CN116514981A - 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 - Google Patents

一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116514981A
CN116514981A CN202310482883.3A CN202310482883A CN116514981A CN 116514981 A CN116514981 A CN 116514981A CN 202310482883 A CN202310482883 A CN 202310482883A CN 116514981 A CN116514981 A CN 116514981A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
cdr
amino acid
human
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202310482883.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116514981B (zh
Inventor
徐蕾
陈涛
孙秋萍
钱伟伦
鞠康琴
孔永�
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Quanxin Biomedical Co ltd
Original Assignee
Jiangsu Quanxin Biomedical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Quanxin Biomedical Co ltd filed Critical Jiangsu Quanxin Biomedical Co ltd
Priority to CN202310482883.3A priority Critical patent/CN116514981B/zh
Priority claimed from CN202310482883.3A external-priority patent/CN116514981B/zh
Publication of CN116514981A publication Critical patent/CN116514981A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116514981B publication Critical patent/CN116514981B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2806—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD2
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本申请公开了一种人IL‑23ELISA试剂盒及其检测方法。具体来说，本申请的ELISA试剂盒包括一对分别抗人IL‑23P19及抗人IL‑23p40亚基的单克隆抗体，并分别用作改良双抗体夹心ELISA方法中的包被抗体和检测抗体；本申请利用该试剂盒成功完成了人IL‑23的定量检测，具有较高的检测灵敏度，开发及应用前景良好。

Description

一种新的抗人IL-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测 方法
技术领域
本申请属于免疫分析技术领域，涉及一种定量检测人IL-23的ELISA试剂盒，利用该试剂盒进行定量检测的方法。
背景技术
白细胞介素(IL)是一组具有重要作用的细胞因子，由免疫细胞或非免疫细胞产生，随着分子生物学和细胞生物学技术的迅速发展，目前至少发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-1～IL-38，功能复杂，成网络，复杂重叠；在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。IL-23是2000年发现的一种白细胞介素，目前已发现其具有多种生物学功能，并在多种疾病中发挥作用。
IL-23主要由活化的树突状细胞、巨噬细胞及单核细胞等产生，是IL-12异源二聚体细胞因子家族中新的一员，主要由IL-23p19和IL-12/IL-23p40两个亚基组成，其中IL-12/IL-23p40是其与IL-12共同含有的亚基。IL-23p19与IL-12/IL-23p40两个亚基单独存在时，不具由生物学功能，只有二者相互连接形成同源二聚体，才能发挥生物学功能。
IL-23主要通过与其受体相互作用，激活下游信号通路发挥生物学功能。IL-23主要作用于Th17细胞，在Th17细胞的增殖与稳定中发挥重要作用，并能促进Th17细胞产生IL-23、IL-17F及IL-22等细胞因子，这些炎症因子作用于角质形成细胞，导致角质形成细胞活化和过度增殖。活化的角质形成细胞又通过产生大量细胞因子、趋化因子和抗菌肽等，募集并激活T细胞等免疫细胞，形成免疫应答的级联效应，引起银屑病损害的发生。IL-23在关节自身免疫炎症中，也是一个促进因子，如在风湿性关节炎中，IL-23促进IL-17的分泌，从而导致了关节的破坏。
目前市场上测定IL-23含量的试剂盒产品类型少，且价格昂贵。本申请中的ELISA试剂盒可定量检测细胞培养基中IL-23的含量，操作简单方便，灵敏度高，且具有良好的特异性，对IL-23相关的自身免疫性疾病的发病机制以及药物模型等的研究具有重要的意义。
发明内容
要解决的技术问题：基于上述现有技术中存在的问题，本申请提供了一种基于改良双抗体夹心ELISA方法研制的人IL-23ELISA试剂盒，并利用该试剂盒成功完成了人IL-23的定量检测，其技术方案如下：
1.一种抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含：
