CN116536269A - 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用 - Google Patents

一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116536269A
CN116536269A CN202211661015.3A CN202211661015A CN116536269A CN 116536269 A CN116536269 A CN 116536269A CN 202211661015 A CN202211661015 A CN 202211661015A CN 116536269 A CN116536269 A CN 116536269A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fdp
monoclonal antibody
antibody
degradation product
cho cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202211661015.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116536269B (zh
Inventor
王醒
王传新
杜鲁涛
赵志敏
李培龙
李娟�
杨忠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Aikeda Biotechnology Co ltd
Shandong University
Original Assignee
Shandong Aikeda Biotechnology Co ltd
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Aikeda Biotechnology Co ltd, Shandong University filed Critical Shandong Aikeda Biotechnology Co ltd
Priority to CN202211661015.3A priority Critical patent/CN116536269B/zh
Publication of CN116536269A publication Critical patent/CN116536269A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116536269B publication Critical patent/CN116536269B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/7452—Thrombomodulin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/224—Haemostasis or coagulation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种CHO细胞株、纤维蛋白原降解产物FDP抗体及其应用，CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202204，其稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。本发明纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。利用本发明FDP抗体制备的检测试剂盒的准确性与临床常用试剂盒一致，并且具有线性范围大、精密度高、重复性好、灵敏度高等特点，可以弥补现有技术存在的缺点，适合临床推广应用。

Description

一种CHO细胞株、纤维蛋白原降解产物FDP抗体及其应用
技术领域
本发明属于医学检验体外诊断领域，尤其涉及一种CHO细胞株、纤维蛋白原降解产物FDP抗体及其应用。
背景技术
FDP是在纤溶酶的作用下，血液中的纤维蛋白降解产物碎片X,Y,D和E(fdp)，或纤维蛋白原降解产物碎片X,Y,D和E(FgDp)的总称。机体在病理状态时激发纤溶系统，随着系列纤溶蛋白的活化，水解体内纤维蛋白原生成FDP。因此，FDP是纤溶系统异常，特别是弥散性血管内凝血综合征（DIC）诊断和病程监测的重要指标之一。除DIC外，FDP异常还可见于恶性肿瘤、深静脉血栓形成、肺栓塞、严重细菌感染、慢性肝病、器官移植排斥反应、妊娠高血压综合症等疾病所致的继发性及原发性纤溶亢进等。临床上检测血清、血浆、尿液中FDP的含量，对纤溶系统疾病的早期快速准确诊断及对溶栓药物治疗的疗程监测具有重要的应用价值。
目前常用的FDP检测方法包括：（1）胶乳凝集法，具有简单快速，费用低的优点，但灵敏度低，且需手工操作，只能实现FDP的定性或者半定量；（2）酶联免疫吸附法(ELISA），具有灵敏度高、可以准确定量等特点，但操作步骤繁琐复杂；（3）免疫胶体金法：具有快速简便的特点，但特异性不强，易受其他物质的干扰。（4）免疫比浊法：可以动态测定抗原抗体结合，相比于其他方法，同时具备操作简便、快速、定量准确、敏感度高等优点，在临床中应用越来越广泛。因此本领域迫切需要一种能够应用于免疫比浊法的抗体，从而可以开发出准确度更高、检测范围更大的自动化体外诊断FDP检测试剂盒。
发明内容
本发明针对免疫比浊法检测人血浆FDP存在的问题，提出一种能够应用于免疫比浊法的抗体及其制备方法与应用。
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种CHO细胞株，该细胞株已进行保藏，其命名为中国仓鼠卵巢细胞CHO FDP，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C202204，保藏日期为2022年01月12日，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，其稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。
第二方面，本发明还提供了CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体，可以特异性识别FDP结构，所述纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体包括如SEQ IDNO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。
所述FDP单克隆抗体的轻链氨基酸序列为：DILLTQSSSLLSVSPGERVSFSCRTSKNVGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASERLPGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNNWPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC，
FDP单克隆抗体的重链氨基酸序列为:
EVQLQQSGPDLVKPGASVRISCKKNYVDPLHKLHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGITGYNQKFKSKANDAQWNPENTAYMDLRSLTSEDSAVYFCARDAYDYDYLTDWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK。
第三方面，本发明提供了CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。
第四方面，本发明提供了纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株
采用天然FDP蛋白对BALB/c小鼠进行多次免疫，制备其脾细胞悬液和SP2/0细胞融合，筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
步骤2：单克隆抗体序列的获得
提取杂交瘤细胞的RNA，通过RT-PCR方法获得FDP单克隆抗体DNA序列，即抗体轻链和重链可变区DNA的序列，并对扩增后的DNA序列进行测序；
步骤3：单克隆抗体序列的构建
将测序获得的轻链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgK保守区的DNA序列，即获得改造后的抗体轻链序列，测序获得的重链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgG1保守区DNA序列，即获得改造后的抗体重链序列；
步骤4：单克隆抗体的表达
利用基因工程技术构建抗体轻链和重链表达载体；将载体转染进入CHO细胞系，稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。
优选的，步骤2中，引物序列：
5’端引物序列：ATTGT CCTTA ATGGG GGG
轻链混合引物：
5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）
5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）
5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）
重链混合引物：
5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’（IgG1保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2a保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2b保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’（IgG3保守区5’端反向引物）。
优选的，所述步骤1中，与骨髓瘤细胞的融合的脾脏细胞为末次免疫后第三天取脾制成的细胞悬，其骨髓瘤细胞的混合比例为1：6到1：10。
优选的，所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含FDP单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。
与现有技术相比，本发明的有益之处为：
本发明是通过如下技术方案实现的：利用本发明FDP抗体制备的检测试剂盒的准确性与临床常用试剂盒一致，并且具有线性范围大、精密度高、重复性好、灵敏度高等特点，可以弥补现有技术存在的缺点，适合临床推广应用。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本发明ELISA检测FDP mAb20与纤维蛋白交叉反应图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。
实施例1
本实施例提供FDP单克隆抗体的制备过程，本实施例未特殊说明之处，为抗体制备或检测的常规操作：
1. 筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株
1.1用常规的方法对BALB/c小鼠进行免疫，免疫原为天然FDP蛋白；
1.2初次免疫将100μg抗原与弗氏完全佐剂按照1:1的比例充分乳化后，在腹腔或皮下多点注射。以后每隔两周，将50μg抗原与不完全佐剂混合后注射，共免疫四次，以上均为一只小鼠的注射用量；
1.3融合前3天加强免疫一次，然后取出脾脏，制备成脾细胞悬液；
1.4在PEG融合剂作用下与SP2/0细胞融合，并在HAT选择培养基上筛选单克隆细胞；
1.5经3次融合，得到24株抗FDP的特异单克隆抗体细胞株，分别按序号命名为FDPmAb 1至FDP mAb 24。
2.抗体的质量控制
骨髓瘤细胞：SP2/0，本身不合成或不分泌免疫球蛋白，保存条件符合要求。
细胞融合：末次免疫后第三天取脾制成细胞悬液，与骨髓瘤细胞按1：6到1：10的比例混合，在PEG作用下进行细胞融合。
克隆化：用ELISA法筛选出分泌目的抗体的杂交瘤细胞，经有限稀释法对其进行克隆，直至筛选的杂交瘤细胞系具有产生单克隆抗体的能力。
3.杂交瘤细胞的鉴定
抗体分泌稳定性：经克隆化及连续传代检查，连续克隆化至检测单克隆抗体的阳性率达100%。
4.单克隆抗体的鉴定
将所得到的单克隆抗体与系列无关抗原进行ELISA反应，检测所得抗体是否与无关免疫原产生交叉反应。检测结果如图1所示，本实施例制得的FDP mAb 20与其他抗原基本没有交叉反应。
6. 单克隆抗体序列的获得
6.1按Invitrogen™ PureLink™ RNA小提试剂盒说明书的方法，从单克隆细胞中提取总RNA。
6.2按照Thermo Scientific™ RevertAid RT逆转录试剂盒说明书，按如下表1体系将抗体轻链可变区和重链可变区的RNA逆转录为cDNA。
表1 反应体系（42℃，30min）
6.3按照Invitrogen™ 末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 说明书在逆转录产物后端加入polyC尾，具体反应体系如下表2：
