤(3)培养结束后的菌液中,继续摇床培养7~21d,其中三七总皂苷溶液的添加量为菌液质量的0.02~2.00%;
(5)发酵结束后,采用纱布过滤掉菌体,发酵液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
本发明内生真菌多量毛霉高效转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的方法,具体步骤为:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖20g/L,自然pH,在101kPa、121℃灭菌30min备用;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2~7d内生真菌多量毛霉菌;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种的菌悬液体积是培养液体积的0.1~10.0%,室温,摇床无菌培养7~14d;
(4)将步骤(3)培养完毕的菌株用硫酸铵盐析,硫酸铵添加饱和度为60~85%;4000~12000r/min离心10~20min分离获得粗酶沉淀,按1g粗酶添加0.1~1L的pH值为3.5~5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液的比例漩涡震荡溶解粗酶沉淀;4000~12000r/min离心5~10min除去不溶物即得粗酶溶液;
(5)采用体积百分比浓度为70~80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:4~1:20,溶解后在无菌条件下将三七总皂苷溶液倒入步骤(4)的粗酶溶液中,继续培养1~4d,其中三七总皂苷溶液的添加量为粗酶溶液质量的0.02~2.00%;
(6)培养结束后,培养液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
本发明内生真菌多量毛霉高效转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的方法,具体步骤为:
(1)采用体积百分比为70~80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,得到终浓度为0.1~1mg/mL三七总皂苷溶液;
(2)利用上述粗酶溶液与步骤(1)中三七总皂苷溶液混合反应,三七总皂苷溶液与粗酶溶液的质量比为1:2~1:20,温度为50~60℃,pH值为3.5~5.0,反应4~72h;
(3)步骤(2)反应结束后加入水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得三七总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
所述三七总皂苷包括人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg1、Re、三七皂苷R1中的一种或多种混合;所述三七总皂苷可以为三七主根及三七花的乙醇提取物,其主根总皂苷主要含有人参皂苷Rb1、Rd、Rg1、Re和三七皂苷R1,花总皂苷主要含有主要人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd。
所述小极性人参皂苷为20(S)-R2、20(R)-R2、20(R)-Rh1、20(S)-Rh1、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、20(R)-Rh2、20(S)-Rh2、F2、Rk3、T5、Rh4、F4、Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5、Rk1、Fe(C-Mc1)、Rd2(C-O)、Fd(C-Mx1)、CK中的多种混合。
本发明的有益效果:
本发明首次发现多量毛霉菌具有从三七中生产小极性人参皂苷的能力,具有高效、简便、环保等优点,这一发现将有助于提高三七的药用功能和经济价值。
附图说明
图1为菌株T63的菌落形态;
图2为菌株T63的孢子形态;
图3为菌株T63的系统发育树;
图4为菌株T63粗酶转化三七主根总皂苷产物的薄层色谱分析结果;
图5为菌株T63粗酶转化三七花总皂苷产物的薄层色谱分析结果;
图6为菌株T63粗酶转化三七主根总皂苷产物的高效液相色谱分析结果;
图7为菌株T63粗酶转化三七花总皂苷产物的高效液相色谱分析结果;
图8为菌株T63生物转化人参皂苷Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rg1,Re和三七皂苷R1的转化路径(a-d)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。实施例中未详细说明的均是本领域的公知常识。
实施例中磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液配制:按不同体积比混合配好浓度为0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和浓度为0.1mol/L的柠檬酸溶液,不同体积比混合得到pH范围为3.5~5.0不同的缓冲液。
实施例1
多量毛霉(Mucor abundans)T63分离自新鲜天麻,该菌按照以下步骤进行分离纯化:
(1)马丁培养基配制:每升培养基中含葡萄糖20g、酵母浸膏2g、蛋白胨5g、MgSO40.5g、KH2PO41g、琼脂25g,余量为水,pH自然,用高压蒸汽灭菌锅121℃,灭菌30min,灭菌结束后取出培养基放入超净工作台,待培养基温度冷却至45℃左右,将提前配好的质量分数1%的链霉素水溶液,按每1L培养基对应4mL链霉素水溶液的比例进行添加,最后摇匀、倒平板即可;
