CN116549731A - 一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法。所述方法步骤如下：向丝素蛋白溶液中加入谷胱甘肽对其进行巯基化改性，得到巯基化的丝素蛋白；向巯基化的丝素蛋白中加入甲基丙烯酸酐改性的透明质酸制备成水凝胶前驱液；在前驱液中加入不同比例的颗粒状骨替代物得到水凝胶前驱复合体；该前驱复合体在蓝光下进行光固化，得到复合水凝胶支架。本申请的颗粒状骨替代物优选为脱矿牙本质基质，脱矿牙本质基质由离体牙制备而成，具有良好的骨传导与骨诱导能力。制备出的复合支架能很好的支持细胞黏附及生长，且形态可塑，同时能够满足骨组织工程支架的强度要求。
Description
技术领域
本发明涉及复合成骨支架材料技术领域，特别涉及一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法。
背景技术
颌骨是支撑面部软组织和牙齿的主要结构，颌骨的完整是保障颜面部的美容和咀嚼功能正常的关键要素。由于外伤、肿瘤、炎症等原因造成的大面积颌骨缺损的修复是口腔颌面外科医生和口腔种植医生面临的一大难题。
组织工程是将工程学原理和生命科学原理结合，以开发生物替代品为目标，将细胞、生长因子等与支架材料结合，创建3D骨组织替代物，用以指导新骨生成。骨组织工程学的出现解决了传统骨移植技术受供体来源不足、免疫排斥等问题的制约。相比传统的骨移植技术，骨支架有着更多的优点，如形态可塑性强、材料可调节性高、来源丰富、无传染性等。
理想的骨组织工程支架需要具备与骨相似的机械性能，在愈合过程中抵抗周围软硬组织的力并维持其形态。以水凝胶为代表的天然聚合物，由于其出色的生物学性能，已成为骨组织工程领域中的研究热点。然而，单纯水凝胶机械性能不足，且常缺乏引导成骨的生物线索，因此，本发明提供了一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法。此发明中的颗粒状骨替代物以脱矿牙本质基质(demineralizeddentinmatrix，DDM)为例。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法，该方法以丝素蛋白和透明质酸为主要成分制备光敏丝素蛋白透明质酸水凝胶，再与颗粒状骨替代物复合经光照后形成一种新型的复合型成骨支架材料，其具有机械强度好、形状可根据不同缺损部位进行调节，不引起细胞免疫反应等优势。
第一方面，本申请提供了一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，是采用以下技术方案得以实现的。
一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，包括以下步骤：
S1.制备巯基化的丝素蛋白：
a.将桑蚕茧置于质量分数为0.4％的Na2CO3溶液中，于98～100℃处理30～45min，重复上述步骤；
b.将蚕茧烘干后得到精练丝，精练丝采用CaCl2·CH3CH2OH·H2O三元溶剂于(70±2)℃搅拌溶解2～4小时，得到丝素水溶液；
c.将丝素水溶液进行透析，再连同透析袋放入pH6的MES缓冲液中，处理12～24h；
d.加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，反应10～15min，再加入还原型谷胱甘肽反应12～24h；透析并干燥后得到巯基化的丝素蛋白；
S2.制备甲基丙烯酰化透明质酸
a.将透明质酸制备成2～8wt％水溶液；
b.加入N，N-二甲基甲酰胺混合均匀，再滴加10-30ml/L甲基丙烯酸酐，反应20～30min后，调节溶液pH至8～9，持续反应12～24h；
c.向溶液中加入0.1～0.5mol/LNaCl，待完全溶解后，取出溶液并加入2.5～3倍体积的无水乙醇；取出絮状沉淀进行离心，复溶后透析、干燥得到甲基丙烯酰化透明质酸固体；
S3.制备颗粒状骨替代物
S4.制备基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架：
a.将步骤S1所得的巯基化改性的丝素蛋白溶于去离子水中，再加入还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐，搅拌均匀；
b.将步骤S2得到的甲基丙烯酰化透明质酸溶于去离子水，加入光引发剂，搅拌均匀；
c.将步骤S4a和步骤S4b得到的两种溶液混合，加入步骤S3所得颗粒状骨替代物，得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的前驱复合体；
d.光照后得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架。
通过采用上述技术方案，本发明选择了生物相容性佳的天然高分子材料丝素蛋白，并通过点击反应使丝素蛋白上的巯基与透明质酸上的双键交联，以提高支架材料的机械性能。并加入了颗粒状骨替代物，提升材料生物相容性及成骨性能。本发明复合水凝胶支架具有较好的空间维持能力，可以应对不同缺损部位的个性化需求。
进一步的，步骤S1b中，CaCl2·CH3CH2OH·H2O三元溶剂中三者的摩尔比为1∶2∶8。
进一步的，步骤S1d中，丝素蛋白与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比均为1：(1～2)；加入的还原型谷胱甘肽的量为0.16～0.2mol/L；更具体的，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为0.2～0.4mol/L，优选为0.3mol/L；N-羟基琥珀酰亚胺的加入量为0.4～0.6mol/L，优选为0.5mol/L；加入的还原型谷胱甘肽的量优选为0.18mol/L。
进一步的，步骤S2b中，按照去离子水与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为3:2的比例加入N，N-二甲基甲酰胺。
进一步的，步骤S3中，颗粒状骨替代物选用脱矿牙本质基质；所述脱矿牙本质基质的制备方法为：
a.取离体牙，去除离体牙的牙周膜、釉质、龋坏部分和修复体；
b.将牙齿压碎并去除牙髓或牙管填充材料；
c.将碎片经过脱矿质、过氧乙酸杀菌冲洗，制备得到颗粒状脱矿牙本质基质。
进一步的，步骤S4a中，巯基化改性的丝素蛋白水溶液的浓度为5～20wt％。
进一步的，步骤S4a中，三(2-羰基乙基)磷盐酸盐的加入量为0.15～0.20wt％。
进一步的，步骤S4b中，甲基丙烯酰化透明质酸的加入量为5～20wt％。
进一步的，步骤S4b中，光引发剂选用蓝光引发剂，终浓度为0.1～0.5wt％。
进一步的，步骤S4c中，加入颗粒状骨替代物后使用真空干燥皿去除气泡。
进一步的，步骤S4c中，颗粒状骨替代物的加入量为15％～50wt％。
进一步的，步骤S4d中，光照条件为在405nm蓝光下照射1～3min。
第二方面，本申请提供了一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，是采用以下技术方案得以实现的。
一种上述制备方法制备得到的基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架。
本申请具有以下有益效果。
1.本发明复合成骨支架具有较好的机械性能，满足了硬组织的承重需求；
2.本发明基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架能在蓝光下快速固化，形态可塑，适用于不同缺损部位的个性化要求；
3.本发明复合成骨支架具有一定促成骨能力；
4.本发明复合成骨支架的原料均为天然高分子聚合物，价格低廉，来源丰富，生物相容性佳。
附图说明
图1是本发明实施例1制备得到的SF-GSH的实物图；
图2是本发明实施例1制备得到的HAMA的实物图；
图3为本发明实施例1制备得到的复合成骨支架的产品图；
图4是本发明实施例2制备得到的复合成骨支架的产品图；
图5是本发明实施例3制备得到的复合成骨支架的产品图；
图6是本发明实施例1制备得到的复合成骨支架的细胞活死染色图；
图7是本发明实施例2制备得到的复合成骨支架的细胞活死染色图；
图8是本发明实施例3制备得到的复合成骨支架的细胞活死染色图。
图9是本发明实施例1制备得到的复合成骨支架用于比格犬牙槽骨缺损修复的micro-CT。
图10是本发明实施例2制备得到的复合成骨支架用于比格犬牙槽骨缺损修复的micro-CT。
图11是本发明实施例3制备得到的复合成骨支架用于比格犬牙槽骨缺损修复的micro-CT。
具体实施方式
以下结合和实施例对本专利申请进行进一步的说明。
实施例1
一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法，包括以下步骤：
(1)将桑蚕茧剪成片状，取30g置于质量分数为0.4％(w/v)的Na2CO3溶液中于100℃处理30min，以上步骤重复3次。将蚕茧捞出沥干后在60℃烘箱中过夜烘干。精练丝采用CaCl2·CH3CH2OH·H2O(摩尔比1∶2∶8)三元溶剂于70℃搅拌溶解3小时，得到丝素水溶液。将丝素水溶液放入MwCo3500的透析袋中，冷藏透析两日。再连同透析袋放入pH6的MES缓冲液中。24h后取出，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(加入量0.3mol/L)和N-羟基琥珀酰亚胺(加入量0.5mol/L)，反应15min后加入还原型谷胱甘肽(加入量0.18mol/L)，在室温下反应24h。透析三日后冷冻干燥两日，得到白色干燥的巯基化的丝素蛋白(SF-GSH)。
(2)将10万分子量的透明质酸溶于去离子水中，制备成2wt％的溶液。再按DI:DMF＝3:2的体积比加入DMF，将混合溶液置于4℃的冷凝循环机中。溶液混合均匀后，缓慢滴加2.88ml的甲基丙烯酸酐。反应30min后，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH至8～9，该过程持续24h。再向溶液中加入0.1molNaCl，待其完全溶解后，取出溶液倒入2.5倍体积的无水乙醇中。然后取出絮状沉淀进行离心，再将离心后的固体复溶于去离子水中。溶解完全后将溶液装袋透析三日，冷冻干燥两日后得到白色海绵状HAMA固体。
(3)以脱矿牙本质基质为例，制备脱矿牙本质基质：取离体牙，去除离体牙的牙周膜、釉质、龋坏部分和修复体。然后将牙齿在容器中压碎成碎片，同时去除牙髓或牙管填充材料。最后，将碎片放入真空超声高压灭菌的骨制备设备中，根据制造方法使用不同的溶液。经过脱矿质、过氧乙酸杀菌冲洗，最终制备出颗粒状脱矿牙本质基质。
(4)制备基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架：将步骤(1)所得的巯基化改性的丝素蛋白溶于去离子水中，得到浓度为5wt％的巯基化改性丝素蛋白水溶液，再加入还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(0.15wt％)，搅拌均匀。再将步骤(2)得到的双键化改性的透明质酸(2wt％)溶于去离子水，再加入LAP(0.5wt％)，搅拌均匀。将两者溶液混合后，加入步骤(3)所得的脱矿牙本质基质与水凝胶质量比为15：85的比例加入脱矿牙本质基质，得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的前驱复合体。405nm光照2min后得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架。
实施例2
一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法，包括以下步骤：
(1)将桑蚕茧剪成片状，取30g置于质量分数为0.4％(w/v)的Na2CO3溶液中于100℃处理30min，以上步骤重复3次。将蚕茧捞出沥干后在60℃烘箱中过夜烘干。精练丝采用CaCl2·CH3CH2OH·H2O(摩尔比1∶2∶8)三元溶剂于70℃搅拌溶解3小时，得到丝素水溶液。将丝素水溶液放入MwCo3500的透析袋中，冷藏透析两日。再连同透析袋放入pH6的MES缓冲液中。24h后取出，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(加入量0.3mol/L)和N-羟基琥珀酰亚胺(加入量0.5mol/L)，反应15min后加入还原型谷胱甘肽(加入量0.18mol/L)，在室温下反应24h。透析三日后冷冻干燥两日，得到白色干燥的巯基化的丝素蛋白(SF-GSH)。
(2)将10万分子量的透明质酸溶于去离子水中，制备成2wt％的溶液。再按DI:DMF＝3:2的体积比加入DMF，将混合溶液置于4℃的冷凝循环机中。溶液混合均匀后，缓慢滴加2.88ml的甲基丙烯酸酐。反应30min后，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH至8～9，该过程持续24h。再向溶液中加入0.1molNaCl，待其完全溶解后，取出溶液倒入2.5倍体积的无水乙醇中。然后取出絮状沉淀进行离心，再将离心后的固体复溶于去离子水中。溶解完全后将溶液装袋透析三日，冷冻干燥两日后得到白色海绵状HAMA固体。
(3)以脱矿牙本质基质为例，制备脱矿牙本质基质：取离体牙，去除离体牙的牙周膜、釉质、龋坏部分和修复体。然后将牙齿在容器中压碎成碎片，同时去除牙髓或牙管填充材料。最后，将碎片放入真空超声高压灭菌的骨制备设备中，根据制造方法使用不同的溶液。经过脱矿质、过氧乙酸杀菌冲洗，最终制备出颗粒状脱矿牙本质基质。
(4)制备基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架：将步骤(1)所得的巯基化改性的丝素蛋白溶于去离子水中，得到浓度为5wt％的巯基化改性丝素蛋白水溶液，再加入还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(0.15wt％)，搅拌均匀。再将步骤(2)得到的双键化改性的透明质酸(2wt％)溶于去离子水，再加入LAP(0.5wt％)，搅拌均匀。将两者溶液混合后，加入步骤(3)所得的脱矿牙本质基质与水凝胶质量比为35：65的比例加入脱矿牙本质基质，得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的前驱复合体。405nm光照2min后得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架。
实施例3
一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架及其制备方法，包括以下步骤：
(1)将桑蚕茧剪成片状，取30g置于质量分数为0.4％(w/v)的Na2CO3溶液中于100℃处理30min，以上步骤重复3次。将蚕茧捞出沥干后在60℃烘箱中过夜烘干。精练丝采用CaCl2·CH3CH2OH·H2O(摩尔比1∶2∶8)三元溶剂于70℃搅拌溶解3小时，得到丝素水溶液。将丝素水溶液放入MwCo3500的透析袋中，冷藏透析两日。再连同透析袋放入pH6的MES缓冲液中。24h后取出，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(加入量0.3mol/L)和N-羟基琥珀酰亚胺(加入量0.5mol/L)，反应15min后加入还原型谷胱甘肽(加入量0.18mol/L)，在室温下反应24h。透析三日后冷冻干燥两日，得到白色干燥的巯基化的丝素蛋白(SF-GSH)。
(2)将10万分子量的透明质酸溶于去离子水中，制备成2wt％的溶液。再按DI:DMF＝3:2的体积比加入DMF，将混合溶液置于4℃的冷凝循环机中。溶液混合均匀后，缓慢滴加2.88ml的甲基丙烯酸酐。反应30min后，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH至8～9，该过程持续24h。再向溶液中加入0.1molNaCl，待其完全溶解后，取出溶液倒入2.5倍体积的无水乙醇中。然后取出絮状沉淀进行离心，再将离心后的固体复溶于去离子水中。溶解完全后将溶液装袋透析三日，冷冻干燥两日后得到白色海绵状HAMA固体。
(3)以脱矿牙本质基质为例，制备脱矿牙本质基质：取离体牙，去除离体牙的牙周膜、釉质、龋坏部分和修复体。然后将牙齿在容器中压碎成碎片，同时去除牙髓或牙管填充材料。最后，将碎片放入真空超声高压灭菌的骨制备设备中，根据制造方法使用不同的溶液。经过脱矿质、过氧乙酸杀菌冲洗，最终制备出颗粒状脱矿牙本质基质。
(4)制备基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架：将步骤(1)所得的巯基化改性的丝素蛋白溶于去离子水中，得到浓度为5wt％的巯基化改性丝素蛋白水溶液，再加入还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(0.15wt％)，搅拌均匀。再将步骤(2)得到的双键化改性的透明质酸(2wt％)溶于去离子水，再加入LAP(0.5wt％)，搅拌均匀。将两者溶液混合后，加入步骤(3)所得的脱矿牙本质基质与水凝胶质量比为50：50的比例加入脱矿牙本质基质，得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的前驱复合体。405nm光照2min后得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的可塑型光固化复合成骨支架。
将实施例1-3制备的不同比例复合成骨支架浸出液用于活死染实验。在37℃，5％CO2培养条件下，在48孔板中用含有不同比例浸出液的DMEM细胞培养基中培养小鼠成纤维细胞收集样本细胞。收集细胞，用PBS洗涤细胞三次。用300ul活死染色工作液将细胞染色，37℃避光孵育15-30分钟。再用PBS洗涤细胞去除染液。用荧光显微镜检测结果。
将实施例1-3制备得到的复合成骨支架用于比格犬牙槽骨缺损修复实验。比格犬禁食24h后全身麻醉，沿牙槽嵴顶全层切开黏骨膜，翻瓣，拔除单侧下颌第一前磨牙至第一磨牙，并制备箱型临界骨缺损，每个骨缺损的尺寸大小为5x10x10mm3(颊舌向尺寸为5mm，牙合龈向尺寸10mm，近远中向尺寸为10mm)，相邻缺损间距为5mm；在缺损中置入不同比例支架后光照固化，再将黏骨膜瓣复位，丝线严密缝合。待其自然愈合8周后取材，拍摄micro-CT。
本具体实施方式的实施例为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.制备巯基化的丝素蛋白：
a.将桑蚕茧置于质量分数为0.4％的Na2CO3溶液中，于98～100℃处理30～45min，重复上述步骤；
b.将蚕茧烘干后得到精练丝，精练丝采用CaCl2·CH3CH2OH·H2O三元溶剂于(70±2)℃搅拌溶解2-4小时，得到丝素水溶液；
c.将丝素水溶液进行透析，再连同透析袋放入pH6的MES缓冲液中，处理12～24h；
d.加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，反应10～15min，再加入还原型谷胱甘肽反应12～24h；透析并干燥后得到巯基化的丝素蛋白；
S2.制备甲基丙烯酰化透明质酸
a.将透明质酸制备成2～8wt％水溶液；
b.加入N，N-二甲基甲酰胺混合均匀，再滴加10-30ml/L甲基丙烯酸酐，反应20～30min后，调节溶液pH至8～9，持续反应12～24h；
c.向溶液中加入0.1～0.5mol/LNaCl，待完全溶解后，取出溶液并加入2.5～3倍体积的无水乙醇；取出絮状沉淀进行离心，复溶后透析、干燥得到甲基丙烯酰化透明质酸固体；
S3.制备颗粒状骨替代物
S4.制备基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架：
a.将步骤S1所得的巯基化改性的丝素蛋白溶于去离子水中，再加入还原剂三(2-羰基乙基)磷盐酸盐，搅拌均匀；
b.将步骤S2得到的甲基丙烯酰化透明质酸溶于去离子水，加入光引发剂，搅拌均匀；
c.将步骤S4a和步骤S4b得到的两种溶液混合，加入步骤S3所得颗粒状骨替代物，得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的前驱复合体；
d.光照后得到基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架。
2.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S1b中，CaCl2·CH3CH2OH·H2O三元溶剂中三者的摩尔比为1∶2∶8。
3.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S1d中，丝素蛋白与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比均为1：(1～2)；加入的还原型谷胱甘肽的量为0.16～0.2mol/L。
4.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S2b中，按照去离子水与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为3:2的比例加入N，N-二甲基甲酰胺。
5.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S3中，颗粒状骨替代物选用脱矿牙本质基质；所述脱矿牙本质基质的制备方法为：
a.取离体牙，去除离体牙的牙周膜、釉质、龋坏部分和修复体；
b.将牙齿压碎并去除牙髓或牙管填充材料；
c.将碎片经过脱矿质、过氧乙酸杀菌冲洗，制备得到颗粒状脱矿牙本质基质。
6.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S4a中，巯基化改性的丝素蛋白水溶液的浓度为5～20wt％。
7.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S4a中，三(2-羰基乙基)磷盐酸盐的加入量为0.15～0.20wt％。
8.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S4b中，甲基丙烯酰化透明质酸的加入量为5～20wt％。
9.根据权利要求1所述的一种基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架及其制备方法，其特征在于：步骤S4c中，颗粒状骨替代物的加入量为15w～50wt％。
10.一种权利要求1-9任一所述制备方法制备得到的基于颗粒状骨替代物/丝素蛋白/透明质酸水凝胶的光固化复合成骨支架。
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2023
- 2023-04-21 CN CN202310432864.XA patent/CN116549731A/zh active Pending
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