表2 反应体系 （37℃，15min）
6.4按Thermo Scientific™PCR Master Mix (2X) 说明书用PCR技术分别扩增抗体轻链、重链DNA。
PCR反应条件为：预热95℃ 5min，循环（变性95℃ 30s，退火55℃ 30s，延伸72℃30s），长时延伸（72℃ 10min）。
表3 反应体系
5’端引物序列为：ATTGT CCTTA ATGGG GGG
轻链混合引物：
5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）
5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）
5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）
重链混合引物：
5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’（IgG1保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2a保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2b保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’（IgG3保守区5’端反向引物）。
6.5按ChargeSwitch™ PCR纯化试剂盒说明书、纯化PCR产物。
7.DNA测序
利用Sanger测序法对上述纯化后的PCR产物进行DNA测序。
FDP mAb 20轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其DNA序列如SEQ ID NO:2 所示。
FDP mAb 20的重链可变区氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示，其DNA序列如SEQ IDNO:4 所示。
8. 单克隆抗体序列的构建
在抗体轻链可变区DNA序列后加入小鼠抗体IgK轻链保守区DNA序列SEQ ID NO:5，即获得改造后的抗体轻链序列。
在抗体重链可变区Fab端DNA序列后加入小鼠重链IgG1保守区DNA序列SEQ ID NO:6，即获得改造后的抗体重链序列。
FDP单克隆抗体（改造后FDP mAb 20抗体）轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，其DNA序列如SEQ ID NO:8所示。
FDP单克隆抗体（改造后FDP mAb 20抗体）重链氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，其DNA序列如SEQ ID NO:10所示。
9.FDP单克隆抗体的表达
人工合成DNA序列SEQ ID NO:8进行连接到pcDNA3.1质粒中。
人工合成DNA序列SEQ ID NO:10进行连接到pcDNA3.1质粒中。
将以上两个质粒进行1:1混合，按Gibco™ ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒说明书将质粒转染到CHO细胞系中表达。
10.单克隆抗体的纯化
用Protein G琼脂糖凝胶纯化单克隆抗体。
10.1 Protein G琼脂糖凝胶装柱，0.75×2cm，柱床体积为1mL；
10.2用20mM磷酸盐缓冲液（pH 7.4），即缓冲液A，平衡5-10个床体积；
10.3将1mL细胞裂解液用缓冲液A稀释到5mL，0.45μm滤膜过滤上样。用缓冲液A再洗5-10个床体积；
10.4用100mM甘氨基酸-盐酸缓冲液（pH 2.7），即缓冲液B，进行洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱抗体，立即用1M Tris-HCl缓冲液（pH 9.0）中和抗体；
10.5用纯水流洗10个柱床体积，再用20％的乙醇流洗10个柱床体积，使柱子再生并置于4-8℃环境中保存。
实施例2
本实施例提供检测试剂的制备过程。
免疫比浊反应试剂的配制：
1.R1试剂配制
3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟基丙磺酸(DIPSO)缓冲液浓度为0.05mol/L，用0.1mol/L HCl溶液调节pH至7.5。再加入0.15mol/L氯化钠，0.1％曲拉通X-100，0.02％ProClin300。其中，DIPSO缓冲液稳定反应体系pH值，氯化钠为反应体系提供离子环境，曲拉通X-100为表面活性剂，ProClin 300为防腐剂。
2. R2试剂配制
2.1 0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)的配制
首先单独配制0.05mol/L的NaH2PO4溶液和0.05mol/L Na2HPO4溶液，其中0.05mol/L的NaH2PO4配制如下：称取7.8015g的NaH2PO4-2H2O，加入到1L水中。同理，将17.911gNa2HPO4-12H2O溶于1L水中配制0.05mol/L的Na2HPO4溶液。之后取28ml NaH2PO4溶液与72mlNa2HPO4溶液，搅拌混合。
2.2 0.5mol/L MES缓冲液(pH6.0)的配制
称取2-吗啉乙磺酸97.6g，加入1L纯化水中，室温下充分溶解，用氢氧化钠调节pH至6.0(0.5mol/L)。
2.3其他物料的称量
2.3.1 NHS：称取NHS 2g，加入5mL纯化水搅拌溶解，搅拌5min使其充分溶解；
2.3.2 EDC：称取EDC 1.4g，加入3mL纯化水搅拌溶解；搅拌5min使其充分溶解；
2.3.3聚苯乙烯乳胶珠：量取聚苯乙烯乳胶珠2.5mL(10％聚苯乙烯乳胶珠)；
2.3.4牛血清白蛋白：称取牛血清白蛋白10g(1％牛血清白蛋白)；
2.3.5 ProClin 300：量取ProClin 300 0.2mL(0.02％ ProClin 300)；
2.4聚苯乙烯乳胶微球的活化
2.4.1将溶解的的EDC溶液加入NHS溶液中混合均匀；
2.4.2将量取的聚苯乙烯乳胶珠加入溶解好的EDC和NHS混合溶液中，再加入2.5mL0.5mol/L MES缓冲液(pH6.0)，然后加入5倍体积(聚苯乙烯乳胶珠)纯化水进行充分溶解，室温反应30min，不断搅拌；
2.4.3将配制好的聚苯乙烯乳胶溶液转移至离心瓶中，配平后离心，15000rpm，8℃，50min；
2.4.4弃上清，收集离心沉淀；加入40mL磷酸盐缓冲液，充分重悬聚苯乙烯乳胶珠，配平后离心，15000rpm，8℃，40min；连续两次；
2.4.5弃上清，收集离心沉淀；加入40mL磷酸盐缓冲液重新悬浮聚苯乙烯乳胶珠，超声20min(150W，3秒，间隔10秒，30次)使其分散。
2.5抗体的偶联
2.5.1将量取的FDP单克隆抗体，加入聚苯乙烯胶乳溶液中；室温搅拌30min；然后将烧杯移至2-8℃过夜搅拌；
2.5.2 15000rmp离心50min，弃上清。用磷酸盐缓冲液洗涤两次，离心沉淀后，弃上清；用40mL磷酸盐缓冲液重新悬浮FDP单克隆抗体乳胶，超声20min(150W，3秒，间隔10秒，30次)；
2.5.3往FDP单克隆抗体乳胶中加入牛血清白蛋白和ProClin 300，充分溶解后，加入460mL磷酸盐缓冲液，即得R2试剂。
实施例3
检测试剂检测结果：
A、检测试剂的准确性
取50例临床标本，将本发明试剂盒与积水医疗试剂盒做临床比对，结果如下表4。
表4 准确性检测结果
本发明试剂盒与积水医疗试剂盒比较：本发明试剂盒检测阳性率为38%，阴性率为62%；积水医疗试剂盒检测阳性率为36%，阴性率为64%，本发明试剂盒与积水医疗试剂盒对FDP检测结果的准确性基本一致。
B、检测试剂的线性范围
将积水医疗试剂盒检测值为118.78μg/mL的血样，用去除FDP的人基质血清溶液作为稀释液，配置浓度为100μg/mL，75μg/mL，50μg/mL，25μg/mL，10μg/mL，5μg/mL，0μg/mL的FDP标准品，使用本发明试剂盒进行检测，检测结果如下表5：
表5 线性范围检测结果
使用本发明检测试剂盒检测FDP的实际检测值与理论值具有细微的差异，差异平均值为-0.26，总体检测值相当，本发明检测试剂盒线性范围较好。
C、检测试剂的精密度
将积水医疗试剂盒检测值为4.76μg/mL和84.21μg/mL的血样用本发明试剂盒测试10次，检测本发明试剂盒的精密度，结果如下表6：
表6 精密度检测结果
使用本发明试剂盒对相同浓度样本连续检测10次，发现检测平均值与理论浓度值差异较小，相对偏差分别为2.72%与0.79%，试剂盒变异系数CV为1.01%与0.65%，均小于5%，检测结果代表本发明检测试剂盒精密度较好。
序列表
SEQ ID NO:1:
DILLTQSSSLLSVSPGERVSFSCRTSKNVGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASERLPGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNNWPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:2:
GATATTTTATTAACTCAATCTTCTTCTTTATTATCTGTTTCTCCTGGAGAGCGTGTTTCTTTTTCTTGTCGTACTTCTAAAAATGTTGGAACTAATATTCATTGGTATCAACAACGTACTAATGGATCTCCTCGTTTATTAATTAAATATGCTTCTGAGCGTTTACCTGGAATTCCTTCTCGTTTTTCTGGATCTGGATCTGGAACTGATTTTACTTTATCTATTAATTCTGTTGAGTCTGAGGATATTGCTGATTATTATTGTCAACAATCTAATAATTGGCCTTATACTTTTGGAGGAGGAACTAAATTAGAGATTAAA
SEQ ID NO:3:
EVQLQQSGPDLVKPGASVRISCKKNYVDPLHKLHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGITGYNQKFKSKANDAQWNPENTAYMDLRSLTSEDSAVYFCARDAYDYDYLTDWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:4:
GAGGTTCAATTACAACAATCTGGACCTGATTTAGTTAAACCTGGAGCTTCTGTTCGTATTTCTTGTAAAAAAAATTATGTTGATCCTTTACATAAATTACATTGGGTTAAACAATCTCATGGAAAATCTTTAGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTATAATGGAATTACTGGATATAATCAAAAATTTAAATCTAAAGCTAATGATGCTCAATGGAATCCTGAGAATACTGCTTATATGGATTTACGTTCTTTAACTTCTGAGGATTCTGCTGTTTATTTTTGTGCTCGTGATGCTTATGATTATGATTATTTAACTGATTGGGGACAAGGAACTTTAGTTACTGTTTCTGCT
SEQ ID NO:5:
CGTGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
SEQ ID NO:6:
GCTAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCGCAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
SEQ ID NO:7:
DILLTQSSSLLSVSPGERVSFSCRTSKNVGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASERLPGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNNWPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO:8:
GATATTTTATTAACTCAATCTTCTTCTTTATTATCTGTTTCTCCTGGAGAGCGTGTTTCTTTTTCTTGTCGTACTTCTAAAAATGTTGGAACTAATATTCATTGGTATCAACAACGTACTAATGGATCTCCTCGTTTATTAATTAAATATGCTTCTGAGCGTTTACCTGGAATTCCTTCTCGTTTTTCTGGATCTGGATCTGGAACTGATTTTACTTTATCTATTAATTCTGTTGAGTCTGAGGATATTGCTGATTATTATTGTCAACAATCTAATAATTGGCCTTATACTTTTGGAGGAGGAACTAAATTAGAGATTAAACGTGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
SEQ ID NO:9:
EVQLQQSGPDLVKPGASVRISCKKNYVDPLHKLHWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGITGYNQKFKSKANDAQWNPENTAYMDLRSLTSEDSAVYFCARDAYDYDYLTDWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQ ID NO:10:
GAGGTTCAATTACAACAATCTGGACCTGATTTAGTTAAACCTGGAGCTTCTGTTCGTATTTCTTGTAAAAAAAATTATGTTGATCCTTTACATAAATTACATTGGGTTAAACAATCTCATGGAAAATCTTTAGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTATAATGGAATTACTGGATATAATCAAAAATTTAAATCTAAAGCTAATGATGCTCAATGGAATCCTGAGAATACTGCTTATATGGATTTACGTTCTTTAACTTCTGAGGATTCTGCTGTTTATTTTTGTGCTCGTGATGCTTATGATTATGATTATTTAACTGATTGGGGACAAGGAACTTTAGTTACTGTTTCTGCTGCTAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCGCAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例应用于其它领域，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (7)

1.一种CHO细胞株，其特征在于，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202204，其稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。
2.权利要求1所述CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体，其特征在于，所述纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。
4.权利要求2所述纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株
采用天然FDP蛋白对BALB/c小鼠进行多次免疫，制备其脾细胞悬液和SP2/0细胞融合，筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
步骤2：单克隆抗体序列的获得
提取杂交瘤细胞的RNA，通过RT-PCR方法获得FDP单克隆抗体DNA序列，即抗体轻链和重链可变区DNA的序列，并对扩增后的DNA序列进行测序；
步骤3：单克隆抗体序列的构建
将测序获得的轻链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgK保守区的DNA序列，即获得改造后的抗体轻链序列，测序获得的重链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgG1保守区DNA序列，即获得改造后的抗体重链序列；
步骤4：单克隆抗体的表达
利用基因工程技术构建抗体轻链和重链表达载体；将载体转染进入CHO细胞系，稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。
5.据权利要求4所述的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤2中，引物序列：
5’端引物序列：ATTGT CCTTA ATGGG GGG
轻链混合引物：
5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）
5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）
5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）
重链混合引物：
5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’（IgG1保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2a保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2b保守区5’端反向引物）
5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’（IgG3保守区5’端反向引物）。
6.据权利要求4所述的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，与骨髓瘤细胞的融合的脾脏细胞为末次免疫后第三天取脾制成的细胞悬，其骨髓瘤细胞的混合比例为1：6到1：10。
7.根据权利要求3所述的CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含FDP单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。
CN202211661015.3A 2022-12-23 2022-12-23 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用 Active CN116536269B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211661015.3A CN116536269B (zh) 2022-12-23 2022-12-23 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211661015.3A CN116536269B (zh) 2022-12-23 2022-12-23 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116536269A true CN116536269A (zh) 2023-08-04
CN116536269B CN116536269B (zh) 2024-01-12

Family

ID=87445808

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211661015.3A Active CN116536269B (zh) 2022-12-23 2022-12-23 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116536269B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117089529A (zh) * 2023-10-16 2023-11-21 深圳普门科技股份有限公司 杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012027470A2 (en) * 2010-08-25 2012-03-01 Gt Life Sciences, Inc. Articles of manufacture and methods for modeling chinese hamster ovary (cho) cell metabolism
CN103954758A (zh) * 2014-05-15 2014-07-30 海南世济医学技术有限公司 一种用于纤维蛋白和纤维蛋白原及其降解产物的检测方法和试剂盒
CN114149507A (zh) * 2021-12-31 2022-03-08 武汉华美生物工程有限公司 抗fdp单克隆抗体、抗体对及其制备方法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012027470A2 (en) * 2010-08-25 2012-03-01 Gt Life Sciences, Inc. Articles of manufacture and methods for modeling chinese hamster ovary (cho) cell metabolism
CN103954758A (zh) * 2014-05-15 2014-07-30 海南世济医学技术有限公司 一种用于纤维蛋白和纤维蛋白原及其降解产物的检测方法和试剂盒
CN114149507A (zh) * 2021-12-31 2022-03-08 武汉华美生物工程有限公司 抗fdp单克隆抗体、抗体对及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"ARX71333.1", GENBANK *
"OM158209.1", GENBANK *
BENOI ˆT HO-TIN-NOE ´等: "Functional hierarchy of plasminogen kringles 1 and 4 in fibrinolysis and plasmin-induced cell detachment and apoptosis", 《FEBS JOURNAL》, vol. 272, no. 13, pages 3387 - 3400, XP009509515, DOI: 10.1111/j.1742-4658.2005.04754.x *
张捷等: "抗人纤维蛋白(原)及降解产物单克隆抗体制备及特性的探讨", 《吉林大学学报(医学版)》, vol. 17, no. 06, pages 559 - 560 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117089529A (zh) * 2023-10-16 2023-11-21 深圳普门科技股份有限公司 杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及试剂盒
CN117089529B (zh) * 2023-10-16 2024-03-15 深圳普门科技股份有限公司 杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN116536269B (zh) 2024-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5807300B2 (ja) 試料中のｃ反応性蛋白質の測定方法及び測定試薬
CN109580959B (zh) 一种检测肝素结合性表皮生长因子的elisa试剂盒
CN111748033B (zh) 一种与新型冠状病毒np蛋白结合的分离抗体、包含其的检测试剂盒
KR20130032869A (ko) 신규 단클론항체 및 d 다이머의 면역학적 측정법
CN116536269B (zh) 一种cho细胞株、纤维蛋白原降解产物fdp抗体及其应用
CN110372783A (zh) 一种脂联素抗原、抗体及其胶乳试剂的制备方法以及脂联素检测试剂盒
CN114807054A (zh) 小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒
CN114369160B (zh) 结合抗繆勒氏管激素amhn二聚体蛋白的高亲和力兔单抗
CN114133452B (zh) 一种肝素结合蛋白抗体及其试剂盒、应用
CN117003878B (zh) 抗sFLT-1蛋白的单克隆抗体及应用
KR102660061B1 (ko) 항 열대열 말라리아 원충 hrp-ii 항체
CN113045646B (zh) 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体
CN113717285B (zh) 抗人d-二聚体抗体及其应用
CN116041499A (zh) 1,3-β-D-葡聚糖结合蛋白、制备方法及应用
CN115948342B (zh) 一种cho细胞株、d-二聚体单克隆抗体及其应用
CN116284417B (zh) 一种凝血酶-抗凝血酶复合物抗体、制备方法及其应用
CN116284415B (zh) 一种纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物单克隆抗体及其制备和应用
JP6481192B2 (ja) クドア・セプテンプンクタータの迅速検出法
CN113402606A (zh) 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其临床应用
CN117285635B (zh) 抗肝素结合蛋白的单克隆抗体组合物及应用
CN117866100B (zh) 针对d-二聚体的单域抗体或其抗原结合片段及其相关生物材料与应用
CN117683121B (zh) 抗水痘-带状疱疹病毒抗体及其应用
CN111378035B (zh) 抗恶性疟原虫hrp-ii重组抗体
CN117327186B (zh) 结合mmp3蛋白的双特异性抗体及其用途
JP7510787B2 (ja) アルカリフォスファターゼ融合抗体及びその製造方法、並びに免疫測定用試薬及び免疫測定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant