CN116492509A - 一种用于医美整形的填充物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了医美技术领域的一种用于医美整形的填充物及其制备方法，包括如下重量份的组分：载药微球10‑30份，凝胶载体60‑100份；所述凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶30‑50份、自体富血小板血浆6‑12份；所述载药微球为负载碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微球。本发明为了解决维持时间短、易引发组织反应、远期并发症风险高的问题，本发明提出通过将脂肪胶、自体富血小板血浆配制成凝胶载体，实现了良好的生物相容性，添加负载碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微球，实现了更好的填充效果。
Description
技术领域
本发明属于医美技术领域，具体是指一种用于医美整形的填充物及其制备方法。
背景技术
美容填充是近年来常见的一种医美方式，通过填充使凹陷、畸形部位恢复饱满、光泽，达到美容效果，目前所用的填充物可分三类：一类材料：人体本身所含物质或相似物质，体内吸收时间短，维持效果不佳，二类材料：人体可吸收高分子材料，易引起组织反应，三类材料：不可吸收材料，产生远期并发症的风险高；脂肪胶，由人体自身的皮下脂肪细胞，经过吸出、净化、离心得到，无毒无害，不会产生免疫反应和排异反应；聚乳酸-羟基乙酸共聚物，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，自体富血小板血浆，含有多种生长因子能够促进细胞增殖和组织血管再生，碱性成纤维细胞生长因子配合血管内皮生长因子，能够通过诱导新生血管的形成，提高局部移植脂肪组织的血流供应；
目前现有的填充技术主要存在以下问题：1.人体本身所含物质或相似物质，维持时间短，需要定期进行美容填充；2.人体可吸收高分子材料，易引发组织反应，长期维持效果不佳；3.不可吸收材料，产生远期并发症风险高，可能产生位移、肉芽。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种用于医美整形的填充物及其制备方法，为了解决维持时间短、易引发组织反应、远期并发症风险高的问题，本发明提出通过将脂肪胶（SVF-gel）、自体富血小板血浆（RPR）配制成凝胶载体作为填充主体的方式，实现了良好的生物相容性，同时通过添加负载碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球（PLGA），实现了局部组织生长因子浓度长期保持较高水平，提高了脂肪组织的血流供应和脂肪细胞的存活率，进而实现更好的填充效果和更久的维持时间。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：本发明提出了一种用于医美整形的填充物，所述填充物包括如下重量份的组分：载药微球10-30份，凝胶载体60-100份。
优选地，所述凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶30-50份、自体富血小板血浆6-12份。
优选地，所述载药微球为负载碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球。
优选地，所述载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子溶解于去离子水中，作为内水相（W1），聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶入二氯甲烷中，作为油相（O），将内水相缓慢加入油相中，进行均质处理，乳化均质机转速为13000-15000rpm，乳化时间为2-5min得到初乳；
S2、取5-8%（w/v）的聚乙烯醇（PVA）溶液，作为外水相（W2），将S1中制备的初乳迅速外水相（W2）中，进行乳化处理，高速分散机转速为3000-3600rpm，搅拌时间为3-5min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到0.6-1.5%（w/v）的聚乙烯醇溶液中，进行磁力搅拌，搅拌速度为500-800rpm，搅拌时间为4-6h，固化，3000-3600rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤3-5次，冻干得到载药微球。