a)抗体重链互补决定区，其包含：CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，其中：
CDR-H1具有序列SEQ ID NO 1：TYNYMC的氨基酸序列，
CDR-H2具有序列SEQ ID NO 2：CIYTTKTNTWYASWAKG的氨基酸序列，
CDR-H3具有序列SEQ ID NO 3：GGWDNLSL的氨基酸序列；
b)抗体轻链互补决定区，其包含：CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，其中：
CDR-L1具有序列SEQ ID NO 4：QSSQSVYSNNYLA的氨基酸序列，CDR-L2具有序列SEQID NO 5：AASTLAS的氨基酸序列，
CDR-L3具有序列SEQ ID NO 6：LGGYDDDAV的氨基酸序列。
2.根据项1所述的抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含抗体重链可变区HCVR和抗体轻链可变区LCVR，其中：
HCVR具有序列SEQ ID NO 7：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWI
ACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARG GWDNLSLWGPGTLVTVSS的氨基酸序列；
LCVR具有序列SEQ ID NO 8：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIY
AASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFG GGTEVVVK的氨基酸序列。
3.根据项1所述的抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链和轻链，其中：
所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO 9：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGWDNLSLWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK的氨基酸序列；
所述轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO 10：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLISPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC的氨基酸序列。
4.一种检测人IL-23的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，
所述第一抗体为项1-3中任一项所述的抗人IL-23P19单克隆抗体；
所述第二抗体为QX001S的CDR-H1具有序列SEQ ID NO 11：TYWLG的氨基酸序列，CDR-H2具有序列SEQ ID NO 12：IMSPVDSDIRYSPSFQG的氨基酸序列，CDR-H3具有序列SEQ IDNO 13：RRPGQGYFDF的氨基酸序列；CDR-L1具有序列SEQ ID NO 14：RASQGISSWLA的氨基酸序列，CDR-L2具有序列SEQ ID NO 15：AASSLQS的氨基酸序列，CDR-L3具有序列SEQ ID NO 16：QQYNIYPYT的氨基酸序列。
5.根据项4所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体用作包被抗体，所述第二抗体用作检测抗体。
6.根据项5所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为酶标板。
7.根据项5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：过氧化物酶标记的链霉亲和素、重组的人IL-23的蛋白标准品、底物、包被抗体稀释液、洗液、封闭液/样品稀释液和终止液。
8.根据项4-7中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
9.根据项4-8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是改良的双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
10.一种定量检测IL-23含量的方法，其特征在于，使用项1-3中任一项所述的抗人IL-23P19单克隆抗体为第一抗体，使用项4所述的第二抗体，利用改良的双抗夹心法进行ELISA检测。
11.根据项10所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
采用第一抗体包被固相载体；
在固相载体中加入蛋白标准液和待测样品，孵育；
弃掉固相载体中的蛋白标准液和待测样品，加入检测抗体，孵育；
弃掉固相载体中的检测抗体，在固相载体中加入稀释后的过氧化物酶标记的链霉亲和素，孵育；
在固相载体中加入底物，避光孵育后加入终止液，测定OD值；
利用重组人IL-23蛋白标准品的OD值拟合出标准曲线，并将被测样品的OD值代入方程计算出被测样品中人IL-23的含量。
12.根据项11所述的方法，其特征在于，所述检测抗体的浓度为0.1μg/ml，然后按照100μl/孔的用量加入固相载体中。
13.根据项11所述的方法，其特征在于，所述酶标二抗的浓度为200ng/ml，然后按照100μl/孔的用量加入固相载体中。有益效果：与现有技术相比，本申请的人IL-23ELISA试剂盒具有较高的检测灵敏度，开发及应用前景良好。
附图说明
