CN116723854A - 肿瘤疫苗接种方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于治疗有需要的受试者的肿瘤或在有需要的受试者中产生针对肿瘤的免疫应答的方法，其包括一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向所述受试者施用有效量的第一组合物，和一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在所述肿瘤部位远端的部位向所述受试者施用有效量的第二组合物。所述第一和第二组合物可各自包含可用于引发针对所述肿瘤的免疫应答的同种异体白血病衍生细胞。

Description

肿瘤疫苗接种方法

相关申请

本申请要求2021年1月22日提交的美国临时申请号63/140,617的权益，所述专利出于所有目的以引用方式整体并入。

背景技术

传统上且目前仍然是治疗性肿瘤疫苗的重点是使用肿瘤抗原进行疫苗接种，所述肿瘤抗原由诸如树突状细胞(DC)的抗原呈递细胞(APC)处理，从而提供T细胞活化和产生针对肿瘤的免疫应答。此疫苗接种策略的目标是扩大来自幼稚库的肿瘤特异性T细胞池，同时通过肿瘤抗原的呈递来逆转肿瘤相关的休眠或无反应性，努力打破对这些抗原的中枢耐受并克服CD4⁺和/或CD8⁺T细胞库的钝化。

免疫疗法彻底改变了癌症疗法领域。有效免疫疗法的一个障碍在于肿瘤倾向于通过改变自身以减少肿瘤抗原的表达或通过创造抑制T细胞和免疫系统其他细胞的环境(肿瘤微环境或TME)来逃避免疫控制。通过这种方式，识别肿瘤抗原的T细胞库被灭活，导致T细胞群惰性或耗尽。一类特定的癌症免疫疗法是基于树突状细胞的疫苗，其包含与一种或多种肿瘤相关抗原组合的自体或同种异体树突状细胞。当前的疫苗接种方法包括在远离肿瘤的部位施用疫苗，例如，经由皮内或结内注射，或将疫苗直接注射到肿瘤微环境中。然而，许多疫苗接种方法都被肿瘤细胞的免疫逃避特性所规避，因为对肿瘤的自然选择压力通常不足以迫使肿瘤进入细胞死亡状态。

因此，需要改进的疫苗接种策略。

发明内容

本文提供了一种组合疫苗接种策略，其表现出优于常规疫苗接种方法的功效。在第一方面，本公开的疫苗接种策略包括一个或多个瘤内施用步骤，其中一个或多个瘤内施用步骤中的每一个包括将有效量的第一组合物(例如，第一免疫原性疫苗组合物)施用至肿瘤部位。在第二方面，本公开的疫苗接种策略包括一个或多个疫苗接种步骤，其中一个或多个疫苗接种步骤中的每一个包括将有效量的第二组合物(例如，第二免疫原性疫苗组合物)施用至肿瘤部位远端的部位。在某些实施方案中，本公开基于以下发现：与单独的组合物的瘤内或瘤外施用相比，包括在肿瘤部位瘤内和在肿瘤部位远端的部位瘤外施用一种或多种组合物(例如，免疫原性疫苗组合物)的组合疫苗接种策略导致肿瘤生长更强的减少。

在一个方面，提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，其包括：一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第一组合物；和一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第二组合物。

在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤各自包括将第一组合物施用到肿瘤中或接近肿瘤的部位。在某些示例性实施方案中，接近肿瘤的部位是肿瘤周围。在某些示例性实施方案中，第一组合物被制备用于瘤内施用。在某些示例性实施方案中，第一组合物包含瘤内施用可接受的稀释剂或溶剂。

在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径施用第二组合物。在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括静脉内施用第二组合物。在某些示例性实施方案中，第二组合物被制备用于静脉内施用。在某些示例性实施方案中，第二组合物包含静脉内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括皮内施用第二组合物。在某些示例性实施方案中，第二组合物被制备用于皮内施用。在某些示例性实施方案中，第二组合物包含皮内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括肌肉内施用第二组合物。在某些示例性实施方案中，第二组合物被制备用于肌肉内施用。在某些示例性实施方案中，第二组合物包含肌肉内施用可接受的稀释剂或溶剂。

在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括将第二组合物施用到与肿瘤所在的器官系统不同的器官系统中。在某些示例性实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在肿瘤对侧部位施用第二组合物。

在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之前进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之后进行。

在某些示例性实施方案中，所述方法还包括在一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤。在某些示例性实施方案中，在一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径向受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第三组合物。在某些示例性实施方案中，在一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤经由与一个或多个疫苗接种步骤相同的途径施用。在某些示例性实施方案中，在一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤经由与一个或多个疫苗接种步骤不同的途径施用。

在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间足以使免疫应答由于一个或多个疫苗接种步骤而产生。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间足以使免疫应答由于一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤而产生。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约2天至约21天。

在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤基本上同时进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤基本上同时进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤在同一天进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤在同一天进行。

在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤与一个或多个瘤内施用步骤之间的时间足以使免疫应答由于一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤而产生。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤与一个或多个瘤内施用步骤之间的时间为约2天至约21天。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤与一个或多个瘤内施用步骤基本上同时进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤与一个或多个瘤内施用步骤基本上同时进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤与一个或多个瘤内施用步骤在同一天进行。在某些示例性实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤与一个或多个瘤内施用步骤中的第一个步骤在同一天进行。

在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤相关。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤不相关。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，其中肿瘤相关抗原选自由以下组成的组：WT-1、MUC-1、RHAMM、PRAME、p53和生存素。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含WT-1、MUC-1、PRAME和生存素。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含树突状细胞表型。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含成熟树突状细胞表型。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。在某些示例性实施方案中，遗传畸变涵盖约16Mb基因组区域。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性和CD83阳性。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞表达选自由以下组成的组的细胞表面标志物：DC-SIGN、Langerin、CD80、CD86、CD70、CD40和它们的任何组合。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性、CD80阳性、CD86阳性和CD40阳性。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD14阴性。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自DCOne细胞系。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞已被灭活。在某些示例性实施方案中，同种异体白血病衍生细胞已经由照射灭活。

在某些示例性实施方案中，第一组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。在某些示例性实施方案中，第二组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。在某些示例性实施方案中，第三组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。

在某些示例性实施方案中，受试者先前罹患肿瘤。在某些示例性实施方案中，受试者先前接受过针对肿瘤的治疗。在某些示例性实施方案中，受试者罹患肿瘤复发。在某些示例性实施方案中，受试者是人。

在某些示例性实施方案中，受试者是家养动物和/或适合兽医保健的动物。

在某些示例性实施方案中，肿瘤是实体瘤。在某些示例性实施方案中，实体瘤选自由肉瘤、癌和淋巴瘤组成的组。在某些示例性实施方案中，实体瘤是卵巢癌。在某些示例性实施方案中，实体瘤是黑色素瘤。

附图说明

图1描绘了示出根据一个实施方案的植入SKOV3的卵巢癌小鼠模型的疫苗接种策略的示意图。

图2描绘了示出在施用根据图1的疫苗接种策略的植入SKOV3肿瘤的小鼠中随时间测量的肿瘤体积(以mm³为单位)的图。

图3描绘了示出根据一个实施方案的植入SKOV3的卵巢癌小鼠模型的疫苗接种策略的示意图。

图4A至图4C描绘了示出在施用对照疫苗接种(PBS；图4A)；组合疫苗接种(DCP-001IP+IT；图4B)；和复发疫苗接种(图4C)的植入SKOV3肿瘤的小鼠中随时间测量的肿瘤体积(以mm³为单位)的图。

图5描绘了示出在施用对照(PBS)；组合疫苗接种(IP+IT)；和复发疫苗接种的植入SKOV3肿瘤的小鼠中随时间测量的平均肿瘤体积(以mm³为单位)的图。

具体实施方式

本文提供了用于在受试者中产生针对肿瘤的免疫应答的方法。在某些实施方案中，产生的免疫应答足以治疗受试者的肿瘤。所述方法通常包括一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第一组合物(例如，第一免疫原性疫苗组合物)；和一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第二组合物(例如，第二免疫原性疫苗组合物)。

应理解，本文所述的方法不限于本文所公开的特定方法和实验条件，因为此类方法和条件可变化。还应理解，本文所使用的术语仅是出于描述特定实施方案的目的，并且不意图进行限制。本文所述的方法使用完全在普通技术人员技术范围内的常规分子和细胞生物学和免疫学技术。此类技术是技术人员众所周知的，并且在科学文献中进行了解释。

A.定义

除非另有定义，否则本文所使用的科学和技术术语具有本领域普通技术人员通常理解的含义。如果存在任何潜在的歧义，本文所提供的定义优先于任何字典或外部定义。除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。除非另有说明，否则"或"的使用意指“和/或”。术语“包括(including)”以及其他形式诸如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。

通常，结合本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质和核酸化学以及杂交使用的命名法是本领域众所周知且常用的。除非另外指定，否则本文所提供的方法和技术通常是根据本领域众所周知并且如在整个本说明书中引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法进行的。酶促反应和纯化技术是根据制造商的说明书、如本领域通常完成或如本文所述进行的。结合本文所述的分析化学、合成有机化学和医药化学所使用的命名法和这些化学领域的实验室程序和技术是本领域众所周知且常用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制、和递送、和患者治疗。

为了可以更容易地理解本公开，以下定义了选择的术语。

冠词“一个/种(a/an)”在本文中用于指代一个或多于一个(即，至少一个)的冠词的语法对象。举例来说，“一种元素”意指一种元素或多于一种元素。

如本文所用，当提及可测量值(诸如量、时距等)时，“约”意在涵盖与指定值±20％或±10％、±5％、±1％或±0.1％的变化，因为此类变化适用于执行所公开的方法。

如本文所用，“减轻”疾病意指降低疾病的一种或多种症状的严重程度。

如本文所用，术语“自体”意指衍生自同一个体，稍后被重新引入所述个体的任何材料。如本文所用，术语“同种异体”是指就需要治疗的受试者而言，涉及在遗传上不同并因此在免疫学上不相容的活组织或细胞。同种异体细胞，例如本文所述的同种异体白血病衍生细胞，虽然在遗传上不同，但衍生自同一物种。例如，本文所述的包括向受试者施用同种异体白血病衍生细胞的方法是指向受试者施用在遗传上不同但仍属于同一物种的白血病衍生细胞。

“疾病”是动物的健康状况，其中动物不能维持体内平衡，并且其中如果疾病没有得到改善，则动物的健康继续恶化。相比之下，动物的“病症”是这样的健康状况，其中动物能够维持体内平衡，但其中动物的健康状态不如没有病症时的健康状态。如果不进行治疗，病症不一定会导致动物健康状况进一步下降。

“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指有效实现特定生物学结果或提供治疗或预防益处的如本文所述的化合物、制剂、材料或组合物的量。此类结果可包括但不限于当施用于哺乳动物时，引起与在不存在本发明的组合物的情况下检测到的免疫应答相比可检测水平的免疫抑制或耐受的量。免疫应答可容易地通过大量本领域公认的方法进行评估。技术人员将理解，本文所施用的组合物的量是变化的，并且可基于多种因素容易地确定，所述因素诸如所治疗的疾病或病状、所治疗的哺乳动物的年龄以及健康和身体状况、疾病的严重程度、所施用的特定化合物等。

如本文所用，“内源性”是指来自生物体、细胞、组织或系统或在其内部产生的任何物质。

免疫原性组合物的“胃肠外”施用包括例如皮下注射(s.c.)、静脉内注射(i.v.)、肌肉内注射(i.m.)或胸骨内注射或输注技术。

如本文所用，术语“治疗性”意指治疗和/或预防。通过抑制、缓解或根除疾病状态获得治疗效果。

如本文所用，术语“治疗”疾病意指降低受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率或严重程度。

如本文所用，术语“免疫应答”包括T细胞介导和/或B细胞介导的免疫应答。T细胞的示例性免疫功能包括，例如，在其他细胞中产生细胞因子和诱导细胞毒性。B细胞功能包括产生抗体。另外，所述术语包括间接受T细胞活化影响的免疫应答，例如，抗体产生和细胞因子反应性细胞(例如，巨噬细胞)的活化。参与免疫应答的免疫细胞包括淋巴细胞，诸如B细胞和T细胞(CD4⁺和CD8⁺细胞)；抗原呈递细胞(例如，专职性抗原呈递细胞，诸如树突状细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、郎格罕氏细胞(Langerhans cell)；以及非专职性抗原呈递细胞，诸如角化细胞、内皮细胞、星形细胞、成纤维细胞、少突细胞)；天然杀伤细胞；髓系细胞，诸如巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱细胞以及粒细胞。在某些实施方案中，术语免疫应答是指T细胞介导的免疫应答。在一些实施方案中，免疫应答可以是T细胞依赖性免疫应答。

如本文所用，术语“T细胞依赖性免疫应答”是指一种免疫应答，其中T细胞、B细胞或T细胞和B细胞群都被活化，并且其中T细胞进一步协助T和B细胞以及其他免疫细胞执行其功能。

如本文所用，术语“T细胞介导的免疫应答”是指由T细胞驱动的免疫应答，并且其中另一种或进一步的免疫应答的引发依赖于T细胞的活化。在某些实施方案中，免疫应答是T细胞介导的免疫应答/T细胞依赖性免疫应答。技术人员熟知用于产生T细胞介导的免疫应答/T细胞依赖性免疫应答的方法和手段，例如通过选择已记录可测量的T细胞应答的适当抗原，或通过选择适当的佐剂或载剂，诸如化学佐剂、生物佐剂、蛋白质、病毒疫苗、树突状细胞疫苗或可作为疫苗组合物施用的任何其他组合物(Bender等人,J.Exp.Med,182:1663-1671(1995)；Bennett等人,Nature,393:478-480(1998)；Kalinski和Moser,Nature,5:251-260(2005)；Pashine等人,Nature Medicine Supplement,11:S63-S68(2005)，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文)。

如本文所用，术语“肿瘤”包括提及以异常高的速率增殖的细胞物质，例如组织。包含赘生性细胞的生长物是赘生物，也称为“肿瘤”，并且通常在受试者体内形成独特的组织块。肿瘤可表现出部分或完全缺乏与正常组织的结构组织和功能协调。如本文所用，肿瘤意图涵盖造血系统肿瘤以及实体瘤。在某些实施方案中，肿瘤是实体瘤。术语肿瘤包括提及肿瘤微环境或肿瘤部位，即肿瘤内的区域和直接位于肿瘤组织外部的区域。在某些实施方案中，肿瘤微环境或肿瘤部位包括肿瘤组织边界内的区域。在某些实施方案中，肿瘤微环境或肿瘤部位包括肿瘤的肿瘤间质区室，所述肿瘤间质区室在本文中定义为介于赘生性细胞的质膜与新形成的新血管的血管壁之间的全部。如本文所用，术语“肿瘤微环境”或“肿瘤部位”是指受试者体内肿瘤所在的位置，包括紧邻肿瘤周围的区域。紧邻肿瘤周围的区域可称为瘤周区域。

肿瘤可以是良性的(例如，良性肿瘤)或恶性的(例如，恶性肿瘤或癌症)。恶性肿瘤大致可分为三大类：起源于上皮结构的恶性肿瘤称为癌，起源于诸如肌肉、软骨、脂肪或骨骼的结缔组织的恶性肿瘤称为肉瘤，以及影响造血系统结构(与血细胞形成有关的结构)，包括免疫系统组成部分的恶性肿瘤称为白血病和淋巴瘤。其他肿瘤包括但不限于神经纤维瘤病。在某些实施方案中，肿瘤是卵巢癌(例如，上皮性卵巢癌，其可进一步分成亚型：浆液性、透明细胞、子宫内膜样、粘液性或混合性上皮性卵巢癌)。在某些实施方案中，肿瘤是黑色素瘤。

实体瘤是异常的组织块，可以是良性或恶性的。在某些实施方案中，实体瘤以形成它们的细胞类型命名(诸如肉瘤、癌和淋巴瘤)。适合通过本文所公开的方法治疗的实体瘤(诸如肉瘤和癌)的实例包括但不限于脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、粘液肉瘤和其他肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、平滑肌肉瘤、尤文氏(Ewing's)瘤、结肠癌、横纹肌肉瘤、胰腺癌、淋巴恶性肿瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、腺癌、基底细胞癌、汗腺癌、鳞状细胞癌、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、甲状腺乳头状癌、乳头状腺癌、乳头状癌、髓样癌、支气管癌、肝细胞瘤、肾细胞癌、胆管癌、维尔姆斯氏(Wilms')肿瘤、绒毛膜癌、宫颈癌、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、膀胱癌、黑色素瘤、中枢神经系统肿瘤(例如，神经胶质瘤，例如脑干神经胶质瘤和混合神经胶质瘤、胶质母细胞瘤(例如，多形性胶质母细胞瘤)、生殖细胞瘤、星形细胞瘤、颅咽管瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、神经鞘瘤、中枢神经系统淋巴瘤、听神经瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、脑膜瘤、少突胶质细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤和脑转移瘤)等。

适合通过本文所公开的方法治疗的癌包括但不限于鳞状细胞癌(各种组织)、基底细胞癌(皮肤癌的一种形式)、食道癌、膀胱癌，包括移行细胞癌(膀胱恶性赘生物)、肝细胞癌、结直肠癌、支气管癌、肺癌(包括小细胞癌和非小细胞肺癌)、结肠癌、甲状腺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肾上腺皮质癌、胰腺癌、汗腺癌、前列腺癌、乳头状癌、腺癌、皮脂腺癌、髓样癌、乳头状腺癌、导管原位癌或胆管癌、囊腺癌、肾细胞癌、绒毛膜癌、维尔姆斯氏肿瘤、精原细胞瘤、胚胎癌、宫颈癌、睾丸癌、鼻咽癌、成骨癌、上皮癌、子宫癌等。

适合通过本文所公开的方法治疗的肉瘤包括但不限于粘液肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、成骨肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、内皮肉瘤、骨肉瘤、间皮瘤、尤文氏肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤和其他软组织肉瘤。

如本文所用，术语“受试者”是指如本文所述的方法的接受者，即，可产生细胞免疫应答的接受者，例如哺乳动物。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者是家养动物，例如马、奶牛、猪、羊、狗、猫等。在某些实施方案中，受试者是适合兽医保健的动物，例如动物园动物。术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用。在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的人。在某些实施方案中，受试者是先前罹患肿瘤和/或先前接受过针对肿瘤的治疗的人。此类受试者可能罹患肿瘤复发。因此，合适的受试者包括罹患肿瘤复发的受试者。在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的家养动物。在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的适合兽医保健的动物。如本文所用，“适合兽医保健的动物”是适合兽医治疗的任何动物，并且包括但不限于能够产生细胞免疫应答的野生动物、家养动物和动物园动物。

如本文所用，术语“免疫原性组合物”是指在需要针对免疫原的免疫应答的受试者中诱导针对所述免疫原的特异性免疫应答的物质。组合物可包括佐剂和任选的一种或多种药学上可接受的载剂、赋形剂和/或稀释剂。免疫原性组合物可用于如本文所述的一个或多个疫苗接种步骤，诸如至少2、3、4或至少5次按时间分开的疫苗接种。在某些实施方案中，免疫原性组合物包含同种异体白血病衍生细胞。在某些实施方案中，免疫原性组合物用于如本文所述的一个或多个疫苗接种步骤(在免疫原性组合物诸如疫苗组合物中)和/或瘤内施用步骤。

如本文所用，术语“瘤内”是指将免疫原(例如，包含同种异体白血病衍生细胞的组合物)递送或转运到肿瘤中。如本文所述的组合物的瘤内递送或转运的一个实例是通过瘤内施用，这是本领域公知的施用途径。

如本文所用，短语“制备用于瘤内递送”是指如本文所述的组合物，其适用于瘤内递送和/或处于允许瘤内递送的制剂中。用于瘤内递送的制备剂可以这样组成，使得它对免疫系统与肿瘤之间的相互作用具有有益作用。在某些实施方案中，瘤内施用组合物(例如，包含树突状细胞或具有树突状细胞特性的细胞，例如，本文所述的同种异体白血病衍生细胞)可经由与进入肿瘤的T细胞直接相互作用和/或通过募集旁观者抗原呈递细胞间接提供额外的免疫刺激(Laurell等人,Journal for Immunotherapy of Cancer,5:52(2017)；Wallgren等人,Scandinavian Journal of Immunology,62,第234-242页(2005)，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文)。技术人员熟知用于制备用于瘤内递送的组合物的各种方法和手段。

如本文所用，术语“瘤内施用步骤”是指通过瘤内递送如本文所述的组合物来主动操纵肿瘤的抗原状态。可进行一个或多个瘤内施用步骤，其中每个瘤内施用步骤包括瘤内施用组合物。在某些实施方案中，瘤内施用步骤提供(i)免疫原在所述肿瘤中由非肿瘤细胞进行的细胞内递送和随后的加工和呈递；或(ii)免疫原向肿瘤的细胞外递送(即，在组合物的瘤内施用之前，向所述肿瘤中存在的细胞的细胞外递送)，例如，通过使用包含免疫原的同种异体白血病衍生细胞。当提及如本文所述的方法(例如，疫苗接种策略)中的步骤时，瘤内施用步骤是指在肿瘤部位向受试者施用有效量的组合物(例如，包含同种异体白血病衍生细胞)。

如本文所用，术语“疫苗接种步骤”是指如本文所述的方法(例如，疫苗接种策略)中的一个步骤，其中在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的组合物(例如，包含同种异体白血病衍生细胞)。在某些实施方案中，在本文所述方法的疫苗接种步骤中，在不是肿瘤所在部位的部位(例如，不是肿瘤部位)施用组合物。在某些实施方案中，在本文所述方法的疫苗接种步骤中，组合物在肿瘤外部位施用。可进行一个或多个疫苗接种步骤，其中每个疫苗接种步骤包括在肿瘤部位远端的部位施用组合物。多于一个疫苗接种步骤的目的可能是增强对免疫原的免疫应答。例如，在某些实施方案中，进行第一疫苗接种步骤，接着进行一个或多个后续疫苗接种步骤，当由于第一疫苗接种步骤而产生针对免疫原的免疫应答时，进行所述后续疫苗接种步骤。

如本文所用，术语“肿瘤外”是指例如在受试者体内远离(例如，远端)肿瘤和紧邻周围组织(例如，可能构成肿瘤微环境)的位置。

本领域技术人员容易理解：(i)本文所述方法的瘤内施用步骤中使用的组合物，如本文所述制备用于瘤内递送；以及(ii)本文所述方法的一个或多个疫苗接种步骤的组合物包含匹配的免疫原(例如，同种异体白血病衍生细胞)，并且在施用时引发针对由所述免疫原建立的一个或多个(目标)表位的免疫应答。因此，在某些实施方案中，(i)和(ii)下的免疫原在免疫学上是匹配的，因为肿瘤中免疫原的T细胞表位和/或B细胞表位被免疫原引发的T细胞和/或B细胞应答识别或与之反应。

范围：在整个本公开中，可以范围格式呈现本发明的各个方面。应当理解，对范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对本发明范围的不灵活限制。因此，对范围的描述应被认为已经具体公开了所有可能的子范围以及所述范围内的单个数值。例如，对范围诸如1至6的描述应被认为已经具体公开了子范围，诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及所述范围内的单个数字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度如何，这都适用。

B.同种异体白血病衍生细胞

本文提供了用于在有需要的受试者中引发针对肿瘤的免疫应答从而治疗肿瘤的方法。本文所述方法的方面包括：(i)一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第一组合物；和(ii)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第二组合物。虽然本公开提供了其中瘤内施用步骤发生在一个或多个疫苗接种步骤之前或之后的方法，但是当一个或多个疫苗接种步骤发生在瘤内施用步骤之前时，本文所提供的方法还包括其中一个或多个疫苗接种步骤发生在瘤内施用步骤之后。在此类情况下，所述方法包括：(i)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第一组合物；(ii)瘤内施用步骤，其包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第二组合物；和(iii)在瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括施用有效量的第三组合物。

本领域普通技术人员将容易理解，本文所提供的用于引发针对肿瘤的免疫应答和/或治疗肿瘤的方法(例如，疫苗接种策略)可采用任何免疫原性组合物的用途。在某些实施方案中，第一、第二和/或第三组合物各自包含同种异体白血病衍生细胞。如本文所用，术语“白血病衍生细胞”是指能够呈递抗原或其免疫原性部分以及MHC I类复合物或MHC II类复合物的白血病起源的细胞。术语“同种异体白血病衍生细胞”是指就用其进行治疗的受试者而言，在遗传上不同但属于同一物种的白血病衍生细胞。

在一些实施方案中，本文所提供的同种异体白血病衍生细胞包含树突状细胞表型。在一些实施方案中，本文所提供的同种异体白血病衍生细胞包含成熟树突状细胞表型。如本文所用，术语“树突状细胞”是指专职抗原呈递细胞(APC)，所述APC可摄取抗原，并且能够呈递抗原或其免疫原性部分以及MHC I类复合物或MHC II类复合体。在一些实施方案中，如本文所述的同种异体白血病衍生细胞具有能够执行与成熟树突状细胞的功能类似的功能的成熟树突状细胞表型。术语树突状细胞包括未成熟树突状细胞(“imDC”)和成熟树突状细胞(“mDC”)，这取决于成熟度。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是衍生自细胞系DCOne的细胞，所述DCOne在布达佩斯条约(Budapest treaty)的条件下于2012年11月15日以登录号DSMZACC3189保藏于DSMZ。从保藏的DCOne细胞系获得成熟细胞的过程例如在EP2931878B1中有所描述，其公开内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，本公开的同种异体白血病衍生细胞是如PCT公布号WO 2014/006058和WO 2014/090795中所述的细胞系DCOne的细胞，所述公布的公开内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含在称为DCP-001的疫苗内。DCP-001是一种现成的同种异体全细胞型疫苗，衍生自DCOne细胞系。在一个实施方案中，DCP-001是通过在米托蒽醌(mitoxantrone)存在下在GM-CSF、TNFα和IL-4的混合物中培养DCOne细胞以加速具有树突状细胞表型的细胞分化，接着在前列腺素-E2、TNFα和IL-1β存在下使细胞成熟而生产的。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自白血病细胞。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自患有白血病的受试者(例如，就使用白血病衍生细胞进行治疗的受试者而言，在遗传上不同的受试者)。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自患有白血病的患者的外周血。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自患有急性髓系白血病的患者的外周血。技术人员将认识到同种异体白血病衍生细胞可衍生自任何从患者获得的外周血，其中患者患有任何类型的白血病，前提是如此衍生的白血病衍生细胞包含本文所公开的特征。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性和CD83阳性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含选自由以下组成的组的细胞表面标志物：CD14、DC-SIGN、Langerin、CD40、CD70、CD80、CD83、CD86和它们的任何组合。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞表达选自由以下组成的组的细胞表面标志物：DC-SIGN、Langerin、CD40、CD70、CD80、CD83、CD86和它们的任何组合。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含MHC I类分子。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含MHC II类分子。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞不表达CD14。因此，在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性、CD86阳性、CD40阳性和CD14阴性。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。在某些实施方案中，遗传畸变涵盖约16Mb(例如，约20.7Mb至约36.6Mb)基因组区域。在某些实施方案中，遗传畸变含有约60个已知和未知基因丢失。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含共刺激分子。在某些实施方案中，共刺激分子包括但不限于MHC I类分子、BTLA和Toll配体受体。共刺激分子及其配体的实例包括但不限于CD27和CD70；CD28和CD80、CD86；4-1BB(CD137)和4-1BBL；OX40和OX40L；ICOS和ICOS-L；淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和ICAM-1；CD2和LFA-3；CD7和半乳糖凝集素-1；等。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种内源性抗原。根据白血病衍生细胞的白血病起源，白血病衍生细胞可包含至少一种已知的对白血病起源具有特异性的内源性抗原。在某些实施方案中，内源性抗原是肿瘤相关抗原。在某些实施方案中，内源性肿瘤相关抗原可选自由以下组成的组：WT-1、RHAMM、PRAME、p53、生存素和MUC-1。

本公开的同种异体白血病衍生细胞可包含外源性抗原。可经由本领域技术人员已知的各种抗原加载策略将此类外源性抗原提供给白血病衍生细胞。例如，加载同种异体白血病衍生细胞的策略可包括但不限于使用合成长肽、mRNA加载、肽脉冲、蛋白质加载、肿瘤裂解物加载、与肿瘤细胞共培养、RNA/DNA转染或病毒转导。用于加载同种异体白血病衍生细胞的其他策略是本领域技术人员已知的并且可用于将外源性抗原加载到白血病衍生细胞。通常，不受任何理论的约束，同种异体白血病衍生细胞将经由特定分子，例如经由MHC I或MHC II加工外源性抗原。因此，同种异体白血病衍生细胞包含的外源性抗原可以是MHC I类抗原或MHC II类抗原。在某些实施方案中，外源性抗原是肿瘤相关抗原。在某些实施方案中，外源性抗原与疾病或病症，例如非癌症相关疾病或病症相关。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤相关。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤不相关。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，其中肿瘤相关抗原选自由以下组成的组：WT-1、MUC-1、RHAMM、PRAME、p53和生存素。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞表达WT-1、MUC-1、PRAME和生存素。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含树突状细胞表型。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含成熟树突状细胞表型。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。在某些实施方案中，其中遗传畸变涵盖约16Mb基因组区域。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性和CD83阳性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞表达选自由以下组成的组的细胞表面标志物：DC-SIGN、Langerin、CD80、CD86、CD70、CD40和它们的任何组合。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性、CD80阳性、CD86阳性和CD40阳性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞呈CD14阴性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞衍生自DCOne细胞系。

在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤相关。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与受试者的肿瘤不相关。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，其中肿瘤相关抗原选自由以下组成的组：WT-1、MUC-1、RHAMM、PRAME、p53和生存素。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且表达WT-1、MUC-1、PRAME和生存素。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含树突状细胞表型。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含成熟树突状细胞表型。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且包含涵盖约16Mb基因组区域的遗传畸变。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且呈CD34阳性、CD1a阳性和CD83阳性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且表达选自由以下组成的组的细胞表面标志物：DC-SIGN、Langerin、CD80、CD86、CD70、CD40和它们的任何组合。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且呈CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性、CD80阳性、CD86阳性和CD40阳性。在某些实施方案中，同种异体白血病衍生细胞是细胞系DCOne的细胞，并且呈CD14阴性。

如本文所提供，某些方法利用同种异体白血病衍生细胞的用途，其中同种异体白血病衍生细胞被灭活。使本公开的同种异体白血病衍生细胞灭活的各种方法是本领域技术人员已知的。在某些实施方案中，对同种异体白血病衍生细胞进行照射。在某些实施方案中，在同种异体白血病衍生细胞用于本文所公开的方法之前，对其进行照射。例如，可使用标准照射装置(Gammacell或等效装置)通过30–150Gy(例如，100Gy)的γ照射1至3小时来实现照射。照射确保包含同种异体白血病衍生细胞(例如，CD34阳性细胞)的组合物中的任何剩余的祖细胞不能继续分裂。例如，细胞可在用作疫苗时注射到患者体内之前进行照射，或在停止培养后立即进行照射。

本领域普通技术人员将容易理解，本文所提供的用于引发针对肿瘤的免疫应答和/或治疗肿瘤的方法(例如，疫苗接种策略)可采用任何免疫原性组合物的用途。

C.药物组合物和制剂

本文提供了用于在有需要的受试者中引发针对肿瘤的免疫应答从而治疗肿瘤的方法。如本文所述，此类方法可采用有效量的第一、第二和/或第三组合物的用途。在某些实施方案中，此类组合物包含本文所述的同种异体白血病衍生细胞，并且可包括药物组合物和制剂，诸如单位剂量形式的组合物。

药物组合物和制剂通常包含一种或多种任选的药学上可接受的载剂和/或赋形剂。在某些实施方案中，所述组合物包含至少一种另外的治疗剂(例如，具有细胞抑制活性或抗癌活性的第二疗法)。

在某些实施方案中，本公开提供了采用可构成在组合物例如药物组合物(例如，免疫原性药物组合物)中的免疫原的方法。在某些实施方案中，组合物包含同种异体白血病衍生细胞和任选的药学上可接受的载剂。

术语“药物组合物”或“药物制剂”是指以允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式的制备剂，并且其不含有对将施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的其他组分。“药学上可接受的载剂”是指药物制剂中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。因此，存在多种合适的制剂。药学上可接受的载剂包括但不限于：缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。在某些实施方案中，载剂的选择部分地由特定细胞和/或施用方法确定。药学上可接受的载剂包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。在某些实施方案中，含有例如同种异体白血病衍生细胞的组合物的载剂适用于静脉内、肌肉内、皮下、胃肠外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。在某些实施方案中，在合适的情况下，例如基于小分子的第二疗法，含有第二疗法的组合物的载剂适用于非胃肠外施用，例如口服施用。

制剂包括那些用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肺部、透皮、肌肉内、鼻内、口颊、舌下或栓剂施用的制剂。在某些实施方案中，细胞群是胃肠外施用的。如本文所用，术语“胃肠外”包括静脉内、肌肉内、皮下、直肠、阴道和腹膜内施用。在某些实施方案中，通过静脉内、腹膜内或皮下注射使用外周全身递送将细胞施用于受试者。

在某些实施方案中，一种用于在有需要的受试者中产生针对肿瘤的免疫应答和/或治疗肿瘤的方法，其包括一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第一组合物；和一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第二组合物。在某些实施方案中，第一组合物被制备用于瘤内施用，并且可包含瘤内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些实施方案中，第二组合物被制备用于选自由以下组成的组的施用途径：肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织。在某些实施方案中，第二组合物被制备用于静脉内施用并且可包含静脉内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些实施方案中，第二组合物被制备用于皮内施用并且可包含皮内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些实施方案中，第二组合物被制备用于肌肉内施用并且可包含肌肉内施用可接受的稀释剂或溶剂。

在某些实施方案中，瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之后进行。在这样的实施方案中，所述方法还可包括在瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤。在瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤可各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第三组合物。在某些实施方案中，第三组合物被制备用于选自由以下组成的组的施用途径：肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织。在某些实施方案中，第三组合物被制备用于静脉内施用并且可包含静脉内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些实施方案中，第三组合物被制备用于皮内施用并且可包含皮内施用可接受的稀释剂或溶剂。在某些实施方案中，第三组合物被制备用于肌肉内施用并且可包含肌肉内施用可接受的稀释剂或溶剂。

本公开的药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的盐、抗氧化剂、水性和非水性载剂、和/或佐剂诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过特定施用途径施用可接受的制备剂是本领域技术人员已知的并且可包括以下。

无论施用途径如何，本领域已知的佐剂都可用于改善/增强本公开方法所用组合物的免疫原性。佐剂增强组合物(例如，包含同种异体白血病衍生细胞的组合物)的免疫原性，但它们本身不一定是免疫原性的。本领域技术人员已经使用佐剂来改善对例如疫苗的免疫应答。佐剂可以是内在的或外在的。内在佐剂可衍生自用作疫苗的灭活或减毒细菌。外在佐剂可以是与抗原非共价连接的免疫调节物质并且被配制以增强免疫应答。

在某些实施方案中，第一、第二和/或第三组合物可包含T细胞免疫应答引发佐剂。本文中与佐剂相关使用的术语“T细胞免疫应答引发”是指增强CD4₊和/或CD8₊T细胞免疫应答或驱动免疫应答朝向CD4₊和/或CD8₊T细胞活化。帮助技术人员选择将免疫应答引导朝向细胞免疫的佐剂的参考文献是例如Pashine等人,Nature Medicine Supplement,11:S63-S68(2005)和Awate等人,Frontiers in Immunology,4:114,第1-10页(2013)，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。此类佐剂的实例是铝矿物盐、水包油乳液、脂质体、toll样受体激动剂或它们的组合。其他佐剂包括脂质体、病毒体、MF59、Montanide、ISCOMs、QS-21、铝、AS04、Poly I:C、MPL、GLA、咪喹莫特、CpG ODN、几丁质、壳聚糖、β-葡聚糖或它们的组合。(Temizoz等人Int Immunol.2016年7月；28(7):329–338，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文)。

在某些实施方案中，佐剂可专门用于胃肠外施用方式。此类佐剂包括例如铝化合物(诸如磷酸铝和氢氧化铝)。根据标准方案，抗原可用铝化合物沉淀或吸附到铝化合物上。用于胃肠外施用方式以及瘤内或瘤周施用方式的其他佐剂是本领域技术人员已知的。

在某些实施方案中，药物组合物可含有防腐剂。合适的防腐剂可包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在某些实施方案中，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载剂是本领域技术人员已知的，并且例如由Remington’sPharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.编(1980)描述。药学上可接受的载剂在采用的剂量和浓度下对接受者通常是无毒的，并且包括但不限于：缓冲液诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子诸如钠离子；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂诸如聚乙二醇(PEG)。

某些实施方案中的缓冲剂包含在组合物中。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在某些实施方案中，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可施用的药物组合物的方法是已知的。示例性方法在例如Remington:The Science andPractice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)中进行了更详细的描述。

制剂可包括水溶液。制剂或组合物还可含有可用于用细胞治疗的特定适应症、疾病或病状的多于一种活性成分，优选具有与所述细胞互补的活性的那些，其中相应活性不会对彼此产生不利影响。此类活性成分适当地以对预期目的有效的量组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物还包含其他药物活性剂或药物，诸如化疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春花碱和/或长春新碱。在一些实施方案中，药物组合物含有有效治疗或预防疾病或病状的量(诸如治疗有效量或预防有效量)的细胞。在一些实施方案中，通过对所治疗的受试者进行定期评估来监测治疗或预防功效。可通过单次推注施用细胞、多次推注施用细胞或连续输注施用细胞来递送所需剂量。