(2)PDA固体培养基配制:每升培养基中含马铃薯浸出粉5g、葡萄糖15g、琼脂20g,pH自然;配制PDA斜面培养基配制时需将琼脂浓度调至25g/L,其余成分比例与PDA固体培养基一致;
(3)菌株的分离:取新鲜天麻,采用纯净水清洗,后放入超净工作台内采用体积分数75%乙醇溶液浸泡5min,后用蒸馏水冲洗3次,将清洗好的天麻放入质量分数6%的次氯酸钠溶液中浸泡5min,后用蒸馏水冲洗3次用无菌滤纸吸水,将杀菌处理后的天麻切片(1cmx1cmx0.3cm)至步骤(1)含有链霉素的马丁培养基上,置于恒温培养箱中25℃培养6d;
(4)菌株的纯化:在超净工作台中,用接种环挑取马丁氏培养基上形态各异的单菌落,以平板划线法将其逐一接种到新配制的多个PDA固体培养基上,倒置于25℃恒温培养箱中,培养6d后观察是否长出不同的菌落,若有不同菌落出现,则继续重复挑取单菌落,并用平板划线法将其接种到新的PDA培养基上,直至纯化到只有一种形态的菌落为止,将纯化所得的菌株接种到PDA斜面培养基上,进行一个临时性的编号T63,置于4℃冰箱保存,即为多量毛霉菌T63(Mucor abundans)。
菌株T63的显微形态及分子生物学鉴定:
(1)菌落形态鉴定:挑取少量菌丝接种于PDA固体培养基的3个点上,25℃培养6d后观察到如图1所示的菌落形态,从菌落形态可看出该菌落表面为白色,呈绒毛状,菌落绒毛凸起,菌丝生长的培养基最初是白色的,但后来变成了淡棕色,这与文献关于多量毛霉的报道是相吻合的。(2)显微形态鉴定:用光学显微镜对菌株的菌丝进行制片观察,得如图2所示的分生孢子梗形态,从图可以看出分枝的孢子清晰透明,顶端呈球形,分枝的孢子周围产生大量孢子囊,孢子囊为球状或近球状,显微形态的观察结果与相关文献描述一致。
(3)真菌ITS测序鉴定:将本实施例分离纯化到的菌株送至北京擎科生物科技有限公司进行ITS rDNA基因的测序,最后将测定结果提交至NCBI数据库进行BLAST同源比对,并选择相近种属的菌株利用软件MEGA6中的邻近法(Neighbor-joining)构建得如图3所示的菌株系统发育树,从发育树可以初步判断菌株T63与毛霉属的多量毛霉真菌相似度最高,所以综合上述所有数据确定该菌株为毛霉属的多量毛霉真菌(Mucor abundans)。
实施例2
三七主根总皂苷的提取,具体步骤如下:
(1)将三七主根加入到溶剂中,溶剂为体积分数60%的乙醇溶液,三七主根与溶剂的液料质量体积比为1:14,60℃保温1.5h来提取三七根总皂苷;
(2)三七主根总皂苷的纯化:采用D-101大孔吸附树脂的预处理,上样,洗脱:依次用体积分数10%、30%、50%、70%、90%、100%的乙醇溶液洗脱,洗脱液用TLC检测分析,合并洗脱液,经旋转蒸发仪减压浓缩,得三七根总皂苷;
(3)三七根总皂苷的检测分析:通过TLC和HPLC检测,判断三七主根中主要含5种皂苷,分别为人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、三七皂苷R1。
实施例3
三七花总皂苷的提取,具体步骤如下:
(1)将三七花加入到溶剂中,溶剂为体积分数60%的乙醇溶液,三七花与溶剂的液料质量体积比为1:14,60℃保温1.5h来提取三七花总皂苷;
(2)三七花总皂苷的纯化:采用D-101大孔吸附树脂的预处理,上样,洗脱:依次用体积分数10%、30%、50%、70%、90%、100%的乙醇溶液洗脱,洗脱液用TLC检测分析,合并洗脱液,经旋转蒸发仪减压浓缩,得三七花总皂苷;
(3)三七花总皂苷的检测分析:通过TLC和HPLC检测,判断三七花总皂苷中主要含有5种皂苷,分别为人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rb3、Rd。
实施例4
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)在无菌条件下,利用步骤(1)的PDB液体培养基活化实施例1提取的菌种培养2d;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种量为菌悬液体积是培养液体积的10.0%,室温,摇床无菌培养7d;
(4)底物添加:按三七根总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:2的比例,用体积百分比浓度为70%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,在无菌条件下将三七主根总皂苷溶液分别添加至步骤(3)培养结束后的菌液中,继续摇床培养7d,其中三七总皂苷溶液的添加量为菌液质量的2.00%;三七总皂苷为三七主根总皂苷提取物,主要含有人参皂苷Rb1、Rd、Rg1、Re和三七皂苷R1;
(5)发酵结束后,采用纱布过滤掉菌体,发酵液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的产物;
(6)步骤(5)转化产物用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例5
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)在无菌条件下,利用步骤(1)的PDB液体培养基活化实施例1提取的菌种培养7d;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种量为菌悬液体积是培养液体积的0.1%,室温,摇床无菌培养14d;