附图用于更好地理解本申请，不构成对本申请的不当限定。其中：
图1为第一抗体识别抗原不同亚基结果图。
图2为第二抗体识别抗原不同亚基结果图。
图3为第一抗体与人IL-23结合位点的竞争作用。
图4为第二抗体与人IL-23结合位点的竞争作用。
图5为人IL-23检测标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本申请，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本申请，并非用于限制本申请。
需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本说明书中提及的科技术语具有与本领域技术人员通常理解的含义相同的含义，如有冲突以本说明书中的定义为准。
一般而言，本说明书中采用的术语具有如下含义。
在本说明书中，“单克隆抗体”表示得自基本上同源的抗体的群体的抗体，即，构成所述群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制品的生产过程中产生)以外，这样的变体通常以微量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制品不同，单克隆抗体制品的每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因而，修饰语“单克隆”指示所述抗体得自基本上同源的抗体群体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法生产所述抗体。例如，要根据本申请使用的单克隆抗体可以通过多种技术来制备，所述技术包括、但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和使用包含人免疫球蛋白基因座的全部或部分的转基因动物的方法，本文描述了这样的方法和其它示例性的制备单克隆抗体的方法。
在本说明书中，“亲和力”表示分子(例如，抗体)的单个结合位点和它的结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指出，否则本说明书中使用的“结合亲和力”表示反映结合对(例如，抗体和抗原)的成员之间的1∶1相互作用的固有结合亲和力。分子X对它的配偶体Y的亲和力通常可以由平衡解离常数(KD)表示。通过本领域已知的常见方法，可以测量亲和力。
在本说明书中，人白细胞介素23(Human Interleukin 23，hIL-23)表示一种源自人的蛋白。IL-23通过结合其受体，激活下游信号通路发挥生物学功能，IL-23主要作用于Th17细胞，在Th17细胞的增殖与稳定中发挥重要作用，并能促进Th17细胞产生IL-23、IL-17F及IL-22等细胞因子，这些炎症因子作用于角质形成细胞，导致角质形成细胞活化和过度增殖。活化的角质形成细胞又通过产生大量细胞因子、趋化因子和抗菌肽等，募集并激活T细胞等免疫细胞，形成免疫应答的级联效应，引起银屑病损害的发生。IL-23在关节自身免疫炎症中，也是一个促进因子，如在风湿性关节炎中，IL-23促进IL-17的分泌，从而导致了关节的破坏。
在本说明书中，“抗人IL-23单克隆抗体”表示这样的单克隆抗体：其能够以足够的亲和力结合人白介素23，使得所述单克隆抗体可用于鉴定/检测人白介素33.
在本说明书中，“酶联免疫吸附测定(EILSA)”是指利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点，将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白结合，并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。其原理是：抗原或抗体能物理性地吸附于固相表面，并且保持其免疫活性；抗原或抗体能与酶通过共价键形成酶结合物，同时保持各自的免疫活性或酶活性；酶结合物与相应的抗原或抗体结合后，能通过加入底物的颜色反应来确定免疫反应的发生，颜色反应的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。根据待检测物质以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法，双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。其是将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次；加待测抗原，如两者是特异的，则发生结合，然后把多余抗体洗除；加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体，使形成"夹心"；加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在存在相应的抗原。
在本说明书中，“亲和素(avidin)”是一种糖蛋白，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。使用更多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素(streptavidin)。
在本说明书中，“生物素(biotin)”又称维生素H。用化学方法制成的衍生物，生物素-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide，BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA结合起来，就可大大提高ELISA的灵敏度。
生物素-亲合素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素-酶偶联物，以放大反应信号。
