CN116622537B - 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用 - Google Patents

一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116622537B
CN116622537B CN202211156655.9A CN202211156655A CN116622537B CN 116622537 B CN116622537 B CN 116622537B CN 202211156655 A CN202211156655 A CN 202211156655A CN 116622537 B CN116622537 B CN 116622537B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus amyloliquefaciens
bacillus subtilis
bacterial agent
bacillus
composite bacterial
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211156655.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116622537A (zh
Inventor
张成省
隋晓娜
韩小斌
孟晨
王先勃
万军
温明霞
赵栋霖
徐康文
郑艳芬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zunyi Tobacco Co Of Guizhou Tobacco Corp
Tobacco Research Institute of Hubei Province
Original Assignee
Zunyi Tobacco Co Of Guizhou Tobacco Corp
Tobacco Research Institute of Hubei Province
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zunyi Tobacco Co Of Guizhou Tobacco Corp, Tobacco Research Institute of Hubei Province filed Critical Zunyi Tobacco Co Of Guizhou Tobacco Corp
Priority to CN202211156655.9A priority Critical patent/CN116622537B/zh
Publication of CN116622537A publication Critical patent/CN116622537A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116622537B publication Critical patent/CN116622537B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G13/00—Protection of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A01G22/45—Tobacco
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌ZA7‑31、复合菌剂、生防制剂及应用。本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌ZA7‑31，已进行生物保藏，保藏编号为CGMCCNO.24912。本发明解淀粉芽孢杆菌ZA7‑31抗病效果好，能有效抑制烟草青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的生长，并且与枯草芽孢杆菌Tpb55复配后能够协同增效。

Description

一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31、复合菌剂、生防制剂及应用
技术领域
本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31、复合菌剂、生防制剂及应用。
背景技术
烟草行业是我国经济发展的重要组成部分，我国烟草种植具有种植区域广、品种多、产量大等特点。但烟草生产容易受病虫害影响，会直接降低烟叶产量及品质，减少烟农收入，造成巨大的经济损失。烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的典型土传病害，该病原菌可在土壤中长期存活并逐年累积，能够侵染植株的根部和茎部，已成为烟草生产上最顽固的病害之一。烟草赤星病是由半知菌亚门的链格孢菌(Alternariaalternata)引起的，是一种感染叶片的烟叶成熟期叶斑病害，在烟叶采收期为发病高峰期。而烟草青枯病(Ralstonia solanacearum)是一种细菌性病害，是亚热带及热带地区烟草生产上影响最为严重的病害。目前化学农药防治是控制病原菌最简单有效的方法，但施用化学药剂会带来环境污染、农药残留或病原菌抗药和耐药性增强等巨大的负面效果，尤其是烟草是以叶部作为加工产品的经济作物，其在“3R问题”(Residue，Resistance，Resurgence)的控制方面受到了消费者们的高度重视。随着“无毒、高效、无残留”的绿色发展植保要求，取代化学防治最有效的措施是生物防治，生物防治无污染，不杀天敌，不易产生抗药性，有利于人畜安全和环境保护。而微生物防治是生物防治的重要组成部分，微生物生防制剂产品约占全世界生防制剂产品总量的90％。
微生物资源丰富，但多数对生防菌的研究仅停留在实验室阶段，能用于生产的制剂或产品的种类和数量有限，难以满足生产需要，而能用于生产应用的混合型菌剂更是少之又少，因此，提供一种用于治疗烟草疾病，对实现化肥农药使用负增长的生防菌具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31、复合菌剂、生防制剂及应用，有效抑制烟草病原菌的生长，防治烟草疾病。
本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.24912。
本发明还提供了一种复合菌剂，包括上述技术方案的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和枯草芽孢杆菌。