(4)底物添加:按三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:10的比例,用体积百分比浓度为80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,在无菌条件下将三七花总皂苷溶液分别添加至步骤(3)培养结束后的菌液中,继续摇床培养21d,其中三七总皂苷溶液的添加量为菌液质量的0.02%;三七总皂苷为三七花总皂苷提取物,主要含有5种皂苷,分别为人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rb3、Rd;
(5)发酵结束后,采用纱布过滤掉菌体,发酵液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的产物;
(6)步骤(5)转化产物用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例6
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2d实施例1提取的天麻内生真菌多量毛霉;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种量为菌悬液体积是培养液体积的5.0%,室温,摇床无菌培养10d;
(4)底物添加:按三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:5的比例,用体积百分比浓度为80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,在无菌条件下将三七总皂苷溶液分别添加至步骤(3)培养结束后的菌液中,继续摇床培养14d,其中三七总皂苷溶液的添加量为菌液质量的1.00%;三七总皂苷为三七主根及花总提取物主要含有8种皂苷,分别为人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg1、Re和三七皂苷R1;
(5)发酵结束后,采用纱布过滤掉菌体,发酵液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的产物;
(6)步骤(5)转化产物用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例7
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养5d实施例1纯化好的天麻内生真菌多量毛霉;
(3)将步骤(2)活化后的菌种接种到无菌PDB培养基进行扩大培养,接种量为菌悬液体积是培养液体积的10.0%,摇床培养14d;
(4)将步骤(3)培养完毕的菌株培养液过滤除去菌体后用硫酸铵盐析,硫酸铵添加饱和度为85%(即硫酸铵的加入量是其达到饱和溶液的量的85%,全文相同);12000r/min离心10min分离获得粗酶沉淀,按1g粗酶添加pH值为4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液0.5L的比例漩涡震荡溶解粗酶沉淀;12000r/min离心5min除去不溶物即得粗酶溶液;
(5)采用体积百分比浓度为75%的乙醇溶液溶解三七主根总皂苷,三七主根总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:4的比例,溶解后在无菌条件下将三七主根总皂苷溶液倒入步骤(4)提取完毕的粗酶溶液中,继续培养4d,其中三七主根总皂苷溶液的添加量为粗酶溶液质量的2.00%,培养完毕即可获得三七主根总皂苷转化产物;
(6)步骤(5)转化产物加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例8
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2d天麻内生真菌多量毛霉;
(3)将步骤(1)活化后的菌种接种到无菌PDB培养基进行扩大培养,接种量为菌悬液体积是培养液体积的0.1%,摇床培养7d;
(4)将步骤(3)培养完毕的菌株培养液过滤除去菌体后用硫酸铵盐析,硫酸铵添加饱和度为60%;4000r/min离心20min分离获得粗酶沉淀,按1g粗酶添加pH值为5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液1L的比例漩涡震荡溶解粗酶沉淀;8000r/min离心7min除去不溶物即得粗酶溶液;
(5)采用体积百分比浓度为80%的乙醇溶液溶解三七花总皂苷,三七花总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:20的比例,溶解后在无菌条件下,将三七花总皂苷溶液倒入步骤(4)提取完毕的粗酶溶液中,继续培养1d,其中三七花总皂苷溶液的添加量为粗酶溶液质量的0.02%,培养完毕即可获得三七花总皂苷转化产物;
(6)步骤(5)转化产物加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例9
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖15g/L,余量为水,自然pH,压力101kPa,121℃高温高压灭菌30min;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养7d天麻内生真菌多量毛霉;
(3)将步骤(2)活化后的菌种接种到无菌PDB培养基进行扩大培养,接种量为菌悬液体积是培养液体积的5.0%,摇床培养10d;