本申请涉及一种抗人IL-23单克隆抗体，具体为一种抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含：a)抗体重链互补决定区，其包含：CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，其中：CDR-H1具有序列SEQ ID NO 1：TYNYMC的氨基酸序列，CDR-H2具有序列SEQ ID NO 2：CIYTTKTNTWYASWAKG的氨基酸序列，CDR-H3具有序列SEQ ID NO 3：GGWDNLSL的氨基酸序列；b)抗体轻链互补决定区，其包含：CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，其中：CDR-L1具有序列SEQ ID NO4：QSSQSVYSNNYLA的氨基酸序列，CDR-L2具有序列SEQ ID NO 5：AASTLAS的氨基酸序列，CDR-L3具有序列SEQ ID NO 6：LGGYDDDAV的氨基酸序列。
本申请的一个具体实施方式中，上述抗体包含抗体重链可变区HCVR和抗体轻链可变区LCVR，其中：HCVR具有序列SEQ ID NO 7：QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWI ACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGWDNLSLWGPGTLVTVSS的氨基酸序列；LCVR具有序列SEQ ID NO 8：AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIY AASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFG GGTEVVVK的氨基酸序列。
本申请的一个具体实施方式中，上述抗体包含重链和轻链，其中：
所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO 9：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCA RGGWDNLSLWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK的氨基酸序列；
所述轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO 10：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLISPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC的氨基酸序列。
本申请涉及一种检测人IL-23的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为上述所述的抗人IL-23P19单克隆抗体；所述第二抗体为QX001S的CDR-H1具有序列SEQ ID NO 11：TYWLG的氨基酸序列，CDR-H2具有序列SEQ ID NO 12：IMSPVDSDIRYSPSFQG的氨基酸序列，CDR-H3具有序列SEQ ID NO 13：RRPGQGYFDF的氨基酸序列；CDR-L1具有序列SEQ ID NO 14：RASQGISSWLA的氨基酸序列，CDR-L2具有序列SEQ ID NO15：AASSLQS的氨基酸序列，CDR-L3具有序列SEQ ID NO 16：QQYNIYPYT的氨基酸序列。
本申请的一个具体实施方式中，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第二抗体为QX001S；其包含重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO 17所示；且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO 18所示。
SEQ ID NO 17：
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIGIMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCARRRPGQGYFDFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 18：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNIYPYTFGQ GTKLEIK
上述所述的抗人IL-23单克隆抗体，其包含重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO7所示；且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO 8所示。
SEQ ID NO 7：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGWDNLSLWGPGTLVTVSS
SEQ ID NO 8：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFGGGTEVVVK
本申请的一个具体实施方式中，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第二抗体为QX001S；其包含重链的氨基酸序列如SEQ ID NO 19所示；轻链的氨基酸序列如SEQID NO 20所示。
SEQ ID NO 19：
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIGIMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCARRRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSSSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO 20：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNIYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQ GLSSPVTKSFNRGEC
所述第一抗体为上述所述的抗人IL-23单克隆抗体，其包含重链的氨基酸序列如SEQ ID NO 9所示；轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO 10所示。
SEQ ID NO 9：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGWDNLSLWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK的氨基酸序列；SEQ ID NO 10：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLISPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC的氨基酸序列。
本申请的一个具体实施方式中，所述第一抗体用作包被抗体，所述第二抗体用作检测抗体。
所述第二抗体QX001S的单克隆抗体制备可见专利CN111718414A。
本申请的一个具体实施方式中，所述试剂盒还包括：过氧化物酶标记的链霉亲和素、重组的人IL-23的蛋白标准品、底物、包被抗体稀释液、洗液、封闭液/样品稀释液和终止液。
本申请的一个具体实施方式中，所述固相载体为96孔酶标板，具体采用美国Corning Coster的聚苯乙烯塑料板。所述生物素为Biotin。所述过氧化物酶为辣根过氧化物酶(HRP)，其标记的链霉亲和素为链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物(SA-HRP)。底物为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)；包被抗体稀释液为磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4；洗液为磷酸盐缓冲液(PBS)含0.05％Tween20；封闭液/样品稀释液为磷酸盐缓冲液(PBS)含0.5％ BSA、0.05％Tween20和0.05％ Proclin300；终止液为硫酸。
本申请的一个具体实施方式中，所述ELISA试剂盒包括：
1)固相载体：酶标板，1块；
2)包被抗体：抗人IL-23第一抗体，10μg/管，1管；
3)检测抗体：抗人IL-23第二抗体(生物素标记)，10μg/管，1管；
4)标准品：人IL-23蛋白，10ng/管，1管；
5)酶标二抗：链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物(Streptavidin-HRP，简称SA-HRP)，500ng/管，1管；
6)底物：3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)，5ml/管，A液、B液各1管；
7)包被抗体稀释液：磷酸盐缓冲液(PBS)，pH 7.4，50ml/瓶，1瓶；
8)洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)，含0.05％ Tween20，200ml/瓶，1瓶；
9)封闭液/样品稀释液：磷酸盐缓冲液(PBS)含0.5％ BSA、0.05％Tween20和0.05％ Proclin300，200ml/瓶，1瓶；
10)终止液：1M硫酸，10ml/管，1管。
本申请的一个具体实施方式中，所述试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。优选地，所述试剂盒是改良的双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
本申请还涉及一种定量检测IL-23含量的方法，其特征在于，使用抗人IL-23P19单克隆抗体为第一抗体，QX001S为第二抗体，利用改良的双抗夹心法进行ELISA检测，包括以下步骤：使用第一抗体包被固相载体；将被测样品加入已包被的固相载体中，孵育；将经生物素标记的第二抗体加入到固相载体中，孵育；将过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释，加入到固相载体中，孵育；将底物加入酶标板，避光孵育后加入终止液，测定OD值；利用重组人IL-23蛋白标准品的OD值拟合出标准曲线，并将被测样品的OD值代入方程计算出被测样品中人IL-23的含量。
在一个具体实施方式中，可采用本申请所述的ELISA试剂盒定量检测样品中的人IL-23的含量，包括以下步骤：
1)包被：采用包被抗体稀释液将包被抗体配制成浓度为5μg/ml的包被抗体工作液，然后按照100μl/孔的用量加到酶标板中，于2～8℃静置过夜；
2)封闭：弃掉酶标板中的包被抗体工作液，用洗液洗板3次，然后按照200μl/孔的用量加入封闭液，置于摇床(120rpm)室温封闭2小时；
3)蛋白标准品配制：取11个EP管并依次编号，从第2管起每管加入250μl样品稀释液并置于EP管架上；用样品稀释液将标准品蛋白配制成浓度为2ng/ml的液体，吸取500μl加入到第1个EP管中，然后从第1个EP管中吸取250μl液体，加入到第2个EP管中进行1/2稀释，依此类推至第11个EP管(最后一管浓度为0)；
4)加样：弃掉酶标板中的封闭液，用洗液洗板3次，然后按照100μl/孔的用量加入蛋白标准液和待测样品，置于摇床(120rpm)室温反应2小时；
5)加检测抗体：弃掉酶标板中的蛋白标准液和待测样品，用洗液洗板3次，将检测抗体(生物素标记)配制成浓度为0.1μg/ml的检测抗体工作液，然后按照100μl/孔的用量加入酶标板中，置于摇床(120rpm)室温反应2小时；
6)加酶标二抗：弃掉酶标板中的检测抗体工作液，用洗液洗板3次，将酶标二抗配制成浓度为200ng/ml的工作液，然后按照100μl/孔的用量加入酶标板中，置于摇床(120rpm)室温反应1小时；
7)显色：将底物的A液和B液等体积混合；弃掉酶标板中的酶标二抗工作液，用洗液洗板3次，然后按照100μl/孔的用量加入底物，室温避光反应5～10分钟；
8)终止显色：将终止液按50μl/孔的用量加入酶标板中终止反应，然后应用酶标仪在450nm波长下测定酶标板中各孔的OD值，根据标准品的OD值拟合出标准曲线，并将待测样品的OD值代入方程，计算出待测样品中人IL-23的浓度，即可完成定量检测。
实施例1抗人IL-23P19单克隆抗体(第一抗体)和QX001S(第二抗体)特性鉴定
1、抗体识别抗原特异性实验：
Neutravidin以2μg/ml包被酶标板，4℃冰箱过夜，次日室温封闭2h。洗板后BioIL-23与Bio IL-12以1μg/ml加入酶标板，室温孵育。
2h。洗板后加入梯度稀释的第一抗体及第二抗体，室温孵育2h。洗板后加入稀释好的酶标二抗，于室温孵育1小时。最后洗板后进行显色，并读取OD450处的吸光度。结果如图1、图2所示，第一抗体与人IL-23结合，不与人IL-12结合，第二抗体与人IL-12及人IL-23均能结合。
2、抗体识别抗原位点的竞争实验：
用第一抗体和第二抗体分别包被酶标板，4℃冰箱过夜，次日室温封闭2h。梯度稀释的Bio IL-23分别与10μg/ml、1μg/ml、0μg/ml的第一抗体及第二抗体等体积相加后于室温孵育1.5小时。洗板后加入孵育好的抗体与Bio IL-23复合物，室温孵育2h。洗板后加入稀释好的酶标二抗，于室温孵育1小时。最后洗板后进行显色，并读取OD450处的吸光度。结果如图3、图4所示，第一抗体和第二抗体结合IL-23不同位点，可将第一抗体作为人IL-23试剂盒的捕获抗体，将第二抗体作为人IL-23试剂盒的检测抗体。
3、检测第二抗体生物素标记：
检测抗体的生物素标记使用Sulfo-NHS-LC-Biotin试剂盒，具体步骤严格按照试剂盒说明书进行。标记完成后，使用ZtbaTM Spin Deasling Colums过滤除去游离的生物素，所得溶液即为生物素标记的检测抗体(第二抗体)。
实施例2人IL-23ELISA定量检测范围
该试剂盒的组成、规格、来源以及贮存条件等信息如下表1所示。
表1试剂盒相关组成及参数
1、样品处理：
样品稀释液稀释蛋白标准品，将质控样品作为待检样品，根据蛋白标准品的吸光值拟合出标准曲线。将质控样品的OD值代入标准曲线，得出质控样品中人IL-23的理论浓度值，
2、定量检测操作步骤：
(1)包被：采用包被抗体稀释液将包被抗体配制成浓度为5μg/ml的包被抗体工作液，然后按照100μl/孔的用量加入酶标板中，于4℃静置过夜；
(2)封闭：弃掉酶标板中的包被抗体工作液，用洗液洗板3次，然后按照200μl/孔的用量加入封闭液，置于摇床(120rpm)室温封闭2小时；
(3)蛋白标准品配制：取11个EP管并依次编号，从第2管起每管加入250μl样品稀释液并置于EP管架上；用样品稀释液将标准品蛋白配制成浓度为2ng/ml的液体，吸取500μl加入到第1个EP管中，然后从第1个EP管中吸取250μl液体，加入到第2个EP管中进行二倍稀释，依此类推至第10个EP管，第11管为零，其中2ng/ml、0.002ng/ml点作为锚定点；
(4)质控样品配制：取5个EP管，分别从2ng/ml取样，配制成1ng/ml、0.8ng/ml、0.2ng/ml、0.01ng/ml、0.004ng/ml的质控样品；
(5)加样：弃掉酶标板中的封闭液，用洗液洗板3次，然后按照100μl/孔的用量加入蛋白标准液和质控样品，置于摇床(120rpm)室温孵育2小时；
(6)加检测抗体：弃掉酶标板中的蛋白标准液和待测样品，用洗液洗板3次，用样品稀释液将检测抗体(生物素标记)配制成浓度为0.1μg/ml的检测抗体工作液，然后按照100μl/孔的用量加入到酶标板中，置于摇床(120rpm)孵育反应2小时；
(7)加酶标二抗：弃掉酶标板中的检测抗体工作液，用洗液洗板3次，用样品稀释液将酶标二抗配制成浓度为200ng/ml的酶标二抗工作液，然后按照100μl/孔的用量加入到酶标板中，置于摇床(120rpm)室温孵育1小时；
(8)显色：将底物的A液和B液等体积混合；弃掉酶标板中的酶标二抗工作液，用洗液洗板3次，然后按照100μl/孔的用量加入底物，室温避光反应5～10分钟；
(9)终止显色：将终止液按50μl/孔的用量加入到酶标板中终止反应，然后应用酶标仪在450nm波长下测定酶标板中各孔的OD值，根据标准品的OD值拟合出标准曲线，并将质控样品的OD值代入方程，计算出质控样品的浓度。
3、检测结果：
(1)人IL-23的检测数据如下表2所示：
表2人IL-23检测结果
人IL-23的检测曲线在0.008-1ng/ml浓度范围均能够回收。
(2)曲线方程：4-P Fit：y＝(0.043-3.261)/(1+(x/0.311)^0.988+1.036，R2＝0.999(见图5)。
(3)质控样品检测数据如下表所示：
表3样品检测数据
4、准确度、精密度考察：
(1)在2批不同的实验中，每个分析批包含1套验证样品，每套验证样品包含5个浓度(LLOQ＝0.004，LQC＝0.01，MQC＝0.2，HQC＝0.8和ULOQ＝1ng/mL)方法的精密度用变异系数CV％表示，等于SD/mean*100。准确度用相对误差表示RE％＝(平均观测浓度-名义浓度)/名义浓度*100。分析该试剂盒的准确性。
(2)结果与讨论：
结果显示，5个浓度水平的批内精密度≤15.165％。ULOQ、HQC、MQC和LQC的批内准确度范围在-9.685％～0％之间。LLOQ的批内准确度范围在0％～0％之间。因此，满足批内精密度和准确度≤20％(LLOQ和ULOQ≤25％)。
本申请提供了一种抗人IL-23ELISA试剂盒及其检测方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (13)