优选的，在S1中，所述碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的质量比为1:1-1.5；
优选的，在S1中，生长因子总浓度为1.5-2g/L，聚乳酸-羟基乙酸浓度为60-80g/L；
优选的，在S1中，内水相和油相的体积比为1:18-25。
优选地，在S2中，所述初乳与外水相体积比为1:4-6。
优选地，在S3中，所述W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:1-2。
优选地，所述脂肪胶的制备方法具体步骤包括：进行局部麻醉，抽取脂肪，静置分层，过滤得到纯脂肪颗粒，初次离心取油滴层及中间部分脂肪层，负压状态震荡，二次离心，取中间层胶状物为脂肪胶；
优选地，所述凝胶载体的制备方法具体步骤包括：用血细胞分离机血小板采集程序，采集自体富血小板血浆，将脂肪胶、自体富血小板血浆均匀混合得到凝胶载体。
本发明还提供一种用于医美整形的填充物的制备方法，具体步骤包括：按重量份称取凝胶载体、载药微球，搅拌，混合均匀，得到用于医美整形的填充物。
本发明取得的有益效果如下：通过在脂肪胶中添加自体富血小板血浆和带有双组分生长因子的载药微球，使新生组织长期处于高水平生长因子环境，促进脂肪组织血管形成，提升脂肪组织供氧量，提高脂肪细胞的成活率，促进脂肪组织的生长，增强了填充效果；自体富血小板血浆具有多种有利于脂肪细胞生长的活性因子，如血管内皮生长因子，血小板源生生长因子，能够促进血管形成，提高组织供氧能力，进而提高脂肪细胞的成活率；载药微球壳体选取聚乳酸-羟基乙酸共聚物，具有缓释效果，使填充物能长期保持局部组织血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的浓度，有利于脂肪细胞生长发育，起到持久的填充效果；添加血管内皮生长因子，能够诱导内皮细胞定向迁移和增殖，形成血管的原始管腔，添加碱性成纤维细胞生长因子，能招募周围平滑肌细胞及周细胞，包装原始管腔形成血管，两者协同作用促进血管形成，提高脂肪细胞存活率。
附图说明
图1为本发明实施例3、对比例1-3所的填充物和等质量脂肪胶在裸鼠体内培养8周后生成组织质量的结果图；
图2为本发明实施例3、对比例1-3所的填充物和等质量脂肪胶在裸鼠体内培养8周后，200倍光镜可视范围生成血管数的结果图；
图3为本发明实施例3所制备的载药微球透射电镜结果图；
图4为本发明实施例3脂肪胶制备过程中二次离心后注射器中脂肪胶分布结果图；
图5为本发明实施例3植入8周后新生组织在裸鼠体内生长情况观察结果图；
图6为本发明实施例3植入8周后新生组织HE染色观察结果图。
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用，但不能限制本申请的内容。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试验材料及试验菌株，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）购于北京伊诺凯科技有限公司，货号EHC130.48；
血管内皮生长因子（VEGF）购于北京伊诺凯科技有限公司，货号222-01783；
聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）购于北京伊诺凯科技有限公司，货号S33138-1g；
聚乙烯醇（PVA）购于北京伊诺凯科技有限公司，货号183141000。
实施例1
一种用于医美整形的填充物，填充物包括如下重量份的组分：载药微球10份，凝胶载体60份。
凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶30份、自体富血小板血浆6份。
载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子按1:1的比例溶解于去离子水中，生长因子溶液的浓度为1.5g/L，作为内水相（W1），聚乳酸—羟基乙酸共聚物以60g/L溶入二氯甲烷中，作为油相（O），将内水相缓慢加入油相中，添加比例为1:18，进行均质处理，乳化均质机转速为13000rpm，乳化时间为2min得到初乳；
S2、取5-8%（w/v）的聚乙烯醇（PVA）溶液，作为外水相（W2），将S1中制备的初乳迅速外水相（W2）中，所述初乳与外水相体积比为1:4，进行乳化处理，高速分散机转速为3000rpm，搅拌时间为3min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到0.6%（w/v）的聚乙烯醇溶液中，W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:1，进行磁力搅拌，搅拌速度为500rpm，搅拌时间为4h，固化，3000rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤3次，冻干得到载药微球。
