CN116479081A - 一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法，属于生物工程技术领域。所述微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法包括如下步骤：在水中加入蜂王浆，调节pH值至8.0～10.0，搅拌溶解，然后离心提取上清液，得到预制液A；加蛋白酶酶解所述预制液A中的蛋白质，酶灭活后离心提取上清液，得到预制液B；在预制液B中加入包埋壁材，均质，喷雾干燥，得到所述微胶囊化蜂王浆功能肽。以本发明的制备方法得到的微胶囊化蜂王浆功能肽，兼具强DPPH自由基清除能力、ACE酶抑制活性和α‑葡萄糖苷酶抑制活性，并且肽包埋率高，适口性好，吸湿性弱，稳定性强，有很好的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法。
背景技术
蜂王浆(Royal Jelly)又名蜂皇浆、王浆，是由工蜂发达的下咽头腺和上颚腺等腺体共同分泌的乳白色或淡黄色浆状物，具有抗衰老、抗菌、抗疲劳、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病和抗突变作用等多种保健功能。
但新鲜的蜂王浆极易变质，需要在全冷链条件下(-18℃冷冻)储存和运输，对物流要求极高。而且蜂王浆的稳定性及水溶性较差，且有一种典型的酚与酸的气味，以及酸涩和辛辣的不良口感。另外，敏感人群可能会对蜂王浆过敏，据研究，蜂王浆中的过敏原是其中的主蛋白1(分子量57kDa)和主蛋白2(分子量51.07kDa)。这些弊端极大地降低了蜂王浆的商品价值，限制了蜂王浆在多领域中的应用。
蜂王浆的成分相当复杂，其中约含有60％-70％的水分、10％-16％的糖类、12％-15％的蛋白质、3％-6％的脂类，以及2％-3％的维生素、游离氨基酸和矿物质等。蜂王浆的变质主要是由于其中的蛋白质容易发生变化，从而导致了一系列的化学反应促使其变质。如何处理蜂王浆中的蛋白质对蜂王浆发挥整体功效起着极其关键的作用，因此，蜂王浆的深加工主要是针对其中的蛋白质而进行的，以开发一系列功能性强、稳定性好、口感佳、脱除致敏因子的深加工产品。
目前，采用酶解法制备蜂王浆多肽已有较多研究，其中具有抗氧化、降血压、降血糖和Aβ抑制剂等功效的功能性多肽均有报道，但是有关兼具高抗氧化、降血糖和降血压功效的功能性蜂王浆多肽还研究不足，且这些蜂王浆多肽的药理作用也仍待进一步加强。另外，在酶解蜂王浆中的蛋白质时，会暴露出部分疏水性结构而产生苦味，这会直接影响蜂王浆多肽产品的感官品质。再者，蜂王浆多肽的吸湿性强，容易结块，不易储藏。因此，如何制备一款适口性良好，兼具抗氧化、降血糖和降血压等功效，并且易储藏的蜂王浆多肽，对于蜂王浆多肽产品的应用推广具有相当重要的价值。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法，兼具强DPPH自由基清除能力、ACE酶抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性，并且肽包埋率高，适口性好，吸湿性弱，稳定性强，有很好的应用价值。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明技术方案之一：一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法，包括：蜂王浆依次经碱溶、酶解、包埋、干燥得到微胶囊化蜂王浆功能肽。
优选地，所述微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法包括如下步骤：
(1)碱溶：在水中加入蜂王浆，调节pH值至8.0～10.0，搅拌溶解，然后离心提取上清液，得到预制液A；
(2)酶解：加蛋白酶酶解所述预制液A中的蛋白质，酶灭活后离心提取上清液，得到预制液B；
(3)包埋：在预制液B中加入包埋壁材，均质，得到微胶囊化蜂王浆功能肽均质液；
(4)干燥：微胶囊化蜂王浆功能肽均质液经浓缩后喷雾干燥得到所述微胶囊化蜂王浆功能肽。
优选地，步骤(1)中：所述蜂王浆与水的质量比为1:6～8；所述搅拌溶解的时间为1～3h；所述离心的离心力为3000～10000g，温度为5～20℃，时间为5～10min。
优选地，步骤(2)中所述蛋白酶为食用中性蛋白酶或食用碱性蛋白酶，酶解的温度为40～50℃，时间为2～4h。
优选地，步骤(2)中：所述预制液A的pH值为8.0～9.0时按照6000～9000U/g蛋白质添加食用中性蛋白酶；所述预制液A的pH值为9.0～10.0时按照6000～9000U/g蛋白质添加食用碱性蛋白酶。