1.一种抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含：
a)抗体重链互补决定区，其包含：CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，其中：
CDR-H1具有序列SEQ ID NO 1：TYNYMC的氨基酸序列，
CDR-H2具有序列SEQ ID NO 2：CIYTTKTNTWYASWAKG的氨基酸序列，
CDR-H3具有序列SEQ ID NO 3：GGWDNLSL的氨基酸序列；
b)抗体轻链互补决定区，其包含：CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，其中：
CDR-L1具有序列SEQ ID NO 4：QSSQSVYSNNYLA的氨基酸序列，
CDR-L2具有序列SEQ ID NO 5：AASTLAS的氨基酸序列，
CDR-L3具有序列SEQ ID NO 6：LGGYDDDAV的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含抗体重链可变区HCVR和抗体轻链可变区LCVR，其中：
HCVR具有序列SEQ ID NO 7：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGL EWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCA RGGWDNLSLWGPGTLVTVSS的氨基酸序列；
LCVR具有序列SEQ ID NO 8：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPK VLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDA VFGGGTEVVVK的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗人IL-23P19单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链和轻链，其中：
所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO 9：
QEQLEESGGGLVKPGGTLTLTCKASGFDFTTYNYMCWVRQAPGKGLEWIACIYTTKTNTWYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGGWDNLSLWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK的氨基酸序列；
所述轻链氨基酸序列是SEQ ID NO 10：
AALTQTPASVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYSNNYLAWYQQKPGQPPKVLIYAASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLISPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC的氨基酸序列。
4.一种检测人IL-23的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，
所述第一抗体为权利要求1-3中任一项所述的抗人IL-23P19单克隆抗体；
所述第二抗体为QX001S的CDR-H1具有序列SEQ ID NO 11：TYWLG的氨基酸序列，CDR-H2具有序列SEQ ID NO 12：IMSPVDSDIRYSPSFQG的氨基酸序列，CDR-H3具有序列SEQ ID NO13：RRPGQGYFDF的氨基酸序列；CDR-L1具有序列SEQ ID NO 14：RASQGISSWLA的氨基酸序列，CDR-L2具有序列SEQ ID NO 15：AASSLQS的氨基酸序列，CDR-L3具有序列SEQ ID NO 16：QQYNIYPYT的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体用作包被抗体，所述第二抗体用作检测抗体。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为酶标板。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：过氧化物酶标记的链霉亲和素、重组的人IL-23的蛋白标准品、底物、包被抗体稀释液、洗液、封闭液/样品稀释液和终止液。
8.根据权利要求4-7中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是改良的双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
10.一种定量检测IL-23含量的方法，其特征在于，使用权利要求1-3中任一项所述的抗人IL-23P19单克隆抗体为第一抗体，使用权利要求4所述的第二抗体，利用改良的双抗夹心法进行ELISA检测。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
采用第一抗体包被固相载体；
在固相载体中加入蛋白标准液和待测样品，孵育；
弃掉固相载体中的蛋白标准液和待测样品，加入检测抗体，孵育；
弃掉固相载体中的检测抗体，在固相载体中加入稀释后的过氧化物酶标记的链霉亲和素，孵育；
在固相载体中加入底物，避光孵育后加入终止液，测定OD值；
利用重组人IL-23蛋白标准品的OD值拟合出标准曲线，并将被测样品的OD值代入方程计算出被测样品中人IL-23的含量。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述检测抗体的浓度为0.1μg/ml，然后按照100μl/孔的用量加入固相载体中。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述酶标二抗的浓度为200ng/ml，然后按照100μl/孔的用量加入固相载体中。