脂肪胶的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、以2%利多卡因20mL＋0.1%肾上腺素0.25mL+0.9%生理盐水500mL配制肿胀液，进行局部麻醉，用3.5mm脂肪抽吸针管抽取脂肪，静置分层，过滤掉下层肿胀液及少量血液；
步骤2、转移至无菌注射器，3000r/min离心3min，取油滴层及中间部分脂肪层导入无菌注射器中；
步骤3、以转换器连接另一注射器，以恒定速率多次推挤至脂肪乳糜状，反向拉开使得注射器内部保持负压状态，震荡后进行二次离心，离心力1800g，取中间层胶状物作为脂肪胶；
载体凝胶的制备方法，包括以下步骤：
用血细胞分离机血小板采集程序采集患者自体富血小板血浆，将脂肪胶与自体富血小板血浆均匀混合得到载体凝胶。
本发明还提供一种用于医美整形的填充物的制备方法，具体步骤包括：按重量份称取凝胶载体、载药微球，600rpm搅拌10min，混合均匀，得到用于医美整形的填充物。
实施例2
一种用于医美整形的填充物，填充物包括如下重量份的组分：载药微球30份，凝胶载体100份。
凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶50份、自体富血小板血浆12份。
载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子按1:1.5的比例溶解于去离子水中，生长因子溶液的浓度为2g/L，作为内水相（W1），聚乳酸—羟基乙酸共聚物以80g/L溶入二氯甲烷中，作为油相（O），将内水相缓慢加入油相中，添加比例为1:25，进行均质处理，乳化均质机转速为15000rpm，乳化时间为5min得到初乳，得到初乳；
S2、取8%（w/v）的聚乙烯醇（PVA）溶液，作为外水相（W2），将S1中制备的初乳迅速外水相（W2）中，初乳与外水相体积比为1:6，进行乳化处理，高速分散机转速为3600rpm，搅拌时间为5min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到1.5%（w/v）的聚乙烯醇溶液中，W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:2，进行磁力搅拌，搅拌速度为800rpm，搅拌时间为6h，固化，3600rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤5次，冻干得到载药微球。
脂肪胶的制备方法与实施例1相同。
载体凝胶的制备方法与实施例1相同。
本发明提供一种用于医美整形的填充物的制备方法与实施例1相同。
实施例3
一种用于医美整形的填充物，所述填充物包括如下重量份的组分：载药微球15份，凝胶载体80份。
所述凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶40份、自体富血小板血浆10份。
所述载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子按1:1.2的比例溶解于去离子水中，生长因子溶液的浓度为1.6g/L，作为内水相（W1），聚乳酸—羟基乙酸共聚物以70g/L溶入二氯甲烷中，作为油相（O），将内水相缓慢加入油相中，添加比例为1:20，进行均质处理，乳化均质机转速为14000rpm，乳化时间为3min得到初乳，得到初乳；
S2、取7%（w/v）的聚乙烯醇（PVA）溶液，作为外水相（W2），将S1中制备的初乳迅速外水相（W2）中，初乳与外水相体积比为1:5，进行乳化处理，高速分散机转速为3200rpm，搅拌时间为4min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到的0.9%（w/v）的聚乙烯醇溶液中，W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:1.5，进行磁力搅拌，搅拌速度为600rpm，搅拌时间为5h，固化，3200rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤4次，冻干得到载药微球。
所述脂肪胶的制备方法与实施例1相同。
所述载体凝胶的制备方法与实施例1相同。
本发明提供一种用于医美整形的填充物的制备方法与实施例1相同。
实施例4
一种用于医美整形的填充物，填充物包括如下重量份的组分：载药微球20份，凝胶载体80份。
凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶45份、自体富血小板血浆10份。
载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子按1:1.3的比例溶解于去离子水中，生长因子溶液的浓度为1.7g/L，作为内水相（W1），聚乳酸—羟基乙酸共聚物以70g/L溶入二氯甲烷中，作为油相（O），将内水相缓慢加入油相中，添加比例为1:22，进行均质处理，乳化均质机转速为14000rpm，乳化时间为3min得到初乳，得到初乳；
S2、取8%（w/v）的聚乙烯醇（PVA）溶液，作为外水相（W2），将S1中制备的初乳迅速外水相（W2）中，初乳与外水相体积比为1:5，进行乳化处理，高速分散机转速为3300rpm，搅拌时间为3min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到0.8%（w/v）的聚乙烯醇溶液中，W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:1.5，进行磁力搅拌，搅拌速度为600rpm，搅拌时间为6h，固化，3400rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤3次，冻干得到载药微球。
脂肪胶的制备方法与实施例1相同。
载体凝胶的制备方法与实施例1相同。
本发明提供一种用于医美整形的填充物的制备方法与实施例1相同。
对比例1
本对比例提供一种填充物，其与实施例3的区别仅在于组分中不包含自体富血小板血浆，其余组分、组分含量与实施例3相同。
对比例2
本对比例提供一种填充物，其与实施例3的区别仅在于组分中不包含生长因子，其余组分、组分含量与实施例3相同。
对比例3
本对比例提供一种填充物，其与实施例3的区别仅在于组分中不包含聚乳酸-羟基乙酸共聚物，其余组分、组分含量与实施例3相同。
对比例4
本对比例提供一种填充物，其与实施例3中载药微球的区别仅在于组分中不包含碱性成纤维细胞生长因子，其余组分、组分含量与实施例3相同。
对比例5
本对比例提供一种填充物，其与实施例3中载药微球的区别仅在于组分中不包含血管内皮生长因子，其余组分、组分含量与实施例3相同。
实验例
实施例1-4中成分相似，填充效果相差不大，因此取实施例3作为代表进行对照试验；取实施例3、对比例1-5中所得填充物为实验组，取相同质量脂肪胶为对照组，每组取10只裸鼠，麻醉后，在裸鼠背部脊椎两侧选取对称位置，分别植入0.5mL实验组和对照组填充物；8周后取出新生组织观察并测重并记录质量m；
将取出的新生组织以2.5%戊二醛固定，进行苏木精-伊红染色（HE染色），在200倍光镜下随机取5点观察，记录视野内血管数，取平均值作为生成血管数。
结果分析
图1为本发明实施例3、对比例1-3所的填充物和等质量脂肪胶在裸鼠体内培养8周后生成组织质量的结果图；图2为本发明实施例3、对比例1-3所的填充物和等质量脂肪胶在裸鼠体内培养8周后，200倍光镜可视范围生成血管数的结果图；
实施例3新生组织质量为0.216g，对比例1-5新生组织质量分别为0.183g、0.137g、0.149g、0.163g、0.161g，对照组新生组织质量为0.093g；实施例3血管数为49.23，对比例1-5血管数分别为43.51、32.49、34.68、37.49、36.53，对照组血管数为28.49；
实施例3所得组织质量和血管数明显高于对比例1，说明本发明在脂肪胶中添加自体富血小板血浆对脂肪组织生长发育具有促进效果，PRP能够释放的高浓度生长因子，为细胞和组织的生长提供了良好的微环境，刺激血管再生增加局部微循环，提供了丰富的氧及干细胞来源，提高脂肪细胞存活率，对脂肪组织生长有促进作用；
实施例3所得组织质量和血管数明显高于对比例2，且明显高于对比例4、5，说明本发明在脂肪胶中添加VEGF和bFGF对脂肪组织生长发育有促进作用，且共同添加更为有效，VEGF使内皮细胞增殖并迁入缺氧部位，形成血管的原始管腔，bFGF一方面促进内皮细胞的迁移，招募平滑肌细胞和周细胞包裹原始管腔形成血管，提高氧气和营养物供应，另一方面促进脂肪前脂肪细胞的增殖和分化，对脂肪组织生长有促进作用；
实施例3所得组织质量和血管数明显高于对比例3，说明本发明使用PLGA对VEGF和bFGF进行包覆具有的缓释作用对脂肪组织生长发育具有促进效果，VEGF和bFGF体内半衰期短，VEGF在正常氧环境中半衰期仅为30-45min，bFGF在体内的半衰期仅为3-10min，在局部组织应用时，扩散快，浓度水平下降快，不能满足应用需要，通过PLGA微球缓释能使局部组织生长因子浓度长期维持在一定水平，有利于脂肪组织的生长发育。
图3为本发明实施例3所制备的载药微球透射电镜结果图，微球的分散性良好，没有发生聚集，呈良好的球形结构。
图4为本发明实施例3脂肪胶制备过程中二次离心后注射器中脂肪胶分布结果图，分层状况良好，上层为油滴层，下层为组织液，中间为低密度脂肪层成胶冻状为脂肪胶。
图5为本发明实施例3植入8周后新生组织在裸鼠体内生长情况观察结果图，对裸鼠进行解剖发现两侧均有新生组织产生，右侧填充物为实施例3所得填充物，左侧为脂肪胶，明显看出，右侧新生组织较大，8周的填充效果优于左侧。
图6为本发明实验例3植入8周后新生组织HE染色观察结果图，可以看到，8周后新生脂肪组织形成，微血管生长状况良好，绝大部分微球已降解吸收，有很好的生物相容性。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，附图中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的应用并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于医美整形的填充物，其特征在于：所述填充物包括如下重量份的组分：载药微球10-30份，凝胶载体60-100份；
所述凝胶载体包括如下重量份的组分：脂肪胶30-50份、自体富血小板血浆6-12份；
所述载药微球为负载碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球。
2.根据权利要求1所述的医美整形的填充物，其特征在于：所述载药微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子溶解于去离子水中，作为内水相W1，聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶入二氯甲烷中，作为油相O，将内水相缓慢加入油相中，进行均质处理，乳化均质机转速为13000-15000rpm，乳化时间为2-5min得到初乳；
S2、取5-8%w/v的聚乙烯醇PVA溶液，作为外水相W2，将S1中制备的初乳迅速外水相W2中，进行乳化处理，高速分散机转速为3000-3600rpm，搅拌时间为3-5min，得到W1/O/W2乳液；
S3、将S2所得W1/O/W2乳液，转移到0.6-1.5%w/v的聚乙烯醇溶液中，进行磁力搅拌，搅拌速度为500-800rpm，搅拌时间为4-6h，固化，3000-3600rpm离心8min收集蛋白微球，超纯水洗涤3-5次，冻干得到载药微球。
3.根据权利要求2所述的医美整形的填充物，其特征在于：在S1中，所述碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的质量比为1:1-1.5。
4.根据权利要求3所述的医美整形的填充物，其特征在于：在S1中，生长因子总浓度为1.5-2g/L，聚乳酸-羟基乙酸浓度为60-80g/L。
5.根据权利要求4所述的医美整形的填充物，其特征在于：在S1中，内水相和油相的体积比为1:18-25。
6.根据权利要求5所述的医美整形的填充物，其特征在于：在S2中，所述初乳与外水相体积比为1:4-6。
7.根据权利要求6所述的医美整形的填充物，其特征在于：在S3中所述W1/O/W2乳液与聚乙烯醇溶液体积比为1:1-2。
8.根据权利要求7所述的医美整形的填充物，其特征在于：所述脂肪胶的制备方法具体步骤包括：进行局部麻醉，抽取脂肪，静置分层，过滤得到纯脂肪颗粒，初次离心取油滴层及中间部分脂肪层，负压状态震荡，二次离心，取中间层胶状物为脂肪胶。
9.根据权利要求8所述的医美整形的填充物，其特征在于：所述凝胶载体的制备方法具体步骤包括：用血细胞分离机血小板采集程序，采集自体富血小板血浆，将脂肪胶、自体富血小板血浆均匀混合得到凝胶载体。
10.根据权利要求1-9任一项所述的医美整形的填充物的制备方法，其特征在于：具体步骤包括：按重量份称取凝胶载体、载药微球，搅拌，混合均匀，得到用于医美整形的填充物。
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| CN117643650A (zh) * | 2024-01-30 | 2024-03-05 | 哈尔滨悦之美芳华医疗美容门诊有限公司 | 一种皮下填充凝胶复合材料及其制备方法 |
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