优选地，步骤(3)中：所述包埋壁材为质量比1:2～4的麦芽糊精和β-环糊精，所述包埋壁材与所述蜂王浆的质量比为0.2～0.8；所述均质为胶体研磨，时间为2～6h。
优选地，步骤(4)中：所述浓缩具体为：40～50℃条件下真空浓缩至溶液中干物质的含量为12％～18％。
优选地，步骤(4)中：所述喷雾干燥条件：进口温度150～200℃，出口温度80～100℃，风速10～30L/min，进料速度1～5L/h。
本发明技术方案之二：提供一种根据上述制备方法得到的微胶囊化蜂王浆功能肽。
本发明技术方案之三：提供一种上述微胶囊化蜂王浆功能肽在养生保健领域中的应用。
本发明的有益技术效果如下：
蜂王浆溶于水后，若直接酶解，会因为其中的杂质而影响酶解效率和产品质量；传统的“碱溶酸沉”提取蛋白质后再酶解的操作步骤繁琐，而且虽然其酶解蛋白质的程度相对较高，但相应的，其产品中也会因酸碱的加入而含有较高的灰分含量，反而更加影响蜂王浆肽的保健功效。而本发明的发明人经研究发现，中性蛋白酶和碱性蛋白酶在特定pH下解酶后肽的功能性较强；因此，本发明改进了蜂王浆蛋白的提取方式，省去了酸沉以及酸沉后复溶等步骤，设计了一种碱溶后离心除杂再酶解的操作方法，改善了产品质量以及酶解后产品的收率。
本发明的产品可以作为食品、保健食品、食品添加剂、药物增效剂等，工艺科学合理，操作简单，适合工业化生产。
以本发明的制备方法得到的微胶囊化蜂王浆功能肽，兼具强DPPH自由基清除能力、ACE酶抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性，并且肽包埋率高，适口性好，吸湿性弱，稳定性强，安全、无毒副作用，有很好的应用价值。
附图说明
图1为蜂王浆水溶液蛋白及其酶解物的电泳图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。
另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。
关于本发明中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
蜂王浆中的蛋白质含量按照凯氏定氮法进行测定。
本发明以下各实施例及对比例中所用食用中性蛋白酶(110U/mg)和食用碱性蛋白酶(200U/mg)均购买自沧州夏盛酶生物技术有限公司。木瓜蛋白酶(800U/mg)、胰蛋白酶(250U/mg)、胃蛋白酶(3.5U/mg)、菠萝蛋白酶(600U/mg)和酸性蛋白酶(50U/mg)均购自北京索莱宝科技有限公司。
本发明以下各实施例及对比例中所用各原料均为市售产品。
实施例1
微胶囊化蜂王浆功能肽的制备：
(1)将蜂王浆和去离子水按重量比1:6混合，常温下搅拌30min，加入食用碱液调节pH值为8.0，搅拌2h，然后在温度5℃、离心力5000g的条件下离心5min，提取上清液，得到预制液A；
(2)在预制液A中加入9000U/g蛋白质的食用中性蛋白酶，其中，所述蛋白质为预制液A中所含的蛋白质；45℃恒温酶解4h，然后90℃保温15min使酶失活，再在温度10℃、离心力8000g的条件下离心10min，提取上清液，得到预制液B；
(3)按蜂王浆质量的0.2倍在预制液B中加入包埋壁材，所述包埋壁材为质量比1:2的麦芽糊精和β-环糊精，胶体研磨均质2h，再在45℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量的15％，然后在进口温度180℃、出口温度90℃、风速10L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得微胶囊化蜂王浆功能肽。
实施例2
微胶囊化蜂王浆功能肽的制备：
(1)、(2)与实施例1完全相同；
(3)按蜂王浆质量的0.5倍在预制液B中加入包埋壁材，所述包埋壁材为质量比1:3的麦芽糊精和β-环糊精，胶体研磨均质2h，再在45℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量的16％，然后在进口温度170℃、出口温度80℃、风速20L/min、进料速度2L/h下喷雾干燥，即得微胶囊化蜂王浆功能肽。
实施例3
微胶囊化蜂王浆功能肽的制备：
(1)、(2)与实施例1完全相同；
(3)按蜂王浆质量的0.8倍在预制液B中加入包埋壁材，所述包埋壁材为质量比1:4的麦芽糊精和β-环糊精，胶体研磨均质2h，再在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量的18％，然后在进口温度190℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得微胶囊化蜂王浆功能肽。
实施例4
与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中调节的pH值为10.0，以及将步骤(2)中的食用中性蛋白酶替换为等质量的食用碱性蛋白酶。
实施例5
与实施例2的区别仅在于，步骤(1)中调节的pH值为10.0，以及将步骤(2)中的食用中性蛋白酶替换为等质量的食用碱性蛋白酶。
实施例6
与实施例3的区别仅在于，步骤(1)中调节的pH值为10.0，以及将步骤(2)中的食用中性蛋白酶替换为等质量的食用碱性蛋白酶。
对比例1
蜂王浆功能肽的制备：
(1)、(2)与实施例1完全相同；
(3)将预制液B在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量比的15％，然后在进口温度180℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得蜂王浆功能肽。
对比例2
蜂王浆功能肽的制备：
(1)、(2)与实施例4完全相同；
(3)与对比例1完全相同。
对比例3
与对比例1的区别仅在于，将步骤(2)中的食用中性蛋白酶替换为等质量的胰蛋白酶，并将酶解温度由45℃调为37℃。
对比例4
蜂王浆功能肽的制备：
(1)将蜂王浆和去离子水按重量比1:6混合，常温下搅拌30min，加入食用碱液调节pH值为8.0，搅拌2h，然后在温度5℃、离心力5000g的条件下离心5min，提取上清液，得到预制液A；
(2)先用柠檬酸将预制液A调节至pH值为6.5，再在预制液A中加入9000U/g蛋白质的木瓜蛋白酶，其中，所述，所述蛋白质为预制液A中所含的蛋白质；40℃恒温酶解4h，然后90℃保温15min使酶失活，再在温度10℃、离心力8000g的条件下离心10min，提取上清液，得到预制液B；
(3)将预制液B在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量比的15％，然后在进口温度180℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得蜂王浆功能肽。
对比例5
与对比例4的区别仅在于，将步骤(2)中的木瓜蛋白酶替换为等质量的菠萝蛋白酶。
对比例6
蜂王浆功能肽的制备：
(1)将蜂王浆和去离子水按重量比1:6混合，常温下搅拌30min，加入食用碱液调节pH值为8.0，搅拌2h，然后在温度5℃、离心力5000g的条件下离心5min，提取上清液，得到预制液A；
(2)先用柠檬酸将预制液A调节至pH值为3.0，再在预制液A中加入9000U/g蛋白质的胃蛋白酶，其中，所述，所述蛋白质为预制液A中所含的蛋白质；42℃恒温酶解4h，然后90℃保温15min使酶失活，再在温度10℃、离心力8000g的条件下离心10min，提取上清液，得到预制液B；
(3)将预制液B在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量比的15％，然后在进口温度180℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得蜂王浆功能肽。
对比例7
蜂王浆功能肽的制备：
(1)将蜂王浆和去离子水按重量比1:6混合，常温下搅拌30min，加入食用碱液调节pH值为8.0，搅拌2h，然后在温度5℃、离心力5000g的条件下离心5min，提取上清液，得到预制液A；
(2)先用柠檬酸将预制液A调节至pH值为3.5，再在预制液A中加入9000U/g蛋白质的食用酸性蛋白酶，其中，所述蛋白质为预制液A中所含的蛋白质；50℃恒温酶解4h，然后90℃保温15min使酶失活，再在温度10℃、离心力8000g的条件下离心10min，提取上清液，得到预制液B；
(3)将预制液B在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量比的15％，然后在进口温度180℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得蜂王浆功能肽。
对比例8
蜂王浆蛋白粉的制备：
(1)与实施例1完全相同；
(2)将预制液A在50℃下真空浓缩至干物质占浓缩后溶液质量比的15％，然后在进口温度180℃、出口温度100℃、风速20L/min、进料速度1L/h下喷雾干燥，即得蜂王浆蛋白粉。
效果验证
(1)为了验证本发明所得产物的理化性质，对实施例1-6及对比例1-8中进行了以下测试。其中，各性能的测试条件如下：
产物得率的公式为：
吸湿性的测试方法为：在干燥器底部加入饱和的Na2SO4溶液，精确称取待测样品2.0g，放入干燥器，在室温下密封静置1周，取出，称量。吸湿性的公式为：
含水量的测试方法为：精确称取待测样品2.0g封装在预先干燥冷却的培养皿中，100℃下密封静置24h后，取出，称重。含水量的公式为：
苦味值的测试方法为：将待测样品以10％质量浓度溶于水中，以5分制进行评估，苦味分值为由10人构成的评定小组的平均得分。评分标准：1，无苦味；2，微苦；3，苦；4，很苦；5，非常苦。
包埋率的测试方法为：先用蒸馏水快速反复洗涤待测样品，洗去微胶囊表面的蜂王浆功能肽，抽滤，干燥；再精密称取干燥的微胶囊溶于水，超声波处理10min，使微胶囊完全破裂，8000r/min下离心10min，取上清液，测定多肽含量，此即为微胶囊中多肽含量。蜂王浆酶解液的多肽含量测定同上。包埋率的公式为：
多肽含量测定：取样液3mL样品，按体积比1:1加入质量分数10％的三氯乙酸溶液使其混合均匀，在室温下静置10min后，以6000r/min离心10min，取上清液加入双缩脲试剂(V样液∶V双缩脲试剂＝1∶4)混合均匀，于37℃恒温水浴30min，于540nm下测定吸光度(纯水代替样品做空白)，对照标准曲线求得样品溶液中的多肽浓度，进而可求得样品中多肽含量。以不同浓度的谷胱甘肽绘制标准曲线。
测试结果如表1所示。
表1理化性质
| 产物得率(％) | 吸湿性(％) | 含水量(％) | 颜色 | 苦味值 | 包埋率(％) | |
| 实施例1 | 46.78 | 28.13 | 5.52 | 浅黄 | 1 | 68.95 |
| 实施例2 | 48.08 | 29.40 | 5.87 | 浅黄 | 1 | 74.25 |
| 实施例3 | 50.26 | 26.24 | 5.22 | 浅黄 | 1 | 72.64 |
| 实施例4 | 43.26 | 27.65 | 5.08 | 浅黄 | 1 | 67.48 |
| 实施例5 | 47.22 | 25.24 | 5.18 | 浅黄 | 1 | 70.62 |
| 实施例6 | 50.25 | 26.08 | 5.63 | 浅黄 | 1 | 70.56 |
| 对比例1 | 26.26 | 38.42 | 6.02 | 浅黄 | 2 | / |
| 对比例2 | 26.87 | 37.65 | 6.08 | 浅黄 | 2 | / |
| 对比例3 | 23.42 | 48.64 | 6.12 | 极浅黄 | 2 | / |
| 对比例4 | 10.68 | 52.56 | 8.96 | 黄 | 2 | / |
| 对比例5 | 15.95 | 42.73 | 6.35 | 浅黄 | 2 | / |
| 对比例6 | 18.85 | 46.52 | 6.23 | 浅黄 | 2 | / |
| 对比例7 | 21.32 | 58.88 | 14.28 | 褐色 | 3 | / |
| 对比例8 | 29.80 | 40.27 | 7.46 | 浅黄 | 1 | / |
由表1可知，对比例8为蜂王浆水溶性蛋白直接喷干的产品，苦味值较低；对比例1-7为蜂王浆水溶性蛋白酶酶解后的喷干产品，苦味值较高，说明酶解可能导致了一些呈苦味的氨基酸暴露出来；对比例1-2的产品得率明显高于对比例3-7，说明相较于其它蛋白酶酶解，采用食用中性蛋白酶或食用碱性蛋白酶酶解损失更小，这主要因为酶解时部分蛋白酶需要调节pH为酸性，会导致一些蛋白沉淀而损失，由此证明本发明减少酸沉步骤确实可以提高产品得率。实施例1-6为蜂王浆水溶性蛋白采用食用中性蛋白酶或食用碱性蛋白酶酶解后，再加入壁材包埋后喷干而成的微胶囊化产品，可见微胶囊方法能够有效降低蜂王浆蛋白直接酶解喷干所得产品的苦味，同时降低产品的吸湿性和含水率，从而提高产品的稳定性；至于实施例中产品得率的提高，一方面是因为加入了壁材，增加了产品质量，另一方面是包埋后喷干不易粘壁，减少了粘壁损失。
(2)酶解效果测试：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析，分离胶与浓缩胶的浓度分别为12.5％、5％，Marker上样量为5μL，蜂王浆水溶性蛋白与其酶解样品上样量为15μL。设定电泳仪电压80V，120mA，P＝20W，当条带跑到两层胶的分界面时将电压调到100V，整个过程大约持续1.5h。电泳结束后，采用0.25％考马斯亮蓝R250染色2h，将胶体剥离玻璃板，换上脱色液，脱色液每升含醋酸150mL、无水乙醇50mL和蒸馏水800mL，进行脱色处理。电泳结果见图1。
图1为蜂王浆水溶液蛋白及其酶解物的电泳图；其中，a中的泳道M为marker，泳道1-3为蜂王浆和去离子水按重量比1:6混合，泳道4-6为对比例8；b中的泳道M为marker，泳道1为对比例5，泳道2为对比例4，泳道3为对比例6，泳道4为对比例3，泳道5为对比例7，泳道6为对比例1，泳道7为对比例2。
由图1可知，蜂王浆和去离子水混合后直接上样蛋白条带最多，当经过碱溶离心后获得的预制液A除去了一些小分子蛋白质，再经过不同蛋白酶酶解获得预制液B，各种蛋白酶均不同程度酶解了预制液A中的蛋白质，尤其是采用食用中性蛋白酶或者食用碱性蛋白酶酶解后，所有蛋白条带(包括过敏原主蛋白1和2)几乎完全消失，证明这两种蛋白酶酶解更彻底，水解度更强，可消除过敏原。
(3)为了验证本发明所得产物的药理性质，对实施例1-6和对比例1-8进行了以下测试。其中，各性能的测试条件如下：
DPPH自由基清除能力的测试方法为：配制100mg/mL的样品水溶液(若为微胶囊产品，需超声破碎10min，离心取上清液作为待测样品)，取100μL，加入0.2mM的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)无水乙醇溶液100μL，室温条件下避光反应30min，在517nm处测定吸光度值A1(蜂王浆肽有抗氧化活性，会使DPPH由明显的紫色变为黄色)。100μL样品液与100μL无水乙醇混合，测定吸光值A2；100μL无水乙醇和100μL DPPH溶液混合，测定吸光度值A3。每组实验做3组平行取平均值。
公式：DPPH清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]x100％。
α-葡萄糖苷酶抑制活性的测试方法为：配制100mg/mL的样品水溶液(若为微胶囊产品，需超声破碎10min，离心取上清液作为待测样品)，取100μL，加入0.16μ/mL的α-葡萄糖苷酶50μL，于37℃水浴10min后，加入2.5mmol/L的底物4-硝基苯基-α-D-呋喃葡萄糖苷(PNPG)溶液50μL，于37℃水浴15min后，立即加入1mol/L的Na2CO3溶液终止反应，用酶标仪在波长405nm处测吸光度值A1；另取100μL 0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH6.9)代替样品液，测定吸光度值A2；再测定只有样品液和PNPG(不加α-葡萄糖苷酶)的背景的吸光值A3。每组实验做3组平行取平均值。
公式：α-葡萄糖苷酶抑制活性(％)＝[A2-(A1-A3)/A2]x100％。
ACE抑制活性的测试方法为：配制100mg/mL的样品水溶液(若为微胶囊产品，需超声破碎10min，离心取上清液作为待测样品)、0.08mol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液(HEPES)、0.005mg/mL的(N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸溶液)(FAPGG)、0.1μ/mL的血管紧张素转化酶(ACE)溶液。空白孔添加ACE 10μL、FAPGG 50μL和HEPES 40μL。样品孔添加ACE 10μL、FAPGG 50μL和样品溶液40μL。利用酶标仪测定反应前340nm的吸光度值。将酶标板上的混合物放在37℃反应30min后，再次测定混合液的吸光度值。
公式：ACE抑制活性(％)＝[(A1-A2)-(B1-B2)]/(A1-A2)x100％；
其中，A1：空白孔的初始吸光度；A2：空白孔反应30min的吸光度；B1：样品孔的初始吸光度；B2：样品孔的反应30min后的吸光度。
测试结果如表2所示。
表2药理性质
| DPPH清除率(％) | α-葡萄糖苷酶抑制活性(％) | ACE抑制活性(％) | |
| 实施例1 | 77.56 | 77.40 | 78.68 |
| 实施例2 | 76.32 | 75.66 | 76.15 |
| 实施例3 | 75.84 | 75.06 | 74.66 |
| 实施例4 | 76.76 | 74.28 | 76.14 |
| 实施例5 | 77.25 | 73.30 | 78.75 |
| 实施例6 | 75.36 | 73.40 | 75.93 |
| 对比例1 | 84.22 | 85.37 | 86.66 |
| 对比例2 | 82.42 | 83.40 | 80.38 |
| 对比例3 | 68.27 | 85.30 | 70.30 |
| 对比例4 | 22.10 | 90.00 | 68.26 |
| 对比例5 | 60.14 | 87.30 | 70.18 |
| 对比例6 | 80.16 | 92.80 | 23.30 |
| 对比例7 | 87.87 | 91.12 | 57.31 |
| 对比例8 | 28.60 | 24.50 | 27.40 |
实验结果表明，采用中性蛋白酶或者碱性蛋白酶酶解后，酶解液的DPPH清除率、α-葡萄糖苷酶抑制性和ACE抑制活性均在80％以上，即兼具较强的抗氧化、降血糖和降血压活性；而采用其它酶降解蛋白质，无法达到类似效果。而且，由表2中的对比例3-4、6可知，采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶进行酶解的产物都出现了某种药理活性较强或者较弱的现象，性能不稳定。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种微胶囊化蜂王浆功能肽的制备方法，其特征在于，包括：蜂王浆依次经碱溶、酶解、包埋、干燥得到微胶囊化蜂王浆功能肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)碱溶：在水中加入蜂王浆，调节pH值至8.0～10.0，搅拌溶解，然后离心提取上清液，得到预制液A；
(2)酶解：加蛋白酶酶解所述预制液A中的蛋白质，酶灭活后离心提取上清液，得到预制液B；
(3)包埋：在预制液B中加入包埋壁材，均质，得到微胶囊化蜂王浆功能肽均质液；
(4)干燥：微胶囊化蜂王浆功能肽均质液经浓缩后喷雾干燥得到所述微胶囊化蜂王浆功能肽。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：所述蜂王浆与水的质量比为1:6～8；所述搅拌溶解的时间为1～3h；所述离心的离心力为3000～10000g，温度为5～20℃，时间为5～10min。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述蛋白酶为食用中性蛋白酶或食用碱性蛋白酶，酶解的温度为40～50℃，时间为2～4h。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中：所述预制液A的pH值为8.0～9.0时按照6000～9000U/g蛋白质添加食用中性蛋白酶；所述预制液A的pH值为9.0～10.0时按照6000～9000U/g蛋白质添加食用碱性蛋白酶。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中：所述包埋壁材为质量比1:2～4的麦芽糊精和β-环糊精，所述包埋壁材与所述蜂王浆的质量比为0.2～0.8；所述均质为胶体研磨，时间为2～6h。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中：所述浓缩具体为：40～50℃条件下真空浓缩至溶液中干物质的含量为12％～18％。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中：所述喷雾干燥条件：进口温度150～200℃，出口温度80～100℃，风速10～30L/min，进料速度1～5L/h。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述制备方法得到的微胶囊化蜂王浆功能肽。
10.一种权利要求9所述的微胶囊化蜂王浆功能肽在制备养生保健产品中的应用。
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|---|---|---|---|---|
| CN117343134A (zh) * | 2023-09-26 | 2024-01-05 | 大连深蓝肽科技研发有限公司 | 一种蜂王浆肽及其与纤维素载体的复合物、制备方法、用于治疗肝损伤疾病的用途 |
| CN117482209A (zh) * | 2023-11-13 | 2024-02-02 | 北京金王健康科技有限公司 | 一种具有ace抑制作用的蜂王胎活性肽组合物及其制备方法和应用 |
| CN117778511A (zh) * | 2024-02-23 | 2024-03-29 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 一种王浆蛋白降糖肽粉的制备方法及其应用 |
| CN117482209B (zh) * | 2023-11-13 | 2024-06-07 | 北京金王健康科技有限公司 | 一种具有ace抑制作用的蜂王胎活性肽组合物及其制备方法和应用 |
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2023
- 2023-06-07 CN CN202310675476.4A patent/CN116479081A/zh active Pending
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