将某些实施方案中的组合物作为在一些方面可被缓冲至选定pH的无菌液体制备剂提供，例如等渗水性溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物。液体制备剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外，液体组合物在某种程度上更便于施用，尤其是通过注射。另一方面，可在适当的粘度范围内配制粘性组合物以提供与特定组织的更长接触时间段。液体或粘性组合物可包含载剂，所述载剂可以是溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。

可通过将细胞掺入溶剂，诸如与合适的载剂、稀释剂或赋形剂诸如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等混合来制备无菌可注射溶液。组合物可含有辅助物质，诸如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、和/或着色剂，具体取决于施用途径和所需制备剂。在一些方面可参考标准文本来制备合适的制备剂。将用于体内施用的制剂通常是无菌的。可例如通过经由无菌过滤膜过滤来容易地实现灭菌。

可添加增强组合物的稳定性和无菌性的各种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲液。可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚和山梨酸)来确保防止微生物作用。可通过使用延迟吸收剂，例如单硬脂酸铝和明胶，使可注射药物形式的吸收延长。

本公开的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可变化，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用方式的所需治疗应答而对患者不具有过度毒性的活性成分的量。所选剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所采用的本公开的特定组合物的活性、施用途径、施用时间、所采用的特定化合物的排泄速率、治疗持续时间、与所使用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗患者的年龄、性别、体重、病情、一般健康状况和既往病史，以及医学领域中众所周知的类似因素。本公开的组合物可使用本领域中众所周知的多种方法中的一种或多种经由一种或多种施用途径施用。

正如技术人员所理解的那样，施用途径和/或施用方式将根据所需结果而变化。此外，本领域技术人员知道能够产生免疫应答的其他合适的组合物。

D.治疗方法

本文所提供的用于引发针对肿瘤的免疫应答并在此过程中治疗有需要的受试者中的肿瘤的方法包括一个或多个瘤内施用步骤和一个或多个疫苗接种步骤。此类方法包括一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位施用有效量的第一组合物，例如瘤内或瘤周，以及一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端部的位施用有效量的第二组合物。

在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤各自包括瘤内或瘤周施用有效量的第一组合物。在某些实施方案中，瘤内施用步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第一组合物。在某些实施方案中，瘤内施用步骤各自包括将第一组合物施用到肿瘤中或接近肿瘤。如本文所述的方法中使用的瘤内施用步骤意图包括将有效量的第一组合物施用到肿瘤中(例如，施用到涵盖肿瘤块和周围肿瘤微环境的区域中)。在某些实施方案中，当肿瘤可能具有较难区分的边界并且技术人员(例如，医师)难以在肿瘤边界内施用第一组合物时，瘤内施用步骤意图涵盖瘤周施用组合物(例如，在紧邻肿瘤周围的区域)。

在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括将有效量的第二组合物施用到肿瘤远端的部位，即远离肿瘤的部位。在某些实施方案中，在如本文所述的疫苗接种步骤中第二组合物的远端施用是通过胃肠外途径，其包括静脉内、动脉内、皮下、皮内、结内、淋巴管内和肌肉内施用，这些都是本领域技术人员众所周知的。在某些实施方案中，在如本文所述的疫苗接种步骤中第二组合物的远端施用通过选自由以下组成的组的方式递送：肌肉内注射、皮下注射、静脉内注射、动脉内注射、腹膜内注射、胸骨内注射、皮内注射、经皮注射、透皮注射，并且递送至组织的间隙空间。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括施用第二组合物，其中施用不是瘤内的，而是瘤外的，并且在一些情况下是肌肉内、皮内、静脉内、结内、淋巴内或它们的组合。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在肿瘤部位远端的部位皮内施用第二组合物。

在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤中的每一个包括经由相同的施用途径施用第二组合物，例如，一个或多个疫苗接种步骤中的每一个包括皮内施用第二组合物。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤包括经由与疫苗接种步骤中的至少一个不同的施用途径施用第二组合物。例如，本文所述的包括一个或多个疫苗接种步骤的方法可包括皮内施用的第一疫苗接种步骤和肌肉内施用的第二疫苗接种步骤。只要一个或多个疫苗接种步骤在肿瘤部位远端的部位施用，一个或多个疫苗接种步骤中的每一个都可在不同位置或相同位置施用。

在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在距肿瘤(例如，肿瘤的边缘，或肿瘤的中心)至少约0.1mm、至少约0.2mm、至少约0.3mm、至少约0.4mm、至少约0.5mm、至少约0.6mm、至少约0.7mm、至少约0.8mm、至少约0.9mm、至少约1mm、至少约2mm、至少约3mm、至少约4mm、至少约5mm、至少约6mm、至少约7mm、至少约8mm、至少约9mm、至少约10mm、至少约15mm、至少约20mm、至少约25mm、至少约30mm、至少约35mm、至少约40mm、至少约45mm、至少约50mm、至少约60mm、至少约70mm、至少约80mm、至少约90mm、至少约10cm、至少约20cm、至少约30cm、至少约40cm、至少约50cm、50cm或更远的部位远端施用第二组合物。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用第二组合物，其中肿瘤部位远端的部位距离肿瘤(例如，肿瘤的边缘，或肿瘤的中心)至少约0.1mm、至少约0.2mm、至少约0.3mm、至少约0.4mm、至少约0.5mm、至少约0.6mm、至少约0.7mm、至少约0.8mm、至少约0.9mm、至少约1mm、至少约2mm、至少约3mm、至少约4mm、至少约5mm、至少约6mm、至少约7mm、至少约8mm、至少约9mm、至少约10mm、至少约15mm、至少约20mm、至少约25mm、至少约30mm、至少约35mm、至少约40mm、至少约45mm、至少约50mm、至少约60mm、至少约70mm、至少约80mm、至少约90mm、至少约10cm、至少约20cm、至少约30cm、至少约40cm、至少约50cm、50cm或更远。本领域技术人员将能够辨别肿瘤部位远端的部位。

在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在器官系统中与肿瘤所在的器官系统不同的部位远端施用第二组合物。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括将第二组合物施用到与肿瘤所在的器官系统不同的器官系统中。例如，如果肿瘤位于卵巢处或卵巢内(例如，上皮性卵巢癌)，则一个或多个疫苗接种步骤各自包括在器官系统中不是卵巢的部位(例如，肝脏、肾脏等)远端施用第二组合物。如本文所用，术语“器官”或“器官系统”是指具有相似功能的一组组织。器官系统的实例包括但不限于肌肉系统、消化系统(例如，胃、小肠、大肠、肝脏、胰腺等)、呼吸系统(例如，肺)、泌尿系统(例如，肾脏、膀胱等)、生殖器官(例如，男性和女性生殖系统、卵巢、胎盘、前列腺等)、内分泌系统、循环系统、神经系统(例如，中枢和外周神经系统)和外皮系统(例如，皮肤、皮下组织)。

在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在肿瘤部位对侧的部位远端施用第二组合物。在某些实施方案中，一个或多个疫苗接种步骤各自包括在肿瘤部位对侧的部位施用第二组合物。例如，如果肿瘤位于卵巢处或卵巢内，则一个或多个疫苗接种步骤各自包括在对侧卵巢处或对侧卵巢内远端施用第二组合物。例如，如果肿瘤位于左卵巢处或左卵巢内，则一个或多个疫苗接种步骤各自包括向右侧卵巢远端施用第二组合物。例如，如果肿瘤位于卵巢处或卵巢内，则一个或多个疫苗接种步骤各自包括在对侧卵巢处或对侧卵巢内施用第二组合物。例如，如果肿瘤位于左卵巢处或左卵巢内，则一个或多个疫苗接种步骤各自包括向右侧卵巢施用第二组合物。

在瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之后进行的情况下，如本文所述的方法还可包括在瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤。在某些实施方案中，在瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第三组合物。如本领域普通技术人员所理解的，在某些实施方案中，第三组合物可经由与第二组合物相同的途径施用。在某些实施方案中，第三组合物可经由与第二组合物不同的途径施用。

因此，本文提供了一种用于在有需要的受试者中产生针对肿瘤的免疫应答和/或治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，其包括：(i)一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第一组合物；和(ii)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第二组合物。在某些实施方案中，所述方法按以下顺序包括：(i)一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第一组合物；和(ii)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第二组合物。在某些实施方案中，所述方法按以下顺序包括：(i)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第一组合物；和(ii)一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第二组合物。

在按以下顺序执行的方法中：(i)一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在肿瘤部位远端的部位向受试者施用有效量的第一组合物；和(ii)瘤内施用步骤，其包括在肿瘤部位向受试者施用有效量的第二组合物；所述方法还包括(iii)在一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括向受试者施用有效量的第三组合物。

如本文所述，本公开的方法包括一个或多个疫苗接种步骤(例如，包括施用第二组合物的一个或多个疫苗接种步骤，或包括施用第三组合物的一个或多个疫苗接种步骤)。在某些实施方案中，进行两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个疫苗接种步骤。技术人员将认识到，如果有的话，进行任何后续疫苗接种步骤，设想后续疫苗接种步骤以结合本文所述的疫苗接种步骤的任何实施方案。

在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤(例如，一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤)基本上同时进行。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤基本上同时进行。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤(例如，一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤)在同一天进行。