优选的，所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌Tpb55，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.2843。
优选的，所述复合菌剂中总有效活菌数为0.5～1×109cfu/mL。
本发明还提供了一种生防制剂，所述生防制剂的活性成分包括微生物菌剂的培养物、分离物和提取物中的一种或多种；所述微生物菌剂包括上述技术方案所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31或复合菌剂。
本发明还提供了上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31或复合菌剂或生防制剂在烟草种植中的应用。
优选的，所述应用包括防治烟草疾病和/或增强烟草对病原体的抗性。
优选的，所述烟草疾病包括青枯病、赤星病和黑胫病中的一种或多种。
优选的，所述病原体包括烟草疫霉、烟草赤星病菌和烟草青枯病菌中的一种或多种。
优选的，所述应用的方式包括：将所述生防制剂施加至烟草的根、叶或周围的土壤。
本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，已进行生物保藏，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.24912。本发明采集烟草植株，收集根际土，分离到1株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，该菌株能够有效抑制烟草青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的生长，丰富了生物农药天然资源，有利于微生物农药的开发研究，具有广泛的市场应用前景。
本发明将所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31与枯草芽孢杆菌Tpb55复配，二者协同增效，对烟草青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的抑制效果大于单一菌株。
生物保藏信息
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZA7-31，于2022年5月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为CGMCC NO.24912；
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)Tpb55，于2008年12月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为CGMCCNO.2843。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为不同筛选菌株对青枯菌的抑制作用；
图2为解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的菌落形态；
图3为解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的系统发育树；
图4为枯草芽孢杆菌Tpb55的菌落形态；
图5为单培养菌株与混合培养菌株的发酵物抑制青枯病的平板效果照片；
图6为单培养菌株与混合培养菌株的分离物(浓缩5倍)抑制青枯病的平板效果；
图7为单培养菌株与混合培养菌株的发酵物抑制黑胫病的平板效果照片；
图8为单培养菌株与混合培养菌株的发酵物抑制赤星病的平板效果照片；
图9为单培养菌株与混合培养菌株的发酵物对赤星和黑胫病菌熏蒸作用的平板效果。
具体实施方式
本发明提供了一株具有生防效果的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31已进行生物保藏，保藏编号为CGMCC NO.24912。
本发明所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31是从采集的烟草植株的根际土中分离到，在LB培养基上菌落呈乳白色的圆形，菌落表面粗糙干燥，无光泽，质地干涩，16S rDNA基因序列优选如SEQ ID NO.1所示。
本发明所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31具有抗致病菌的作用，实施例结果表明，在青枯菌平板上产生直径为1.98±0.03cm的抑菌圈、在赤星病菌平板上赤星的生长直径为1.73±0.02cm，抑制率为79.16％、在黑胫病菌平板上黑胫的生长直径为1.82±0.05cm，抑制率为79.78％。所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31能够抑制有效抑制烟草青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的生长。
本发明还提供了一种复合菌剂，包括上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和枯草芽孢杆菌；所述枯草芽孢杆菌优选包括枯草芽孢杆菌Tpb55，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.2843。
在本发明中，所述复合菌剂中总有效活菌数优选为0.5～1×109cfu/mL。
本发明所述复合菌剂的制备方法优选包括：分别对所述枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31进行活化培养和扩大培养，得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液后混合培养，得到所述复合菌剂。
本发明分别对所述枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31进行活化培养，得到活化后的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和活化后的枯草芽孢杆菌Tpb55。本发明所述活化培养的方式优选为：分别将所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和枯草芽孢杆菌Tpb55接种到LB固体培养基中；所述活化培养的温度优选为37℃，时间优选为24h。本发明对所述LB固体培养基的来源没有严格要求，常规购买或者自行配制。
得到活化后的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和活化后的枯草芽孢杆菌Tpb55后，本发明优选分别挑取活化后的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31和活化后的枯草芽孢杆菌Tpb55的单菌落，分别接种到LB液体培养基中，扩大培养，得到解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液。本发明所述扩大培养的温度优选为37℃，转速优选为180r/min，时间优选为24h；所述扩大培养优选使用恒温摇床。
得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液后，本发明优选利用生理盐水分别稀释所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液，得到解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液。本发明所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液中解淀粉芽孢杆菌ZA7-31有效活菌数优选为109cfu/mL，枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液中枯草芽孢杆菌Tpb55有效活菌数优选为109cfu/mL。
得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液后，本发明优选将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液按照1:1的体积比混合后，接种到LB液体培养基中，180rpm震荡培养24h后得到所述复合菌剂；所述接种的接种量优选为1％，即解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液得接种量分别为0.5％。
本发明将枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31复配，在青枯菌平板上产生直径为2.12±0.03cm的抑菌圈、在赤星病菌平板上赤星的生长直径为1.58±0.01cm，抑菌率为80.96％、在黑胫病菌平板上黑胫的生长直径为1.75±0.04cm，抑菌率为80.56％。本发明所述复合菌剂，解淀粉芽孢杆菌ZA7-31与枯草芽孢杆菌Tpb55协同增效，对烟草青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的抑制效果大于单一菌株。
本发明还提供了一种生防制剂，所述生防制剂的活性成分优选包括微生物菌剂的培养物、分离物和提取物中的一种或多种，进一步优选为微生物菌剂的培养物；所述微生物菌剂优选包括上述技术方案所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31或复合菌剂。
在本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的培养物制备方法优选包括：将所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31按照1:100的体积比接种到LB液体培养基中，在37℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养16h。所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的培养物中有效活菌数优选为0.5～1×109cfu/mL。
在本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物的制备方法优选包括：依次对所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的培养物进行离心和过滤，收集得到的滤液即为所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物。本发明所述离心的转速优选为10000r/min，时间优选为5min；所述过滤优选使用0.22μm滤膜。
本发明优选对所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物进行冷冻干燥处理，得到粉末后利用去离子水溶解，过滤，得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物的浓缩液。本发明所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物与去离子水的体积比优选为5:1，即将所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物浓缩5倍。本发明优选使用真空冷冻干燥机进行所述冷冻干燥；所述过滤优选使用0.22μm滤膜。本发明对所述冷冻干燥的条件没有严格要求，常规选择即可。
在本发明中，所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的提取物的制备方法优选包括：利用乙酸乙酯对所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物萃取两次，合并两次萃取液后蒸干，即为所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的提取物。本发明进行所述第一萃取时，所述乙酸乙酯和所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的分离物的体积比优选为1:1。本发明优选对第一萃取后萃取的剩余相进行第二萃取，得到第二萃取物；所述乙酸乙酯和所述萃取物剩余相的体积比优选为1：1。本发明对所述第一萃取和第二萃取的条件没有严格要求，常规操作即可。本发明所述蒸干优选使用旋蒸仪；所述蒸干的温度优选＜40℃。
在本发明中，所述复合菌剂的培养物的制备方法优选包括：将所述复合菌剂按照1:100的体积比接种到LB液体培养基中，在37℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养16h。本发明对所述LB液体培养基的来源没有严格要求，常规购买或者自行配制均可。所述复合菌剂的培养物中有效活菌数优选为0.5～1×109cfu/mL。
在本发明中，所述复合菌剂的分离物的制备方法优选包括：依次对所述复合菌剂的培养物进行离心和过滤，收集得到的滤液即为所述复合菌剂的分离物。本发明所述离心的转速优选为10000r/min，时间优选为5min；所述过滤优选使用0.22μm滤膜。
本发明优选对所述复合菌剂的分离物进行冷冻干燥处理，得到粉末后利用去离子水溶解，过滤，得到所述复合菌剂的分离物的浓缩液。本发明所述复合菌剂的分离物与去离子水的体积比优选为5:1，即将所述复合菌剂的分离物浓缩5倍。本发明所述冷冻干燥优选使用真空冷冻干燥机；所述过滤优选使用0.22μm滤膜。本发明对所述冷冻干燥的条件没有严格要求，常规选择即可。
在本发明中，所述复合菌剂的提取物的制备方法优选包括：利用乙酸乙酯对所述复合菌剂的分离物进行第一萃取和第二萃取，合并两次萃取液后蒸干，即为所述复合菌剂的提取物。本发明进行所述第一萃取时，所述乙酸乙酯和所述复合菌剂的分离物的体积比优选为1:1。本发明优选对第一萃取所得萃取后剩余相进行第二萃取，得到第二萃取物；所述乙酸乙酯和萃取后剩余相的体积比优选为1：1。本发明对所述第一萃取和第二萃取的条件没有严格要求，常规操作即可。本发明所述蒸干优选使用旋蒸仪；所述蒸干的温度＜40℃。
本发明还提供了上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31或复合菌剂或生防制剂在烟草种植中的应用；所述应用优选包括防治烟草疾病；所述烟草疾病优选包括青枯病、赤星病和黑胫病中的一种或多种，进一步优选为青枯病、赤星病和黑胫病。本发明优选将所述生防制剂施加至烟草的根、叶或周围的土壤。本发明所述生防制剂的施加次数优选为2次，第一次施加优选每株烟草施加50mL所述生防制剂的400倍稀释液；第一次施加优选每株烟草施加100mL所述生防制剂的400倍稀释液；所述第一次施加和第二次施加的时间间隔优选为20d。本发明所述生防制剂具有抗病性，能够抑制青枯病菌、黑胫病菌以及赤星病菌的生长，提高烟草抗性。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一株解淀粉芽孢杆菌ZA7-31、复合菌剂、生防制剂及应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
如无特殊说明，具体实施过程中使用的培养基和分析方法均为常规方法。
实施例1
1.1菌株分离
(1)生理生化分析
从遵义采集烟草植株，收集根际土，将根际土用无菌水稀释10-2、10-3、10-4，涂布至LB固体平板上，28℃培养2d，挑取颜色、形态不同的单菌落，反复划线分离直至纯化，并以青枯雷尔氏菌为筛选菌株，筛选有抑制活性的菌株，最终筛选得到3株对青枯雷尔氏菌具有抑制活性的菌株，依次命名为ZA7-31、FGH5-3和T-9，其中ZA7-31对青枯菌的抑菌圈大小为2.02±0.04cm，FGH5-3对青枯菌的抑菌圈大小为1.45±0.02cm，T-9对青枯菌的抑菌圈大小为1.66±0.02cm，由此可见ZA7-31对青枯菌的抑制作用最强(具体如图1)。
将ZA7-31接种到LB固体培养基中28℃培养1d，观察的形态发现ZA7-31在LB培养基上菌落呈乳白色的圆形，菌落表面粗糙干燥，无光泽，质地干涩(具体如图2)。
(2)16S rDNA序列分析
对菌株ZA7-31的16S rDNA序列进行分析，具体的，挑取ZA7-31的单菌落扩增16SrDNA序列(27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(SEQ ID NO.2)1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’(SEQ ID NO.3))，连接到克隆载体上进而转化进入大肠杆菌中。
测序得ZA7-31的16S rDNA序列片段长度为1511bp，具体如SEQ ID NO.1所示：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGATTCAGACATAAAAGGTGGCTTCCGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACC-3’。从NCBI(GenBank)数据库中获取13个标准菌株序列，运用MEGA-X对分离菌株和参比株的16S rDNA序列进行分析，构建分离菌株与参比菌株的系统发育树(图3)；由图3可见本发明提供的ZA7-31的16S rDN A基因序列与Bacillus amyloliquefaciens的16S rDNA基因序列聚在一起，结合平皿上菌落特征，将本发明分离菌株ZA7-31鉴定为解淀粉芽孢杆菌，命名为解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，并于2022年5月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号CGMCC NO.24912。
实施例2-1
解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液的制备
从-80℃冰箱中将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31菌种取出在LB固体培养基上划线，37℃培养过夜；挑ZA7-31单菌落接种于LB液体培养基中，在37℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养24h；将菌液用生理盐水调至OD600为1.0左右(约109cfu/mL)；以1％接菌量，将稀释后的菌液接种到新鲜的LB液体培养基中，在37℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养16h，得解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液，有效活菌数约0.5～1×109cfu/mL。
实施例2-2
解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物或浓缩液的制备
将实施例2-1得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液于10000r/min离心5min去除菌体，收集上清液，将上清液用0.22μm一次性微孔滤膜过滤得到完全不含菌体的滤液，即为解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物；
将10mL解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物用真空冷冻干燥机冷冻干燥成粉末，用2mL去离子水溶解，再用0.22μm一次性微孔滤膜过滤即得解淀粉芽孢杆菌ZA7-31浓缩液。
实施例2-3
解淀粉芽孢杆菌ZA7-31提取物的制备
将实施例2-2得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物或浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取，萃取两遍合并滤液，放在旋蒸仪上蒸干，要求加热温度小于40℃，即得解淀粉芽孢杆菌ZA7-31提取物。
实施例3-1
复合菌剂的制备
从-80℃冰箱中将枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31菌种取出分别在LB固体培养基上划线，37℃培养过夜；挑Tpb55和ZA7-31单菌落分别接种于LB液体培养基中，在37℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养24h；将菌液用生理盐水调至OD600为1.0左右(约109cfu/mL)；将稀释后的枯草芽孢杆菌Tpb55菌液和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31菌液按照1:1的体积比混合发酵24h，得到复合菌剂。
实施例3-2
复合菌剂发酵液的制备
同实施例2-1，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31替换为实施例3-1得到的复合菌剂，得到复合菌剂发酵液，有效活菌数约0.5～1×109cfu/mL。
实施例3-3
复合菌剂分离物或浓缩液的制备
同实施例2-2，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液替换为实施例3-2得到的的复合菌剂发酵液，得到复合菌剂分离物和复合菌剂浓缩液。
实施例3-4
复合菌剂提取物的制备
同实施例2-3，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物或浓缩液为实施例3-3得到的复合菌剂分离物或浓缩液，得到复合菌剂提取物。
对比例1-1
枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液的制备
同步骤实施例2-1，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31替换为保藏编号为CGMCCNO.2843的枯草芽孢杆菌Tpb55(枯草芽孢杆菌Tpb55的菌落形态如图4)，得到枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液，有效活菌数约0.5～1×109cfu/mL。
对比例1-2
枯草芽孢杆菌Tpb55分离物或浓缩液的制备
同步骤实施例2-2，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液替换为对比例1-1得到的枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液，得到枯草芽孢杆菌Tpb55分离物和枯草芽孢杆菌Tpb55浓缩液。
对比例1-3
枯草芽孢杆菌Tpb55提取物的制备
同步骤实施例2-3，区别在于将解淀粉芽孢杆菌ZA7-31分离物或浓缩液为替换为对比例1-2得到的枯草芽孢杆菌Tpb55分离物或浓缩液，得到枯草芽孢杆菌Tpb55提取物。
实施例4
青枯菌的抑菌活性比较
(1)含有青枯菌的平板制备：从-80℃冰箱中将青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)菌种取出在NA固体培养基上划线，28℃培养过夜；挑单菌落接种于NB液体培养基中，在28℃、180r/min的恒温摇床中震荡培养24h；制作NA培养基，高压蒸汽灭菌后放凉至50℃以下，取活化好的青枯雷尔氏菌菌液(约109cfu/mL)，以2％的接菌量加入培养基中迅速混匀倒入平板，培养基凝固后即为含有青枯菌的平板。
(2)分别取4μL实施例2-1中得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液、对比例1-1得到的枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液和实施例3-2得到的复合菌剂发酵液，分别滴加在步骤(1)得到的含有青枯菌的平板上，28℃恒温培养箱中培养48h，观察经不同发酵液处理的平板上的抑菌圈直径大小，结果如图5所示。
根据图5可以看出，单独培养的Tpb55抑制青枯菌的作用很小，抑菌圈直径为1.07±0.02cm，单独培养的ZA7-31产生的抑菌圈直径为2.02±0.04cm，而Tpb55和ZA7-31混合培养后产生的抑菌圈直径为2.42±0.05cm，Tpb55与ZA7-31混合培养对青枯菌的抑制作用显著高于其任一单独培养对青枯菌的抑制作。
(3)用无菌打孔器在步骤(1)含有青枯菌的平板上制作直径为5mm的圆孔，分别取50μL实施例2-2得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31浓缩液、对比例1-2得到的枯草芽孢杆菌Tpb55浓缩液和实施例3-3得到的复合菌剂浓缩液，加入圆孔中，28℃恒温培养箱中培养48h，观察经不同浓缩液处理的平板上的抑菌圈直径大小，结果如图6所示。
根据图6可以看出，单独培养Tpb55产生的浓缩液没有抑制青枯菌的作用，单独培养ZA7-31产生的浓缩液抑菌圈直径为1.64±0.01cm，而Tpb55和ZA7-31混合培养后的浓缩液产生的抑菌圈直径为2.12±0.03cm。由此可以看出，除去菌体后，Tpb55与ZA7-31混合培养的上清液同样具有强烈的抑制青枯菌的作用，并且抑制效果显著高于其任一单独培养的上清液。
实施例5
烟草疫霉的抑菌活性比较
(1)含有烟草疫霉的平板制备：
称取30g燕麦放在1L蒸馏水中煮沸20分钟，用纱布过滤出燕麦残渣，过滤液用蒸馏水定容至1L，加入15g琼脂，121℃灭菌20分钟，得到固体燕麦培养基。从-80℃冰箱中将烟草疫霉取出接种在固体燕麦培养基上，28℃培养5天；用无菌打孔器制作直径为5mm的菌饼，然后将菌饼放在固体燕麦培养基平板中央。
(2)分别取4μL实施例2-1得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液、对比例1-1得到的枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液和实施例3-2得到的复合菌剂发酵液，分别滴加在步骤(1)得到的含有烟草疫霉的平板上，28℃恒温培养箱中培养4天，观察经不同发酵液处理的平板上的抑菌圈直径大小，结果如图7所示。
根据图7可以看出，单独培养的Tpb55基本没有抑制黑胫病菌(即烟草疫霉)的作用，黑胫病菌在单独培养的ZA7-31抑制作用下生长直径为1.82±0.05cm，抑制率为79.78％(抑制率(％)＝(对照组真菌生长直径9cm-处理组真菌生长直径)/对照组真菌生长直径×100)，黑胫病菌在Tpb55和ZA7-31混合培养下生长直径为1.75±0.04cm，抑制率为80.56％(抑制率(％)＝(对照组真菌生长直径9cm-处理组真菌生长直径)/对照组真菌生长直径×100)。Tpb55与ZA7-31混合培养对黑胫病的抑制作用有所增强，能抑制黑胫病菌的生长。
实施例6
烟草赤星病的抑菌活性比较
(1)含有烟草赤星病菌的平板制备：
称取30g燕麦放在1L蒸馏水中煮沸20分钟，用纱布过滤出燕麦残渣，过滤液用蒸馏水定容至1L，加入15g琼脂，121℃灭菌20分钟，得到固体燕麦培养基。从-80℃冰箱中将烟草赤星病菌取出接种在固体燕麦培养基上，28℃培养5天；用无菌打孔器制作直径为5mm的菌饼，然后将菌饼放在固体燕麦培养基平板中央。
(2)分别取4μL实施例2-1得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液、对比例1-1得到的枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液和实施例3-2得到的复合菌剂发酵液，分别滴加在步骤(1)得到的含有烟草疫霉的平板上，28℃恒温培养箱中培养7天，观察经不同发酵液处理的平板上的抑菌圈直径大小，结果如图8所示。
根据图8可以看出，单独培养的Tpb55抑制作用下生长直径为2.44±0.02cm，抑制率为70.60％(抑制率(％)＝(对照组真菌生长直径8.3cm-处理组真菌生长直径)/对照组真菌生长直径×100)抑制赤星病菌的作用很小，赤星病菌在单独培养的ZA7-31抑制作用下生长直径为1.73±0.02cm，抑制率为79.16％(抑制率(％)＝(对照组真菌生长直径8.3cm-处理组真菌生长直径)/对照组真菌生长直径×100)，而赤星病菌在Tpb55和ZA7-31混合培养下生长直径为1.58±0.01cm，抑制率为80.96％(抑制率(％)＝(对照组真菌生长直径8.3cm-处理组真菌生长直径)/对照组真菌生长直径×100)。表明Tpb55与ZA7-31的混合培养比其任一单独培养对赤星病菌的抑制作用更强。
实施例7
烟草疫霉和烟草赤星病菌的熏蒸作用比较
1.烟草疫霉的熏蒸作用：
(1)称取30g燕麦放在1L蒸馏水中煮沸20分钟，用纱布过滤出燕麦残渣，过滤液用蒸馏水定容至1L，加入15g琼脂，121℃灭菌20分钟，得到固体燕麦培养基。从-80℃冰箱中将烟草疫霉取出接种在固体燕麦培养基上，28℃培养5天；用无菌打孔器制作直径为5mm的菌饼，然后将菌饼放在固体燕麦培养基平板中央；
(2)分别取100μL实施例2-1中得到的解淀粉芽孢杆菌ZA7-31发酵液、对比例1-1得到的枯草芽孢杆菌Tpb55发酵液和实施例3-2得到的复合菌剂发酵液，分别均匀涂布在LB固体培养基上，以空白的LB固体培养基为对照，与步骤(1)处理后的平板用封口膜密封在一起，并在28℃的培养箱中培养4天，观察经不同发酵液处理的平板上的抑菌圈直径大小，结果如图9所示。
根据图9可以看出，对照的黑胫病菌(即烟草疫霉)长势良好，直径为9cm，单独培养的ZA7-31产生的挥发性气体处理后疫霉的生长直径为4cm且菌丝生长稀疏，单独培养的Tpb55，以及混合培养Tpb55和ZA7-31产生的挥发性气体处理后疫霉几乎不生长或只长出少量菌丝，都对黑胫病菌产生了良好的熏蒸效果。
2.烟草赤星病菌的熏蒸作用：
同步骤1，区别在于将烟草疫霉替换为烟草赤星病菌。经不同发酵液处理的平板上的抑菌圈直径大小结果如图9所示。
根据图9可以看出，对照的赤星病菌长势良好，直径为8.5cm，长势良好，不管是单独培养的Tpb55和ZA7-31还是两者的混合培养，都对赤星病菌产生了良好的熏蒸效果。
应用例1
1.供试菌株和药剂：枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的复合菌剂(总有效活菌数100亿/克)；枯草芽孢杆菌Tpb55(总有效活菌数100亿/克)和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31(总有效活菌数100亿/克)；58％甲霜灵锰锌；
2.试验地区：遵义市道真县隆兴烟叶站和余庆县敖溪烟叶站，试验地均为往年发病严重地块；
3.烟草品种：K326。
4.试验方法：2020年分别于遵义市道真县隆兴烟叶站和余庆县敖溪烟叶站进行如下实验：
(1)将试验地区平均分为4个处理区，每个处理区面积约120m2，依次记为枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区、枯草芽孢杆菌处理区、解淀粉芽孢杆菌处理区、58％甲霜灵锰锌处理区和空白对照；采用随机区组试验设计，每个处理区平均分为4个小区，每个小区面积约30m2，每个小区设置为三行区，每行区种植15株K326，即每个处理区设4个重复。
(2)道真县隆兴烟叶站2020年5月4日移栽K326，余庆县敖溪烟叶站2020年4月15日移栽K326，每个处理区移栽前：
枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区：将花椒籽粕、酒糟粉和生物炭按30:65:5混合，腐熟发酵得花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥，按每吨花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种10公斤菌剂的接种量，向花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种步骤1枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的复合菌剂，调节含水量50％，用尿素调节C/N比为35，二次发酵7d，制备成生防有机肥。按照80公斤/亩的施加量，向枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区施加生防有机肥，移栽时，随定根水每株施用50mL复合菌剂400倍液，移栽后20天每株施用100mL复合菌剂400倍液1次；
枯草芽孢杆菌处理区：同枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区，区别在于按每吨花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种10公斤菌剂的接种量，向花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种枯草芽孢杆菌Tpb55，制备成生防有机肥。按照80公斤/亩的施加量，向枯草芽孢杆菌处理区施加生防有机肥，移栽时，随定根水每株施用50mL枯草芽孢杆菌Tpb55 400倍液，移栽后20天每株施用100mL枯草芽孢杆菌Tpb55 400倍液1次；
解淀粉芽孢杆菌处理区：同枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区，区别在于按每吨花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种10公斤菌剂的接种量，向花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥接种解淀粉芽孢杆菌ZA7-31，制备成生防有机肥。按照80公斤/亩的施加量，向解淀粉芽孢杆菌处理区施加生防有机肥，移栽时，随定根水每株施用50mL解淀粉芽孢杆菌ZA7-31400倍液，移栽后20天每株施用100mL解淀粉芽孢杆菌ZA7-31400倍液1次；
58％甲霜灵锰锌处理区和空白对照均施用上述花椒籽粕-酒糟粉-生物炭有机肥做基肥。
(3)田间出现黑胫病病株时，枯草芽孢杆菌/解淀粉芽孢杆菌处理区每株施用100mL枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的复合菌剂400倍液，施用2次，时间间隔为7d；枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌处理区分别每株施用100mL枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌菌剂400倍液，施用2次，时间间隔为7d；58％甲霜灵锰锌处理区每株施用100mL 58％甲霜灵锰锌，施用2次，时间间隔为7d；空白对照时间等体积的清水。
(4)参照GB 23222-2008国家标准，于第二次防治施药后10天调查病害发生程度，计算病情指数和防病效果，采用DPS 7.05数据处理软件进行数据显著性检验，结果如下表1。
表1复合菌处理对烟草黑胫病田间防治效果
根据表1可以看出，余庆和道真试验点烟草黑胫病分别于6月中旬和下旬田间开始出现病株，生防菌单独处理或组合处理均能延迟发病时间。与对照相比，复合菌剂处理能延迟黑胫病发病时间8～10天，甲霜灵锰锌处理初始发病时间与对照则基本一致；第二次施药后10天，黑胫病发病程度普遍较轻，余庆和道真试验点空白对照的病情指数分别为18.77和14.95。复合菌剂处理能显著降低烟草黑胫病的发病程度，与甲霜灵锰锌处理防治效果无显著差异，优于菌剂单独处理。本发明枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的复合菌剂(总有效活菌数100亿/克)对轻至中度发生的烟草黑胫病具有较好的防治效果，能够延迟发病时间，降低发病程度。

Claims (10)

1.一种复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZA7-31和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Tpb55；
所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO .24912；
所述枯草芽孢杆菌Tpb55保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO .2843；
所述复合菌剂的制备方法包括：分别对所述枯草芽孢杆菌Tpb55和解淀粉芽孢杆菌ZA7-31进行活化培养和扩大培养，得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液后混合培养，得到所述复合菌剂。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂中总有效活菌数为0.5×109～1×109 cfu/mL。
3.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，得到所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液后，还包括：利用生理盐水分别稀释所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31种子液和枯草芽孢杆菌Tpb55种子液，得到解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液；
所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液中解淀粉芽孢杆菌ZA7-31的有效活菌数为1×109cfu/mL；
所述枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液中枯草芽孢杆菌Tpb55的有效活菌数为1×109 cfu/mL；
所述混合培养时，所述解淀粉芽孢杆菌ZA7-31稀释液和枯草芽孢杆菌Tpb55稀释液的体积比为1：1。
4.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述混合培养的转速为180rpm，时间为24h。
5.一种生防制剂，其特征在于，所述生防制剂的活性成分包括权利要求1～4任一项所述的复合菌剂的培养物。
6.权利要求1～4任一项所述的复合菌剂或权利要求5所述的生防制剂在烟草种植中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括防治烟草疾病和/或增强烟草对病原体的抗性。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述烟草疾病包括青枯病、赤星病和黑胫病中的一种或多种。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述病原体包括烟草疫霉、烟草赤星病菌和烟草青枯病菌中的一种或多种。
10.根据权利要求6～9任一项所述的应用，其特征在于，所述应用的方式包括：将所述生防制剂施加至烟草的根、叶或周围的土壤。
CN202211156655.9A 2022-09-21 2022-09-21 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用 Active CN116622537B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211156655.9A CN116622537B (zh) 2022-09-21 2022-09-21 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211156655.9A CN116622537B (zh) 2022-09-21 2022-09-21 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116622537A CN116622537A (zh) 2023-08-22
CN116622537B true CN116622537B (zh) 2024-04-19

Family

ID=87608721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211156655.9A Active CN116622537B (zh) 2022-09-21 2022-09-21 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116622537B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102154186A (zh) * 2011-04-14 2011-08-17 中国农业科学院烟草研究所 一株枯草芽孢杆菌及其在真菌病害防治中的应用
CN104711209A (zh) * 2015-02-09 2015-06-17 湖南省烟草公司永州市公司 用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌b011及其应用
CN109504639A (zh) * 2018-12-29 2019-03-22 贵州大学 解淀粉芽孢杆菌gumt319及其应用
CN114672429A (zh) * 2022-01-19 2022-06-28 山东青岛烟草有限公司 一种微生物复合菌剂及其在防治植物病害中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102154186A (zh) * 2011-04-14 2011-08-17 中国农业科学院烟草研究所 一株枯草芽孢杆菌及其在真菌病害防治中的应用
CN104711209A (zh) * 2015-02-09 2015-06-17 湖南省烟草公司永州市公司 用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌b011及其应用
CN109504639A (zh) * 2018-12-29 2019-03-22 贵州大学 解淀粉芽孢杆菌gumt319及其应用
CN114672429A (zh) * 2022-01-19 2022-06-28 山东青岛烟草有限公司 一种微生物复合菌剂及其在防治植物病害中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN116622537A (zh) 2023-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN115058358B (zh) 一株耐盐芽孢杆菌及其应用
WO2011032330A1 (zh) 防除连作烟草青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料
CN105820981B (zh) 一株高地芽孢杆菌菌剂的制备及应用
CN110358710A (zh) 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用
CN117757700B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN114231444A (zh) 一株耐盐芽孢杆菌及其应用
CN116064284B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN108865949B (zh) 枯草芽孢杆菌tkm-1及其应用
CN117165494A (zh) 一种猕猴桃溃疡病生防菌株Wq-1及其应用
CN117209335A (zh) 一种连作辣椒功能型微生物矿物肥及其制备方法和应用
CN114806896B (zh) 一株互隔交链孢霉、除草剂及其应用
CN113980871B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌菌株ht-9及其应用
CN115927082A (zh) 贝莱斯芽孢杆菌yjk1及其用途
CN116622537B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌za7-31、复合菌剂、生防制剂及应用
CN110791459B (zh) 一株用于防控连作百合土传枯萎病的枯草芽孢杆菌及其应用
CN118048273A (zh) 一株对疫霉菌具有拮抗作用的链霉菌菌株及其应用
CN115851553B (zh) 一种可防治根肿病的弗吉尼亚链霉菌及其应用
CN111808778A (zh) 一株防治黄萎病的韦氏芽孢杆菌及其培养方法、菌剂及其制备方法和应用
CN116144538B (zh) 一种可防治根肿病的黄暗色链霉菌及其应用
CN118240679A (zh) 一种可与杀菌剂协同防治咖啡病害的生防菌及其应用
CN108531413B (zh) 一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用
CN114467975B (zh) 一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用
CN116478887A (zh) 一种防治猕猴桃夏季溃疡病的微生物菌剂及其应用
CN108531414B (zh) 一株防治植物根癌病的泛菌及其应用
CN117363489B (zh) 一株具备黄瓜促生和抗病功能的长尾柄孢壳菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant