CN116530659A - 具有增强抗氧化功能的原料组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有增强抗氧化功能的原料组合物及其制备方法，属于食品技术领域，该组合物以朝鲜蓟粉、刺梨粉、血橙粉、石榴果汁粉、沙棘粉、枸杞粉、酵母抽提物、橄榄果粉、海参肽为原料，通过对组合物的配方组分以及用量的优化，使其具有优异的抗氧化、增强人体免疫力的作用，且稳定性高，易于长期储存，提高了食品的附加值。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域，具体涉及一种具有增强抗氧化功能的原料组合物及其制备方法。
背景技术
人体在代谢过程中会产生自由基，研究表明，人体内存在各种自由基，如氧阴离子自由基、二氧化氮自由基、一氧化氮自由基等。正常情况下，人体内自由基的产生与消除处于动态平衡状态，但人体内抗氧化酶类活性下降时，清除体内自由基的能力下降，体内自由基过量就会引起酯质过氧化，膜结构受到破坏，引起脑细胞、肌肉细胞、肝细胞及亚细胞结构的广泛损伤，造成衰老或心脑血管疾病、肿瘤、糖尿病等疾病的发生。因此抗氧化概念及应用研究已经成为目前医药、保健品、食品市场领域的热点。
抗氧化剂能够消除人体内过多的自由基，对许多自由基引起的疾病及老化相关疾病具有预防作用。人体的抗氧化物质一部分来自于自身合成，另一部分从外界中摄取。人体可以从外界摄取的抗氧化剂有很多，例如：维生素C、维生素E、类胡萝卜素群、黄酮类、褪黑素、人体生长素等，它们可以利用自身结构的特性来稳定自由基多余的电子，防止自由基对细胞造成老化，且不会对人体带来负担。目前主要是将其中的一、两种抗氧化剂，做为增强机体抗氧化能力、延缓衰老的保健食品直接使用，或搭配其它食物一同服用。但由于各种抗氧化剂的抗氧化功效、作用不尽相同，单纯的使用其中一、两种抗氧化剂，其抗氧化效果非常的有限，不可能对机体起到系统的抗氧化作用。因此，人们尝试将多种抗氧化剂搭配使用，从而制造出能对机体起到较强抗氧化作用的保健食品。
中国申请CN101496603A公开了一种具有增强免疫力和抗氧化功能的保健食品，包含灵芝、白术、茯苓、薏苡仁、黄精、枸杞子、麦冬、党参。中国专利CN107581614A公开一种抗氧化保健食品，包含微藻粉、银杏叶提取物、金银花提取物、山楂提取物、枸杞。CN107927506A公开了一种高效抗氧化的多酚型饮料，由以下原料组成：海参肽、海藻提取物、葡萄籽提取物、石榴提取物、茶多酚、红枣粉、枸杞粉、蓝莓粉、木糖醇、苹果醋、其余为纯净水。
目前，国际国内市场上已经有利用抗氧化剂制成健康食品或药品，但大多数产品的功效单一，且稳定性较差，而且，某些抗氧化剂本身具有轻微的毒性，长期服用会对机体产生不利影响。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有增强抗氧化功能的原料组合物及其制备方法，通过对各组分以及用量的优化，使其具有优异的抗氧化、增强人体免疫力的作用，且稳定性高，易于长期储存，提高了食品的附加值。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种具有增强抗氧化功能的原料组合物，该组合物由朝鲜蓟粉、刺梨粉、血橙粉、石榴果汁粉、沙棘粉、枸杞粉、酵母抽提物、橄榄果粉、海参肽组成。
上述所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由1-5份朝鲜蓟粉、5-10份刺梨粉、15-25份血橙粉、1-5份石榴果汁粉、5-8份沙棘粉、2-5份枸杞粉、2-8份酵母抽提物、1-5份橄榄果粉和1-2份海参肽组成。
进一步地，所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由2-4份朝鲜蓟粉、6-10份刺梨粉、20-25份血橙粉、2-5份石榴果汁粉、5-7份沙棘粉、3-5份枸杞粉、2-6份酵母抽提物、3-5份橄榄果粉和1-2份海参肽组成。
优选地，所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、6份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、3份橄榄果粉和2份海参肽组成。
上述所述具有增强抗氧化功能的原料组合物中，所述朝鲜蓟粉、沙棘粉和橄榄果粉的质量比为1:1-4:0.5-2；优选地，所述朝鲜蓟粉、沙棘粉和橄榄果粉的质量比为1:2:1。
在具有增强抗氧化功能的原料组合物中，所述酵母抽提物按照以下步骤制备：
（1）干酵母加水活化，得酵母溶液；