CN202310482883.3A 2023-04-27 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 Active CN116514981B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310482883.3A CN116514981B (zh) 2023-04-27 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310482883.3A CN116514981B (zh) 2023-04-27 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116514981A true CN116514981A (zh) 2023-08-01
CN116514981B CN116514981B (zh) 2024-06-25

Family

ID=

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718414A (zh) * 2020-06-12 2020-09-29 江苏荃信生物医药有限公司 抗人白介素23单克隆抗体及其应用
CN112852743A (zh) * 2021-01-25 2021-05-28 江苏荃信生物医药有限公司 用于生产乌司奴单抗的生物类似药的细胞株及生产方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718414A (zh) * 2020-06-12 2020-09-29 江苏荃信生物医药有限公司 抗人白介素23单克隆抗体及其应用
CN112807428A (zh) * 2020-06-12 2021-05-18 江苏荃信生物医药有限公司 包含抗人白介素23单克隆抗体的药物组合物
WO2021248718A1 (zh) * 2020-06-12 2021-12-16 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人白介素23单克隆抗体及其应用
CN112852743A (zh) * 2021-01-25 2021-05-28 江苏荃信生物医药有限公司 用于生产乌司奴单抗的生物类似药的细胞株及生产方法
WO2022156060A1 (zh) * 2021-01-25 2022-07-28 江苏荃信生物医药股份有限公司 用于生产乌司奴单抗的生物类似药的细胞株及生产方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4964957B2 (ja) 抗薬物抗体アッセイ
CN111417856A (zh) 抑制靶干扰作用的抗药物抗体测定法
CN114276450B (zh) 抗人il-17a单克隆抗体及其用途
JP5337101B2 (ja) 抗原特異的に結合した特定の免疫グロブリンクラスの抗体を検出する際に、アレイ試験方式においてブランク値を低減するための免疫複合体特異的抗体
JP3234947B2 (ja) 生物流体中のリガンドの量を測定する方法及びその様な方法を実施する為のキット
CN113156134B (zh) 用于检测人白介素23的elisa试剂盒及检测方法
CN116514981B (zh) 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法
CN116514981A (zh) 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法
CN112300285B (zh) 一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法
CN115947844B (zh) 一种新的抗人il-33单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法
CN117417452B (zh) 一种抗抗人干扰素α受体1（IFNAR1)单克隆抗体的单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法
JPH05223817A (ja) 免疫学的に結合可能な物質の定量方法
CN117143234B (zh) 抗大鼠白细胞介素-4蛋白的单克隆抗体及其用途
WO2002044727A1 (fr) Procede de mesure de l'activite de liaison d'une proteine se liant a un ligand presentant une faible stabilite chimique a un premier ligand
CN116675771A (zh) 一种抗人tslp单克隆抗体、包含其的试剂盒以及检查方法
CN113811770B (zh) 抑制干扰的药代动力学免疫测定
CN115960236A (zh) 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法
CN115819575A (zh) 针对人肿瘤坏死因子-α的单克隆抗体
JP2002253230A (ja) モノクローナル抗体、ハイブリドーマおよびその用途
CN113811770A (zh) 抑制干扰的药代动力学免疫测定
TW201943730A (zh) 應用於微量免疫反應檢測之單域結合蛋白及其應用方法
JPH06205690A (ja) ヒト単球走化活性化因子の高感度免疫学的測定法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant