CN116482382A - 一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物及其应用，涉及生物医学技术领域；所述生物标志物为C‑X‑C基序趋化因子配体10。本发明通过酶联免疫吸附实验方法检测肝外胆管癌患者胆汁中CXCL10的浓度来预测患者的预后，结果显示，胆汁中CXCL10的浓度越高，患者1年和3年总体生存率越低，说明肝外胆管癌预后差。因此，本发明研究发现胆汁中的CXCL10可以作为预测肝外胆管癌预后的生物标志物，为评估胆管癌预后提供了新的标志物，这对于准确预测患者的预后风险及丰富胆管癌治疗策略具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物及其应用。
背景技术
胆管癌(CCA)是一种发病率和死亡率较高的恶性肿瘤。依据其解剖部位的不同，胆管癌又被分为肝内胆管癌(iCCA)、肝门部胆管癌(pCCA)及远端胆管癌(dCCA)。其中，肝门部胆管癌及远端胆管癌统称为肝外胆管癌，肿瘤常造成胆道梗阻及胆汁淤积，因此黄疸是其特征性临床表现。世界范围内，胆管癌发病率呈逐年上升趋势，并存在明显的地区差异。
由于胆管癌的早期症状不明显，病情往往在确诊时已经进入晚期。因此，对胆管癌患者进行准确的预后评估至关重要。然而，目前的预后评估方法存在局限性，如侵入性、准确性不足等问题。因此，急需一种新的、准确度高、安全性好的预后预测方法，这对于准确预测患者的预后风险及丰富胆管癌治疗策略具有重要意义。
CXCL10(C-X-CMotifChemokineLigand10，C-X-C基序趋化因子配体10)是一种小型细胞因子，属于CXC趋化因子家族的成员。CXCL10在免疫反应中起重要作用，例如诱导T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)和其他免疫细胞的迁移。此外，CXCL10在一些疾病状态下，如炎症和肿瘤发展中，表达水平发生改变。这一特点使其具有成为恶性肿瘤预后分子标志物的潜能。然而，CXCL10在肝外胆管癌中的作用尚未阐明，其浓度与肝外胆管癌患者预后的关系也没有相关研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明研究发现胆汁中的C-X-C基序趋化因子配体10可以作为预测肝外胆管癌预后的生物标志物，为评估胆管癌预后提供了新的标志物，这对于准确预测患者的预后风险及丰富胆管癌治疗策略具有重要意义。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物，所述生物标志物为C-X-C基序趋化因子配体10。
进一步地，所述生物标志物在肝外胆管癌患者胆汁中的浓度升高，则预示所述肝外胆管癌患者预后差。
本发明还提供检测C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中浓度的试剂在制备预测肝外胆管癌预后的产品中的应用。
进一步地，所述产品包括试剂或试剂盒。
本发明还提供一种预测肝外胆管癌预后的产品，包括检测C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中浓度的试剂。
进一步地，所述产品包括试剂或试剂盒。
进一步地，所述产品通过酶联免疫吸附法检测所述C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中的浓度。
本发明公开了以下技术效果：
本发明通过酶联免疫吸附实验方法检测肝外胆管癌患者胆汁中CXCL10的浓度来预测患者的预后，结果显示，胆汁中CXCL10的浓度越高，患者1年和3年总体生存率越低，说明肝外胆管癌预后差。因此，本发明研究发现胆汁中的CXCL10可以作为预测肝外胆管癌预后的生物标志物，为评估胆管癌预后提供了新的标志物，这对于准确预测患者的预后风险及丰富胆管癌治疗策略具有重要意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中60例肝外胆管癌及胆石症患者的胆汁中CXCL10的浓度差异；
图2为实施例2中利用CXCL10浓度及生存状态绘制的肝外胆管癌患者的受试者工作特征曲线；
图3是实施例2中CXCL10浓度在肝外胆管癌患者样本判别的总生存期(OS)的生存曲线图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1用于预测肝外胆管癌预后的胆汁CXCL10浓度测定
1.人类肝外胆管癌胆汁的来源
收集山东大学齐鲁医院自2016年1月至2022年12月确诊为肝外胆管癌的患者的胆汁(60例)，这些患者全部接受胆管癌根治性切除术，且术后恢复顺利，无相关并发症。另收集胆石症患者的胆汁(20例)作为对照组。
入组标准：
(1)术前结合腹部增强CT、MRI或MRCP等影像学检查、实验室检查及体格检查等证实为肝外胆管癌或胆石症。
(2)患者一般情况良好，无心、肺、肾、脑等重要器官严重器质性病变而影响手术实施及术后恢复。
(3)手术成功，无严重术后并发症，术后恢复顺利，且未行与原发疾病相关的二次手术。
(4)明确的临床资料、术后随访资料以及术后生存时间，其术后生存时间大于3个月。
排除标准：
(1)既往有上腹部手术史。
(2)术中因大出血或心跳骤停等意外而行姑息性手术或终止手术者。
(3)术中因查见局部脏器浸润或腹腔广泛脏器转移而行姑息性手术者。
(4)术后因手术相关并发症或其他非手术意外而死亡者，或术后生存期小于3个月。
2.胆汁中CXCL10浓度测定
使用酶联免疫吸附实验(ELISA法)对胆管癌及胆石症患者胆汁中CXCL10的浓度进行测定。具体步骤如下：
(1)样品准备：将胆汁样品解冻并稀释10倍。
(2)酶标板预处理：使用CXCL10/IP-10测定试剂盒(Abcam,NO.ab214056)检测CXCL10的浓度。将CXCL10抗体稀释后加到酶标板孔中，然后在4℃下孵育过夜。
(3)酶标板洗涤：使用洗涤液清洗酶标板上多余的抗体，减少非特异性结合。
(4)样品和标准品添加：在酶标板的不同孔中加入适量的样品和标准品。标准品用于建立浓度曲线，以便定量测定CXCL10的浓度。之后，将酶标板在室温下孵育2小时。
(5)酶标板洗涤：与步骤(3)类似，用洗涤液清洗酶标板以去除未结合的样品和标准品。
(6)检测抗体添加：将检测抗体即生物素标记的二抗加入酶标板孔中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白上。再次在室温下孵育1小时。
(7)酶标板洗涤：用洗涤液清洗酶标板，去除未结合的检测抗体。
(8)酶联添加：将酶联物(通常是辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉素蛋白A加入酶标板孔中。酶联物会结合到生物素标记的检测抗体上。按照试剂盒说明进行操作，通常在室温下孵育30分钟至1小时。
(9)酶标板洗涤：再次用洗涤液清洗酶标板，以去除未结合的酶联物。
(10)显示底物加入：将显色底物即TMB加入每个酶标板孔中。底物与酶反应，产生颜色变化。在室温下孵育10-30分钟，直到颜色显著发展。
(11)停止反应：在达到适当的颜色发展后，加入停止液(硫酸或磷酸)以终止反应。颜色将从蓝色变为黄色。
(12)读取吸光度：使用酶标仪读取每个孔的吸光度值(450nm波长)。
(13)数据分析：使用标准品的吸光度值建立一个标准曲线。然后，根据这个曲线将样品的吸光度值转换为CXCL10的浓度。
结果如图1所示，肝外胆管癌和胆石症中CXCL10浓度差异显著，肝外胆管癌患者中的CXCL10浓度明显高于胆石症患者。
实施例2结合胆汁中CXCL10浓度预测肝外胆管癌预后
根据测得的CXCL10浓度及患者生存状态绘制受试者工作特征曲线(P＝0.010，AUC＝70.5)，结果见图2。根据受试者工作特征曲线计算其Cut-off值(610.2719)，即当CXCL10浓度≥610.2719pg/ml时定义为高CXCL10浓度组，当CXCL10浓度＜610.2719pg/ml时定义为低CXCL10浓度组。
在肝外胆管癌中，高CXCL10浓度组患者总体生存趋势低于低CXCL10浓度组患者，其1年及3年总体生存率(overallsurvival，OS)也有较为明显差异，结果见表1。
表1 1年及3年总体生存率
具体地，利用上述方法进行胆管癌预后的方法为：
S1：提取肝外胆管癌患者术后胆汁，进行样品实验前处理；
S2：利用ELISA法检测胆汁中CXCL10的浓度；
S3：结合CXCL10的浓度预测肝外胆管癌患者的预后情况。
综合上述实验结果发现，本发明能够直接有效的根据患者胆汁中CXCL10的浓度预测患者的预后情况，其浓度越高，提示患者预后更差。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (7)
1.一种预测肝外胆管癌预后的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为C-X-C基序趋化因子配体10。
2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物在肝外胆管癌患者胆汁中的浓度升高，则预示所述肝外胆管癌患者预后差。
3.检测C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中浓度的试剂在制备预测肝外胆管癌预后的产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒。
5.一种预测肝外胆管癌预后的产品，其特征在于，包括检测C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中浓度的试剂。
6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品包括试剂或试剂盒。
7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品通过酶联免疫吸附法检测所述C-X-C基序趋化因子配体10在胆汁中的浓度。
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