在某些实施方案中，瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤(例如，一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤)在时间上是分开的。因此，在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之前进行。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之后进行。在某些实施方案中，在一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间已经过去了一定时间。在某些实施方案中，在首先进行一个或多个瘤内施用步骤的情况下，所经过的时间量足以使受试者由于一个或多个瘤内施用步骤而产生免疫应答。在某些实施方案中，在随后进行一个或多个瘤内施用步骤的情况下，所经过的时间量足以使受试者由于一个或多个疫苗接种步骤而产生免疫应答。技术人员将容易理解，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间经过的时间量是一个或多个瘤内施用步骤的最后一个步骤与一个或多个疫苗接种步骤的第一个步骤之间的时间量(其中一个或多个瘤内施用步骤在一个或多个疫苗接种步骤之前进行)。在一个或多个瘤内施用步骤之前进行一个或多个疫苗接种步骤的情况下，技术人员理解经过的时间是在一个或多个疫苗接种步骤的最后一个步骤与一个或多个瘤内施用步骤的第一个步骤之间。

例如，初级免疫应答由于一个或多个疫苗接种步骤(例如，一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤)而产生。在初级免疫应答的情况下，产生初级免疫应答可能需要约7天至约21天。在另一个实例中，次级免疫应答由于一个或多个疫苗接种步骤(例如，一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤)而产生。在次级免疫应答的情况下，产生次级免疫应答可能需要约2天至约3天。因此，在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约1天至约21天、约1天至约22天、约1天至约23天、约1天至约24天、约1天至约3周、约1天至约4周、约1天至约5周、约1天至约10周，以及其任何中间时间量。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周，以及其任何中间时间量。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约2天至约21天。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约2天至约3天。在某些实施方案中，一个或多个瘤内施用步骤与一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约7天至约21天。

适合接受如本文所述的方法的受试者可以是能够产生细胞免疫应答的任何受试者。例如，任何哺乳动物都可以是本文所述方法的合适接受者。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者是家养动物，例如马、奶牛、猪、羊、狗、猫等。在某些实施方案中，受试者是适合兽医保健的动物，例如动物园动物。

在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的人。在某些实施方案中，受试者是先前患有肿瘤和/或先前接受过针对肿瘤的治疗的人。此类受试者可能罹患肿瘤复发。因此，合适的受试者包括罹患肿瘤复发的受试者。在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的家养动物。在某些实施方案中，受试者是罹患肿瘤(例如，实体瘤)的适合兽医保健的动物。如本文所用，“适合兽医保健的动物”是适合兽医治疗的任何动物，并且包括但不限于能够产生细胞免疫应答的野生动物、家养动物和动物园动物。肿瘤可以是液体瘤或实体瘤。实体瘤的实例包括那些被分类为肉瘤、癌和淋巴瘤的肿瘤。在某些实施方案中，受试者罹患实体瘤。在某些实施方案中，受试者罹患卵巢癌。在某些实施方案中，受试者罹患黑色素瘤。

E.组合疗法

本文所提供的方法可用于产生针对肿瘤的免疫应答和/或治疗肿瘤。此类方法可单独使用，或与其他疗法(例如，第二疗法)组合使用。因此，本文还提供了用于与本文所述的方法组合使用的组合疗法。例如，本文所提供的方法可与放射疗法或具有细胞抑制活性或抗癌活性的第二疗法组合使用。

在某些实施方案中，本文所述的方法还包括向受试者施用第二疗法。在一些实施方案中，第二疗法包括有效量的组合物。在一些实施方案中，第二疗法包括放射疗法。在一些实施方案中，第二疗法包括免疫检查点疗法。在一些实施方案中，第二疗法包括抗血管生成疗法。在一些实施方案中，第二疗法包括聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂疗法。本领域技术人员(例如，医师)将能够容易地确定可用于本文所述的组合疗法的特定剂量和给药方案。

在某些方面，本文所提供的方法可用于与具有细胞抑制活性或抗癌活性的第二疗法组合。合适的细胞抑制化疗化合物包括但不限于DNA交联剂、DNA片段化剂、嵌入剂、蛋白质合成抑制剂、拓扑异构酶I和II抑制剂、抗代谢物、微管导向剂、激酶抑制剂、激素和激素拮抗剂。

在某些方面，本文所提供的方法可用于与包含一种或多种免疫肿瘤学(IO)剂的第二疗法组合。已知IO剂可有效增强、刺激和/或上调受试者的免疫应答。在某些实施方案中，与本文所述的方法组合使用IO剂可增强所述方法在治疗肿瘤中的功效。IO剂的实例包括但不限于小分子药物、抗体和基于细胞的剂。在某些实施方案中，IO剂是单克隆抗体，其可以是人抗体或人源化抗体。

IO剂可以是刺激受体(例如，共刺激受体)的激动剂，或T细胞上抑制信号的拮抗剂。两者的结果都包括抗原特异性T细胞应答的放大。此类IO剂在本领域中也称为免疫检查点调节剂(例如，免疫检查点抑制剂)。在一些实施方案中，IO剂调节共刺激和/或共抑制通路，并且能够增强和/或恢复抗原特异性T细胞应答的功能。参与共刺激和/或共抑制通路的分子的实例包括但不限于免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员；B7膜蛋白家族的成员，包括例如B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6；肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员，包括例如CD40、CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fnl4、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY和NGFR。

因此，在某些实施方案中，免疫检查点疗法包括使用一种或多种免疫检查点调节剂，它们是(i)抑制T细胞活化的蛋白质的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，包括例如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4；和(ii)刺激T细胞活化的蛋白质的激动剂，包括例如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。

在某些实施方案中，如本文所述的第二疗法可靶向一种或多种免疫检查点调节剂。本公开的第二疗法可靶向的免疫检查点调节剂(例如，免疫检查点抑制剂)可包括但不限于腺苷A2A受体(A2AR)、B7-H3(也称为CD276)、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4，也称为CD152)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白(KIR)、淋巴细胞活化基因-3(LAG3)、程序性死亡1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(TIM-3)、T细胞活化的V结构域Ig抑制因子(VISTA)和NKG2A。

在某些实施方案中，本文所述的方法还包括向受试者施用有效量的免疫检查点抑制剂。在某些示例性实施方案中，免疫检查点抑制剂靶向选自由以下组成的组的免疫检查点调节剂：CTLA-4、PD-1、PD-L1、NKG2A、B7-H3和B7-H4。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂可以是小分子、重组配体、重组受体或抗体。免疫检查点抑制剂抗体可以是人源化的、人的、嵌合的或本领域已知的任何形式的抗体。因此，在某些示例性实施方案中，免疫检查点抑制剂是选自由以下组成的组的抗体：抗CTLA-4、抗PD-1、抗PD-L1、抗NKG2A、抗B7-H3和抗B7-H4。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是选自由以下组成的组的抗体：伊匹木单抗、帕博利珠单抗、纳武单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗和西米普利单抗。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1结合拮抗剂，一种能够抑制PD-1与其配体结合配偶体结合的分子。在某些实施方案中，PD-1配体结合配偶体是PD-L1和/或PD-L2。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1与其结合配偶体结合的分子。在一些实施方案中，PD-L1结合配偶体是PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2与其结合配偶体结合的分子。在一些实施方案中，PD-L2的结合配偶体是PD-1。示例性抗体描述于美国专利号8,735,553、8,354,509和8,008,449中，其公开内容以引用的方式整体并入本文。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自由纳武单抗、帕博利珠单抗和CT-011组成的组。纳武单抗，也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和OPDIV O，是一种抗PD-1抗体，描述于国际专利申请号WO2006/121168中，其公开内容整体并入本文。帕博利珠单抗，也称为MK-3475、Merck3475、兰布罗利珠单抗(lambrolizumab)、KEYTRUDA和SCH-900475，是一种抗PD-1抗体，描述于国际专利申请号WO2009/114335中，其公开内容整体并入本文。CT-011，也称为匹地利珠单抗(Pidilizuma b)，是一种抗PD-1抗体，描述于国际专利申请号WO2009/101611中，其公开内容整体并入本文。另外的抗PD-1抗体包括PDR001(Novar tis；参见WO2015/112900)、MEDI-0680(AMP-514)(AstraZeneca；参见WO2012/145493)、REGN-2810(Sanofi/Regeneron；参见WO2015/112800)、JS001(Taizhou Junshi)、BGB-A317(Beigene；参见WO2015/35606)、INCSHR1210(SHR-1210)(Incyte/JiangsuHengrui Medicine；参见WO2015/085847)、TSR-042(ANB001)(Tesara/Anapty sBio；参见WO2014/179664)、GLS-010(Wuxi/Harbin Gloria Pharma ceuticals)、AM-0001(Armo/Ligand)或STI-1110(Sorrento；参见WO 2014/194302)。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1结合拮抗剂，诸如拮抗性PD-L1抗体。示例性抗PD-L1抗体可选自Tecentriq(阿替利珠单抗)、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、西米普利单抗、STI-1014(Sorrento；参见WO2013/181634)或CX-072(CytomX；参见WO2016/149201)。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1拮抗剂，诸如度伐鲁单抗(也称为MEDI4736)、阿替利珠单抗(也称为MPDL3280A)或阿维鲁单抗(也称为MSB00010118C)。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4结合拮抗剂，一种能够抑制CTLA-4与其配体结合配偶体结合的分子。CTLA-4存在于T细胞表面，并且当与抗原呈递细胞表面上的CD80或CD86(也分别称为B7-1和B7-2)结合时，充当“关闭”开关。CTLA4是免疫球蛋白超家族的成员，在辅助T细胞表面上表达并向T细胞传递抑制信号。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。抗CTLA-4抗体公开于以下文献中：美国专利号8,119,129、国际专利申请号WO 01/14424、WO 98/42752；WO 00/37504(CP675,206，也称为曲美木单抗(tremelimumab)；以前称为替西木单抗(ticilimumab))，美国专利号6,207,156；Hurwitz等人,1998，其公开内容以引用的方式整体并入本文。也可使用与任何这些本领域公认的抗体竞争结合CTLA-4的抗体，例如，国际专利申请号WO2001014424、WO2000037504和美国专利号8,017,114中描述了人源化CTLA-4抗体，所述专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹木单抗(也称为10D1、MDX-010、MDX-101和Yervoy)。

在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对B7-H4的抗体(例如，在国际专利申请号WO 2013025779和WO2013067492中公开的那些，其公开内容以引用的方式整体并入本文)。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对B7-H3的抗体，包括但不限于中和人B7-H3的抗体(例如，在美国专利公布号20120294796中公开为BRCA84D的MGA271和衍生物，所述美国专利公布的公开内容以引用的方式整体并入本文)。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对NKG2A的抗体，参见例如，Montfoort等人Cell(2018)175(7):1744-1755，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。

在某些方面，本文所提供的方法可用于与包含一种或多种抗血管生成剂的第二疗法组合。因此，本文所提供的方法可用于与抗血管生成疗法组合。新血管的形成或血管生成通过为肿瘤提供专门的血液供应来提供其生长所需的氧气和必需营养素，从而促进癌症的生长和转移。已经证明靶向血管生成和相关生长因子(包括但不限于血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和成纤维细胞生长因子(FGF))的疗法会抑制新血管生长。

许多抗血管生成剂是本领域已知的并且将适合与本文所提供的方法组合使用。示例性抗血管生成剂包括但不限于生理剂，诸如生长因子(例如，ANG-2、NK1、2、4(HGF)、转化生长因子β(TGF-β))、细胞因子(例如，干扰素诸如IFN-α、IFN-β、IFN-γ、血小板因子4(PF-4)、PR-39)、蛋白酶(例如，裂解的AT-III、胶原蛋白XVIII片段(内皮抑素))、Hmw激肽释放酶-d5纤溶酶片段(血管抑素)、凝血酶原-F1-2、TSP-1)、蛋白酶抑制剂(例如，金属蛋白酶的组织抑制剂，诸如TIMP-1、TIMP-2或TIMP-3；乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(maspin)；纤溶酶原活化剂-抑制剂，诸如PAI-1；色素上皮衍生因子(PEDF))、肿瘤抑素(Tumstatin)、抗体产物(例如，胶原蛋白结合抗体HUIV26、HU177、XL313；抗VEGF：抗整合素(例如，Vitaxin，(Lxsys)))和糖苷酶(例如，肝素酶-I或肝素酶-II)。作为血管生成相关抗原(包括蛋白质和多肽)拮抗剂的分子也是合适的，包括但不限于针对VEGF、VEGF受体、EGFR、bFGF、PDGF-B、PD-ECGF、TGF包括TGF-α的分子、内皮糖蛋白(endoglin)、Id蛋白、各种蛋白酶、一氧化氮合酶、氨肽酶、血小板应答蛋白、k-ras、Wnt、细胞周期蛋白依赖性激酶、微管、热休克蛋白、肝素结合因子、合成酶、胶原蛋白受体、整合素和表面蛋白聚糖NG2。已知或被认为具有抗血管生成潜力的“化学”或改良生理剂包括例如，长春花碱、紫杉醇(taxol)、酮康唑、沙利度胺、多来他汀、考布他丁A(combrestatin A)、雷帕霉素(Guba等人Nature Medicine(2002)8:128-135，其公开内容以引用的方式整体并入本文)、CEP-7055(可购自Cephalon,Inc.)、黄酮乙酸、Bay 12-9566(Bayer Corp.)、AG3340(Agouron,Inc.)。CGS.27023A(Novartis)、四环素衍生物(例如，COL-3(Collagenix,Inc.))、Neovastat(Aeterna)、BMS-275291(Bristol-Myers Squibb)、低剂量5-FU、低剂量甲氨蝶呤(MTX)、伊索拉定(irsofladine)、根赤壳菌素、环孢菌素、卡托普利(captopril)、塞来昔布(celecoxib)、D45152-硫酸化多糖、阳离子蛋白(鱼精蛋白)、阳离子肽-VEGF、苏拉明(多磺化萘基脲)、干扰VEGF功能或产生的化合物(例如，SU5416或SU6668(Sugen)、PTK787/ZK22584(Novartis))、远霉素A、Angiozyme(核酶)、异黄酮、星形孢菌素衍生物、染料木黄酮、EMD121974(Merck KcgaA)、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)、异喹诺酮、视黄酸、羧胺三唑、TNP-470、奥曲肽、2-甲氧基雌二醇、氨基甾醇(例如，角鲨胺)、谷胱甘肽类似物(例如，N-乙酰基-L-半胱氨酸)、考布他丁A-4(Oxigene)、Eph受体阻断剂(Himanen等人Nature(2001)414(6866):933-938，其公开内容以引用的方式整体并入本文)、Rh-血管抑素、Rh-内皮抑素(参见国际专利申请号WO01/93897，其公开内容以引用的方式整体并入本文)、环状RGD肽、accutin-去整合素、苯二氮类、人源化抗avb3 Ab、Rh-PAI-2、阿米洛利、对氨基苯甲脒、抗uPA ab、抗-uPAR Ab、L-苯丙氨酸-N-甲基酰胺(例如，巴马司他(Batimistat)、马立马司他(Marimastat))、AG3340和米诺环素。

在某些实施方案中，抗血管生成剂是抗VEGF抗体。示例性抗VEGF抗体包括以足够的亲和力且特异性地结合VEGF并且可降低或抑制VEGF的生物学活性的任何抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗VEGF抗体包括但不限于与由杂交瘤ATCC HB 10709产生的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体；根据Presta等人Cancer Research(1997)57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，所述文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗(BV)，也称为rhuMAb VEGF或AVASTIN。贝伐单抗和其他人源化抗VEGF抗体在美国专利号6,884,879中有进一步描述，所述美国专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。另外的抗体包括例如，如描述于国际专利申请号WO2005/012359和WO2005/044853中的G6-31和B20-4.1，其公开内容以引用的方式整体并入本文。另外的抗VEGF抗体描述于以下文献中：美国专利号7,060,269、6,582,959、6,703,020和6,054,297；国际专利公布号WO98/45332、WO 96/30046和WO94/10202；欧洲专利号EP 0666868B1；美国专利公布号2006009360、20050186208、20030206899、20030190317、20030203409和20050112126；和Popkov等人,Journal of ImmunologicalMethods 288:149-164(2004)，其公开内容以引用的方式整体并入本文。另外的VEGF抑制剂包括舒尼替尼(Pfizer)和索拉非尼(/>Onyx and Bayer HealthcarePharmaceuticals)，它们属于一组对VEGFR和PDGFR均具有活性的VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂(RTKI)。在某些实施方案中，抗血管生成剂是舒尼替尼。还有其他VEGF抑制剂包括防止配体与血管内皮生长因子受体(VEGFR)结合的融合蛋白。这些融合蛋白有时被称为VEGF陷阱，并且包括阿柏西普。因此，在某些实施方案中，抗血管生成疗法包括选自由以下组成的组的抗血管生成剂：贝伐单抗、阿柏西普、舒尼替尼和索拉非尼。

在某些方面，本文所提供的方法可用于与包含一种或多种聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂的第二疗法组合。因此，本文所提供的方法可用于与PARP抑制剂疗法组合。PARP是参与细胞许多功能的蛋白质家族，所述功能包括DNA修复、基因表达、细胞周期控制、细胞内运输和能量代谢。PARP蛋白通过碱基切除修复途径在单链断裂修复中发挥关键作用。PARP抑制剂作为针对存在DNA修复缺陷(诸如BRCA1和BRCA2)的肿瘤的单一疗法显示出活性，并且当与诱导DNA损伤的抗癌剂一起施用时作为组合疗法显示出活性。PARP抑制剂可选自由以下组成的组：小分子、核酸、核酸类似物或衍生物、肽、拟肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、单糖、二糖、三糖、寡糖、多糖、脂质、糖胺聚糖、由生物材料制成的提取物及其组合。示例性PARP抑制剂包括但不限于奥拉帕尼、维利帕尼或其前药、卢卡帕尼、拉唑帕尼(talazoparib)、尼拉帕尼、INO-1001、AZD2461、SC10914、BGB-290和氟唑帕利(Fluzoparib)。因此，在某些实施方案中，PARP抑制剂疗法包括选自由以下组成的组的PARP抑制剂：奥拉帕尼、尼拉帕尼、卢卡帕尼和维利帕尼。

包括本文所述的方法(即，第一疗法)和第二疗法(例如，免疫检查点疗法、抗血管生成疗法、PARP抑制剂疗法)的本文所述的组合疗法涵盖治疗方案，其中将第一疗法和第二疗法同时(例如，基本上同时)或依序施用于受试者。例如，本文所述的第一疗法可与第二疗法一起基本上同时施用于受试者。基本上同时施用可例如通过向受试者施用具有固定比率的每种疗法的单一剂型或针对每种疗法的多个单一剂型来实现。每种疗法可通过任何适当的途径依序或基本上同时施用，所述途径包括但不限于口服途径、静脉内途径、瘤内途径、肌肉内途径和通过粘膜组织的直接吸收。

在一些实施方案中，第一疗法和第二疗法通过相同途径或不同途径施用。例如，所选组合的第一疗法可通过静脉内注射施用，而组合的第二疗法可瘤内施用。替代地，例如，所有疗法都可静脉内施用，或者所有治疗剂都可通过瘤内施用。

在一些实施方案中，组合疗法可包括第一疗法和第二疗法与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，手术或放射治疗)组合施用。当组合疗法还包括非药物治疗时，非药物治疗可在任何合适的时间进行，只要实现来自疗法和非药物治疗的组合的共同作用的有益效果即可。

本文所提及或引用的文章、专利和专利申请以及所有其他文献和电子版可用信息的内容特此以引用的方式整体并入，其程度犹如每个单独出版物均具体地且单独地被指示为以引用的方式并入一样。申请人保留将来自任何此类文章、专利、专利申请或其他实体和电子文件的任何和所有材料和信息完全并入本申请的权利。

虽然已参考其具体实施方案描述了本发明，但本领域技术人员应该理解可做出各种变化并且在不背离本发明的真实精神和范围的情况下可取代等效物。对本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本文所公开的实施方案的范围的情况下，可使用合适的等效物对本文所述的方法进行其他合适的修改和调适。另外，可做出许多修改来使具体情况、材料、物质组成、过程、过程步骤或多个步骤适应于本发明的目的、精神和范围。所有此类修改意图在所附权利要求的范围内。现已详细描述某些实施方案，通过参考以下实施例将使实施方案得到更清楚的理解，包括所述实施例只是出于说明目的，并不意图进行限制。

F.实施例

实施例1：DCP-001在人源化卵巢癌小鼠模型：远离肿瘤部位的疫苗接种中的功效

DCP-001是一种现成的同种异体全细胞型疫苗，衍生自DCOne细胞系。简而言之，在米托蒽醌存在下，将细胞培养在GM-CSF、TNFα和IL-4的混合物中以加速具有树突状细胞表型的细胞分化，接着在前列腺素-E2、TNFα和IL-1β存在下使细胞成熟。

图1描绘了示出植入SKOV3的卵巢癌小鼠模型的疫苗接种策略的示意图。将SKOV3肿瘤植入人源化小鼠体内。以初免加强(prime boost)方式，经由腹膜内(IP)疫苗接种以0.2E6个细胞/小鼠的剂量来施用DCP-001。初免疫苗接种发生在植入后36天，此时测得的肿瘤大小为75-100mm³。加强疫苗接种发生在植入后43天。对照在植入后第36和43天接种磷酸盐缓冲盐水(PBS)。肿瘤体积每周测量三次，直至植入后63天。

图2描绘了示出在根据图1中描绘的方案施用疫苗接种的SKOV3肿瘤移植小鼠中随时间测量的肿瘤体积(以mm³为单位)的图。如图2所示，与对照组(接种PBS)相比，DCP-001接种小鼠的肿瘤生长减少。在DCP-001接种组的一只小鼠中，观察到肿瘤消退。

实施例2：DCP-001在人源化卵巢癌小鼠模型：不同的疫苗接种策略中的功效

图3描绘了示出植入SKOV3的卵巢癌小鼠模型的疫苗接种策略的示意图。将SKOV3肿瘤植入人源化小鼠体内。测试了两种DCP-001疫苗接种方案：(1)腹膜内(IP)和瘤内施用(IT)的组合(n＝9)；以及(2)复发疫苗接种(n＝9)。复发疫苗接种旨在防止初始治疗后肿瘤再发。在实验环境中，通过在肿瘤植入前给动物接种疫苗来模拟复发疫苗接种。在组合疫苗接种方案(DCP-001IP+IT疫苗接种)中，在肿瘤植入后第13天(初免)和第20天(加强)施用0.2E6个细胞/小鼠。在复发疫苗接种方案中，在第-13和-6天IP施用0.2E6个细胞/小鼠的DCP-001复发疫苗接种。对照在第-13、-6、13和43天接种PBS(n＝8)。

图4描绘了示出在施用对照疫苗接种(PBS；图4A)；组合疫苗接种(DCP-001IP+IT；图4B)；和复发疫苗接种(图4C)的植入SKOV3肿瘤的小鼠中随时间测量的肿瘤体积(以mm³为单位)的图。如图4A至图4C所示，与对照组相比，两组DCP-001接种小鼠的肿瘤生长均有所减少。另外，在IP+IT疫苗接种组的三只小鼠中观察到肿瘤消退，以及在复发疫苗接种组的五只小鼠中观察到肿瘤消退(三只完全消退和两只部分消退)。

图5描绘了示出在施用对照(PBS)；组合疫苗接种(IP+IT)；和复发疫苗接种的植入SKOV3肿瘤的小鼠中随时间测量的平均肿瘤体积(以mm³为单位)的图。在图5中，*表示使用非配对t检验时p<0.05。

Claims (63)

1.一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，其包括：

一个或多个瘤内施用步骤，每个步骤包括在肿瘤部位向所述受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第一组合物；和

一个或多个疫苗接种步骤，每个步骤包括在所述肿瘤部位远端的部位向所述受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第二组合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤各自包括将所述第一组合物施用到所述肿瘤中或接近所述肿瘤的部位。

3.如权利要求2所述的方法，其中接近所述肿瘤的所述部位是肿瘤周围。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组合物被制备用于瘤内施用。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含瘤内施用可接受的稀释剂或溶剂。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径施用所述第二组合物。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括静脉内施用所述第二组合物。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述第二组合物被制备用于静脉内施用。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述第二组合物包含静脉内施用可接受的稀释剂或溶剂。

10.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括皮内施用所述第二组合物。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述第二组合物被制备用于皮内施用。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中所述第二组合物包含皮内施用可接受的稀释剂或溶剂。

13.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括肌肉内施用所述第二组合物。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述第二组合物被制备用于肌肉内施用。

15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述第二组合物包含肌肉内施用可接受的稀释剂或溶剂。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括将所述第二组合物施用到与所述肿瘤所在的器官系统不同的器官系统中。

17.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括在所述肿瘤对侧部位施用所述第二组合物。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤在所述一个或多个疫苗接种步骤之前进行。

19.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤在所述一个或多个疫苗接种步骤之后进行。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括在所述一个或多个瘤内施用步骤之后的一个或多个疫苗接种步骤。

21.如权利要求20所述的方法，其中在所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤各自包括经由选自由肌肉内、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、胸骨内、皮内、经皮、透皮、递送至组织间隙和递送至非肿瘤组织组成的组的途径向所述受试者施用有效量的包含同种异体白血病衍生细胞的第三组合物。

22.如权利要求21或22所述的方法，其中在所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤经由与所述一个或多个疫苗接种步骤相同的途径施用。

23.如权利要求21或22所述的方法，其中在所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤经由与所述一个或多个疫苗接种步骤不同的途径施用。

24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤之间的时间足以使免疫应答由于所述一个或多个疫苗接种步骤而产生。

25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤之间的时间足以使免疫应答由于所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤而产生。

26.如权利要求24或25所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤之间的时间为约2天至约21天。

27.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤基本上同时进行。

28.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤基本上同时进行。

29.如权利要求27或28所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤在同一天进行。

30.如权利要求27或28所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤与所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤在同一天进行。

31.如权利要求20-30中任一项所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤之间的时间足以使免疫应答由于所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个疫苗接种步骤而产生。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤之间的时间为约2天至约21天。

33.如权利要求31或32所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤基本上同时进行。

34.如权利要求31或32所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤基本上同时进行。

35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤在同一天进行。

36.如权利要求33或34所述的方法，其中所述一个或多个瘤内施用步骤之后的所述一个或多个疫苗接种步骤中的第一个步骤与所述一个或多个瘤内施用步骤中的第一个步骤在同一天进行。

37.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与所述受试者的所述肿瘤相关。

38.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，所述肿瘤相关抗原与所述受试者的所述肿瘤不相关。

39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含至少一种肿瘤相关抗原或编码至少一种肿瘤相关抗原的核酸，其中所述肿瘤相关抗原选自由以下组成的组：WT-1、MUC-1、RHAMM、PRAME、p53和生存素。

40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含WT-1、MUC-1、PRAME和生存素。

41.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含树突状细胞表型。

42.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含成熟树突状细胞表型。

43.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞包含染色体11p15.5至11p12之间的遗传畸变。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述遗传畸变涵盖约16Mb基因组区域。

45.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性和CD83阳性。

46.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞表达选自由以下组成的组的细胞表面标志物：DC-SIGN、Langerin、CD80、CD86、CD70、CD40和它们的任何组合。

47.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞呈CD34阳性、CD1a阳性、CD83阳性、CD80阳性、CD86阳性和CD40阳性。

48.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞呈CD14阴性。

49.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞衍生自DCOne细胞系。

50.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞已被灭活。

51.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述同种异体白血病衍生细胞已经由照射灭活。

52.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。

53.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。

54.如权利要求21-53中任一项所述的方法，其中所述第三组合物任选地还包含一种或多种药学上可接受的载剂、佐剂、赋形剂和/或稀释剂。

55.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者先前罹患所述肿瘤。

56.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者先前接受过针对所述肿瘤的治疗。

57.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者罹患所述肿瘤复发。

58.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述受试者是家养动物和/或适合兽医保健的动物。

60.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是实体瘤。

61.如权利要求60所述的方法，其中所述实体瘤选自由肉瘤、癌和淋巴瘤组成的组。

62.如权利要求60或61所述的方法，其中所述实体瘤是卵巢癌。

63.如权利要求60或61所述的方法，其中所述实体瘤是黑色素瘤。