（2）步骤（1）所得酵母溶液中加入盐使细胞壁破碎，得酵母混合溶液；
（3）步骤（2）所得酵母混合溶液中加入复合酶进行酶解，得到酵母酶解液；
（4）将步骤（3）所得酵母酶解液灭酶处理，离心分离取上清液；
（5）步骤（4）所得上清液经蒸发浓缩、喷雾干燥，得粉末状的酵母抽提物。
进一步地，步骤（1）中，所述干酵母与水的添加质量比为1:5-10，优选质量比为1:6-7。活化条件为：温度32-38℃，时间0.5-2h，搅拌速率为30-50r/min；优选活化条件为：温度36-38℃，时间1-1.5h。
进一步地，步骤（2）中，所述氯化钠的添加量为酵母溶液质量的3-4%，优选为3.5-3.8%。细胞壁破碎的条件为：温度70-80℃，时间1-4h；优选为温度75℃，时间2.5h。
进一步地，步骤（3）中，所述复合酶为碱性蛋白酶、葡聚糖酶和甘露聚糖酶的混合物；其中，碱性蛋白酶的添加量为干酵母质量的0.1-0.3%，葡聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.05-0.2%，甘露聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.02-0.05%；优选地，碱性蛋白酶的添加量为干酵母质量的0.2%、葡聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.1%，甘露聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.03%。
进一步地，步骤（3）中，所述酶解条件为：温度40-55℃，pH=7.5-8.0，时间2-12h；优选酶解条件为：温度50℃，PH=8.0，时间6h。
进一步地，步骤（4）中，灭酶处理条件为：温度75-90℃，时间20-40min；优选灭酶处理条件为：温度85℃，时间30min。
进一步地，所述酵母抽提物中包含8-12%的谷胱甘肽，优选为含10.6%的谷胱甘肽。
上述所述具有增强抗氧化功能的原料组合物的制备方法，包括下述步骤：
将所述各原料混匀、粉碎、过筛，制成冲剂或片剂或胶囊，灭菌、包装后即为成品。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明提供了一种包含朝鲜蓟粉、刺梨粉、血橙粉、石榴果汁粉、沙棘粉、枸杞粉、酵母抽提物、橄榄果粉、海参肽的具有增强抗氧化功能的原料组合物，通过对抗氧化食品的配方组分以及用量的优化，使其具有增强人体的抗氧化和免疫力功能的作用，且稳定性高，易于长期储存，提高了食品的附加值；
（2）本发明在组合物中添加朝鲜蓟粉、刺梨粉和橄榄果粉，三组分复配，不近可以是组合物获得优异的抗氧化性能，且三组分以特定比例添加时具有一定的协同作用，有助于增加组合物的稳定性，使其长时间放置后仍具有较强的抗氧化性能；
（3）本发明在制备酵母抽提物过程中，以碱性蛋白酶、葡聚糖酶和甘露聚糖酶为复合酶进行酶解，并调控复合酶的添加量，使所得酵母抽提物中谷胱甘肽含量在8-12%，将其添加到组合物中，可明显提高增强免疫力功能的作用，并有助于提高组合物的稳定性。
具体实施方式
以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本发明要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本发明的发明作出多种改变和修饰，而其也应当属于本发明要求保护的范围之中。
下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。
实施例1：
具有增强抗氧化功能的原料组合物，包含下述组分：
3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、6份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、3份橄榄果粉和2份海参肽。
所述酵母抽提物按照由以下步骤制备：
（1）10份干酵母加100份水活化，得酵母溶液；
（2）步骤（1）所得酵母溶液中加入4份氯化钠，75℃下破碎细胞壁2.5h，得酵母混合溶液；
（3）步骤（2）所得酵母混合溶液中加入复合酶（0.02份碱性蛋白酶、0.01份葡聚糖酶、0.003份甘露聚糖酶），在50℃、pH=8.0条件下酶解6h，得到酵母酶解液；
（4）将步骤（3）所得酵母酶解液在85℃下灭酶30min，离心分离取上清液；
（5）步骤（4）所得上清液蒸发浓缩、喷雾干燥，得粉末状的酵母抽提物，包含10.6%的谷胱甘肽。
上述具有增强抗氧化功能的原料组合物的制备方法，包括下述步骤：
将所述各原料混匀、粉碎、过30目筛，置胶囊机中装囊，即为成品。
实施例2
具有增强抗氧化功能的原料组合物，包含下述组分：
3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、3份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、6份橄榄果粉和2份海参肽。
其余与实施例1相同。
实施例3
具有增强抗氧化功能的原料组合物，包含下述组分：
2份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、8份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、1份橄榄果粉和2份海参肽。
其余与实施例1相同。
实施例4
酵母抽提物制备过程中，碱性蛋白酶的添加量为0.03份，葡聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.005份，甘露聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.005份。
其余与实施例1相同。
实施例5
酵母抽提物制备过程中，碱性蛋白酶的添加量为0.01份，葡聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.02份，甘露聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.002份。
其余与实施例1相同。
对比例1
具有增强抗氧化功能的原料组合物，包含下述组分：
3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、2份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、7份橄榄果粉和2份海参肽。
其余与实施例1相同。
对比例2
具有增强抗氧化功能的原料组合物，包含下述组分：
3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、15份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、1份橄榄果粉和2份海参肽。
其余与实施例1相同。
对比例3
具有增强抗氧化功能的原料组合物中不添加沙棘粉。
其余与实施例1相同。
对比例4
具有增强抗氧化功能的原料组合物中不添加橄榄果粉。
其余与实施例1相同。
对比例5
具有增强抗氧化功能的原料组合物中，分别用等量的薏仁粉、甘草粉代替沙棘粉和橄榄果粉。
其余与实施例1相同。
对比例6
酵母抽提物制备过程中，复合酶利用等量的碱性蛋白酶代替。
其余与实施例1相同。
对比例7
酵母抽提物制备过程中，复合酶利用等量的葡聚糖酶代替。
其余与实施例1相同。
对比例8
酵母抽提物制备过程中，复合酶利用等量的甘露聚糖酶代替。
其余与实施例1相同。
实验例1
抗氧化功能动物实验
1.1材料：10月龄SPF级ICR雌性小鼠，由上海西普尔－必凯实验动物公司提供；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)测试盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2分组与给药剂量：将小鼠随机分组，每组10只，设置为4个实验组（实施例1、对比例3-5）和一个对照组。具有增强抗氧化功能的原料组合物每日以1.2g/kg的量给予实验组动物灌胃，对照组灌胃等量蒸馏水，连续灌胃30天，实验结束时颈椎脱臼处死。
1.3实验方法：采尾尖血20μL加蒸馏水制成4％溶血液，按试剂盒说明书测定溶血液中的MDA含量，摘眼球采血离心，取血清测定SOD活力。
1.4实验结果：实验数据采用统计学软件进行方差分析。
实验结果如下表1所示。
表1. 对小鼠抗氧化性能的影响
注：与对照组相比，＜0.05
由表1可见，实施例、对比例组小鼠的MDA含量明显低于对照组（p＜0.05），SOD活力高于对照组（p＜0.05），可知本发明提供的组合物具有较强的抗氧化性能；对比实施例1和对比例3-5可知，对比例3-5的小鼠的MDA含量和SOD活力差距不明显，而与实施例1差距较大，可知朝鲜蓟粉、沙棘粉和橄榄果粉同时添加使组合物获得更高的抗氧化功能。
实验例2
增强免疫功能动物实验
2.1实验动物：10月龄SPF级ICR雌性小鼠，由上海西普尔－必凯实验动物公司提供。
2.2分组与给药剂量：将小鼠随机分组，每组10只，设置为6个实验组（实施例1、4和5、对比例6-8）和一个阴性对照组，按照成人一天服用量20倍的剂量，将具有增强抗氧化功能的原料组合物加蒸馏水调配好，每日以10mL/kg的量给予实验组动物灌胃，对照组给生理盐水10mL/kg，连续灌胃30天，进行以下测试实验。
2.3实验方法
2.3.1免疫器官重量及脏器指数
小鼠灌胃30天后颈椎脱臼处死，取小鼠胸腺和脾脏吸干血迹后进行称重，计算脏器重量和小鼠体重之间的比值即为脏器指数。
结果：
表2. 脏器指数
注：与阴性对照组相比，＜0.05
如表2所示，与阴性对照组相比，各实验例小鼠的胸腺指数、脾脏指数提高，且差异具有显著性，可知本发明提供的组合物具有增强免疫功能的作用。
2.3.2小鼠迟发型变态反应测定
小鼠灌胃30天后，于第1、第5天向每只小鼠的后肢皮内注射0.02mL、7%的DNFB丙酮溶液进行致敏，第1次致敏的第8天在小鼠右耳涂抹0.02mL、1%的DNFB丙酮溶液进行攻击，左耳涂生理盐水作为对照，攻击24h后颈椎脱臼处死，分别在左右耳的同一部位打下圆耳片，称重并计算左右耳重量的差值。
结果：
表3. 左右耳重量差值
注：与阴性对照组相比，＜0.05
如表3所示，与阴性对照组相比较，各实施例、对比例的小鼠右耳经1%DNFB丙酮溶液攻击后明显肿胀，重量高于左耳；实施例组左右耳重量的差值明显高于对比例组和阴性对照组，且差异有统计学意义，表明本发明提供的组合物具有促进小鼠的迟发型变态反应的作用，且酵母抽提物制备过程中，复合酶的选择会影响酵母抽提物的性能，从而影响组合物的性能，以三种酶进行酶解时，所得组合物促进小鼠的迟发型变态反应的作用越强，即增强免疫功能作用越强。
2.3.3小鼠碳廓清实验
小鼠连续灌胃30天后，按每10g体质量在尾静脉注入0.1mL、25%墨汁，分别在2min、10min后从小鼠内毗静脉丛取血20μL，加入到2mL、0.1%的Na2CO3溶液中，并以Na2CO3溶液作空白对照，600nm下测定吸光度；小鼠颈椎脱臼处死，取肝脏和脾脏，吸干表面血污，进行称重，算出碳廓清吞噬指数。
结果：
表4. 吞噬指数
注：与阴性对照组相比，＜0.05
如表4所示，与阴性对照组相比，各实施例组小鼠以较高剂量灌胃时可以明显提高小鼠的碳廓清能力，即本发明提供的组合物具有优异的增强免疫功能的作用。
2.3.4小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
小鼠连续灌胃30天后，向腹腔注射lmL、20%的鸡红细胞悬液，30min后颈椎脱臼处死动物，腹腔注射2mL生理盐水，吸取腹腔液制作涂片，37℃下温育30min，漂洗、晾干，染色、显微镜下计数，计算吞噬指数和吞噬百分率。
结果：
表5. 吞噬指数和吞噬百分率
注：与阴性对照组相比，＜0.05
如表5所示，与阴性对照组相比，各实施例、对比例以较高剂量灌胃时可以明显提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，即本发明提供的组合物具有优异的增强免疫功能的作用。
2.3.5NK细胞活性测定(LDH测定法)
小鼠连续灌胃30天后，颈椎脱臼处死，无菌取脾制成脾细胞悬液2×107个/mL，取传代后24h生长良好的YAC-1细胞（靶细胞），靶细胞4×105个/mL和效应细胞各100μL加入培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；各项设置3个平行孔，在培养箱(培养条件：5％CO2、37℃)中培养4h；培养板离心，吸取上清液100μL置于培养板中，加入100μLLDH基质液，每孔加入30μL、lmol/L的HCl，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)值，计算NK细胞活性。
结果：
表6. NK细胞活性
注：与阴性对照组相比，＜0.05
如表6所示，与阴性对照组相比，各实施例、对比例组小鼠以较高剂量灌胃时可以明显提高小鼠NK细胞活性，且实施例组的NK细胞活性高于对比例组，可知，本发明提供的组合物具有优异的增强免疫功能的作用。
综上所述，本发明提供的组合物具有优异的增强免疫功能的作用，且利用三种酶进行酶解制备酵母抽提物，有助于提升组合物的增强免疫力功能。
实验例3
稳定性实验
将实施例1-3、对比例1、2和6-8所得具有增强抗氧化功能的原料组合物配成质量浓度为0.4%的样品溶液，4.5mL、0.05mol/L、pH=8.2的Tris-HCl缓冲液中加入1mL样品溶液和0.4mL、25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，20℃下反应5min，加入的HCl终止反应；以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测吸光度值；空白对照用1mL蒸馏水来替代样品溶液；按照下式计算自由基清除率；
自由基清除率（%）=[1-（样品吸光度值/空白对照组吸光度值）]×100%；
并用相同方法测试放置12月后的组合物的自由基清除率，利用前后自由基清除率的变化来此评价稳定性。结果如表7所示。
表7. 自由基清除率
如表7所示，已知实施例、对比例所得组合物的初始自由基清除率均高于90%，放置12月后，自由基清除率均有不同程度的下降。还可知，实施例1所得组合物在放置12月后自由基清除率仍高于94%，仍保持较高的自由基清除率，即抗氧化稳定性好。而对比例1、2的初始自由基清除率与实施例1-3相当，但12月后自由基清除率下降至90%以下，明显低于实施例1-3，可知朝鲜蓟粉、橄榄果粉和沙棘粉以特定比例添加时，所得组合物能具有较好的抗氧化稳定性，在放置12月后仍能保持较高的抗氧化性能。还可以看出，对比例6-8放置12月后自由基清除率差距较小，但均明显低于实施例1，由此可见，制备中酵母抽提物过程中，以三种酶进行酶解，可使组合物获得更优异的稳定性。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例作出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，该组合物由朝鲜蓟粉、刺梨粉、血橙粉、石榴果汁粉、沙棘粉、枸杞粉、酵母抽提物、橄榄果粉、海参肽组成。
2.根据权利要求1所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由1-5份朝鲜蓟粉、5-10份刺梨粉、15-25份血橙粉、1-5份石榴果汁粉、5-8份沙棘粉、2-5份枸杞粉、2-8份酵母抽提物、1-5份橄榄果粉和1-2份海参肽组成。
3.根据权利要求2所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由2-4份朝鲜蓟粉、6-10份刺梨粉、20-25份血橙粉、2-5份石榴果汁粉、5-7份沙棘粉、3-5份枸杞粉、2-6份酵母抽提物、3-5份橄榄果粉和1-2份海参肽组成。
4.根据权利要求3所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述具有增强抗氧化功能的原料组合物，按重量份计由3份朝鲜蓟粉、8份刺梨粉、22份血橙粉、3份石榴果汁粉、6份沙棘粉、3份枸杞粉、5份酵母抽提物、3份橄榄果粉和2份海参肽组成。
5.根据权利要求1所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述朝鲜蓟粉、沙棘粉和橄榄果粉的质量比为1:1-4:0.5-2。
6.根据权利要求5所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述朝鲜蓟粉、沙棘粉和橄榄果粉的质量比为1:2:1。
7.根据权利要求1所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，酵母抽提物按照以下步骤制备：
（1）干酵母加水活化，得酵母溶液；
（2）步骤（1）所得酵母溶液中加入盐使细胞壁破碎，得酵母混合溶液；
（3）步骤（2）所得酵母混合溶液中加入复合酶进行酶解，得到酵母酶解液；
（4）将步骤（3）所得酵母酶解液灭酶处理，离心分离取上清液；
（5）步骤（4）所得上清液经蒸发浓缩、喷雾干燥，得粉末状的酵母抽提物。
8.根据权利要求7所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，步骤（3）中，所述复合酶为碱性蛋白酶、葡聚糖酶和甘露聚糖酶的混合物；其中，碱性蛋白酶的添加量为干酵母质量的0.1-0.3%，葡聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.05-0.2%，甘露聚糖酶的添加量为干酵母质量的0.02-0.05%。
9.根据权利要求4所述的具有增强抗氧化功能的原料组合物，其特征在于，所述酵母抽提物中包含8-12%的谷胱甘肽。
10.权利要求1-9任一项所述具有增强抗氧化功能的原料组合物的制备方法，包括下述步骤：
将所述各原料混匀、粉碎、过筛，制成冲剂或片剂或胶囊，灭菌、包装后即为成品。
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