CN118048273A - 一株对疫霉菌具有拮抗作用的链霉菌菌株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株对疫霉菌具有拮抗作用的链霉菌菌株及其应用。该链霉菌,名称为链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80,所述链霉菌已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.28698。链霉菌ASG80对多种农业疫霉病原菌具有抑菌效果。本发明还公开了链霉菌ASG80或包括所述生防链霉菌ASG80在防治农业疫霉病原菌药物方面的应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用领域,具体涉及一株对疫霉菌具有拮抗作用的链霉菌菌株及其应用。
背景技术
链霉菌是一类重要的微生物资源,虽然其生长周期较长,但其能产生丰富的次级代谢产物,是抗生素及其它生物活性物质的主要生产者,在农业病虫害的防治上具有重要的应用价值。
由疫霉菌引起的作物疫病被视作“植物瘟疫”,是农作物生产中危害非常严重的一类病害。已经发现的疫霉菌有160多种,能侵染上百种植物,目前仍是全球粮食和生态安全的重要威胁。由疫霉菌侵染引起的病害具有发病快、变异快、流行快等特点,生产上的防控一直比较困难。因缺少抗病品种,目前生产上对疫霉菌的防治依然是以化学防治为主,但是长期施用化学药剂不仅病原菌容易产生抗药性,而且还会环境污染。因此,为了有效防止由疫霉菌造成的损失,有必要寻找新更加环保的防治方法以减少杀菌剂的使用。而生物防治则具有对环境友好、施用技术简便等优点,与其它的防治策略相比,生物防治被认为是一种更有前途防治疫霉的策略。因此,挖掘与鉴定对应的生防菌株以用于生物防治,是控制疫霉菌及其病害的关键。
发明内容
本发明提供了一种拮抗疫霉的链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80菌株及其应用,解决了现有技术中采用化学农药防控疫霉。使用化学农药防治病原菌不仅容易产生抗药性,还会引起环境污染。
本发明中的链霉菌从海南省海口市健康剑麻根部分离得到,命名为链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80,已于2023年10月23日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏编号为28698。链霉菌(Streptomycessp.)ASG80菌落为圆形或近圆形,中间白色边缘淡黄色。
本发明的Streptomyces sp.ASG80菌株对疫霉属(Phytophthora)病原菌、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、掌状拟盘多毛孢(Pestalotiopsis palmarum)均具有明显的抑制作用。因而本发明提供所述菌株及代谢产物在生物防治中应用,具体是用于防治由烟草疫霉(Phytophthora nicotiana)、樟疫霉(P.cinnamomi)、棕榈疫霉(P.palmivora)、辣椒疫霉(P.capsici)、豇豆疫霉(P.vignae)、瓜疫霉(P.melonis)、芋疫霉(P.colocasiae)、大豆疫霉(P.sojae)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、掌状拟盘多毛孢(Pestalotiopsis palmarum)中所引起植物病害。
本发明具有以下良好效果:含毒介质法制备培养基,菌株Streptomyces sp.ASG80的无菌发酵液对疫霉的生长有明显的抑制作用,在发酵条件未经优化的情况下,摇瓶培养8d的发酵液稀释10倍后抑菌率达到90%以上。通过平板滤纸片法测定,菌株ASG80发酵提取物,对烟草疫霉(P.nicotiana)、樟疫霉(P.cinnamomi)、辣椒疫霉(P.capsici)、豇豆疫霉(P.vignae)、芋疫霉(P.colocasiae)的抑菌率均达到80%以上,其次对棕榈疫霉(P.palmivora)和瓜疫霉(P.melonis)达到70%,抑菌率较低的大豆疫霉(P.sojae),抑菌率为68.56±4.08%。此前关于Streptomyces sp.及其代谢产物拮抗对疫霉防治很少,这一发现为筛选控制疫霉生防菌,以及以此为材料开发生物农药提供了重要的新材料。由于该菌株是从健康剑麻根部分离获得,与自然生态具有天然的和谐相融性,与化学农药相比对土壤生态无毒副作用、无残留。因此,在病害的生物防治实践中具有潜在的商业开发和应用价值。
附图说明
图1为实施例1中菌株ASG80在固体ISP2培养基上的菌落形态(培养14d);
图2为实施例1中菌株ASG80菌丝形态;
图3为实施例2中菌株ASG80的16S rDNA电泳图;
图4为实施例2中菌株ASG80及相关菌株的系统发育鉴定;
图5为实施例3中菌株ASG80的抗菌谱;
图6为实施例5中菌株ASG80无菌发酵液的抑菌活性;
图7为实施例8中菌株ASG80发酵提取物的抑菌谱。
生物材料保藏
名称:链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80;
分类命名:链霉菌Streptomyces sp.;
保藏日:2023年10月23日;
保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号);
保藏编号:CGMCC No.28698。
具体实施方式
实施例1链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80的获得
采集来自海南省海口市剑麻植株根样,样品采集后置于密封袋中,实验室4℃冰箱保存,称取根10g,用无菌研磨仪研磨,转入盛有90mL无菌水的三角瓶中,振荡约20min。取悬浮液1mL逐级稀释至104倍,分别取10-2、10-3、10-4浓度的悬浮液均匀地涂于高氏1号培养基平板上(含有浓度1μg/mL制霉素(罗恩试剂)、萘啶酮酸(罗恩试剂)和重铬酸钾(西陇化工)),每个浓度梯度重复3皿,在28℃恒温下培养一段时间。从平板上挑取不同培养性状的单菌落,共分离获得153株菌株,进而在ISP2固体培养基平板上划线纯化,获得放线菌纯培养,编号保存。
通过平板对峙法测定,筛选出菌株ASG80对疫霉的抑制效果最好。在ISP2固体培养基上气生菌丝中间为灰白色,边缘为淡黄色(图1)。在扫描电镜下,气生菌丝呈丝状(图2A),并带有毛发状结构(图2B)。从平板上挑取菌株ASG80在新鲜的ISP2固体培养基平板上纯化,于20%的甘油-80℃保存。
高氏一号固体培养基的配置:可溶性淀粉20.0g;KNO3 1.0g;K2HPO4 0.5g;MgSO4·7H2O 0.5g;NaCl 0.5g;FeSO4·7H2O 0.01g;琼脂20.0g,pH=7.4-7.6;121℃灭菌20min。
ISP2固体培养基的配置:酵母膏4.0g;麦芽膏10.0g;葡萄糖4.0g;微量盐溶液1.0mL;琼脂粉20.0g;蒸馏水1000mL;pH 7.2;121℃灭菌20min。其中,微量盐溶液:FeSO4·7H2O 0.1g;MnCl2·4H2O 0.1g;ZnSO4·7H2O 0.1g;蒸馏水1000mL。
实施例2链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80的分子鉴定
将实施例1中获得纯化的菌株ASG80接种至ISP2液体培养基平板上,28℃培养3d,过滤收集菌丝体进行基因组DNA提取。ISP2液体培养基的配置:酵母膏4.0g;麦芽膏10.0g;葡萄糖4.0g;微量盐溶液1.0mL;蒸馏水1000mL;pH 7.2;121℃灭菌20min。
选用细菌16S rDNA通用引物27f(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492r(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)进行PCR扩增。PCR反应体系(25μL):DNA模板(100ng/μL)1μL,引物27f和1525r(10μM)各1μL,2×Ex taq Premix 12.5μL,ddH2O 9.5μL体系。PCR反应条件:95℃5min;95℃1min,55℃1min,72℃2min,35个循环;72℃5min;4℃保温。
PCR扩增产物通过电泳检测,片段长度约为1500bp,结果如图3所示。扩增后进行连接转化克隆,阳性克隆送至深圳华大基因公司进行基因序列测定。菌株ASG80 16S rDNA序列如序列表中序列1所示。
将所获得的序列于NCBI的数据库中进行BLAST分析。通过比对分析,菌株ASG8016S rDNA序列与Streptomyces luteireticuli、S.abikoensis、S.luteoverticilatus、S.abikoensis、S.griseoverticilatus、S.reticulum、S.varsoviensis、S.sapporonensis等链霉菌属的16S rDNA序列相似度为99%。根据比对结果选择相似度大于98%的菌株16SrRNA基因序列作为参比对象,在MEGA 6软件中进行多序列比对,通过邻接法进行聚类分析和构建系统发育树(如图4所示),鉴定为链霉菌Streptomyces sp.。
该菌株,命名为链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏日期2023年10月23日,保藏编号为28698。
实施例3链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80对病原菌的抑菌测试
供试植物病原疫霉菌包括烟草疫霉(Phytophthora nicotiana)、樟疫霉(P.cinnamomi)、棕榈疫霉(P.palmivora)、辣椒疫霉(P.capsici)、豇豆疫霉(P.vignae)、瓜疫霉(P.melonis)、芋疫霉(P.colocasiae)、大豆疫霉(P.sojae)、瓜疫霉(P.melonis);植物病原真菌则包括胶孢炭疽菌(Coletotrichum gloeosporioides)、禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、新暗色柱节孢(Neoscytalidiumdimidiatum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、掌状拟盘多毛孢(Pestalotiopsispalmarum)。
采用平板对峙法测定链霉菌ASG80的抗菌谱。制备上述植物病原菌5mm的菌饼,接种在PDA平板(直径90mm)中央,距离菌饼上下2cm处接种链霉菌ASG80,以仅接种各植物病原菌为对照组,28℃恒温培养至对照组接近长满至整个平板时测量,每个处理重复3次。采用十字交叉法测量菌落直径,求出菌株对各病原菌的抑菌率。抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)-(处理组病原菌生长直径-病原菌块直径)]/(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)×100%。抑菌效果如图5所示,对各植物病原菌的抑菌率如下表1所示:
表1链霉菌ASG80的抗菌谱测定
病原菌 | 寄主 | 抑菌率(%) | 病原菌 | 寄主 | 抑菌率(%) |
烟草疫霉 | 剑麻 | 80.51±0.16 | 瓜疫霉 | 黄瓜 | 70.53±0.15 |
樟疫霉 | 油梨 | 72.87±0.46 | 胶孢炭疽菌 | 橡胶 | 62.78±0.60 |
棕榈疫霉 | 胡椒 | 75.63±0.27 | 稻瘟病菌 | 水稻 | 85.87±0 |
辣椒疫霉 | 辣椒 | 61.27±0.18 | 尖孢镰刀菌 | 香蕉 | 43.21±0.16 |
豇豆疫霉 | 豇豆 | 88.43±0.31 | 禾谷镰刀菌 | 小麦 | 44.96±0.31 |
大豆疫霉 | 大豆 | 56.70±0.26 | 新暗色柱节孢 | 火龙果 | 0 |
芋疫霉 | 芋头 | 83.74±0 | 掌状拟盘多毛孢 | 椰子 | 58.95±0.16 |
由表1可知,菌株ASG80的抗菌谱较宽,对供试的14种病原菌中的13种均具有不同程度的抑菌效果。尤其是对疫霉类的烟草疫霉、樟疫霉、棕榈疫霉、辣椒疫霉、豇豆疫霉、瓜疫霉、芋疫霉、大豆疫霉、瓜疫霉,最大抑菌率高达88.43±0.31%;对稻瘟病菌的抑菌率为85.87±0%;对炭疽菌、禾谷镰刀菌、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、掌状拟盘多毛孢菌抑制效果稍差,而对新暗色柱节孢没有抑制作用。
实施例4链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80无菌发酵液制备
将实施例1中获得的Streptomyces sp.ASG80经ISP2固体培养基平板活化,接种于ISP2液体培养基中,于恒温振荡箱中28℃,180rpm振荡培养3d;按照1%(体积百分含量)接种量接种到10L改良黄豆粉浸汁培养基发酵培养基中,28℃、180rpm振荡培养8d得到发酵液。通过0.22μm无菌过滤器过滤,获得链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80无菌发酵液。
改良黄豆粉浸汁培养基的配置:蔗糖10.0g;蛋白胨2.0g;可溶性淀粉5.0g;酵母浸粉2.0g;NaCl 2.0g;K2HPO4 0.5g;MgSO4·7H2O 0.5g;Ca2CO3 1.0g;黄豆浸粉20.0g;蒸馏水1000mL;pH 7.2;121℃灭菌20min。
实施例5菌株ASG80无菌发酵液的抗菌谱测定
实施例4所得链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80无菌发酵液与冷却至50℃左右的V8培养基和PDA培养基以1:9的比例混合后倒平板(含有10% ASG80无菌发酵液V8固体培养基),对照组加入等体积的无菌水。在超净工作台中,将预先培养好的植物病原菌用直径为5mm的打孔器打孔,疫霉菌饼接种到V8培养基平板中央,真菌菌饼接种到PDA培养基平板中央,在28℃恒温培养箱中培养。菌落直径快达到平板边缘,测量菌落直径并计算菌丝生长抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)-(处理组病原菌生长直径-病原菌块直径)]/(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)×100%。抑菌效果如图6所示,对各菌的抑菌率如下表2所示。
表2菌株ASG80无菌发酵液的抑菌活性
从表2数据中可以看出,菌株ASG80的10%无菌发酵液对烟草疫霉、樟疫霉、棕榈疫霉、辣椒疫霉、豇豆疫霉、瓜疫霉、芋疫霉、大豆疫霉的抑菌率均为100%,对瓜疫霉抑菌率为93.54%。而对其他真菌病原菌的抑菌率则低于72%,不及疫霉病原菌的抑菌效果好。因此,该菌的发酵液可以应用于由疫霉引起土传病害绿色微生态灌根制剂,具有重要应用潜力和开发前景。
V8固体培养基的配置:V8果汁100mL;Ca2CO3 0.2g;琼脂粉20g;蒸馏水900mL;pH7.0;121℃灭菌20min。
实施例6菌株ASG80无菌发酵液的热稳定性测定
将实施4的无菌发酵液分别置于40℃、50℃、60℃下水浴1h。以烟草疫霉作为指示菌,通过含有10%无菌发酵液V8固体培养基进行测定:将事先培养好的烟草疫霉菌用直径为5mm的打孔器打孔,菌饼接种到V8培养基平板中央,在28℃恒温培养箱中培养。当菌落生长快达到平板边缘时,测量菌落直径抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)-(处理组病原菌生长直径-病原菌块直径)]/(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)×100%。对烟草疫霉的抑菌率如下表3所示。
表3不同温度处理后菌株ASG80无菌发酵液对烟草疫霉的抑菌率
从表3的数据可以看出,60℃对无菌发酵液的活性有一定的影响,但50℃以下对无菌发酵液的活性无影响,说明该发酵液的热稳定性较好。
实施例7菌株ASG80无菌发酵液的光稳定性测定
将实施4的无菌发酵液分别置于紫外灯(ZW20S19W)下照射0.5h、1h、2h、3h、4h。以烟草疫霉作为指示菌,通过含有10%无菌发酵液V8固体培养基进行测定:将事先培养好的疫霉菌用直径为5mm的打孔器打孔,菌饼接种到V8培养基平板中央,在28℃恒温培养箱中培养。菌落生长快达到平板边缘时,测量菌落直径并计算菌丝体生长抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)-(处理组病原菌生长直径-病原菌块直径)]/(对照组病原菌生长直径-病原菌块直径)×100%。对烟草疫霉的抑菌率如下表4所示。
表4不同时间的紫外线处理后菌株ASG80无菌发酵液对烟草疫霉的抑菌率
从表4的数据可以看出,随着光照时间的延长,无菌发酵液的活性并未减弱。因此,菌株ASG80的发酵液在防治该类植物病原菌引起的病害中可发挥稳定功效。
实施例8菌株ASG80的发酵及发酵提取物的制备
将实施例4得到的发酵液,用等体积的乙酸乙酯(10L)萃取发酵液,反复萃取3遍,合并3次乙酸乙酯萃取液,并在45℃下将其减压浓缩至干品,得到提取物(2.13g),即为菌株ASG80发酵提取物。
实施例9菌株ASG80发酵提取物抑菌谱测定
取100mg的实施例8制备的菌株ASG80发酵提取物,用二甲基亚砜(DMSO)溶解成浓度为10mg/mL的待测样品,以甲霜灵(有效含量98%)和嘧菌酯(有效含量97%)作为疫霉类病原菌的阳性对照,以多菌灵(有效含量97%)和嘧菌酯(有效含量97%)作为真菌类病原菌的阳性对照。以疫霉类的烟草疫霉、樟疫霉、棕榈疫霉、辣椒疫霉、豇豆疫霉、瓜疫霉、芋疫霉、大豆疫霉和瓜疫霉,真菌类的胶孢炭疽菌、禾谷镰刀菌、稻瘟病菌、新暗色柱节孢、尖孢镰刀菌、掌状拟盘多毛孢作为抗菌谱测定的指示菌。通过平板滤纸片法测定链霉菌粗提产物的抑菌活性:将直径5mm的疫霉菌饼接种到V8培养基平板中央,真菌菌饼接种到PDA培养基平板中央,在距离菌块2cm处放置一张直径为6mm的滤纸片,左侧滤纸片吸取10μL的10mg/mL发酵提取物或甲霜灵、嘧菌酯、多菌灵,右侧滤纸片吸取10μL的二甲基亚砜(DMSO)作为对照。每个处理重复3次,放置28℃恒温培养,当对照菌落长满至边缘时,观察记录抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长宽度-处理组病原菌生长宽度)]/对照组病原菌生长宽度×100%。抑菌效果如图7所示,对病原菌的抑菌率如下表5所示。
表5菌株ASG80发酵提取物对病原菌的抑菌率
从表5数据中可以看出菌株ASG80发酵提取物对8种植物病原疫霉菌具有较好的抑制作用,其中对烟草疫霉、樟疫霉、辣椒疫霉、豇豆疫霉、芋疫霉的抑菌率均达80%以上,其次对棕榈疫霉和瓜疫霉为72.92±0.59%,抑菌率稍低的大豆疫霉,抑菌率为64.19±1.07%。与甲霜灵和嘧菌酯相比,ASG80发酵提取物对于疫霉类的抑制效果更好。相比之下,ASG80发酵提取物对6种真菌类病原菌的抑菌率均低于60%,比对照药剂多菌灵对真菌类的抑制效果更差。因此,该菌在制备由疫霉引起的植物病害绿色环保微生物农药药剂方面具有重要潜力和开发前景。
实施例10菌株ASG80发酵提取物的热稳定性测定
将实施例8中制备的发酵提取物用DMSO溶解成浓度为10mg/mL的样品液,分别置于40℃、50℃、60℃下水浴1h。以烟草疫霉作为指示菌,通过平板滤纸片法测定发酵提取物的抑菌活性:将直径5mm的病原菌块接种到V8培养基平板中央,在距离菌块2cm处放置直径为6mm的滤纸片,左侧滤纸片吸取10μL的10mg/mL发酵提取物,右侧滤纸片吸取10μL的二甲基亚砜(DMSO)作为对照。每个处理重复3次,放置28℃恒温培养,当对照长满至接近边缘时,测量并计算抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长宽度-处理组病原菌生长宽度)]/对照组病原菌生长宽度×100%。对烟草疫霉的抑菌率如下表5所示。
表5不同温度处理后的菌株ASG80发酵提取物对烟草疫霉的抑菌率
从表5的数据可以看出,在室温至60℃之间,对烟草疫霉抑制效果有轻微影响,说明该粗提物的热稳定性较好。因此,菌株ASG80在防治该类卵菌病害中可发挥稳定功效。
实施例11菌株ASG80发酵提取物的光稳定性测定
将实施例8中制备的发酵提取物用DMSO溶解成浓度为10mg/mL的样品液,分别置于紫外灯(ZW20S19W)下照射0.5h、1h、2h、3h、4h。以烟草疫霉作为指示菌,通过平板滤纸片法测定发酵提取物的抑菌活性:将直径5mm的病原菌块接种到V8培养基平板中央,在距离菌块2cm处放置直径为6mm的滤纸片,左侧滤纸片吸取10μL的10mg/mL发酵提取物,右侧滤纸片吸取10μL的二甲基亚砜(DMSO)作为对照。每个处理重复3次,放置28℃恒温培养,当对照长满至边缘时,测量并计算抑菌率,抑菌率(%)=[(对照组病原菌生长宽度-处理组病原菌生长宽度)]/对照组病原菌生长宽度×100%。对烟草疫霉的抑菌率如下表6所示。
表6不同时间的紫外线处理后菌株ASG80发酵提取物对烟草疫霉的抑菌率
从表6的数据可以看出,随着紫外光照时间的延长,菌株ASG80发酵提取物的抑菌率有下降趋势,但仍然具有较好的抑菌效果,抑菌率为80%左右。因此,菌株ASG80在防治上述疫霉类病害引起的植物病害中可发挥稳定功效。
以上所述实施例仅展示了本发明的几种实施方式,其描述较为具体,但对本发明而言只是说明性的,而非限制性的。对于本领域普通技术人员来说,在不脱离所附权利要求所限定的精神和范围的情况下,可做出许多修改、变化和改进,这些都属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一株链霉菌,名称为链霉菌(Streptomyces sp.)ASG80,其特征在于,所述链霉菌已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.28698。
2.权利要求1所述的链霉菌在制备抑制植物病原菌的生防菌剂或微生物菌肥或生物农药中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述植物病原菌为疫霉属(Phytophthora)病原菌、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、掌状拟盘多毛孢(Pestalotiopsis palmarum)中的至少一种;所述疫霉属(Phytophthora)病原菌为烟草疫霉(Phytophthora nicotiana)、樟疫霉(P.cinnamomi)、棕榈疫霉(P.palmivora)、辣椒疫霉(P.capsici)、豇豆疫霉(P.vignae)、瓜疫霉(P.melonis)、芋疫霉(P.colocasiae)和大豆疫霉(P.sojae)至少一种。
4.一种针对植物病原菌的生防制品,其特征在于,所述生防制品的活性成分为权利要求1所述的链霉菌、所述链霉菌的发酵液或链霉菌发酵液的提取物。
5.根据权利要求4所述的生防制品,其特征在于,所述的链霉菌的发酵液的获得方法如下所述:
S1:将所述链霉菌接种于改良黄豆粉浸汁培养基中培养;改良黄豆粉浸汁培养基的配置:蔗糖10.0g;蛋白胨2.0g;可溶性淀粉5.0g;酵母浸粉2.0g;NaCl 2.0g;K2HPO4 0.5g;MgSO4·7H2O 0.5g;Ca2CO3 1.0g;黄豆浸粉20.0g;蒸馏水1000mL;pH 7.2;121℃灭菌20min;
S2:将培养后的所述链霉菌液中的菌丝去除,得到所述链霉菌发酵液。
6.根据权利要求5所述的生防制品,其特征在于,S1中所述链霉菌的接种浓度为1%,于28℃、180rpm的黑暗条件下培养8d。
7.根据权利要求4所述的生防制品,其特征在于,所述链霉菌发酵液的提取物是以乙酸乙酯为提取剂从链霉菌发酵液提取得到的。
8.权利要求4所述的生防制品的制备方法,包括下述步骤:将链霉菌发酵液用等体积乙酸乙酯萃取提取,共提取三次,收集乙酸乙酯萃取液。
9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述提取后,还包括将乙酸乙酯萃取液减压浓缩和干燥获得链霉菌发酵液提取物的步骤,或还包括减压浓缩、干燥和稀释获得链霉菌发酵液提取物的步骤;所述减压浓缩的温度为45℃。
10.一种防治植物病害的方法,其特征在于,对植物施用权利要求4-7中任意一项所述的生防制品。
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