(4)将步骤(3)培养完毕的菌株培养液过滤除去菌体后用硫酸铵盐析,硫酸铵添加饱和度为75%;8000r/min离心15min分离获得粗酶沉淀,按1g粗酶添加pH值为3.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液0.1L的比例漩涡震荡溶解粗酶沉淀;4000r/min离心10min除去不溶物即得粗酶溶液;
(5)采用体积百分比浓度为80%的乙醇溶液溶解三七花总皂苷,三七花总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:10的比例,溶解后在无菌条件下将三七花总皂苷溶液倒入步骤(4)提取完毕的粗酶溶液中,继续培养2d,其中三七花总皂苷溶液的添加量为粗酶溶液质量的1.00%,培养完毕即可获得三七花总皂苷转化产物;
(6)步骤(5)转化产物加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例10
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)采用体积百分比为70%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,使三七总皂苷溶液终浓度为1mg/mL;
(2)步骤(1)中三七总皂苷为人参皂苷标准品(HPLC≥98%)Rb1、Rd、Re、Rg1、Rb2、Rc、Rb3、三七皂苷R1等量混合而成;
(3)利用实施例9中的粗酶溶液与步骤(1)中三七总皂苷溶液反应,三七总皂苷溶液与粗酶溶液的质量比为1:2;反应条件:温度为60℃,pH值为3.5,反应时间为4h;
(4)步骤(3)反应结束后加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例11
内生真菌多量毛霉(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)采用体积百分比为80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,使三七总皂苷溶液终浓度为0.5mg/mL;
(2)步骤(1)中三七总皂苷为三七根总皂苷;
(3)利用实施例8中的粗酶溶液与步骤(1)中三七总皂苷溶液反应,三七总皂苷溶液与粗酶溶液的质量比为1:10;反应条件:温度为50℃,pH值为5.0,反应时间为72h;
(4)步骤(3)反应结束后加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
实施例12
多量毛霉菌(Mucor abundans)粗酶转化三七总皂苷为小极性人参皂苷的应用,具体步骤如下:
(1)采用体积百分比为75%的乙醇溶液溶解三七皂苷,使三七皂苷单体溶液终浓度为0.1mg/mL;
(2)步骤(1)中三七总皂苷为人参皂苷标准品(HPLC≥98%)Rb1、Rd、Re、Rg1、Rb2、Rc、Rb3、三七皂苷R1中的一种;
(3)利用实施例9中的粗酶溶液分别与步骤(1)中三七皂苷单体溶液单独进行反应,三七皂苷单体溶液与粗酶溶液的质量比为1:20;反应条件:温度为50℃,pH值为3.5,反应时间为48h;
(4)步骤(3)反应结束后加入水饱和正丁醇萃取2~3次,取上清液减压浓缩后用于TLC和HPLC分析,得到小极性人参皂苷。
转化产物薄层色谱(TLC)分析:取出正丁醇层,旋转蒸发仪蒸干,利用甲醇溶解,用毛细管吸取甲醇溶解液,进行薄层色谱分析,展开剂为三氯甲烷-甲醇-水-冰醋酸6.7:2.6:0.4:0.3(v/v/v/v),显色剂为10%硫酸-乙醇溶液,实施例7和实施例8的TLC分析结果分别见图4和图5,从图4和图5中可以看出,皂苷转化组底物被转化并且出现多个迁移距离较大的新显色点,说明这些物质具有较小的极性,这一结果提示有小极性人参皂苷生成。
转化产物高效液相色谱(HPLC)分析:高效液相分析条件是C18柱(5μm,250mm×4.6mm);检测波长203nm;柱温30℃;体积流量1.0mL/mL;进样量30μL;流动相水溶液(A)-乙腈(B);洗脱程序为:0-30min,20%(B);30-60min,20-36%(B);60-65min,36-38%(B);65-68min,38-49%(B);68-88min,49-60%(B);88-91min,60-62%(B);91-101min,62-75%(B),实施例7的HPLC分析结果见图6,其中A为13种人参皂苷对照品,B为8种人参皂苷对照品,C为酶转化三七主根总皂苷转化产物(2,20(S)-R2;3,Rb1;4,20(R)-R2;5,20(R)-Rh1;6,Rd;7,F2;8,Rk3;9,T5;10,Rh4;11,20(S)-Rg3;12,20(R)-Rg3;15,Rg5;16,Rk1;1,13,14未知化合物),D为三七主根总皂苷;由图6可知粗酶可以将三七主根中主要皂苷(人参皂苷Rb1,Rd,Rg1,Re和三七皂苷R1)转化为次要人参皂苷(20(S)-R2,20(R)-R2,20(R)-Rh1,F2,Rk3,T5,Rh4,20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,Rg5,Rk1和未知化合物)。
实施例8的HPLC分析结果见图7,其中A为13种人参皂苷对照品,B为8种人参皂苷对照品,E为酶转化三七花总皂苷转化产物(2,Fc;3,Rb2;4,Rb3;6,Rd;8,Fe;9,Rd2+Fd;10,F2;11,Rk3;12,20(S)-Rg3;13,20(R)-Rg3,17,Rg5;18,Rk1;19,CK;1,5,7,14,15,16未知化合物),F为三七花总皂苷,由图7可知粗酶可以将三七花中主要皂苷(Rb1,Rb2,Rb3,Rc和Rd)转化为次要人参皂苷(Fc,Fe,Rd2,Fd,F2,Rk3,20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,Rg5,Rk1,CK和未知化合物)。
从实施例12的分析结果可以推测出三七单体皂苷转化路径如图8所示,C.abundans粗酶主要水解PPD型人参皂苷中的C-3与C-20相连的内葡萄糖外葡萄糖生成20(S/R)-异构体,以及通过脱水形成双键异构体(如图8a所示),也可以水解PPT型皂苷C-20的内葡萄糖和外葡萄糖生成20(S/R)-异构体;后通过脱水形成双键异构体(如图8b、8c、8d所示),那么由图8可知人参皂苷Rb1转化路径为:Rb1→Rd→20(S/R)-Rg3→Rh5/Rk1(主要路径);Rb1→Rd→F2→20(S/R)-Rh2(次要路径);人参皂苷Rb2转化路径为:Rb2→Rd2(C-O)(主要路径);Rb2→Rd→F2/20(S/R)-Rg3→20(S/R)-Rh2/Rg5/Rk1(次要路径);人参皂苷Rb3转化路径为:Rb3→Fd(C-Mx1)(主要路径);Rb3→Rd→F2/20(S/R)-Rg3→20(S/R)-Rh2/Rg5/Rk1(次要路径);人参皂苷Rc转化路径为:Rc→Fe(C-Mc1)(主要路径);Rc→Rd→F2/20(S/R)-Rg3→20(S/R)-Rh2/Rg5/Rk1(次要路径);人参皂苷Rg1转化路径为:Rg1→20(S/R)-Rh1→Rh4/Rk3;人参皂苷Re转化路径为:Re→20(S/R)-Rg2→Rg6/F4;三七皂苷R1转化路径为:R1→20(S/R)-R2→T5/3β,12β-二羟基达玛烷-(E)-20(22),24-二烯-6-o-β-d-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷,转化路径推导结果与实施例12的结论相符合。
本发明首次将多量毛霉真菌应用于三七总皂苷转化领域,且从产物来看可获得22种稀有人参皂苷(小极性人参皂苷),说明多量毛霉在转化天然人参皂苷制备稀有人参皂苷方面具有较大的应用价值。本发明以三七主根和三七花提取物为底物,采用多量毛霉菌进行生物转化生产小极性人参皂苷。本发明对环境友好且经济实惠,为工业化生产奠定可靠的理论基础。
Claims (8)
1.一种内生真菌多量毛霉(Mucor abundans),所述多量毛霉(Mucor abundans)属于真菌界(Fungi),毛霉门(Mucoromycota),藻状菌纲(Mucoromycetes),毛霉目(Mucorales),毛霉科(Mucoraceae),毛霉属(Mucor),分离自新鲜天麻。
2.根据权利要求1所述内生真菌多量毛霉(Mucor abundans),已在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为40620,保藏日期为2023年5月9日。
3.权利要求1所述内生真菌多量毛霉在三七总皂苷转化为小极性人参皂苷中的应用。
4.根据权利要求3所述应用,其特征在于,具体步骤为:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖20g/L,自然pH,在101kPa、121℃灭菌30min备用;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2~7d内生菌多量毛霉;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种的菌悬液体积是培养液体积的0.1~10.0%,室温,摇床无菌培养7~14d;
(4)按三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:2~1:10的比例,乙醇溶液的体积百分比浓度为70~80%,将三七总皂苷与乙醇溶液混合得到三七总皂苷溶液,在无菌条件下将三七总皂苷溶液添加至步骤(3)培养结束后的菌液中,摇床培养7~21d,其中三七总皂苷溶液的添加量为菌液质量的0.02~2.00%;
(5)发酵结束后,采用纱布过滤掉菌体,发酵液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
5.根据权利要求3所述应用,其特征在于,具体步骤为:
(1)PDB液体培养基的配制:培养基中各成分的比例为马铃薯浸出粉5g/L、葡萄糖20g/L,自然pH,在101kPa、121℃灭菌30min备用;
(2)采用步骤(1)制备的PDB培养基活化培养2~7d内生真菌多量毛霉;
(3)吸取步骤(2)活化好的多量毛霉菌悬液,接种到新的PDB液体培养基中,接种的菌悬液体积是培养液体积的0.1~10.0%,室温,摇床无菌培养7~14d;
(4)将步骤(2)培养完毕的菌株培养液除去菌体后用硫酸铵盐析,硫酸铵添加饱和度为60~85%;4000~12000r/min离心10~20min分离获得粗酶沉淀,按1g粗酶添加0.1~1L pH值为3.5~5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液的比例漩涡震荡溶解粗酶沉淀;4000~12000r/min离心5~10min除去不溶物即得粗酶溶液;
(5)采用体积百分比为70~80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1:4~1:20,溶解后在无菌条件下将三七总皂苷溶液倒入步骤(4)的粗酶溶液中,继续培养1~4d,其中三七总皂苷溶液的添加量为粗酶溶液质量的0.02~2.00%;
(6)培养结束后,培养液用水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
6.根据权利要求3所述应用,其特征在于,具体步骤为:
(1)采用体积百分比为70~80%的乙醇溶液溶解三七总皂苷,得到终浓度为0.1~1mg/mL的三七总皂苷溶液;
(2)利用权利要求5中步骤(4)的粗酶溶液与步骤(1)中三七总皂苷溶液混合反应,三七总皂苷溶液与粗酶溶液的质量比为1:2~1:20,温度为50~60℃,pH值为3.5~5.0,反应4~72h;
(3)步骤(2)反应结束后加入水饱和正丁醇萃取2~3次,合并上清正丁醇溶液,经旋转蒸发浓缩,即得三七总皂苷转化后的小极性人参皂苷。
7.根据权利要求3所述应用,其特征在于,所述三七总皂苷为人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg1、Re、三七皂苷R1中的一种或多种混合。
8.根据权利要求3所述应用,其特征在于,所述小极性人参皂苷为20(S)-R2、20(R)-R2、
20(R)-Rh1、20(S)-Rh1、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、20(R)-Rh2、20(S)-Rh2、F2、Rk3、T5、Rh4、F4、Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5、Rk1、Fe(C-Mc1)、Rd2(C-O)、Fd(C-Mx1)、CK中的多种混合。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310722269.XA CN116731880B (zh) | 2023-06-16 | 2023-06-16 | 一种内生真菌多量毛霉及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310722269.XA CN116731880B (zh) | 2023-06-16 | 2023-06-16 | 一种内生真菌多量毛霉及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116731880A true CN116731880A (zh) | 2023-09-12 |
CN116731880B CN116731880B (zh) | 2024-04-26 |
Family
ID=87911102
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310722269.XA Active CN116731880B (zh) | 2023-06-16 | 2023-06-16 | 一种内生真菌多量毛霉及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116731880B (zh) |
Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH104909A (ja) * | 1996-03-18 | 1998-01-13 | Daiichi Seito Kk | 工業的大量生産のできる味噌玉麹 |
CN101603019A (zh) * | 2009-07-23 | 2009-12-16 | 北京沃土天地生物科技有限公司 | 一种高无机氮源生物复合肥及其制备方法 |
CN101935681A (zh) * | 2009-07-03 | 2011-01-05 | 包海鹰 | 黑根霉对人参皂苷的转化作用 |
JP2011229428A (ja) * | 2010-04-26 | 2011-11-17 | Ikeda Shokken Kk | 抗酸化性組成物の製造方法 |
CN105331668A (zh) * | 2015-10-27 | 2016-02-17 | 昆明理工大学 | 一种生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法 |
CN106591142A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-04-26 | 昆明理工大学 | 一种炭角目菌植物内生菌及应用 |
WO2017117903A1 (zh) * | 2016-01-08 | 2017-07-13 | 赵树民 | 20(s)-原人参二醇的制备方法 |
CN107746871A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-03-02 | 吉林农业大学 | 利用裂褶菌生物转化人参皂苷制备人参稀有皂苷的方法 |
CN108998397A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-14 | 邹平金铭生物科技有限公司 | 一种复合微生物制剂及其制备方法 |
CN109971818A (zh) * | 2018-04-19 | 2019-07-05 | 沈阳药科大学 | 一种制备稀有人参皂苷的方法 |
CN110283871A (zh) * | 2019-07-10 | 2019-09-27 | 吉林农业大学 | 一种利用复合霉菌发酵人参生产多糖和稀有皂苷的方法 |
CN110898090A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-03-24 | 昆明理工大学 | 一种三七花总皂苷及其制备方法与应用 |
CN110982869A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-10 | 昆明理工大学 | 一种生物转化三七总皂苷制备20(R)-人参皂苷Rh1的方法 |
CN113717860A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-11-30 | 昆明理工大学 | 黄篮状菌在三七总皂苷转化为小极性人参皂苷中的应用 |
WO2023052829A1 (en) * | 2021-10-02 | 2023-04-06 | Desert King Chile S.A | A 3-o-monodesmosidic saponins extract, stable at physiological ph, method for preparing it from a quillaja plant extract cultured with a microbial consortium, uses and such microbial consortium |
US20240043901A1 (en) * | 2021-10-19 | 2024-02-08 | Mingzhiyuan (Hangzhou) Biological Technology Co., Ltd | A method for preparing ginsenoside preparation by biological engineering technology |
-
2023
- 2023-06-16 CN CN202310722269.XA patent/CN116731880B/zh active Active
Patent Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH104909A (ja) * | 1996-03-18 | 1998-01-13 | Daiichi Seito Kk | 工業的大量生産のできる味噌玉麹 |
CN101935681A (zh) * | 2009-07-03 | 2011-01-05 | 包海鹰 | 黑根霉对人参皂苷的转化作用 |
CN101603019A (zh) * | 2009-07-23 | 2009-12-16 | 北京沃土天地生物科技有限公司 | 一种高无机氮源生物复合肥及其制备方法 |
JP2011229428A (ja) * | 2010-04-26 | 2011-11-17 | Ikeda Shokken Kk | 抗酸化性組成物の製造方法 |
CN105331668A (zh) * | 2015-10-27 | 2016-02-17 | 昆明理工大学 | 一种生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法 |
WO2017117903A1 (zh) * | 2016-01-08 | 2017-07-13 | 赵树民 | 20(s)-原人参二醇的制备方法 |
CN106591142A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-04-26 | 昆明理工大学 | 一种炭角目菌植物内生菌及应用 |
CN107746871A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-03-02 | 吉林农业大学 | 利用裂褶菌生物转化人参皂苷制备人参稀有皂苷的方法 |
CN109971818A (zh) * | 2018-04-19 | 2019-07-05 | 沈阳药科大学 | 一种制备稀有人参皂苷的方法 |
CN108998397A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-14 | 邹平金铭生物科技有限公司 | 一种复合微生物制剂及其制备方法 |
CN110283871A (zh) * | 2019-07-10 | 2019-09-27 | 吉林农业大学 | 一种利用复合霉菌发酵人参生产多糖和稀有皂苷的方法 |
CN110898090A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-03-24 | 昆明理工大学 | 一种三七花总皂苷及其制备方法与应用 |
CN110982869A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-10 | 昆明理工大学 | 一种生物转化三七总皂苷制备20(R)-人参皂苷Rh1的方法 |
CN113717860A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-11-30 | 昆明理工大学 | 黄篮状菌在三七总皂苷转化为小极性人参皂苷中的应用 |
WO2023052829A1 (en) * | 2021-10-02 | 2023-04-06 | Desert King Chile S.A | A 3-o-monodesmosidic saponins extract, stable at physiological ph, method for preparing it from a quillaja plant extract cultured with a microbial consortium, uses and such microbial consortium |
US20240043901A1 (en) * | 2021-10-19 | 2024-02-08 | Mingzhiyuan (Hangzhou) Biological Technology Co., Ltd | A method for preparing ginsenoside preparation by biological engineering technology |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
NGUYEN TTT等: "Discovery of Three New Mucor Species Associated with Cricket Insects in Korea", J FUNGI (BASEL), 3 June 2022 (2022-06-03), pages 601 - 610 * |
吴秀丽;张怡轩;赵文倩;王金辉;吴春福;李铣;: "真菌EST-Ⅰ及EST-Ⅱ对人参皂苷Rg_1定向转化为人参皂苷F_1的研究", 沈阳药科大学学报, no. 01, 20 January 2008 (2008-01-20), pages 1 - 5 * |
张薇;孙晓东;张萍;吕国忠;: "专一转化人参二醇类皂苷Rb_1为Rd的真菌菌株的筛选", 菌物学报, no. 02, 15 March 2011 (2011-03-15), pages 162 - 168 * |
李伟主编: "《复方丹参滴丸物质基础和药代动力学研究》", 30 April 2014, 中国医药科技出版社, pages: 76 - 81 * |
李国勤: "动物毛霉菌病", 中国兽医学报, no. 03, 30 May 1996 (1996-05-30), pages 1 - 5 * |
蔡小雨;闫培生;高秀君;陈琪琪;郭长禄;刘润东;梁浩;张明臣;: "人参皂苷生物转化的研究进展", 中国农业科技导报, no. 04, 15 April 2018 (2018-04-15), pages 58 - 66 * |
赵方允;虞泓;陈自宏;曾文波;殷勤红;葛锋;: "三七中分离微生物对其转化的初步研究", 医学研究杂志, no. 08, 15 August 2011 (2011-08-15), pages 53 - 56 * |
郭从亮;杨晓艳;陈子明;武双;王承潇;黄璐琦;崔秀明;: "一株植物内生菌Coniochaeta sp.对三七总皂苷中人参皂苷Rb_1的特异性转化含量测定", 中药材, no. 05, 6 June 2016 (2016-06-06), pages 1075 - 1078 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116731880B (zh) | 2024-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111617120B (zh) | 一种人参虫草发酵提取物的制备方法 | |
CN103146592B (zh) | 一种转化人参皂苷Rb1生成Rd的酵母菌及其应用 | |
CN116426391B (zh) | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 | |
CN1982438A (zh) | 一株芽孢杆菌及用其制备单糖链人参皂苷及苷元的方法 | |
CN105331668A (zh) | 一种生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法 | |
CN103966112B (zh) | 多形汉逊酵母重组菌株及其在龙胆苦苷生物合成中的应用 | |
CN104762229B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用 | |
CN102363796B (zh) | 一种微生物发酵转化生产甘草次酸的方法 | |
CN113717860B (zh) | 黄篮状菌在三七总皂苷转化为小极性人参皂苷中的应用 | |
CN116731880B (zh) | 一种内生真菌多量毛霉及其应用 | |
CN107312720B (zh) | 一株高效转化人参皂苷Rb1为Rd木豆内生真菌及应用 | |
CN105420119B (zh) | 人参内生真菌及其应用 | |
CN109468359B (zh) | 一种人参皂苷Rk6的制备方法 | |
CN116790386A (zh) | 一株青霉属真菌Penicillium sp. YMS6及其应用 | |
CN116103161A (zh) | 一种产泽兰素的植物内生真菌及其应用 | |
CN106591142B (zh) | 一种炭角目菌植物内生菌及应用 | |
CN113502230B (zh) | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 | |
CN111763705B (zh) | 一种人参皂苷组合物的制备方法及其应用 | |
CN109609581A (zh) | 一种微生物混合发酵转化降解黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法 | |
CN109735473B (zh) | 发酵法制水溶性姜黄素 | |
CN107954839A (zh) | 一种抗炎活性化合物peniroquesine A及其制备方法和应用 | |
CN105199966B (zh) | 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用 | |
CN103614322B (zh) | 产糖苷酶的链霉菌及其在生物转化制备葫芦素b中的应用 | |
CN117089465B (zh) | 一种疣梗曲霉及应用 | |
CN113502231B (zh) | 一株德氏根霉Lut-8-53及其在生物转化法制备木犀草素中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |